高同型半胱氨酸血症对主动脉组织Bcl-2基因甲基化影响

目的:探讨高蛋氨酸饮食诱导高同型半胱氨酸血症(Hhcy)对大鼠主动脉组织Bcl-2基因启动子区甲基化水平的影响。方法:健康6周龄雄性Wistar大鼠24只,体重(160±10)g,适应性喂养1周后随机分为对照组和Hhcy组,每组12只。对照组给予AIN-93G配方饲料,Hhcy组饲以含1.7%蛋氨酸的AIN-93G配方饲料。喂养18周后,全自动生化仪测定血浆同型半胱氨酸浓度。HE染色观察大鼠主动脉组织形态学变化,免疫组织化学检测大鼠主动脉组织Bcl-2表达;巢式降落式PCR联合甲基化特异性PCR检测Bcl-2基因启动子区甲基化水平,荧光RT-PCR检测主动脉组织Bcl-2基因mRNA表达。结果:18周蛋氨酸饮食可以诱导大鼠Hhcy;HE染色主动脉组织呈现动脉粥样硬化早期形态学变化,免疫组织化学显示Hhcy组主动脉组织Bcl-2表达增加;Hhcy组主动脉组织Bcl-2基因启动子区甲基化水平低于对照组(P<0.05),Bcl-2基因mRNA表达高于对照组(P<0.05)。结论:Hhcy通过降低Bcl-2甲基化水平,使Bcl-2表达增加,平滑肌细胞凋亡减弱,可能是其参与动脉粥样硬化形成的分子机制之一。     

内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致内皮细胞损伤中的作用机制.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞,加入0、50、100、200、500 μmol/L同型半胱氨酸和100 μmol/L同型半胱氨酸+维生素B12+叶酸的培养液中孵育72 h.MTT法检测人脐静脉内皮细胞的增殖活性;实时定量PCR测定内皮型一氧化氮合酶mRNA表达;化学比色法测定内皮型一氧化氮合酶活性;硝酸还原酶法检测一氧化氮生成量.巢式降落式甲基化特异性PCR法检测内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化改变;同位素法检测DNA甲基化转移酶的活性.结果 人脐静脉内皮细胞与不同浓度同型半胱氨酸孵育72 h后,人脐静脉内皮细胞的增殖活性降低,内皮型一氧化氮合酶mRNA表达、内皮型一氧化氮合酶活性和一氧化氮的含量明显下降.内皮型一氧化氮合酶基因启动子序列DNA甲基化程度随同型半胱氨酸浓度的升高而增加,且DNA甲基化转移酶活性升高,而叶酸和维生素B12有一定拮抗作用,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05和P＜0.01).结论 同型半胱氨酸可导致内皮型一氧化氮合酶基因启动子区序列高甲基化修饰,并出现相应的内皮型一氧化氮合酶基因表达下调,这可能是同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的重要机制之一.     

瑞舒伐他汀对高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉组织Bcl-2甲基化的影响

目的 观察瑞舒伐他汀对高同型半胱氨酸血症(Hhcy) Wistar大鼠主动脉组织Bel-2甲基化水平及其表达的影响,探讨瑞舒伐他汀逆转Hhcy致动脉粥样硬化的可能机制.方法 实验选用33只健康雄性5周龄Wistar大鼠,体重150±10 9,大鼠随机分为3组,对照组11只,Hhey组11只,瑞舒伐他汀组11只;对照组给予正常饮食,Hhcy组给予正常饮食和蛋氨酸1 g/(kg·d)灌胃,瑞舒伐他汀组给予正常饮食和蛋氨酸1g/(kg·d)加瑞舒伐他汀10 mg/(kg·d)灌胃.16周末处死大鼠,心脏取血,全自动生化仪测定血清同型半胱氨酸浓度;提取主动脉组织DNA,甲基化特异性PCR(MSP)联合巢式PCR(nested PCR)检测Bcl-2启动子区甲基化水平,实时荧光定量PCR检测Bcl-2 mRNA的表达,免疫组化和Western blot检测Bcl-2蛋白的表达.结果 16周蛋氨酸灌胃1 g/(kg·d)可以诱导Hhcy(P ＜0.01);瑞舒伐他汀可以降低升高的同型半胱氨酸水平(P＜0.05);与对照组比较,Hhcy组主动脉组织中Bcl-2启动子区域发生去甲基化,Bcl-2 mRNA、蛋白表达上调(均P＜0.05);瑞舒伐他汀组主动脉组织中Bcl-2启动子区域甲基化的水平高于Hhcy组,Bcl-2 mRNA、蛋白的表达低于Hhcy组(均P＜0.05).结论 瑞舒伐他汀拮抗Hhcy大鼠主动脉组织的去甲基化,下调Bel-2的表达,这可能是瑞舒伐他汀抗动脉粥样硬化的作用之一.     

尿酸减轻氧化应激诱导的血管内皮细胞损伤

目的　探讨尿酸对氧化应激情况下的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）有无保护作用以及其可能的机制。方法　将人脐静脉内皮细胞分为四组：不做任何处理的对照组、单纯叔丁基过氧化氢（t-BHP）组、单纯尿酸组和尿酸+t-BHP组。MTT试验计算各组细胞存活率。DCFH-DA探针检测各组细胞内活性氧（ROS）水平。流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。荧光定量PCR技术检测各组细胞核转录相关因子2（Nrf2）mRNA表达变化。Western　blot　技术检测各组细胞胞浆与胞核中Nrf2蛋白表达水平。结果　MTT试验发现，尿酸+t-BHP组细胞存活率（78.5%±7.6%）显著高于单纯t-BHP组（P<0.05）。尿酸+t-BHP组细胞内ROS水平以及细胞凋亡率都明显低于单纯t-BHP组（P<0.05）。各组Nrf2的mRNA表达水平差异均无显著性（P>0.05），但单纯尿酸组与尿酸+t-BHP组细胞核内Nrf2明显增多。结论　尿酸对氧化应激下的血管内皮细胞具有保护作用，其机制可能为尿酸增加了血管内皮细胞中Nrf2的核内转移。     

bcl-2在同型半胱氨酸致血管内皮细胞凋亡中的作用

目的:研究bcl-2在同型半胱氨酸致人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法:以人脐静脉内皮细胞株为实验对象,用含有不同浓度同型半胱氨酸的RPMI 1640培养液对其作用48h,MTT法测定细胞增殖生长能力;流式细胞术测定细胞凋亡水平;荧光定量PCR测定bcl-2基因的mRNA表达;Western blotting测定bcl-2蛋白表达量。结果:同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞的增殖能力有明显的抑制作用,OD值从(0.99±0.05)渐下降至(0.28±0.03)(P0.01),且呈明显的剂量效应关系;细胞凋亡率由(2.05±0.26)%渐增至(30.86±1.94)%(P0.01);与对照组相比,实验组bcl-2mRNA及蛋白表达明显下降(P0.01)。结论:同型半胱氨酸可通过下调bcl-2的mRNA及蛋白质表达,促进人脐静脉内皮细胞的凋亡。     

同型半胱氨酸血症对人脐静脉内皮细胞增殖活性的影响

目的 观察不同浓度的同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作用不同时间后对细胞增殖和形态结构的影响.方法 在含有不同浓度的同型半胱氨酸培养环境及对照培养环境中,分别孵育内皮细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测同型半胱氨酸对内皮细胞增殖活性的影响,并进行细胞形态学观察.结果 同型半胱氨酸低浓度时对细胞生长的抑制不明显,随着浓度的增高,细胞生长抑制越明显,且呈浓度、时间依赖性.结论 高同型半胱氨酸可损伤内皮细胞,抑制细胞生长,有助于糖尿病和胰岛素抵抗致动脉粥样硬化等血管病变的发生和发展.     

二苯乙烯苷对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1、ICAM-1和VCAM-1表达的影响

目的 观察何首乌二苯乙烯苷对同型半胱氨酸诱导培养的人脐静脉内皮细胞株单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1) mRNA表达的影响.方法 在人脐静脉内皮细胞的培养基中加入不同浓度的二苯乙烯苷处理2h再加入3.0 mmol/L同型半胱氨酸作用36 h.Hoechst33342核染色检测细胞核损伤;以RT-qPCR检测不同浓度二苯乙烯苷处理对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1、ICAM-1及VCAM-1 mRNA表达的影响.结果 10 μmol/L浓度以内,二苯乙烯苷预孵育呈浓度依赖性降低3.0 mmol/L同型半胱氨酸所致人脐静脉内皮细胞核损伤加重,抑制同型半胱氨酸所致MCP-1、ICAM-1及VCAM-1 mRNA的表达升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 二苯乙烯苷具有明显抑制同型半胱氨酸所致人脐静脉内皮细胞MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达增加的作用.     

同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞表达RANTES蛋白

为探讨同型半胱氨酸是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达RANTES蛋白 ,使人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸孵育 8h后 ,用免疫细胞化学和Westernblot方法检测RANTES蛋白的表达。免疫细胞化学检测结果发现 ,培养的人脐静脉内皮细胞能表达RANTES蛋白。培养的内皮细胞与 0 .1、0 .5及 1mmol L同型半胱氨酸共同孵育 8h后 ,其RANTES蛋白表达的平均吸光度值分别为 0 .0 4 34± 0 .0 0 6 3、0 .0 788± 0 .0 0 5 3和 0 .10 6 1± 0 .0 2 15 ,均显著高于对照组 (0 .0 2 0 0± 0 .0 0 32 ) ,方差分析发现 ,组间均存在显著性差异 (P <0 .0 1)。Westernblot检测结果发现 ,当内皮细胞与 0 .1、0 .5和 1mmol L同型半胱氨酸共同孵育 8h后 ,其免疫染色条带的积分吸光度值分别为 8873、10 2 0 0和 10 80 0 ,分别是对照组 (3881)的 2 .2 9倍、2 .6 3倍和 2 .78倍。此结果提示 ,培养的人脐静脉内皮细胞表达低水平的RANTES蛋白 ,同型半胱氨酸能提高其RANTES蛋白的表达     

在载脂蛋白E基因敲除小鼠和人脐静脉平滑肌细胞中

目的　观察同型半胱氨酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠不同组织和人脐静脉平滑肌细胞中B1和Alu序列甲基化水平的影响,为进一步阐明同型半胱氨酸致动脉粥样硬化形成的分子机制提供理论和实验依据。方法　复制高同型半胱氨酸血症载脂蛋白E基因敲除小鼠模型,给予不同饮食14周后,分别取小鼠心脏组织、血管及白细胞;原代培养人脐静脉平滑肌细胞,用50、100、200　及500　μmol/L　同型半胱氨酸干预培养72　h后,抽提组织、白细胞及平滑肌细胞的基因组DNA,采用巢式降落式甲基化特异性PCR法分别检测不同组织和细胞中B1和Alu　序列甲基化水平的变化。结果　饲以高蛋氨酸饮食的载脂蛋白E基因敲除小鼠心脏组织、血管和白细胞中B1重复序列甲基化水平下降明显,与正常对照组比较有显著性差异（P<0.05和P<0.01）;在同型半胱氨酸干预的平滑肌细胞中Alu序列甲基化水平下降显著（P<0.05和P<0.01）。结论　同型半胱氨酸引起B1和Alu序列低甲基化改变可能是其导致动脉粥样硬化发生发展的重要机制之一。     

Fas信号在同型半胱氨酸致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的:研究Fas信号在同型半胱氨酸致人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法:以人脐静脉内皮细胞株为实验对象,用含不同浓度的同型半胱氨酸的DMEM培养液对其处理,MTT法测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡水平;荧光定量PCR测定Fas基因、caspase-3基因及caspase-8基因的mRNA表达;Western blot测定Fas蛋白、caspase-3蛋白及caspase-8蛋白表达量。结果:同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞的增殖能力有明显抑制作用,随着同型半胱氨酸浓度增高,实验结果显示细胞增殖能力逐渐降低,细胞凋亡率呈上升现象;与对照组相比,实验组Fas、caspase-3及caspase-8mRNA及蛋白表达明显上升。结论:同型半胱氨酸可能通过上调Fas、caspase-3及caspase-8的mRNA及蛋白的表达,促进人脐静脉内皮细胞的凋亡。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.