p27kip1基因转染联合化疗对胃癌细胞生长的影响

背景：p27kipl是一种抑癌基因，早期研究显示p27kipl基因转染能明显抑制胃癌、食管癌细胞生长．表明该基因疗法可能是治疗胃癌、食管癌的新途径，深入阐明p27kipl的抑癌机制，可为p27kipl基因治疗胃癌、食管癌提供可靠的理论基础。目的：研究p27kipl基因转染联合化疗对胃癌细胞生长的影响。方法：将p27kipl重组腺病毒（Ad-p27kipl）转染胃癌细胞SGC-7901，免疫细胞化学法检测p27kipl的表达。加入5-氟尿嘧啶（5-FU）和顺铂（DDP）后．甲基噻唑基四唑（MrIT）法测定细胞生长抑制率,^3H-胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR）掺入试验测定DNA的合成。结果：Ad-p27kipl转染胃癌细胞后，p27kipl表达明显增强。加入5-FU和DDP后，细胞生长抑制率显著增高．^3H-TdR掺人量显著降低（P〈0．01）。结论：p27kipl基因转染联合化疗能明显抑制胃癌细胞的生长。     

Ad-p27mt转染重组腺病毒治疗裸鼠内人胃癌的分子机制

目的:研究Ad-p27mt转染重组腺病毒对人胃癌细胞凋亡的作用及机制.方法:Ad-p27mt转染重组腺病毒导入胃癌细胞株SGC-7901内;流式细胞仪检测凋亡染色体亚二倍体峰值,了解Ad-p27mt对人胃癌组织凋亡的作用;TUNEL法检测DNA片断,在Ad-p27mt组和Ad-LacZ组中分析细胞的凋亡.结果:Ad-p27mt成功转入人胃癌细胞SGC-7901内,转化率达100%.流式细胞仪检测发现在感染后18h出现G1-S相前出现凋亡染色体亚二倍体峰值,并且DNA电泳出现凋亡特征性的条带;TUNEL法检测Ad-p27治疗组与对照组的凋亡率分别是92.3%±3.76%和2.01%±0.15%,两组的差异有显著性(P<0.01).结论:重组腺病毒转染的人p27突变基因能诱导裸鼠体内人胃癌细胞SGC-7901的凋亡.     

p27kip1基因转染联合化疗对胃癌细胞生长的影响

背景:p27kip1是一种抑癌基因,早期研究显示p27kip1基因转染能明显抑制胃癌、食管癌细胞生长,表明该基因疗法可能是治疗胃癌、食管癌的新途径,深入阐明p27kip1的抑癌机制,可为p27kip1基因治疗胃癌、食管癌提供可靠的理论基础.目的:研究p27kip1基因转染联合化疗对胃癌细胞生长的影响.方法:将p27kip1重组腺病毒(Adp27kip1)转染胃癌细胞SGC-7901,免疫细胞化学法检测p27kip1的表达.加入5-氟尿嘧啶(5-FU)和顺铂(DDP)后,甲基噻唑基四唑(MTT)法测定细胞生长抑制率,3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入试验测定DNA的合成.结果:Adp27kip1转染胃癌细胞后,p27kip1表达明显增强.加入5-FU和DDP后,细胞生长抑制率显著增高,3H-TdR掺入量显著降低(P＜0.01).结论:p27kip1基因转染联合化疗能明显抑制胃癌细胞的生长.     

腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的 构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果.方法 构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Western blot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达.以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性.构建裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Akt1的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48 h、72 h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003).与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P<0.001),且rAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%～7.1%,而进入G0/G1期的细胞增加了12.1%～13.7%.裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的靶向P85和Akt1的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略.     

腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的 构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果.方法 构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Western blot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达.以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性.构建裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Akt1的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48 h、72 h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003).与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P<0.001),且rAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%～7.1%,而进入G0/G1期的细胞增加了12.1%～13.7%.裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的靶向P85和Akt1的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略.     

阿司匹林对胃癌细胞株7901增殖和凋亡的影响

目的 体外观察阿司匹林（ASA）对胃癌细胞株SGC-7901细胞平殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞仪（FCM）、电镜和^3h-TdR核素标记等技术,研究ASA和SGC-7901细胞增殖的抑制和可能的机制。结果 MTT显示体外ASA对SGC-7901有细胞毒作用,与浓度和作用时间有相关性,^3H-TdR实验表明,ASA对细胞DNA合成有抑制制作。FCM显示,DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,凋亡率在7.8%-34.4%。使S期、G2/M期细胞比例升高,G1期比例下降,呈一定剂量效应关系。电镜下见典型的细胞凋亡形态学特征：细胞核染色质致密浓缩,凋亡小体形成等。结论 体外ASA对SGC-7901细胞增殖有抑制作用,可能与诱导细胞凋亡和阻止细胞周期的进展有关。     

腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的 构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果.方法 构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Western blot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达.以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性.构建裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Akt1的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48 h、72 h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003).与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P<0.001),且rAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%～7.1%,而进入G0/G1期的细胞增加了12.1%～13.7%.裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的靶向P85和Akt1的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略.     

腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的 构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果.方法 构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Western blot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达.以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性.构建裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Akt1的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48 h、72 h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003).与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P<0.001),且rAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%～7.1%,而进入G0/G1期的细胞增加了12.1%～13.7%.裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的靶向P85和Akt1的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略.     

腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的 构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果.方法 构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Western blot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达.以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性.构建裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Akt1的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48 h、72 h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003).与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P<0.001),且rAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%～7.1%,而进入G0/G1期的细胞增加了12.1%～13.7%.裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的靶向P85和Akt1的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略.     

腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的 构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果.方法 构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Western blot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达.以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性.构建裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Akt1的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48 h、72 h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003).与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P<0.001),且rAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%～7.1%,而进入G0/G1期的细胞增加了12.1%～13.7%.裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的靶向P85和Akt1的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略.     

Effect of mutant p27(kipl) gene on human cholangiocarcinoma cell line, QBC(939)

AIM：To investigate the effects of exogenously mutated p27^kip1 （p27） on proliferation and apoptosis of human cholangiocarcinoma cell line, QBC939 in vivo.METHODS： Adenviral vectors were used to transfect mutated p27 cDNA into human QBC939 cell line. Expression of p27 was detected by RT-PCR. Western blot. Cell growth, morphological change, cell cycle, apoptosis and cloning formation were determined by MTT assay and flow cytometry.RESULTS： The expression of p27 protein and mRNA was increased signifi cantly in QBC939 cell line transfected with Ad-p27mt. The transfer of Ad-p27mt could signifi cantly inhibit the growth of QBC939 cells, decrease the cloning formation rate and induce apoptosis. p27 over expression caused cell cycle arrest at G0/G1 phase 72 h after infection with Ad-p27mt.CONCLUSION： p27 may cause cell cycle arrest at G0/G1 phase and subsequently lead to apoptosis. Recombinant adenovirus expressing mutant p27 may be potentially useful in gene therapy for cholangiocarcinoma.     

Apoptosis mechanisms of human gastric cancer cell line MKN-45 infected with human mutant p27

AIM: To explore the inducing effect of human mutant p27 gene on the apoptosis of the human gastric cancer cell line MKN-45 and its associated mechanisms. METHODS: The recombinant adenovirus Ad-p27mt was constructed to infect the human gastric cancer cell line MKN-45. Using flow cytometry, TUNEL assay and DNA fragment analysis, we measured the apoptotic effect of Ad-p27mt on the human gastric cancer cells. RESULTS: Ad-p27mt was successfully constructed and the infection efficiency reached 100%. After 18 h of infection, we observed an apoptotic hypodiploid peak on the flow cytometer before G1-S and apoptotic characteristic bands in the DNA electrophoresis. The apoptotic rate detected by TUNEL method was significantly higher in the Ad-p27mt group (89.4±3.12%) compared to the control group (3.12±0.13%, P < 0.01). CONCLUSION: Human mutant p27 can induce apoptosis of the human gastric cancer cells in vitro.     

Anti-gastric cancer active immunity induced by FasL／B7-1 gene-modified tumor cells

AIM:To study the activation of cytotoxic T lymphocytes (CTLs) against gastric cancer cells induced by FasL/B7-1 (FB-11) gene-modified tumor cells,and to explore whether co-expression of FasL and B7-1 in SGC-7901 tumor cells could initiate synergistic antitumor effect. METHODS: FasL and B7-1 genes were transfected into human SGC-7901 gastric cancer cells with adenovirus vectors. The positive clones were selected by G418. FasL and B7-1 genes were detected by flow cytometry and RT-PCR. Abdominal infiltrating lymphocytes and sensitized spleen cells were obtained from mice that were immunized with SGC-7901/FB-11 or wild type SGC-7901 cells intraperitoneally,and cytotoxicity of these CTLs against tumor cells was determined by MTT assay. RESULTS: Flow cytometry and RT-PCR showed that FasL and B7-1 genes were highly expressed. FasL and B7-1 transfected cancer cells had a high apoptosis index. DNA laddering suggested that FasL and B7-1 genes induced gastric cancer cell apoptosis. FasL+/B7-1+SGC-7901 cells (SGC-7901/FB-11) were inoculated subcutaneously in the dorsal skin of C57BL/6 mice and then decreased their tumorigenicity greatly (z=2.15-46.10, P<0.01).SGC-7901/FB-11 cell-sensitized mice obtained protective immune activity against the rechallenge of wild type SGC-7901 cells (z=2.06-44.30, P<0.05). The cytotoxicity of CTLs induced by SGC-7901/FB-11 cells against SGC-7901 was significantly higher than that of CTLs activated by wild-type SGC-7901 cells (84.1±2.4% vs30.5±2.3%, P<0.05). CONCLUSION: FasL and B7-1 genes can effectively promote the activity of CTLs against gastric cancer cells. FasL/B7-1 molecules play an important role in CTL cytotoxicity.     

Effect of NHE1 antisense gene transfection on the biological behavior of SGC-7901 human gastric carcinoma cells

AIM： To study the effect of type 1 Na^＋/H^＋ exchanger （NHE1 ） antisense human gene transfection on the biological behavior of gastric carcinoma cell line SGC-7901. METHODS： Antisense NHE1 eukaryotic expression on vector pcDNA3.1 was constructed by recombinant DNA technique and transfected into gastric carcinoma cell line SGC-7901 with DOTAP liposome transfection method. Morphological changes of cells were observed with optic and electron microscopes. Changes in cell proliferative capacity, apoptosis, intracellular pH （pHi）, cell cycle, clone formation in two-layer soft agar, and tumorigenicity in nude mice were examined. RESULTS： Antisense eukaryotic expressing vectors were successfully constructed and transfected into SGC-7901. The transfectant obtained named 7901 -antisense （7901-AS） stablely produced antisense NHE1. There was a significant difference between the pHi of 7901-AS cells （6.77 ± 0.05） and that of 7901-zeo cells and SGC-7901 cells （7.24 ± 0.03 and 7.26 ± 0.03, P 〈 0.01）. Compared with SGC-7901 and 7901-zeo cells, 7901-AS cells mostly showed cell proliferation inhibition, G1/G0 phase arrest, increased cell apoptotic rate, recovery of contact inhibition, and density contact. The tumorigenicity in nude mice and cloning efficiency in the two-layer soft agar were clearly inhibited. CONCLUSION： NHE1 antisense gene significantly restrains the malignant behavior of human gastric carcinoma cells, suppresses cell growth and induces cell apoptosis, and partially reverses the malignant phenotypes of SGC-7901 . These results suggest a potential role for human tumor gene therapy.     

腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的 构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果.方法 构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Western blot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达.以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性.构建裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Akt1的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48 h、72 h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003).与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P<0.001),且rAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%～7.1%,而进入G0/G1期的细胞增加了12.1%～13.7%.裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的靶向P85和Akt1的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略.     

腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的 构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果.方法 构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Western blot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达.以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性.构建裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Akt1的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48 h、72 h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003).与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P<0.001),且rAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%～7.1%,而进入G0/G1期的细胞增加了12.1%～13.7%.裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的靶向P85和Akt1的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略.