肾上腺素诱导的血管平滑肌细胞C1~-电流及其与Ca2+运动的关系

为观察肾上腺素对主动脉平滑肌细胞C1-电流的影响及其与Ca2+内流的关系,采用膜片钳单离子通道(细胞贴附式)技术和Fura-2荧光法测定细胞内游离Ca2+浓度变化.结果发现,10 μmol/L肾上腺素可引起氯通道开放概率由对照组的0.061±0.0042增加到0.690±0.011;平均开放时间由1.08±0.23 ms延长到6.44±0.57 ms.此Cl-电流可被硝苯地平和EGTA抑制.肾上腺素可引起平滑肌细胞内游离Ca2+浓度由静息时77±13 nmol/L快速升高达峰值随后维持在高水平的内流平台相,达216±27 nmol/L.Cl-通道阻断剂尼氟灭酸在一定范围内呈浓度依赖性抑制肾上腺素诱发的Cl-电流及Ca2+内流,8 μmol/L 尼氟灭酸对细胞内游离Ca2+浓度的抑制率达27%±8%.结果表明,Cl-通道开放在调节平滑肌细胞Ca2+内流中起重要作用.     

Cl-通道在小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

为探讨Cl-通道在小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,采用细胞计数和氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验 ,并结合fura 2荧光测定细胞浆Ca2 + 浓度等技术 ,研究了Cl-通道阻断剂对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。结果发现 ,Cl-通道阻断剂 4,4-二异硫氰酸二丙乙烯 2 ,2 -二磺酸 (DIDS ,0 .0 1μmol/L～ 0 .1mmol/L)可抑制 5 %小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖 ,其作用具有时效性和量效性 ,其它Cl-通道阻断剂如茚满羟基丙酸 (IAA 94,0 .1μmol/L～ 1mmol/L)、5 硝基 2 (3 苯丙氨基 )苯甲酸 (NPPB ,0 .1μmol/L～ 1mmol/L)、4 乙酰氨基 4 异硫氰酸 2 ,2 二磺酸 (SITS ,0 .1μmol/L～ 1mmol/L)、二苯丙氨基 2 ,2 二羧酸 (DPC ,0 .1μmol/L～ 1mmol/L)和速尿 (10 μmol/L～ 1mmol/L)等均无此作用 ,且DIDS对电压依赖性钙通道没有直接的影响。结果提示小牛血清可以开放DIDS敏感的Cl-通道 ,且该通道可能在小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖的调控上起着一定的作用。     

肾上腺素诱导的血管平滑肌细胞C1~-电流及其与Ca~(2 )运动的关系

为观察肾上腺素对主动脉平滑肌细胞C1- 电流的影响及其与Ca2 内流的关系 ,采用膜片钳单离子通道(细胞贴附式 )技术和Fura 2荧光法测定细胞内游离Ca2 浓度变化。结果发现 ,10 μmol L肾上腺素可引起氯通道开放概率由对照组的 0 .0 6 1± 0 .0 0 4 2增加到 0 .6 90± 0 .0 11;平均开放时间由 1.0 8± 0 .2 3ms延长到 6 .4 4± 0 .5 7ms。此Cl- 电流可被硝苯地平和EGTA抑制。肾上腺素可引起平滑肌细胞内游离Ca2 浓度由静息时 77± 13nmol L快速升高达峰值随后维持在高水平的内流平台相 ,达 2 16± 2 7nmol L。Cl- 通道阻断剂尼氟灭酸在一定范围内呈浓度依赖性抑制肾上腺素诱发的Cl- 电流及Ca2 内流 ,8μmol L尼氟灭酸对细胞内游离Ca2 浓度的抑制率达 2 7%± 8%。结果表明 ,Cl- 通道开放在调节平滑肌细胞Ca2 内流中起重要作用。     

蛇毒多肽X在巨噬细胞泡沫化过程中的Ca2+拮抗作用

为研究由中华眼镜蛇毒分离纯化而得的蛇毒多肽X在巨噬细胞泡沫化过程中的Ca2+拮抗作用。将C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞置于10mg/L氧化型低密度脂蛋白中培养,制备泡沫样细胞;应用Ca2+荧光指示剂技术,检测蛇毒多肽X对泡沫样细胞Ca2+水平的缓慢与即刻影响。结果发现,在10mg/L蛇毒多肽X中孵育的泡沫样细胞Ca2+水平为3.61×10-7mol/L,为对照细胞的40.2%;而蛇毒多肽X对细胞Ca2+水平的即刻影响不明显。结果提示,在巨噬细胞泡沫化过程中,蛇毒多肽X可拮抗细胞Ca2+水平的增高,从而阻止泡沫细胞的形成。     

Cl-通道在小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

为探讨Cl^-通道在小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用,采用细胞计数和氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验,并结合fura-2荧光测定细胞浆Ca^2 浓度等技术,研究了Cl^－通道阻断剂对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。结果发现,Cl^-通道阻断剂4,4－二异硫氰酸二乙丙烯2,2－二磺酸（DIDS,0．01μmol/L－0．1mmol/L)可抑制5％小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖,其作用具有时效性和量效性,其它Cl^-通道阻断剂如茚满羟基丙酸（IAA－94,0．1μmol/L-1mmol/L)、二苯丙氨基－2,2－二羧酸（DPC,0．1μmol/L-1mmol/L)和速尿（10μmol/L-mmol/L)等均无此作用,且DIDS对电压依赖性钙通道没有直接的影响。结果提示小牛血清可以开放DIDS敏感的Cl^-通道,且该通道可能在小牛血清引起的小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖的调控上起着一定的作用。     

氯通道阻滞剂在β25-35淀粉样多肽诱导PCl2细胞凋亡的保护作用

目的 探讨氯通道阻滞剂(DIDS)对β25-35淀粉样多肽(Aβ25-35)诱导PCl2细胞凋亡的影响.方法 PCl2细胞按实验不同分为对照组(DMEM培养液)、Aβ25-35组(Ap25-35 40 μmol/L)、DIDS组(Aβ25-35 40,μmol/L+DIDS 50μmol/L).MTT法测细胞存活率,Hoeehst 33 258荧光染色观察细胞核形态学改变,流式细胞技术测细胞凋亡率.结果 Aβ25-35组与对照组和DIDS组比较,PCI2细胞的存活率明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率明显增高(P＜0.05),不同DIDS浓度依赖性升高PC12细胞存活率,DIDS 50 μmol/L能显著丁调Aβ25-35诱导的细胞凋亡(P＜0.05).结论 DIDS时Aβ25-35诱导PC12细胞损伤有保护作用.     

钙离子在肿瘤坏死因子α诱导心肌肥大中的作用

目的 研究Ca2+在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导心肌细胞肥大中的作用.方法 Lowry法测心肌细胞蛋白含量;计算机图像分析系统测心肌细胞体积;3H-亮氨酸掺入法测心肌细胞蛋白合成;Till阳离子测定系统观察胞内[Ca2+]i瞬变.结果 IP3R阻断剂2-APB(30 μmol/L)或RyR阻断剂ryanodine (50 μmol/L)能降低由TNF-α(100μg/L)诱导的心肌细胞蛋白合成、蛋白含量以及细胞体积增加,二者合用抑制作用更强.L型Ca2+通道阻断剂nifedipine(50 μmol)对上述反应无明显作用(P＞0.05).IP3R阻断剂2-APB(30μmol/L)或RyR阻断剂ryanodine(50 μmol/L)能降低由TNF-α(100 μg/L)诱导的心肌细胞内钙离子瞬变幅度增高,二者合用作用抑制更强.L型Ca2+通道阻断剂nifedipine(50μmol/L)对其无明显作用(P＞0.05).结论 TNF-α通过调节心肌细胞内钙离子浓度从而诱导心肌细胞肥大.而在此过程中TNF-α可能主要是通过作用IP3R和RyR促使胞内钙贮库Ca2+释放而引起胞内钙离子水平增高的,而非通过打开L型Ca2+通道.     

急性缺氧对环匹阿尼酸诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度升高的影响

目的:研究急性缺氧对Ca2+-ATPase抑制剂——环匹阿尼酸(CPA)诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)内钙浓度([Ca2+]i)升高的影响及机制。方法:选用6只雄性SD大鼠(体重200~250 g),培养大鼠PVSMC,运用荧光显微镜和细胞内钙浓度检测系统观测CPA及急性缺氧(4%O2)对PVSMC的[Ca2+]i影响及钙池操纵性钙通道(SOCC)阻断剂氯化镍(Ni Cl2)和SKF96365的干预作用。结果:含5μmol/L硝苯地平(电压依赖钙通道阻断剂)的无钙Krebs溶液孵育PVSMC,10μmol/L CPA使PVSMC的[Ca2+]i小幅度升高,急性缺氧能使[Ca2+]i升高幅度增加;恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA使[Ca2+]i显著升高,急性缺氧可导致CPA诱导的[Ca2+]i升高显著增强;SOCC阻断剂Ni Cl2(500μmol/L)和SKF96365(50μmol/L)均能明显抑制急性缺氧条件下CPA诱导的[Ca2+]i升高,但对高钾(60 mmol/L KCl)Krebs溶液引起的[Ca2+]i反应无影响。结论:急性缺氧能够使CPA诱导的大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高增强,[Ca2+]i升高可被SOCC阻断剂阻断,提示急性缺氧能够增强SOCC活性,使细胞外Ca2+通过SOCC内流增强,从而导致大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高。     

不同浓度氢溴酸槟榔碱对结肠平滑肌细胞钙离子移动和收缩力的影响

[目的]观察不同浓度的氢溴酸槟榔碱(Ah)对结肠平滑肌细胞钙离子(Ca2+)移动的影响,以探讨其对平滑肌收缩力的作用。[方法]取培养大鼠结肠平滑肌细胞,以荧光指示剂Fluo-3/AM负载,通过激光共聚焦显微镜(LSCM)动态观察不同浓度Ah对培养的结肠平滑肌细胞Ca2+移动的作用。[结果]Ah在1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol/L浓度刺激下可使结肠平滑肌细胞[Ca2+]i荧光强度(FI)逐渐升高(P<0.05),而在未加药以及1×10-13、1×10-12、1×10-11mol/L浓度刺激下对[Ca2+]iFI无影响(P>0.05);在1×10-3mol/L浓度刺激下细胞膜迅速发生破裂;应用阿托品预处理,则FI从4.28±1.51降至3.83±1.40(P>0.05)。[结论]Ah可使结肠平滑肌细胞内[Ca2+]i逐渐升高,阿托品可阻断Ah对平滑肌的收缩作用。     

西罗莫司经利阿诺定受体2途径诱导血管内皮细胞钙超载

目的观察西罗莫司造成血管内皮钙超载引起细胞损伤并探讨其相关机制。方法在西罗莫司处理和利阿诺定稳定利阿诺定受体通道的情况下,采用MTT法检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞存活率,HE染色观察细胞形态,一氧化氮(NO)检测试剂盒测定培养液NO含量,Ca2+敏感的荧光染料Fluo-3 AM标记胞质Ca2+,分别采用流式细胞仪分析和激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca2+水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,Annexin VFITC/PI染色法检测细胞凋亡率。结果西罗莫司能降低细胞存活率(P0.01)。西罗莫司500 nmol/L刺激24 h后,HE染色发现细胞肿胀,核固缩、核碎裂及胞浆空泡;NO含量降低,细胞内Ca2+含量增高,线粒体膜电位降低,细胞凋亡率增加(P均0.01)。与西罗莫司500 nmol/L组相比,利阿诺定50μmol/L干预组细胞存活率明显增加(P0.01),细胞内Ca2+含量降低(P0.05),细胞培养液NO含量由28.33±4.18μmol/L增至47.03±3.87μmol/L(P0.01),线粒体膜电位水平由0.24±0.03增至0.45±0.04(P0.01),细胞凋亡率由43.3%±2.0%降至30.7%±0.9%(P0.01)。结论西罗莫司可能通过内质网利阿诺定受体途径增加细胞内Ca2+水平,造成钙超载和线粒体损害,继而引起细胞凋亡。     

高血压病患者血小板Na~ -H~ 交换与Ca~(2 )内流、Ca~(2 )结合力的关系

细胞内pH对血管平滑肌结构和功能有重要影响,本文通过观察高血压病患者血小板Na~ -H~ 交换活性、血小板Ca~(2 )内流和Ca~(2 )结合力等指标,探讨了细胞Na~ -H~ 交换活性和Ca~(2 )代谢与血压间的关系。     

Ca~(2 )预处理和缺血预处理对大鼠心脏Ca~(2 )反常损伤的影响

给离体大鼠心脏进行5次1分钟无Ca~(2 )继5分钟复Ca~(2-)灌流预处理后,可使随后Ca~(2-)反常损伤明显减轻,表现为心肌细胞蛋白质丢失量减少,冠状动脉痉挛减轻.本研究进一步应用2次10分钟缺血,继10分钟再灌注进行缺血预处理,结果显示这一方案未能减轻Ca~(2 )反常所致心肌损伤.如在Ca~(2-)预处理过程中给予腺苷A_1受体阻滞剂8-SPT,可以阻断Ca~(2 )预处理的保护作用,提示腺苷A_1受体兴奋可能是这一保护机制的重要环节.     

24例老年肺心病患者红细胞钙－ATP酶和钙镁含量的变化

目的观察老年肺心病患者红细胞膜钙－ＡＴＰ酶（钙泵）活性和红细胞内Ｃａ２、Ｍｇ２＋含量的变化，初步探讨其发生机制及意义。方法采用生化方法和原子吸收法测定上述指标，并与非老年肺心病患者及老年健康者比较。结果老年肺心病组（２４例）红细胞钙泵活性（μｍｏｌｐｉ·ｍｇ－１／ｈ）、Ｃａ２＋含量（μｍｏｌ／ｇ）、Ｍｇ２＋含量（μｍｏｌ／ｇ）分别为０．２３±０．１０、７．４６±１．８２、８．２１±０．８４；非老年肺心病组（２０例）分别为０．３２±０．１１、６．０１±１．５２、８．７４±０．７２；老年健康组（１２名）分别为０．４２±０．１５、４．５１±１．４４、９．０２±１．０８。老年肺心病组与后两组比较，红细胞钙泵活性及Ｍｇ２＋含量降低，Ｃａ２＋含量增高（Ｐ值＜０．０５、０．０１或０．００１）；在肺心病伴呼吸衰竭和心力衰竭时上述异常改变更为明显。结论红细胞膜钙泵活性降低及其细胞内Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋含量异常变化，在老年人肺心病的发病中可能具有重要作用     

Chronic hypoxia increases intracellular Ca~(2+) concentration and augments proliferation by enhancing store-operated Ca~(2+) entry in pulmonary arterial smooth muscle cells

<正>Objective To determine whether store-operated Ca~(2+) entry(SOCE)is involved in chronic hypoxia-induced alteration of intracellular Ca~(2+)concentration ([Ca~(2+)]_i)and proliferation in pulmonary arterial smooth muscle cells(PASMC).Methods Rat PASMCs were cultured and treated in normoxia(21%O_2)or hypoxia(4%O_2)condition.The proliferation of PASMC     

SJAMP对血小板胞内游离钙水平的影响

目的：探讨Ca2 在SJAMP诱导血小板聚集中的作用。方法：以Fura-2为钙荧光探针，应用双波长法测定了SJAMP对血小板胞内游离钙水平的影响。结果：发现SJAMP在100μg／ml时对血小板胞浆游离钙的影响最为显著，可使正常人血小板胞内钙水平从71．30±7.66nmol／L升至93．96±10．24nmol/L（n＝10），在胞外存在1mmol／LCa2 时，SJAMP引起胞内游离钙升高幅度更大．可达116．72±10．66nmol／L（n=10）。另一方面，SJAMP对血小板胞内游离钙的影响，与其它诱导剂相比，其升高幅度较小且时限较长，同时如果血小板预先与环氧化酶抑制剂孵育．则SJAMP对血小板胞内钙的升高作用明显受抑。结论：推测SJAMP对血小板胞内钙的影响可能是一花生四烯酸及其代谢物有关的过程。     

Ca~(2+)-CaN-NFAT信号通路在心肌肥大中的作用及研究进展

钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)是Ca2 的下游因子,在细胞内钙升高引起的心肌肥大中有重要作用。现综述Ca2 CaN及其下游因子活化T细胞核因子3(NFAT3)和锌指转录因子(GATA4)在心肌肥大中的作用及近年的研究进展。     

肌浆网Ca~(2+)-ATP酶和L型-Ca~(2+)通道功能变化对肥厚心室肌电重构的影响

为探讨肌浆网Ca2 + ATP酶和L型 Ca2 +通道功能变化在左室肥厚 (LVH)心室肌电重构发生中的作用。将 60只日本大耳白兔随机分为 6组 :单纯实验组、实验组 +维拉帕米、实验组 +Thapsigargin、单纯对照组、对照组 +维拉帕米和对照组 +Thapsigargin。实验组行腹主动脉部分结扎术 ,喂养 1 0周制作LVH模型。对照组在游离出腹主动脉后 ,不予结扎。均采用以Langendorff离体灌流方法。对单纯实验组和单纯对照组 ,在心外膜左室心尖部部位以 2 31ms为基础周长 (BCL)测定心室有效不应期 (VERP)后 ,于右房行电刺激 ,刺激频率为 2 60次 /分 ,持续 30min ,保持 1 1房室传导。刺激结束后 ,重复测定VERP值。对其余 4组 ,先测定未加药物时各组的VERP值 ,随后改用加入药物的灌流液后再次测定VERP值 ,最后进行右房刺激及VERP的测定 (同前 )。结果 :单纯实验组在快速刺激后 ,VERP显著延长 ,其延长程度显著大于单纯对照组 ;而在加用维拉帕米的实验组和对照组中 ,快速刺激后无VERP延长的表现 ;相反 ,Thapsigargin则可增强快速刺激后VERP延长的表现。结论 :L 型Ca2 +通道的激活可能是LVH心室肌电重构发生的重要原因。其中 ,心室肌细胞肌浆网Ca2 + ATP酶的功能降低参与了此过程 ,并可能导致了LVH与正常心室肌的频率相关性电重构?     

Intestinal Ca~(2+) absorption revisited: A molecular and clinical approach

Ca~(2+) has an important role in the maintenance of the skeleton and is involved in the main physiological processes. Its homeostasis is controlled by the intestine,kidney, bone and parathyroid glands. The intestinal Ca~(2+) absorption occurs mainly via the paracellular and the transcellular pathways. The proteins involved in both ways are regulated by calcitriol and other hormones as well as dietary factors. Fibroblast growth factor 23(FGF-23) is a strong antagonist of vitamin D action. Part of the intestinal Ca~(2+) movement seems to be vitamin D independent.Intestinal Ca~(2+) absorption changes according to different physiological conditions.It is promoted under high Ca~(2+) demands such as growth, pregnancy, lactation,dietary Ca~(2+) deficiency and high physical activity. In contrast, the intestinal Ca~(2+)transport decreases with aging. Oxidative stress inhibits the intestinal Ca~(2+)absorption whereas the antioxidants counteract the effects of prooxidants leading to the normalization of this physiological process. Several pathologies such as celiac disease, inflammatory bowel diseases, Turner syndrome and others occur with inhibition of intestinal Ca~(2+) absorption, some hypercalciurias show Ca~(2+)hyperabsorption, most of these alterations are related to the vitamin D endocrine system. Further research work should be accomplished in order not only to know more molecular details but also to detect possible therapeutic targets to ameliorate or avoid the consequences of altered intestinal Ca~(2+) absorption.     

利拉鲁肽降低心肌微循环内皮细胞缺血再灌注损伤的机制研究

目的探讨利拉鲁肽降低微循环缺血再灌注损伤的机制。方法体外培养人脐静脉血内皮细胞系,并建立细胞缺氧复氧(HR)模型。正常对照组(Con组,正常培养),HR组(等量PBS),低剂量利拉鲁肽组(低Lir组,加入利拉鲁肽终浓度1nmol/L),中剂量利拉鲁肽组(中Lir组,加入利拉鲁肽终浓度10nmol/L),高剂量利拉鲁肽组(高Lir组,加入利拉鲁肽终浓度100nmol/L)。小干扰RNA技术敲低三磷酸肌醇受体(IP3R)和VDAC蛋白表达,并作为干扰IP3R组和干扰VDAC组。MTT法检测细胞活性;Fura-2AM检测细胞内钙超载([Ca~(2+)]c)情况;Western blot检测钙泵蛋白IP3R;观察利拉鲁肽作用下线粒体钙([Ca~(2+)]m)的浓度变化。结果与Con组比较,HR组促进IP3R表达增加和[Ca~(2+)]c超载(P0.05),表现为Fura-2AM荧光增强(P0.05);同时[Ca~(2+)]c超载现象通过VDAC进入线粒体,诱发[Ca~(2+)]m超载、膜电位丢失、膜孔道开放增加、细胞色素C释放,最终TUNEL阳性凋亡细胞增加(P0.05)。与HR组比较,低、中和高Lir组减少IP3R表达(P0.05),抑制[Ca~(2+)]c/[Ca~(2+)]m超载,降低细胞凋亡(P0.05)。结论 HR通过激活IP3R-[Ca~(2+)]c/VDAC-[Ca~(2+)]m信号通路诱导内皮细胞凋亡,利拉鲁肽可以通过抑制上述信号保护微循环内皮,降低再灌注损伤。     

幽门螺杆菌作用后AGS细胞内钙离子的动态变化研究

背景幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与胃癌发生密切相关,但致病机制尚未清晰。细胞毒素相关蛋白A(CagA)是Ⅰ型Hp的主要毒力因子,在Hp诱导的疾病特别是胃癌的发展中起重要作用。前期的研究发现,Hp作用后人胃腺癌上皮细胞(AGS)的钙离子相关蛋白钙网织蛋白CRT以及钙离子结合蛋白CALNUC磷酸化程度发生改变,提示Hp可能会影响AGS细胞的钙稳态,通过钙离子通路影响细胞的增殖或凋亡。目的研究Hp作用于人胃腺癌上皮细胞后,AGS细胞内钙离子的时序性变化,以及CagA对AGS细胞内钙离子的影响,进一步揭示Hp的致病机制。方法采用钙离子荧光标记示踪法,AGS细胞以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,特异性地活体标记AGS内的钙离子,采用激光共聚焦显微镜观察分析Hp26695及其CagA缺失株(Hp26695△CagA)分别作用于AGS细胞1h、2h、3h、4h、5h、6h后,AGS细胞内钙离子的变化情况。结果幽门螺杆菌与AGS细胞相互作用1h,胞内Ca2+部分流失,5h胞内Ca2+大量流失。1～6h内,Hp26695与Hp26695△CagA作用的AGS细胞荧光强度没有显著差异。结论Hp作用会导致AGS细胞内Ca2+剥夺,且与CagA的存在无明显关联性。