坎地沙坦对高血压大鼠左室重构的抑制作用

目的:研究坎地沙坦对大鼠心肌组织中钙网蛋白(CRT)及细胞凋亡蛋白caspase-12表达的影响及其对左室重构的逆转作用。方法:采用双肾双夹术建立高血压大鼠模型。将36只雄性SD大鼠随机分为假手术组、手术组和坎地沙坦干预组,每组12只(n=12)。喂养6周后,通过颈动脉插管测定大鼠平均动脉压(MBP);称量大鼠的体质量(BW)、心脏质量(HW)、左心室质量(LVW),计算心脏质量指数(HW/BW)及左心室质量指数(LVWI=LVW/BW)。采用免疫组化染色法检测大鼠心肌组织中CRT及caspase-12表达的水平。结果:与假手术组比较,手术组大鼠的MBP、LVWI均有显著升高(P<0.05),内质网应激相关分子CRT及caspase-12蛋白的表达水平均增强。与手术组比较,坎地沙坦干预组大鼠的MBP和LVWI均降低(P<0.05),内质网应激相关分子CRT及caspase-12蛋白的表达水平均减弱。结论:高血压触发的内质网应激可能参与了高血压后期的左室重构过程。而坎地沙坦干预后内质网应激水平明显降低且心室重构在一定程度上得到逆转,提示坎地沙坦可能通过降低CRT和caspase-12介导的内质网应激反应起到抑制高血压左室重构的作用。     

拉西地平对高血压大鼠血管平滑肌细胞CRT和caspase12表达变化的影响

目的 探讨压力负荷高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞内质网应激相关因子钙网蛋白（calreticulin,CRT）和caspase-12的表达变化及药物拉西地平对其的影响.方法 将30只成年雄性SD大鼠随机等分为对照组（sham组）、模型组（TAC组）和拉西地平组（lacidipine组）.Sham组分离腹主动脉但不行狭窄术,TAC组行腹主动脉狭窄术,lacidipine组行腹主动脉狭窄术并给予拉西地平0.5 mg/（kg·d）,喂养8周用颈动脉插管法测定各组大鼠的平均动脉压（MAP）;利用图像分析软件测量血管中层的厚度;用免疫组织化学法和western-blot法检测CRT和caspase-12的表达水平;TUNEL荧光法检测血管平滑肌细胞的凋亡率.结果 ①TAC组大鼠MAP均值显著高于sham组（P＜0.01＝和lacidipine组（P＜0.05＝;lacidipine组大鼠MAP均值高于sham组（P＜0.05＝;②TAC组大鼠血管平滑肌中层厚度均值大于sham组和lacidipine组均有统计学意义（P＜0.05＝,lacidipine组和sham组大鼠血管平滑肌中层厚度比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;③TAC组的CRT和caspase-12蛋白表达量均值高于sham组和lacidipine组,lacidipine组CRT和caspase-12蛋白表达量均值高于sham组（P＜0.05＝;④TAC组大鼠血管平滑肌凋亡率高于sham组和lacidipine组（P＜0.05＝,lacidipine组大鼠血管平滑肌凋亡率高于sham组（P＜0.05＝.结论 腹主动脉狭窄致高血压可引起血管平滑肌细胞内质网应激反应,导致CRT表达增加及caspase-12的活化增高;拉西地平通过下调内质网应激水平,逆转高血压所致的血管平滑肌细胞的损伤作用,对血管平滑肌细胞具有保护作用.     

高血压大鼠心肌内质网应激时GRP78和CHOP的表达及其与心肌细胞凋亡的关系

目的:探讨心肌组织内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)在高血压大鼠心肌中的表达及其与心肌细胞凋亡的关系。方法:将48只SD大鼠随机等分为两个组,一组采用腹主动脉缩窄术(TAC)建立高血压模型,称为TAC组;另一组只进行相应的假手术,称为Sham组。按术后饲养时间(3 d、7 d、14 d和28 d)的不同,TAC组又分为4个组,即TAC3d组、TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组,每组6只(n=6);Sham组也又分为4个组,即Sham3d组、Sham7d组、Sham14d组和Sham28d组,每组6例(n=6)。用颈动脉插管法测定各组大鼠的平均动脉压(MAP);用Western blot法检测GRP78蛋白和CHOP蛋白表达的水平;用TUNNEL法检测心肌细胞的凋亡。结果:①TAC3d组、TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组的MAP均显著高于相应的各Sham组(P0.05),且TAC各组的MAP随着术后时间的延长,血压值呈逐渐递增的趋势。②GRP78蛋白在TAC术后3 d即发现表达(0.20±0.02),明显高于Sham3d组(0.10±0.02)(P0.05);但明显低于其他各TAC组(P0.05)。随着术后时间的延长,TAC7d组GRP78蛋白的表达达到最高(0.94±0.03),其后各组呈递减趋势;但TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组GRP78蛋白表达的水平均明显高于相应的各Sham组(P0.05)。③随着TAC术后时间的延长,心肌组织中CHOP蛋白的表达呈递増趋势;TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组CHOP蛋白表达的水平,分别为(0.17±0.01)、(0.36±0.03)和(0.61±0.02),均明显高于相应的各Sham组(P0.05)。TAC3d组CHOP蛋白的表达与Sham3d组比较,无明显差异。④Sham3d组和TAC3d组中仅有极少数凋亡细胞;Sham7d组和TAC7d组可见较多的凋亡细胞,且随着时间的延长细胞凋亡率逐渐增加,TAC28d组的凋亡率达最高(30.23±0.17)%;TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组细胞凋亡率显著高于相应的各Sham组(P0.05)。⑤相关性分析显示,从TAC7d组、14d组及28d组的MAP与心肌组织中GRP78蛋白的表达呈显著的负相关(r=-0.882,P0.01),与CHOP蛋白的表达呈显著正相关(r=0.933,P0.01);CHOP蛋白的表达与GRP78蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.980,P0.01),与心肌细胞的凋亡率呈显著的正相关(r=0.997,P0.01)。结论:高血压诱导心肌组织内质网应激反应在血压升高早期以GRP78的表达占优势,随着血压持续性升高可导致CHOP在心肌中超表达,参与心肌细胞凋亡的病理过程,并使心肌内质网应激稳态调节发生失衡。     

缺血后处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12的影响

目的探讨心肌缺血再灌注损伤大鼠使用缺血后处理对内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白(GRP)78及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-12表达的影响。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为A组(空白对照组)、B组(心肌缺血再灌注损伤组)、C组(心肌缺血后处理组),每组10只,分别进行假手术、心肌缺血再灌注损伤及心肌缺血后处理操作,分析3组大鼠心肌的缺血面积及梗死面积百分比,对比心肌内质网应激相关蛋白GRP78及caspase-12的表达,并对3组大鼠的神经行为进行评估。结果 A组大鼠心肌组织无缺血及梗死病灶,C组大鼠心肌组织的缺血面积及梗死面积百分比均显著低于B组,差异有统计学意义(P0.05);A组相应部位心肌组织GRP78及caspase-12蛋白表达均显著低于B组及C组,C组caspase-12蛋白表达显著低于B组,而GRP78蛋白表达高于B组,差异均有统计学意义(均P0.05);神经行为学评估结果显示3组各项神经运动功能量化数值之间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论大鼠心肌缺血再灌注损伤使用缺血后处理能够抑制心肌细胞的凋亡,同时能够增加内质网的应激反应,其与心肌细胞凋亡减少及心肌梗死面积减少相关。     

Ghrelin通过抑制ERS减轻ISO所致的心肌损伤和心肌细胞凋亡

目的探讨ghrelin（G）减轻异丙基肾上腺素（isoproterenol,ISO）所致心肌损伤和凋亡是否与其抑制心肌内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）有关。方法：将29只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为对照（Con）组、ISO组和ISO＋G组。Con组皮下注射生理盐水,ISO组皮下注射ISO,ISO＋G组皮下注射ISO前2 d皮下注射ghrelin。采用生理记录仪测定各组大鼠心功能。以HE染色及血浆乳酸脱氢酶（LDH）及肌酸激酶MB（CK-MB）活性的测定评估心肌损伤的程度。用TUNEL法测定心肌细胞的凋亡。用Western blot检测各组心肌组织中ERS标志性分子C／EBP同源蛋白（C／EBP-homologous protein,CHOP）和easpase．12的表达。结果：外源性ghrelin可显著缓解ISO所致大鼠的心功能不全,减轻ISO造成的心肌损伤,减少心肌细胞凋亡,并降低CHOP和剪切的caspase-12的表达。结论：ghrelin通过抑制ERS可减轻ISO所致心肌损伤和心肌细胞凋亡。     

低血糖对急性心肌梗死后内质网应激介导心肌细胞凋亡的作用和机制研究

目的通过体内大鼠模型观察低血糖水平对内质网应激(ERS)感受蛋白及凋亡信号分子表达的影响。方法将Wister大鼠40只中随机选20只结扎左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌梗死(AMI)模型;另20只为假手术,再随机分为正常血糖假手术组(SN组)、正常血糖AMI组(MN组)、低血糖假手术组(SL组)、低血糖AMI组(ML组),每组10只。建立术前低血糖模型,术后24h处死取材,评估大鼠心肌细胞凋亡程度、检测心肌组织中葡萄糖调节蛋白78/免疫球蛋白结合蛋白(GRP78/BIP)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和C/EBP同源蛋白(CHOP)及Caspase-12的表达情况。结果 ML组及MN组心肌细胞凋亡指数[(29.36±2.15)%、(20.27±2.80)%]明显高于SN组和SL组[(1.82±0.83)%、(1.97±0.96)%,P<0.05];MN组和ML组GRP78、PERK、CHOP及Caspase-12的表达明显高于SN组和SL组(P<0.01);MN组与ML组PERK表达比较,无统计学差异(P>0.05)。结论 AMI前低血糖水平激活了ERS诱导的细胞凋亡通路;内质网特异性标记蛋白表达与心肌细胞凋亡变化规律一致,ERS通路可能参与了大鼠AMI后心肌细胞凋亡的调控。     

高表达SEL1L减轻小鼠主动脉弓缩窄所致心脏结构和功能损伤的机制研究

目的 内质网应激在压力过载所致心肌损伤中扮演重要作用，Lin-12样抑制子/增强子（suppressor/enhancer of Lin12-like, SEL1L）是维持内质网稳态的关键分子，本研究旨在观察高表达SEL1L对小鼠主动脉弓缩窄（transverse aortic constriction, TAC）所致心脏结构和功能损伤的影响及其可能的作用机制。方法 采用主动脉弓缩窄术建立小鼠心肌肥厚模型。40只雄性C57BL/6小鼠随机均分为4组：Sham组、主动脉弓缩窄组（TAC组）、主动脉弓缩窄+AAV9空白干预组（TAC+AAV9-Ctrl组）和主动脉弓缩窄+AAV9-SEL1L组（TAC+AAV9-SEL1L组）。TAC+AAV9-Ctrl组和TAC+AAV9-SEL1L组小鼠心肌内点注射1011个单位的AAV9-Ctrl和AAV9-SEL1L病毒颗粒4周后，进行TAC手术。检测各组小鼠心脏功能，明确心肌肥厚、心肌纤维化及心肌细胞凋亡情况，同时观察心肌组织内质网应激和氧化应激水平。结果 与Sham组相比，TAC组小鼠心脏SEL1L mRNA及蛋白表达显著降低，心脏功能明显受损...     

自发性高血压大鼠心室重构及脂联素受体1的表达

目的 观察自发性高血压大鼠(SHR)心室重构情况和心肌脂联素受体1(AdipoR1)及其mRNA的表达水平.方法 8只12w龄雄性自发性高血压大鼠为实验组(SHR组),8只12周龄雄性京都Wistar大鼠为对照组(WKY组).喂养12w后,各组大鼠分别超声心动图测定左室舒张末期内径(LVEDD)、室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、二尖瓣口舒张早期峰值流速(E峰)、舒张晚期血流峰值流速(A峰)并计算E/A比值;计算左室重量指数(LVWI);HE染色和Masson染色观察心肌组织形态学改变,并测定心肌胶原容积分数(CVF)和羟脯氨酸(Hyp)的含量;RT-PCR方法检测心肌组织AdipoR1 mRNA表达水平;Western印迹方法检测心肌组织AdipoR1蛋白表达水平.结果 与WKY组相比,SHR组IVST、LVPWT、LVWI均增大;LVEDD和E/A均减小;心肌细胞排列紊乱,间质成纤维细胞肥大增生,CVF和Hyp的含量均增多;AdipoR1 mRNA及AdipoR1蛋白表达均显著降低.结论 SHR大鼠有心室重构发生,心肌AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白表达均水平下调,提示SHR大鼠心室重构发生与AdipoR1的变化有关.     

尾加压素Ⅱ对大鼠心肌细胞氧化应激/内质网应激及其相关信号通路的影响

目的:探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)对心肌细胞氧化应激(OS)/内质网应激(ERS)及其相关信号通路的影响。方法:本实验将原代培养的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞随机分为四组:正常对照组、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸预处理组(NAC 100μmol/L,NAC组)、UⅡ组(UⅡ100 nmol/L)和UⅡ+NAC组(UⅡ100 nmol/L+NAC100μmol/L)。采用2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作为探针检测各组心肌细胞内活性氧(ROS)的水平。通过实时荧光定量PCR (qRTPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组内质网应激的标志性因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活性转录因子6(ATF6)、细胞凋亡信号分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)的表达情况,观察UⅡ对氧化应激及心肌细胞内质网应激信号通路的作用。结果:UⅡ组心肌细胞中ROS表达水平较UⅡ+NAC组、正常对照组、NAC组明显增强,差异有统计学意义(P0.05)。qRT-PCR、Western blot结果显示,UⅡ组中ATF6、GRP78、CHOP和caspase-12的mRNA及蛋白表达量均较UⅡ+NAC组、正常对照组、NAC组明显增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论:UⅡ可以诱导心肌细胞氧化应激及内质网应激的激活,而抗氧化剂预处理可以明显减轻UⅡ诱导的氧化应激、内质网应激及相关信号通路的激活,提示UⅡ可能通过氧化应激进一步激活内质网应激及相关信号通路。     

吡格列酮对缺血再灌注大鼠心肌细胞内质网应激致凋亡途径的影响

目的 观察吡格列酮对大鼠心肌细胞缺血再灌注(I/R)损伤(MIRI)后GRP78和caspase - 12蛋白表达的影响,探讨吡格列酮内质网应激途径的心肌保护.方法 Wistar大鼠30只随机分为I/R+ Pio组[灌服5 mg/(kg·d)]、I/R组及假手术组,各10只.制作大鼠心肌再灌注损伤模型.TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学检测GRP78和caspase - 12表达变化.结果 吡格列酮预处理组大鼠心肌细胞凋亡及GRP78、caspase - 12蛋白表达水平明显比I/R组减少(P＜0.05).结论 通过内质网应激途径可能是吡格列酮对心肌再灌注损伤的保护作用机制之一.     

非洛地平和伊贝沙坦对原发性高血压左室肥厚的逆转作用

目的 :观察非洛地平和伊贝沙坦治疗原发性高血压 (EH)的疗效及对左室肥厚的作用。方法 :将 10 4例EH伴左室肥厚的患者随机分为非洛地平组和伊贝沙坦组 ,于服药前及服药后 6个月、12个月、2 4个月分别测定血压、左室舒张末内径 (LVDd)、舒张期室间隔厚度 (IVST)、左室后壁厚度 (LVPWT)、左室射血分数 (LVEF)、左室高峰射血率 (LPER)、左室高峰射血率时间 (LTPER)、左室高峰充盈率 (LPFR)和左室高峰充盈率时间(LTPFR)。结果 :治疗后 ,两组血压较治疗前显著下降 (P <0 .0 5 ,或P <0 .0 1) ,两组治疗前后比较LVEF、LPER和LTPER均无变化 (P >0 .0 5 ) ,而LPFR升高和LTPFR则明显降低 (P <0 .0 5 ,或P <0 .0 1) ;左室重量指数 (LVMI)、LVDd、IVST、LVPDWT在伊贝沙坦组明显下降 (P <0 .0 5 ,或P <0 .0 1) ,而在非洛地平组则无变化 (P >0 .0 5 )。结论 :非洛地平和伊贝沙坦均能有效控制血压 ,但伊贝沙坦能明显减轻左室肥厚     

Ablation of mineralocorticoid receptors in myocytes but not in fibroblasts preserves cardiac function

Antagonists of the mineralocorticoid receptor improve morbidity and mortality in patients with severe heart failure. However, the cell types involved in these beneficial effects are only partially known. The aim of this work was to evaluate whether genetic deletion of mineralocorticoid receptors in mouse cardiomyocytes or fibroblasts in vivo is cardioprotective after chronic left ventricular pressure overload. After transverse aortic constriction, mice deficient in myocyte mineralocorticoid receptors but not those deficient in fibroblast mineralocorticoid receptors were protected from left ventricular dilatation and dysfunction. After pressure overload, left ventricular ejection fraction was significantly higher in mice lacking myocyte mineralocorticoid receptors (70.2±4.4%) as compared with control mice (54.3±2.5%; P<0.01). Myocyte mineralocorticoid receptor-deficient mice showed mild cardiac hypertrophy at baseline, contributing to reduced left ventricular wall tension at baseline and after pressure overload. Cardiac levels of phospho-extracellular signal-regulated kinase 1/2 were higher in myocyte mineralocorticoid receptor-deficient mice than in control mice after pressure overload. Neither fibroblast nor myocyte mineralocorticoid receptor ablation altered the development of cardiac hypertrophy or fibrosis after pressure overload. Both mineralocorticoid receptor mutant mouse strains developed similar degrees of myocyte apoptosis, proinflammatory gene expression, and macrophage infiltration after pressure overload. Thus, mineralocorticoid receptors in cardiac myocytes but not in fibroblasts protect from cardiac dilatation and failure after chronic pressure overload.     

伊贝沙坦逆转高血压左心室肥厚的细胞学机制

目的探讨伊贝沙坦(IBT)抗高血压左心室肥厚过程中,对心肌细胞凋亡和心肌肌浆网钙泵活性的影响。方法选用16周龄自发性高血压大鼠(SHR)24只,随机分为IBT组(8只)、蒸馏水(DW)组(8只)和SHR0组(8只),另选16只WKY大鼠作为正常对照,随机分为WKY0组(8只)和WKY1组(8只)。IBT组大鼠给予IBT(60 mg.kg-1.d-1)加适量蒸馏水灌胃14周。治疗前后,测量血压和左心室心肌肥厚指数(LVMI),原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡,并检测治疗后左心室心肌细胞肌浆网Ca2+-ATP酶活性。结果DW组LVMI、心肌细胞凋亡指数均显著高于WKY组,而IBT组明显低于DW组;DW组Ca2+-ATP酶活性明显低于IBT组及同龄WKY组,IBT组稍低于同龄WKY组;Ca2+-ATP酶活性与LVMI、心肌细胞凋亡指数呈显著负相关,LV-MI与心肌细胞凋亡指数呈显著正相关。结论IBT可能通过调节心肌细胞肌浆网钙泵活性以抑制高血压左心室肥厚过程中心肌细胞凋亡,从而逆转左心室肥厚。     

比索洛尔和乌拉地尔逆转原发性高血压患者左心室肥厚的对比研究

目的对比研究比索洛尔和乌拉地尔逆转原发性高血压(EH)患者左心室肥厚的作用。方法将76例EH伴左心室肥厚的患者随机分为比索洛尔组和乌拉地尔组,于服药前及服药后6、12及24个月分别测定左室舒张末内径(LVDT)、舒张期室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、左室射血分数(LVEF)、心排血量(CO)、A峰/E峰比值(A/E比值)。结果两组治疗前后比较LVEF、CO均无变化,而A/E比值则明显降低;左室重量指数(LVMI)、左室舒张末内径(LVDd)I、VST、LVPDWT在比索洛尔组明显下降,而在乌拉地尔组则无变化。结论比索洛尔和乌拉地尔均能明显改善左室舒张功能,且比索洛尔能明显减轻左心室肥厚。     

Free fatty acids act as endogenous ionophores, resulting in Na+ and Ca2+ influx and myocyte apoptosis

AIMS: Disturbances in lipid metabolism have been suggested to play an important role in myocardial damage. Marked accumulation of free fatty acids (FFAs), including arachidonic acid (AA), palmitic acid, oleic acid, and linoleic acid, occurs during post-ischaemia and reperfusion (post-I/R). Possible cellular mechanisms of AA/FFAs-induced myocyte apoptosis were investigated. METHODS AND RESULTS: In neonatal rat ventricular myocytes, AA/FFAs activate a novel non-selective cation conductance (NSCC), resulting in both intracellular Ca(2+) and Na(+) overload. AA caused sustained cytosolic [Na(+)](cyt) and [Ca(2+)](cyt) overload, resulting in mitochondrial [Na(+)](m) and [Ca(2+)](m) overload, which induced caspase-3-mediated apoptosis. Similar apoptotic effects were seen using Na(+) ionophore cocktail/Ca(2+)-free medium, which induced [Na(+)](cyt) and [Na(+)](m), but not [Ca(2+)](cyt) and [Ca(2+)](m) overload. Electron microscopy showed that inhibition of [Na(+)](m) overload prevented disruption of the mitochondrial membrane, showing that [Na(+)](m) overload is an important upstream signal in AA- and FFA-induced myocyte apoptosis. CONCLUSION: AA and FFAs, which accumulate in the myocardium during post-I/R, may therefore act as naturally occurring endogenous ionophores and contribute to the myocyte death seen during post-I/R.