愈肝胶囊对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用

目的：观察愈肝胶囊对HBV转染细胞表达功能的影响。方法：本研究以乙型肝炎病毒(HBV)基因转染的人肝癌细胞系2．2．15细胞作为筛选抗HBV药物的细胞模型，观察愈肝胶囊对2．2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的影响；并以四甲基氮唑蓝(MTT)比色法检测药物对细胞的毒性。结果：愈肝胶囊对2．2．15细胞分泌HBsAg和HBeAg有显著抑制作用。半数中毒剂量(TC50)为1．79mg／ml，对2．2．15细胞分泌HBsAg和HBeAg抑制率分别为70．81％，83．96％；半数有效剂量(IC50)HBsAg为0．86，HBeAg为0．13。治疗指数(TI)分别为HBsAg2．08，HBeAg13．76。结论：愈肝胶囊在体外有一定的抗HBV作用。     

氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的：观察氧化苦参碱体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法：以HepG2－2．2．15细胞株为模型, 用微粒酶免疫测定技术(MEIA）检测细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg含量,用bDNA信号可扩增法定量检测细胞内核心颗粒HBV DNA的变化,以MTT比色法观察药物的细胞毒性。结果：氧化苦参碱2000μg/ml时对HBsAg、HBeAg的抑制率分别达40．57％、48．27％;浓度为100－200μg/ml时,能明显降低2．2．15细胞浆核心颗粒HBV DNA水平;无明显细胞毒性作用。结论：体外细胞培养表明,氧化苦参碱具有直接抗HBV活性。     

蒙药乙肝1号对HBV转染细胞表达功能的影响

目的:探讨蒙药乙肝1号抗HBV药理作用。方法:采用HBV的2.2.15细胞系作为模型,观察药物对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制效果。结果:蒙药乙肝1号30mg/ml浓度对细胞有毒,最大耐受药物浓度20mg/ml时对HBsAg抑制率为57.81％,半数有效剂量(IC_(50)为5.54±3.44mg/ml,治疗指数TI为5.42±3.42;对HBeAg的抑制率为71.64％,半数有效剂量(IC_(50))为3.69±0.01mg/ml,治疗指数(TI)为6.41±0.03mg/ml。结论:提示蒙药乙肝1号煎剂在体外有一定的抗HBV作用。     

胎盘免疫调节因子对HepG2．2．15细胞毒性及HBV DNA分泌作用的影响

目的观察胎盘免疫调节因子（PF）在体外的抗乙肝病毒（HBV）作用及安全性。方法将质量浓度分别为0．032—20．000mg／ml的PF作用于体外培养的人肝癌细胞系HepG 2．2．15细胞,通过MTT比色法观察细胞增殖抑制率及半数毒性质量浓度（TC50）,以荧光定量PCR法检测HBV DNA水平（以拉米夫定为阳性对照组）。结果PF处理后细胞增殖抑制率为0．75％～58．21％且呈浓度依赖性,作用72h后TC50为13．61mg／ml;PF作用72h和144h后,细胞上清液中HBV DNA拷贝量显著降低,与阳性对照组水平相似。结论PF在体外有显著抗HBV作用,且细胞毒性较小。     

环孢素A对乙型肝炎病毒作用的体外实验

目的探讨环孢素A（CsA）在体外对乙型肝炎病毒（HBV）蛋白合成、DNA复制的影响。方法将不同浓度的CsA（0．6～20．0μg／ml）作用于HepG2．2．15细胞系，通过检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）水平；以及细胞内乙型肝炎核心抗原（HBcAg）mRNA水平和HBVDNA水平来评价HBV复制情况；通过检测细胞内PyK2激酶402位点酪氨酸（PyK2Y402）磷酸化水平来探讨CsA对HBV复制的作用机制。结果CsA对HBV复制具有抑制作用，随着CsA浓度的升高，对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升，细胞内HBVDNA复制水平下降。10．0μg／ml CsA作用4d时，对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为49．7％和34．3％，HBVDNA的表达量仅为对照组的34．9％。在2．0“g／ml CsA作用下PyK2 Y402的磷酸化水平下降。结论CsA对HepG2．2．15细胞HBsAg和HBeAg表达、HBVDNA复制均有抑制作用，并呈剂量依赖性。CsA可能通过降低PyK2 Y402的磷酸化水平抑制HBV的复制。     

融合蛋白胸腺素α1-干扰素α抗乙型肝炎病毒活性的实验研究

目的观察融合蛋白胸腺素α1-干扰素α(TA1-IFN)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用,并与胸腺素α1、干扰素α两者联合(TA1+IFN)应用的体外抗HBV作用进行比较。方法HepG22.2.15细胞接种后24h,换用含5种不同浓度(8000、4000、2000、1000、500U／ml)药物的培养基,37℃、体积分数5％CO2条件下培养,每3d换用原浓度含药培养液1次,并于第6天收集培养液,用Abbott诊断试剂盒,分别检测不同组药物作用后上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)的含量,并计算其抑制率;同时用四甲基偶氮唑盐比色分析法检测不同组药物对HepG22.2.15细胞的细胞毒性作用。结果TA1-IFN体外对HBsAg、HBeAg的抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系,并且在药物浓度达8000U／ml后趋于稳定,此时TA1-IFN对HBsAg、HBeAg抑制率分别为72.2％±0.8％、60.4％±1.1％,细胞存活率为85.2％±2.0％;而相应浓度的TA1-IFN对HBsAg、HBeAg抑制率为40.0％±0.7％、34.5％±3.2％,细胞存活率为70.0％±1.9％,两者HBsAg、HBeAg抑制率及细胞存活率比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论融合蛋白TA1-IFN体外具有良好的抗HBV作用,其体外抗HBV活性比TA1-IFN联合应用强,且细胞毒性比TA1+IFN联合应用时小,本实验为融合蛋白TA1-IFN的临床研究提供了重要的理论     

灵猫方药物血清体外抗乙肝病毒作用的研究

目的：观察灵猫方药物血清对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制效果。方法：应用SD大鼠备置5倍和10倍灵猫方药物血清、生理盐水大鼠血清,将3种血清分别作用于HepG2.2.15细胞,在第72小时、96小时、144小时收集细胞培养上清液,采用ELISA法检测HBsAg、HBeAg。结果：与生理盐水大鼠血清相比较,灵猫方药物血清在72小时后即产生抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的作用,96小时时对乙肝病毒（HBV）的抑制率达到高峰,在144小时对HBV的抑制率有所下降;5倍灵猫方药物血清和10倍灵猫方药物血清在抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg方面,差异无显著性意义。结论：灵猫方药物血清在体外具有一定的抗HBV的作用。     

肝舒胶囊在体外细胞培养中抗HBV活性的研究

目的研究肝舒胶囊在2.2.15细胞培养中抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法用2.2.15细胞体外培养.对肝舒胶囊抗HBV活性进行评价。结果肝舒胶囊5g／L加药后4d对2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制率为51.16％和74.83％,在加药后第8天抑制作用达高峰,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为75.72％和80.02％。药物作用12d时．其治疗指数可达7.73和5.39。结论肝舒胶囊在体外细胞培养中对HBsAg和HBeAg的分泌均有较好的抑制作用。     

苦参碱与氧化苦参碱体外抗乙肝病毒的比较

目的:观察苦参碱与氧化苦参碱对HepG2.2.1 5细胞分泌HBsAg,HBeAg和Pre-S1的影响,探讨其体外抗乙型肝炎病毒作用.方法:采用HepG2.2.1 5细胞模型进行体外培养,给予不同浓度苦参碱与氧化苦参碱,作用9 d后收集上清液,用MTT法观察药物对HepG2.2.15细胞的抑制作用,用ELISA法检测上清夜中HBsAg,HBeAg和Pre-S1的分泌.结果:苦参碱与氧化苦参碱在浓度为0.001mol/L以下时对HepG2.2.1 5的生长抑制作用较小(低于25%).在浓度为1000 μmol/L到0.1 μmol/L之间,苦参碱和氧化苦参碱对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制率均高于50%,而对HBeAg的抑制率均低于50%;浓度为0.001 mol/L时对Pre-Sl的抑制率分别为53.58%、59.33%.结论:苦参碱与氧化苦参碱均具有一定的抗HBV作用,两者无显著差别,且对HBsAg和Pre-S1的抑制效果优于拉米夫定.     

叶下珠提取物抗乙肝病毒及乙肝病毒X基因的研究

目的：研究叶下珠提取物在体外抗HBV以及抑制HBX表达的作用。方法：选用2．2．15细胞以及建立HepG2X、HepG2X-HIV-1-LTR-luciferase细胞系，用不同浓度的叶下珠药液进行细胞培养试验。确定药液对试验细胞的药物最大无毒浓度（TC0）以及半数药物有效浓度（IC50）。实验时，将细胞分空白对照组、HepG2CAT-HIV-1-LTR-luciferase细胞对照组，以及不同药物浓度的试验组（15mg／ml，7．5mg／ml，3.75mg／m1），并以β—action作为内参照。用real time-PCR、RT-PCR，以及抑制荧光素酶（luciferase）等方法，定量检测HBV DNA含量以及HBX表达量。结果：叶下珠提取物最大无毒剂量是15mg／ml，对HepG2．2．15细胞HBVDNA和HepG2-X细胞HBX半数有效量皆为3．75mg／ml（P〈0．05）。而7．5mg／ml、15mg／ml剂量与空白对照组相比较，分别为P〈0．01，P〈0．001。对HBX的抑制荧光素酶试验，叶下珠对细胞对照组及空白对照组抑制不明显，而高剂量用药组（15mg／ml），用药72小时与24小时比较，抑制率上升了10倍。结论：叶下珠不仅对全基因的HBV有抑制作用，还可能直接时X基因表达有抑制作用。     

扇贝多糖体外抗乙型肝炎病毒活性的研究

目的体外观察扇贝多糖抗乙型肝炎病毒（HBV）的作用。方法采用HepG2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度扇贝多糖,作用9d后收集上清液,用MTT法观察扇贝多糖对HepG2.2.15细胞的抑制作用;用ELISA法测定上清液中HBsAg和HBeA含量;用荧光定量PCR检测扇贝多糖对HepG2.2.15细胞分泌HBV DNA的影响。结果扇贝多糖浓度在500μg/mL 时,对细胞无明显毒性;扇贝多糖对HBsAg、HBeAg均有抑制作用,其半数有效浓度（IC50）分别为294μg/mL 、168μg/mL,治疗指数（TI）为>17.0和>29.8;扇贝多糖对HBV DNA的复制也有一定的抑制作用。结论扇贝多糖具有一定的体外抗HBV作用。     

三螺旋形成寡核苷酸抑制乙型肝炎病毒复制及抗原合成的实验研究

目的 探讨三螺旋形成寡核苷酸抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用。方法 针对ＨＢＶ核心启动子ＳＰ１位点,合成２１ｍｅｒ硫代磷酸三螺旋形成寡核苷酸及２１ｍｅｒ无关对照寡核苷酸。采用ＬＥＩＳＡ,斑点杂交法分别检测了经寡核苷酸处理的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞及空白对照组细胞培养上清ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｇ及ＨＢＶ ＤＮＡ水平。结果 ＴＦＯ２１组２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ及ＨＢＶ ＤＮＡ分泌量明显低于空白对照组。ＴＦ     

Effective inhibition of expression of hepatitis B virus genes by DNAzymes

AIM: To evaluate the inhibitory effects of DNAzymes on the expressions of hepatitis B virus (HBV) s (HBsAg) and e (HBeAg) in 2.2.15 cells, and to explore the potential therapeutic effects of DNAzymes on replication of HBV genome. METHODS: DNAzymes DrzBS and DrzBC specific to HBV (ayw subtype) s gene ORF A157UG and e gene ORF A1816UG, were designed and synthesized. Inhibitory effects of DrzBS or DrzBC on the expressions of HBV s and e genes as well as HBV DNA levels in culture supernatants were observed in 2.2.15 cells. RESULTS: After being treated with DrzBS or DrzBC, the expression of HBV s or e genes in 2.2.15 cells was depressed dramatically. The maximum inhibition rate was 94.2% and 91.8% for DrzBS and DrzBC, respectively. The concentration for effective inhibition of both DrzBS and DrzBC was within 0.1-2.5 μmol/L, showing a dose-dependence. The efficiency of inhibiting HBsAg, HBeAg in 2.2.15 cells by DrzBS or DrzBC was higher than that of the same target genes by antisense oligonucleotides (ASON). The concentration for effective inhibition of DNAzymes was at least 10-fold lower compared with ASON controls. Neither inhibition on the replication of HBV DNA nor toxicity to 2.2.15 cells was observed. CONCLUSION: DrzBS and DrzBC can block the expression of HBV s- and e-genes in 2.2.15 cells and provide a specific and effective anti-HBV gene therapeutic means.     

Effective inhibition of expression of hepatitis B virus genes by DNAzyrnes

AIM: To evaluate the inhibitory effects of DNAzymes on the expressions of hepatitis B virus (HBV) s (HBsAg) and e (HBeAg) in 2.2.15 cells, and to explore the potential therapeutic effects of DNAzymes on replication of HBV genome. METHODS: DNAzymes DrzBS and DrzBC specific to HBV(aywsubtype) s gene ORF A157UG and e gene ORF A1816UG,were designed and synthesized. Inhibitory effects of DrzBS or DrzBC on the expressions of HBV s and e genes as well as HBV DNA levels in culture supernatants were observed in 2.2.15 cells.RESULTS: After being treated with DrzBS or DrzBC, the expression of HBV s or e genes in 2.2.15 cells was depressed dramatically. The maximum inhibition rate was 94.2% and 91.8% for DrzBS and DrzBC, respectively. The concentration for effective inhibition of both DrzBS and DrzBC was within 0.1-2.5 μmol/L, showing a dosedependence. The efficiency of inhibiting HBsAg, HBeAg in 2.2.15 cells by DrzBS or DrzBC was higher than that of the same target genes by antisense oligonucleotides (ASON). The concentration for effective inhibition ofDNAzymes was at least 10-fold lower compared with ASON controls. Neither inhibition on the replication of HBV DNA nor toxicity to 2.2.15 cells was observed.CONCLUSION: DrzBS and DrzBC can block the expression of HBV s- and e-genes in 2.2.15 cells and provide a specific and effective anti-HBV gene therapeutic means.     

反义锁核酸与拉米夫定在HepG2.2.15细胞中抗HBV作用的比较

目的:应用反义锁核酸与拉米夫定作用HepG2.2.15细胞,对他们抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)效果进行比较.方法:设计针对HBV翻译起始区S基因mRNA的反义寡核苷酸,并进行锁核酸修饰,以阳离子脂质体介导反义锁核酸转染HepG2.2.15细胞;拉米夫定组直接作用HepG2.2.15细胞;分别于用药后第2、4、6、8、10天收集细胞培养上清液.用ELISA法和FQ-PCR法检测收集上清液HBsAg、HBeAg和HBVDNA的含量.MTT法分别检测反义锁核酸与拉米夫定对细胞存活率的影响.结果:拉米夫定对HBVDNA具有明显抑制作用,最高可达46.52%,但对HBsAg、HBeAg影响较小;反义锁核酸对HBsAg、HBeAg及HBVDNA均有较强抑制作用,对HBsAg、HBeAg和HBVDNA的最高抑制率分别达67.69%、59.71%和62.96%(P<0.05),且抑制随时间呈增高趋势.反义锁核酸与拉米夫定对细胞代谢均无明显影响.结论:反义锁核酸抗HBV作用机制与拉米夫定不同,反义锁核酸抗HBV作用明显优于拉米夫定.     

复方六月雪体外抗HBV的实验研究

目的观察复方六月雪(CLYX)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法在最大无毒浓度(TC0)基础上观察不同浓度药物作用于HepG2.2.15细胞,分别在第4天和8天收集细胞培养上清液,采用实时荧光定量PCR法检测上清液HBV DNA的含量,采用ELISA法测定上清液HBsAg和HBeAg的滴度。结果无毒浓度的复方六月雪在HepG2.2.15细胞培养中可有效地抑制细胞HBV DNA的复制及HBsAg和HBeAg的分泌。结论CLYX在体外有显著的抗HBV的作用。     

减毒水痘病毒对乙型肝炎病毒复制的影响

目的观察减毒水痘病毒对乙型肝炎病毒复制的影响。方法分别用减毒水痘病毒接种鸭乙型肝炎模型和HepG22.2.15细胞,以斑点杂交和EIA方法分别检测鸭血清中DHBVDNA和细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg的含量。结果减毒水痘病毒两个剂量组均显示鸭血清病毒量下降,200pfu/kg组在给药后第10天和停药5d时,DHBVDNA吸光度（A）平均值分别由给药前1.17±0.29降至0.59±0.45和0.21±0.21,相比差异有显著性（t＝3.51,P＜0.01和t＝7.54,P＜0.001）;400pfu/kg组在给药后第5、10天DHBVDNA无下降,停药5d时DHBVDNAA平均值由给药前0.70±0.25降至0.32±0.17,差异有显著性（t＝3.58,P＜0.01）;减毒水痘病毒对2.2.15细胞分泌HBeAg、HBsAg均有抑制作用,最大抑制率分别为61%和33%,对HBeAg的抑制较HBsAg强。结论减毒水痘病毒在鸭乙型肝炎模型上可以显著降低血清DHBVDNA水平;在体外能够直接抑制2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg,提示该病毒可能对乙型肝炎病毒复制有干扰或抑制作用。     

Synergistic effect of a novel oxymatrine-baicalin combination against hepatitis B virus replication, α smooth muscle actin expression and type I collagen synthesis in vitro

AIM: To study the effect of oxymatrine-baicalin combination (OB) against HBV replication in 2.2.15 cells and alpha smooth muscle actin (alpha SMA) expression, type I, collagen synthesis in HSC-T6 cells. METHODS: The 2.2.15 cells and HSC-T6 cells were cultured and treated respectively. HBsAg and HBeAg in the culture supernatants were detected by ELISA and HBV DNA levels were determined by fluorescence quantitative PCR. Total RNA was extracted from HSC-T6 cells and reverse transcribed into cDNA. The cDNAs were amplified by PCR and the quantities were expressed in proportion to beta actin. The total cellular proteins extracted from HSC-T6 cells were separated by electrophoresis. Resolved proteins were electrophoretically transferred to nitrocellulose membrane. Protein bands were revealed and the quantities were corrected by beta actin. RESULTS: In the 2.2.15 cell culture system, the inhibitory rate against secretion of HBsAg and HBeAg in the OB group was significantly stronger than that in the oxymatrine group (HBsAg, P = 0.043; HBeAg, P = 0.026; respectively); HBV DNA level in the OB group was significantly lower than that in the oxymatrine group (P = 0.041). In HSC-T6 cells the mRNA and protein expression levels of alpha SMA in the OB group were significantly lower as compared with those in the oxymatrine group (mRNA, P = 0.013; protein, P = 0.042; respectively); The mRNA and protein expression levels of type I collagen in the OB group were significantly lower as compared with those in the oxymatrine group (mRNA, P < 0.01; protein, P < 0.01; respectively). CONCLUSION: OB combination has a better effect against HBV replication in 2.2.15 cells and is more effective against alpha SMA expression and type I collagen synthesis in HSC-T6 cells than oxymatrine in vitro.