miR-204在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-204在胃癌组织中的表达与临床病理参数的关系及其对胃癌细胞凋亡的影响。方法接受手术治疗的胃癌患者53例,收集手术切除的胃癌组织作为胃癌组标本,并收集其癌旁(3 cm)正常组织作为对照组标本,同时培养人胃癌细胞株(BGC823、SGC7901)和永生化胃上皮细胞株(GES-1)。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组标本、对照组标本、BGC823、SGC7901、GES-1细胞株中的miR-204表达,分析胃癌组组织miR-204相对表达量与临床病理参数的关系,对部分BGC823、SGC7901细胞株进行转染miR-204,对比转染miR-204组与未转染miR-204组的BGC823、SGC7901细胞株的细胞增殖和细胞凋亡情况。结果胃癌组标本中的miR-204相对表达量明显低于对照组标本中miR-204的相对表达量(P0.05)。BGC823细胞株和SGC7901细胞株中的miR-204相对表达量明显低于GES-1细胞株中的miR-204相对表达量(P0.05)。胃癌组组织标本中miR-204相对表达量与患者的年龄、性别无关(P0.05),与TNM分期、淋巴结转移、分化程度有关(P0.05)。第3天的BGC823、SGC7901细胞株中,未转染组的吸光度高于转染miR-204组(P0.05),未转染组的细胞凋亡百分比显著低于转染miR-204组(P0.05)。结论 miR-204在胃癌组织以及胃癌细胞株中呈现低表达,且其表达与TNM分期、淋巴结转移以及分化程度有关,转染miR-204后能抑制胃癌细胞株的细胞增殖,并能促进其细胞凋亡。     

Adv-shRNA抑制NRP2表达对胃癌SGC7901细胞增殖的影响

目的通过特异性抑制胃癌细胞株SGC7901中神经纤毛蛋白2(NRP2)基因的表达,检测RNA干扰片段对SGC7901细胞增殖能力的影响。方法将NRP2的特异性RNA干扰腺病毒载体转染至胃癌细胞SCG7901 72 h后荧光显微镜观察转染情况;采用RT-PCR法检测转染后NRP2基因mRNA表达情况;MTT法检测胃癌细胞增殖情况;Western印迹检测转染后NRP2蛋白表达情况。结果成功将NRP2-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901。各重组腺病毒转染组NRP2 mRNA水平均低于阴性对照组和空白组,其中以NRP2-shRNA-3抑制效应最强。阴性对照组与空白组细胞增殖迅速,两组间无显著差异(P>0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比有显著差异(P<0.05)。阴性对照组与空白组NRP2蛋白表达量明显高于实验组(P<0.01),而阴性对照组与空白组之间无显著差异(P>0.05)。结论重组腺病毒载体NRP2-shRNA可有效抑制胃癌细胞SCG7901中NRP2基因的mRNA和蛋白的表达,并在一定程度上抑制癌细胞增殖,可作为动物实验的理论基础和前期条件。     

RNA干扰FLOT2基因表达下调NF-κB信号对胃癌细胞凋亡诱导作用研究

目的 探讨RNA干扰FLOT2基因表达对胃癌细胞凋亡及NF-κB信号的影响。方法 Western blotting检测人胃癌BGC823、SGC7901和MKN28细胞中FLOT2蛋白表达。BGC823细胞分为空白组、阴性组和si-FLOT2组,参照脂质体Lipofectamine~(TM)2000将siRNA转染细胞,细胞转染48 h,Western blotting检测FLOT2、NF-κB p65、IKK-β、p-IKK-β和Bax的蛋白表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 BGC823、SGC7901和MKN28胃癌细胞中FLOT2蛋白表达均显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES1(P0.05)。转染si-FLOT2的BGC823细胞FLOT2蛋白表达显著低于空白组(P0.05)。与空白组比较,si-FLOT2组细胞凋亡率显著升高,NF-κB p65、IKK-β和p-IKK-β蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P0.05)。结论 RNA干扰FLOT2基因表达可诱导胃癌细胞凋亡,机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

短发夹状RNA抑制survivin基因在肝癌细胞中的表达

目的 构建抗凋亡因子survivin的短发夹状RNA(shRNA)，观察其在肝癌细胞株HepG2、SMMC—7721中对survivin基因表达的抑制作用。方法 设计，合成两对survivin编码基因的反向重复序列，中间分别间隔4和8个nt，分别定向克隆至载体pTZU6 1的U6转录启动子下，构建pshRNA—survivin1和pshRNA—survivin2重组质粒，与表达survivin基因的质粒pEGFP—Cl—survivin共转染肝癌细胞株HepG2和SMMC—7721，荧光显微镜下观察融合蛋白中GFP的表达以分析pshRNA—survivin对survivin基因表达的抑制作用。结果 酶切分析和测序证实pshRNA—survivin1和pshRNA—survivin2构建成功；两组shRNA对survivin的表达均有明显的抑制作用，抑制率达80％以上；两重组质粒在HepG2和SMMC—7721两种细胞中抑制目的基因的作用无明显差异；反向重复序列中间隔4或8个nt构建的shRNA，对抑制目的基因的表达无显著差异。结论 构建的pshRNA—survivin重组质粒能有效抑制survivin基因在肝癌细胞株HepG2、SMMC—7721中的表达。     

shRNA沉寂HK-Ⅱ表达对胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察shRNA沉寂HK-Ⅱ基因的表达对胃癌细胞株SGC7901细胞增殖、凋亡的影响, 初步评价HK-Ⅱ基因治疗胃癌的应用前景.方法:取胃癌细胞株SGC7901及胃上皮细胞株GES-1细胞为研究对象, 将每株细胞分别分成5组(A: 干扰组; B: 阳性对照组; C: 阴性对照组; D: 脂质体组; E: 空白对照组). 用shRNA沉寂胃癌细胞株SGC7901及胃上皮细胞株GES-1细胞中HK-Ⅱ的表达. 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染shRNA后每株细胞中各组HK-Ⅱ mRNA的表达变化; 分别用MTT及流式细胞仪检测转染后细胞增殖、凋亡的变化.结果:HK-Ⅱ mRNA在胃癌细胞株SGC7901细胞中的表达明显高于胃上皮细胞株GES-1细胞(t = 12.119, P <0.01), HK-Ⅱ shRNA可以明显抑制两株细胞中HK-Ⅱ的表达(P <0.01).沉寂HK-Ⅱ的表达可抑制SGC7901细胞的增殖(F = 159.811, P <0.01), 并促进其凋亡(χ2= 21.324, P <0.01); 但对胃上皮细胞增殖(F =0.704, P = 0.592)及凋亡(χ2 = 1.007, P = 0.909)无明显影响.结论:沉寂HK-Ⅱ表达可以抑制胃癌细胞株SGC7901的增殖, 促进其凋亡; 但对胃上皮细胞株GES-1无明显影响. HK-Ⅱ可能成为胃癌治疗的一个靶点.     

hCTB006联合伊立替康对胃癌细胞BGC823、SGC7901协同杀伤的作用机制

目的:研究人死亡受体(death receptor5,DR5)激动型抗体hCTB006联合伊立替康对不同分化程度胃癌细胞BGC823、SGC7901的体外抑瘤作用,并对其诱导胃癌细胞凋亡的机制进行初步探讨.方法:实验将BGC823、SGC7901细胞分为伊立替康组、hCTB006组和两者联合应用组,应用ATPlite法研究各组药物的体外抑瘤作用;采用ELISA法研究伊立替康处理胃癌细胞前后DR5表达的变化.采用Western blot技术检测药物处理前后BGC823、SGC7901细胞X-联锁凋亡抑制蛋白(X-chromosome-linked inhibitory of apoptosis protein,XIAP)的表达变化情况.结果:BGC823对hCTB006中度敏感,对SGC7901不敏感,伊立替康对胃癌细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性,与hCTB006联合用药后对BGC823具有良好的协同抑制作用,但对SGC7901协同作用不明显.ELISA测得伊立替康处理后胃癌细胞DR5的表达量无明显变化.但伊立替康和hCTB006联合用药可使胃癌细胞BGC823内XIAP水平明显降低,而对SGC7901细胞内XIAP没有明显作用.结论:伊立替康联合hCTB006后对低分化胃癌细胞BGC823的增殖有明显协同抑制作用,而对中度分化的SGC7901细胞呈拮抗作用,这种诱导胃癌细胞凋亡的机制可能与其DR5的表达无关,而与联合作用后细胞抑凋亡蛋白XIAP的表达水平有关.     

TROP2 shRNA真核表达载体转染胃癌BGC-823细胞的沉默作用

目的:构建TROP2特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体, 抑制人胃癌BGC-823细胞TROP2基因的表达.方法:构建TROP2短发夹环RNA, 产生重组质粒转染胃癌BGC-823细胞, 转染24 h后用G418(浓度400 mg/L)筛选, 待细胞稳定后收集, 分别命名为W组(未处理组), HK组(随机阴性对照质粒组), KB组(空质粒组), T1组, T2组, T3组. 并运用实时荧光定量PCR和Western blot检测TROP2的表达.结果:TROP2特异性shRNA片段被成功克隆进pGensil1.1质粒中, 重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致. 与未转染细胞组、随机阴性对照组、空质粒组相比, 转染shRNA重组质粒的人胃癌BGC-823细胞TROP2表达在mRNA和蛋白水平都受到抑制.与T1、T2组相比, T3组对TROP2 mRNA和蛋白抑制作用最明显, 差异具统计学意义(8.79±0.23 vs 9.54±0.20, 9.57±0.23; 3.66±0.11vs 6.46±0.36, 9.31±0.11, 均P<0.05).结论:成功构建了针对TROP2 的特异性shRNA真核表达载体并抑制了TROP2的表达,为进一步研究其基因功能打下了基础.     

miR495、miR551a靶向干扰SGC7901细胞PRL-3基因的表达

目的:构建靶向PRL-3基因的miRNA495和miRNA551a真核表达载体,观察其转染胃癌SGC7901细胞后对胃癌细胞PRL-3基因表达的影响.方法:设计并合成两条针对PRL-3基因的特异性miRNA495和miRNA551a干扰序列,分别与pcDNA6.2-GW/Em GFP-miR载体连接,转化大肠杆菌,纯化并鉴定后利用LipofectamineTM2000转染胃癌SGC7901细胞,实时定量PCR及Western blot技术鉴定重组体对PRL-3基因表达的干扰效果.结果:针对PRL-3基因的miRNA495和miRNA551a干扰质粒构建成功,胃癌SGC7901细胞分别转染两种质粒后miRNA495及miRNA551a的表达明显升高,并且明显抑制了PRL-3基因mRNA及蛋白的表达.结论:靶向PRL-3基因的miRNA495和miRNA551a真核表达载体构建成功,其可有效提高胃癌SGC7901细胞miRNA495和miRNA551a的表达,并抑制PRL-3mRNA及PRL-3蛋白的表达.     

MicroRNA-133a在5-氟尿嘧啶促进胃癌细胞BGC823及SGC7901细胞凋亡中的功能研究

[目的]研究microRNA-133a(miR-133a)在5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导胃癌细胞BGC823及SGC7901凋亡中的作用。[方法]用荧光定量PCR检测经5-Fu(IC50值)处理过胃癌细胞miR-133a的表达;构建过表达miR-133a的胃癌细胞株并行细胞增殖、细胞流式验证miR-133a的生物学功能;5-Fu分别处理过表达及敲低miR-133a的胃癌细胞株后,行细胞增殖、细胞流式、Western Blot观察细胞生长及凋亡情况。[结果]5-Fu诱导BGC823及SGC7901内源性miR-133a的表达(50%,P0.0001,24h),miR-133a促进胃癌细胞凋亡,敲低miR-133a可以抑制5-Fu对胃癌细胞的促凋亡作用。[结论]5-Fu通过诱导胃癌细胞BGC823及SGC7901内源性miR-133a的表达,促进胃癌细胞凋亡。     

Fas基因修饰胃癌耐药细胞的表达

目的将 Fas 基因导入胃癌耐药细胞,建立 Fas 基因表达耐药株,并比较转导前后 mRNA 与蛋白的表达水平。方法:采用分子克隆技术将 Fas 基因插入真核表达载体 pBK-CMV 的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将重组表达载体转染受体细胞 SGC7901/VCR,G418筛选克隆细胞,Southern blot、Northern blot、Weston blot 检测Fas 基因和 Bcl-2基因的表达。结果:成功地构建了真核表达载体 pBK-Fas cDNA;转导细胞后,从2×10~5细胞中筛选出大约120个抗性克隆,转导率大于0.5‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗生细胞,从而建立了 Fas 基因表达耐药株,我们命名为 SGC7901/VCR Fas cells;杂交结果表明,转导株与非转导株均有Fas cDNA 的表达,但转导株 Fas mRNA 及其蛋白水平的表达则显著高于非转导株。结论:在胃癌耐药细胞中 Fas基因处于低表达状态;通过脂质体介导的基因转染,Fas 基因可成功地导入胃癌耐药细胞,并能有效地增强 FasmRNA 及其蛋白的表达,为诱导细胞凋亡逆转胃癌耐药细胞的研究奠定了重要基础。     

稳定转染15-PGDH基因对人胃癌细胞生长和迁移的影响

背景：前期研究表明胃癌组织中NAD＋依赖性15-羟基前列腺素脱氢酶（15-PGDH）表达明显减低,瞬时转染15-PGDH对人胃癌细胞的生长和迁移有一定抑制作用。目的：建立稳定转染15-PGDH基因的人胃癌细胞株SGC7901．观察恢复15-PGDH表达对胃癌细胞生长和迁移的影响,探讨15-PGDH与胃癌发生、发展的关系。方法：以双酶切和质粒测序鉴定真核表达质粒pcDNA3／15-PGDH,采用脂质体法将质粒转染人SGC7901细胞,G418筛选稳定转染株．实时聚合酶链反应（PCR）和蛋白质印迹法鉴定。分别以甲基噻唑基四唑（MTT）实验和细胞划痕实验检测稳定转染15-PGDH基因的SGC7901细胞株的增殖情况和迁移能力。结果：经4周G418筛选以及实时PCR和蛋白质印迹法鉴定,得到4株可稳定、较高水平表达15-PGDH的SGC7901细胞株。稳定转染15-PGDH基因的SGC7901细胞株．细胞生长和迁移能力显著低于空质粒组（P〈0．01）。结论：成功建立了稳定转染15-PGDH基因的SGC7901细胞株．恢复15-PGDH表达可显著抑制人胃癌细胞的生长和迁移。15-PGDH表达减低或缺失与胃癌的发生、发展密切相关。     

IL-17A在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡的影响~

背景:白细胞介素-17A(IL-17A)在炎症反应中发挥重要作用。既往研究发现IL-17A基因多态性与某些亚型胃癌的发生风险增加有关。目的:探讨IL-17A在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:以免疫组化法和RT-PCR法分别检测胃癌组织、相应癌旁非癌组织以及胃癌细胞株的IL-17A表达。以不同浓度重组人IL-17A处理胃癌细胞株SGC7901,以MTT法检测细胞增殖,以流式细胞术检测细胞凋亡,以real-time RT-PCR检测细胞中的IL-6、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达。结果:胃癌组织中IL-17A阳性细胞数较相应癌旁非癌组织显著增多(P0.05),且主要表达于炎性细胞和血管内皮细胞,在胃癌细胞株中无表达。重组人IL-17A可刺激SGC7901细胞增殖,抑制H_2O_2诱导的细胞凋亡,并上调其IL-6、MMP-13 mRNA表达。结论:IL-17A可直接或通过诱导炎症信号通路分子间接促进胃癌进展。     

PI3K/Akt抑制剂LY294002对胃癌细胞化疗增敏作用的探讨

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物5-Fu及奥沙利铂联合使用对3种胃癌细胞系(MGC803、BGC823和SGC7901)化疗效果的影响.方法 将PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002联合化疗药物5-Fu及奥沙利铂作用于3种胃癌细胞系,MTT法检测单独使用5-Fu、奥沙利铂及联合LY294002对体外培养的3种胃癌细胞系的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 联合LY294002作用后,5-Fu、奥沙利铂对3种胃癌细胞系的增殖抑制作用明显增强(P<0.05),且凋亡率显著提高(P<0.05).结论结果 LY294002能有效提高化疗药物5-Fu、奥沙利铂体外对胃癌细胞的增殖抑制作用,抑制PI3K/Akt信号转导通路可显著提高胃癌的化疗疗效.     

Periostin基因过表达对顺铂和5-氟尿嘧啶诱导人胃癌细胞凋亡的影响

背景：肿瘤细胞耐药性的产生是肿瘤化疗失败的主要原因之一。Periostin是一种基质特异性细胞黏附分子。既往研究发现,periostin除参与胃癌细胞的生长、侵袭、转移外,还能降低其对化疗药物的敏感性。目的：明确periostin基因过表达对顺铂和5-氟尿嘧啶（5．Fu）诱导人胃癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法：将表达人periostin全长序列的重组质粒稳定转染人胃癌细胞株SGC7901,同时设置空载体稳定转染组和未转染对照组,加入不同浓度顺铂或5-Fu处理24h,以流式细胞术检测细胞凋亡。以蛋白质印迹法检测经5μmol／L顺铂或10μmol／L5-Fu处理的SGC7901细胞的凋亡相关蛋白表达。结果：顺铂和5-Fu均能剂量依赖性地诱导SGC7901细胞凋亡,促进细胞色素c由线粒体释放至胞质,同时easpase-3激活,easpase-3底物PARP剪切增强。periostin稳定转染组SGC7901细胞对顺铂和5-Fu诱导的细胞凋亡具有显著抗性,细胞凋亡率显著低于经相同剂量化疗药物处理的空载体稳定转染组（P〈0．05）,胞质细胞色素C、cleavedcaspase-3、cleavedPARP蛋白表达亦明显下调。结论：过表达periostin基因可增强SGC7901细胞对顺铂和5-Fu诱导的细胞凋亡的抵抗能力,其抗凋亡活性与抑制线粒体依赖性凋亡途径有关。     

zeb1基因与肿瘤细胞迁移能力的关系

目的:探讨肿瘤细胞zeb1基因的表达量与肿瘤细胞的迁移能力之间的关系.方法:实时定量PCR方法检测正常胃黏膜上皮细胞GES及四种肿瘤细胞BGC823、SGC7901、A549和HeLa细胞中zeb1基因的表达量:Transwell小室检测五种细胞的迁移能力.结果:在五种细胞中,zeb1在HeLa细胞中表达量最高,BGC823及SGC7901次之,在A549及GES中表达量最低;发生迁移的细胞数目在HeLa细胞中最多,BGC823及SGC7901其次,在A549及GES细胞中最少;线性相关分析表明,zeb1基因的表达量与细胞迁移能力呈正相关(r=0.961,P<0.01).结论:zeb1基因可能促进肿瘤细胞的迁移能力.     

胃癌细胞对细小病毒H-1敏感性差异的实验研究

目的 探讨不同胃癌细胞株对细小病毒细胞毒作用的敏感性差异及可能的机制。方法共选用HGC27(未分化)、BGC823(未分化)、MKN45(低分化)、AGS(低分化)、SGC7901(中分化)和MKN28(高分化)等6株不同分化状态的胃癌细胞株，用流式细胞仪分析其各自的细胞周期，H-1病毒感染后采用MTT方法检测不同胃癌细胞株对其细胞毒作用的敏感性差异，用RT-PCR来检测H-1病毒中的非结构蛋白基因(NS-1)在6株不同胃癌细胞中的表达。结果 HGC27、BGC823、MKN45、AGS、SGC7901和MKN28等不同分化状态细胞株中，S期细胞的比率分别为24．72％，30．15％，27．10％，29．03％，31．82％和33．73％。其中HGC27细胞对H-1病毒的细胞毒作用敏感；SGC7901细胞其次；MKN45、AGS细胞对H-1病毒的细胞毒作用中等敏感；MKN28细胞对H-1病毒的细胞毒作用不敏感；而BGC823则对H-1病毒的细胞毒作用抵抗。病毒NS-1的mRNA在HGC27、BGC823、MKN45和SGC7901等细胞中的表达水平较高，而在AGS和MKN28中的表达水平却较低。结论 H-1病毒的细胞毒作用在不同的胃癌细胞株中的差异显著。总体上，与高分化细胞株MKN28细胞相比，分化差的细胞对细小病毒H-1的细胞毒作用敏感性增加。其机制至少部分与分化差细胞中病毒NS-1蛋白的产生和积聚能力增高相关。未分化的BGC823细胞对H-1病毒的细胞毒作用抵抗，进一步证实并非所有的肿瘤细胞都对细小病毒的溶胞性作用敏感。     

Transduction of Fas gene or Bcl-2 antisense RNA sensitizes cultured drug resistant gastric cancer cells to chemotherapeutic drugs

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍａｊｏｒｍｅｔｈｏｄｓｉｎｔｕｍｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ,ｂｕｔｉｔｏｆｔｅｎｄｏｅｓｎｏｔｗｏｒｋｄｕｅｔｏｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＭＤＲ）．Ｒｅｃｅｎｔｓｔｕｄｉ...     

Investigation of the sensitivities of distinct gastric cancer cells to parvovirus H‐1 induced cytotoxicity

OBJECTIVE: To investigate the sensitivities of distinct gastric cancer cells to parvovirus H‐1 induced cytotoxicity and the possible mechanism(s). METHODS: There were six distinct differentiated gastric cancer cell lines: HGC27 (undifferentiated), BGC823 (undifferentiated), MKN45 (poorly differentiated), AGS (poorly differentiated), SGC7901 (moderately differentiated) and MKN28 (well differentiated). The cell cycle distributions were measured by flow cytometry and the differential sensitivities of the six distinct gastric cancer cells after H‐1 virus infection were detected by MTT assay. RT‐PCR was used to detect viral NS1 gene expression in all six gastric cancer cell lines. RESULTS: The S phase ratios of HGC27, BGC823, MKN45, AGS, SGC7901 and MKN28 were 24.72%, 30.15%, 27.10%, 29.03%, 31.82% and 33.73%, respectively. HGC27 cells were sensitive to H‐1 virus induced cytotoxicity, followed by SGC7901 cells. MKN45 and AGS cells were moderately sensitive and MKN28 cells were insensitive. However, BGC823 cells were resistant to H‐1 virus induced cytotoxicity. The expressions of viral NS1 were higher in HGC27, BGC823, MKN45 and SGC7901 cells, and lower in AGS and MKN28 cells. CONCLUSIONS: The sensitivities of the distinct gastric cancer cells to H‐1 virus induced cytotoxicity were markedly different. In general, the poorly differentiated cells showed an enhanced sensitivity to H‐1 virus attack compared with well‐differentiated ones. The enhanced sensitivity of poorly versus well‐differentiated gastric cancer cells to H‐1 virus is related in part to the enhanced capacity of the former for NS1 protein production and accumulation. The undifferentiated BGC823 cells were resistant to H‐1 virus triggered cytotoxicity. It may further verify that not all tumor cells are sensitive to H‐1 virus lytic effects.     

hPOT1 RNA干扰对人胃癌BGC823细胞突变型p53表达的影响

目的通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中人端粒保护蛋白（human protection of telomeresl，hPOTl）的表达，观察hPOTl RNA干扰对胃癌BGC823细胞突变型p53基因转录水平的影响。方法从hPOTl编码区外显子8的区域选取一段19个碱基的序列gtactagaagcctatctca为RNA干扰靶向序列，构建hPOTl的RNA干扰真核表达载体，转人体外培养的低分化人胃癌细胞BGC823，提取细胞总RNA，半定量RT-PCR检测hPOTl和突变型p53基因mRNA表达水平的改变，验证hPOTlRNA干扰载体的基因沉默效率，了解抑制hPOTl表达后突变型p53基因mRNA水平的改变。结果经DNA测序鉴定，hPOTlRNA干扰载体包含干扰序列的插入片段，插入位置正确。经半定量RT-PCR鉴定，RNA干扰组细胞的hPOTl mRNA表达水平明显下调，基因沉默效率在70％左右；突变型p53表达下调。结论通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中hPOTl表达后，突变型p53表达下调，提示hPOTl与突变型p53之间有一定的相关性。