阿柏西普对大鼠视网膜Müller细胞STAT3表达的影响

目的：探讨阿柏西普对大鼠视网膜Müller细胞信号转导及转录活化因子3(STAT3)表达的影响。

方法：采用不同浓度的阿柏西普 100μL(加药浓度分别为400、200、100pg/mL)大鼠永生化视网膜Müller细胞24、48h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞侵袭,Western-blot法检测AKT、STAT3蛋白表达。

结果：随着阿柏西普浓度的升高,Müller细胞的增殖活性下降(P<0.05)。处理48h后,随着阿柏西普浓度的升高,Müller细胞的凋亡率逐渐上升,Müller细胞的侵袭穿透指数逐渐降低(P<0.05)。转染48h后,随着阿柏西普浓度的升高,Müller细胞的AKT蛋白相对表达量无显著变化(P>0.05),STAT3蛋白相对表达量逐渐降低(P<0.05)。

结论：阿柏西普可抑制大鼠视网膜Müller细胞STAT3蛋白表达,从而抑制细胞增殖与侵袭性,促进细胞凋亡。     

转化生长因子β1对牛角膜内皮细胞外基质合成的影响

目的观察转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)对体外培养的牛角膜内皮细胞细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)合成的影响。方法将体外培养的牛角膜内皮细胞分为实验组和对照组,经0μg·L-1(对照)、0.1μg·L-1、1.0μg·L-1、10.0μg·L-1、100.0μg·L-1浓度的TGF-β1处理48h后,用SABC免疫组化法分别检测角膜内皮细胞纤维连接蛋白和层粘连蛋白的合成情况。结果与对照组相比,一定浓度(1.0μg·L-1及10.0μg·L-1)的TGF-β1能明显促进体外培养的角膜内皮细胞纤维连接蛋白及层粘连蛋白的合成,且呈剂量依赖性。但浓度为0.1μg·L-1及100.0μg·L-1的TGF-β1组OD值与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论一定浓度(1·0μg·L-1及10.0μg·L-1)TGF-β1能促进牛角膜内皮细胞ECM的合成,提示TGF-β1可能在角膜内皮细胞损伤修复中扮演重要角色。     

肿瘤坏死因子-α对体外培养牛眼小梁细胞纤维连接蛋白的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)对体外培养牛眼小梁细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响及意义.方法 体外培养牛眼小梁细胞,免疫荧光法行神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)及Ⅷ因子相关抗原染色鉴定.取第3代小梁细胞分别加入浓度20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1 TNF-α孵育35 h,免疫荧光法行FN染色后用激光共聚焦显微镜观测并行定量分析.结果 20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1浓度组染色积分光密度值分别为19 486.45±1 318.15、31 312.61±1 822.52、39 958.98±2 186.85,高于对照组积分光密度值(13 062.62±1 923.36).各实验组FN荧光强度表达高于对照组,差异具有统计学意义,且随TNF-α浓度增高FN的表达亦逐渐增多.结论 在体外培养条件下TNF-α可引起牛眼小梁细胞FN合成增加,推测FN可能通过与整合素结合来促进胶原收缩,小梁网间空隙扩大,房水外流阻力减小,从而降低眼压.     

环孢霉素A抑制人视网膜色素上皮细胞增生的体外研究

目的 观察环孢霉素A(cyclosporine,CsA)对体外培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞增生的影响作用.方法 取体外培养人RPE细胞进行分组实验,实验分对照组和实验组:对照组用DMEM培养液继续培养;实验组按所加CsA浓度的不同分为0.20 mg·L-1、0.40 mg·L-1、0.80 mg·L-1、1.60 mg·L-1、3.20 mg·L-1、6.40 mg·L-1.时间效应关系分别于CsA作用24 h、48 h、72 h后测定.对照组和实验组均用MTT比色法测吸光度A值.结果 CsA浓度为0.20 mg·L-1时,作用72 h后差异有统计学意义(P＜0.05);CsA浓度≥0.40 mg·L-1时,作用24 h即差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CsA能够抑制体外培养的RPE细胞的生长,这种抑制作用在一定浓度范围内有剂量时间效应.     

TGF-β1诱导体外培养角膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达

目的观察转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对体外培养的角膜成纤维细胞结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)的诱导表达作用。方法体外培养的角膜成纤维细胞分实验组和对照组,对照组弃原培养液,加无血清培养液继续培养,实验组用不同浓度的TGFβ1(0.1μg·L-1、1μg·L-1、10μg·L-1)处理24h,用RTPCR方法检测角膜成纤维细胞CTGFmRNA的表达情况。结果1μg·L-1和10μg·L-1TGFβ1处理组CTGF/GAPDH像素比值分别为0.35±0.05和1.25±0.10,均较对照组高(0.13±0.02),差异具有统计学意义,同时CTGF/GAPDH比值随TGFβ1浓度增加而增加。结论TGFβ1可以诱导角膜成纤维细胞CTGF的表达,在角膜成纤维细胞中CTGF也可能是TGFβ1对细胞起作用的下游信号分子。     

曲安奈德联合阿柏西普治疗雷珠单抗应答不良的湿性年龄相关性黄斑变性

目的：比较阿柏西普玻璃体内注射联合曲安奈德后部眼球筋膜下注射治疗抗血管内皮生长因子(VEGF)药物雷珠单抗应答不良的湿性年龄相关性黄斑变性(ARMD)的效果及安全性。

方法：回顾性队列研究。2018-06/2020-05对抗VEGF药物雷珠单抗治疗应答不良的难治性ARMD 60例60眼,随机分为阿柏西普对照组及曲安奈德联合阿柏西普观察组,每组30例30眼。两组患者每月1次分别行单纯阿柏西普玻璃体内注射或阿柏西普玻璃内注射联合曲安奈德后部眼球筋膜下注射,连续注射3次。分别于注射前和注射第3次后1、3、6mo进行复查视力(BCVA)、黄斑中心凹厚度(CMT)及眼压的改变。

结果：两组患者在治疗后1、3、6mo的BCVA及CMT均明显好转(P<0.05)。观察组治疗后1mo平均眼压较前升高,但仍在正常范围,两组眼压比较有差异(17.50±4.60 vs 18.30±3.73mmHg,P<0.05)。

结论：曲安奈德后部眼球筋膜下注射联合阿柏西普玻璃体内注射治疗湿性ARMD,有效地减轻黄斑区水肿并改善视力,更加安全可靠。     

阿柏西普对体外培养的视网膜Müller细胞膜离子通道的影响

目的：探讨阿柏西普对体外培养的高糖环境下视网膜Müller细胞膜K⁺通道的影响。

方法：人Müller细胞分为3组：对照组(常规DMEM培养基培养)、高糖组(高糖DMEM培养基培养)、实验组(高糖DMEM培养基和100μmol/L 阿柏西普处理)。采用荧光探针检测细胞K⁺浓度,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测Müller细胞caspase-3蛋白水平。

结果：Müller细胞培养48h后呈现谷氨酰胺合成酶(GS)阳性,纯化度在90%以上。荧光检测显示对照组、高糖组、实验组K⁺相对浓度分别为(2.14±0.44)%、(23.11±4.39)%、(5.20±0.92)%,细胞存活率分别为(100.00±0.00)%、(73.24±4.13)%、(85.22±5.33)%,细胞凋亡率分别为(5.03±1.91)%、(26.73±3.14)%、(16.63±2.73)%(均P<0.05)。 与对照组相比,高糖组Müller细胞内caspase-3蛋白水平显著上升(P<0.05); 与高糖组Müller细胞相比,实验组Müller细胞内caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05)。

结论：阿柏西普可抑制体外培养的高糖环境下视网膜Müller细胞膜K⁺通道,抑制高糖诱导的Müller细胞凋亡,降低caspase-3蛋白表达水平,促进细胞增殖。     

阿柏西普联合曲安奈德治疗视网膜中央静脉阻塞继发黄斑水肿的效果

目的:评价玻璃体内注射阿柏西普联合后部眼球筋膜下注射曲安奈德治疗视网膜中央静脉阻塞(CRVO)继发黄斑水肿的效果。方法:回顾性分析郑州市第七人民医院2018年12月至2020年12月收治的CRVO继发黄斑水肿66例(66眼)的临床资料。将患者分为两组：阿柏西普组33例行阿柏西普玻璃体内注射;联合组33例行阿柏西普玻璃体...     

高钙状态对人晶状体上皮细胞株SRA01/04氧化应激水平的影响

目的 探讨高钙培养对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)株SRA01/04氧化应激水平的影响.方法 选取处于对数生长期的HLEC均匀接种96孔板(每孔2×103个细胞),对照组:正常培养的HLEC,实验组:正常培养的HLEC+CaCl2(3 mmol·L-1、5 mmol· L-1、7 mmol· L-1、9 mmol· L-1、11 mmol·L-I、13 mmol·L-1、15 mmol· L-1、17 mmol·L-1、19 mmol·L-1)培养0h、12 h、24 h、36 h,采用CCK-8法检测各组细胞存活率.利用定量检测试剂盒测量细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、总谷胱甘肽(total-glutathione,T-GSH)含量及氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)/T-GSH比值的变化.结果 3 mmol·L-1、5 mmol·L-1、7 unol·L-1 CaCl2处理SRA01/04细胞24h,细胞存活率随CaCl2浓度增高先呈显著下降趋势,当浓度增高到9 mmol·L-1后细胞存活率又逐渐恢复,各实验组HLEC活力差异有统计学意义(P＜0.05).对照组细胞活力(0.592±0.055)与15 mmol·L-1CaCl2组(0.293±0.020)细胞活力相比差异有统计学意义(t=7.811,P＜0.05).CaCl2引起HLEC凋亡的最合适浓度和作用时间为15 mmol·L-1处理24h.与对照组相比,15 mmol·L-1CaCl2处理24h后,细胞核碎裂、溶解,细胞内SOD活力增高(t=-6.417,P＜0.05),T-GSH含量下降(t=13.816,P＜0.05),GSSG/T-GSH比值增高(t=-4.396,P＜0.05).结论 CaCl2诱导的高钙状态抑制HLEC的活力,引起细胞内SOD活力和GSSG含量增加,诱发并加剧细胞内氧化应激反应.     

蛋白酪氨酸激酶抑制剂对RPE细胞趋化因子表达和Ca2+的影响

目的 研究蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)抑制剂染料木黄酮(Genistein)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞趋化因子表达和细胞内Ca2+的影响.方法 应用不同剂量IL-1β对RPE细胞进行刺激,RT-PCR法观察细胞IL-8和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotaetic protein-1,MCP-1)mRNA表达的变化.应用Genistein对RPE细胞培养进行干预,观察其对IL-1β诱导RPE细胞IL-8和MCP-1 mRNA表达的影响.应用Fura2/AM、荧光分光光度计检测IL-1β和Genistein对RPE细胞内Ca2+的影响.结果 RT-PCR结果显示,0.1μg·L-1、1μg·L-1、10μg·L-1IL-1β刺激组IL-8 mRNA相对表达值分别为0.446±0.133、0.727±0.054和0.523±0.106,对照组为0.272±0.088;1μg·L-1、10μg·L-1IL-1β刺激组与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.001、0.015).10μg·L-1IL-1β诱导的RPE细胞MCP-1 mRNA相对表达值与对照组比较,差异有显著统计学意义(P=0.002).10 mg·L-1、50 mg·L-1 Genistein对IL-1β诱导的IL-8和MCP-1 mRNA表达具有明显的抑制作用,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01).IL-1β引起细胞内ca2+浓度升高,Genistein对细胞内Ca2+作用与之相反.结论 Genistein对IL-1β诱导的1L-8和MCP-1 mRNA表达具有明显的抑制作用,其机制可能为抑制IL-1β诱导的细胞内Ca2+增加.     

石蒜碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的作用及其可能机制

目的　探讨石蒜碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的作用，并分析其可能机制。方法　取B16F10葡萄膜黑色素瘤细胞株，按石蒜碱浓度为0 μmol·L^-1（对照组）、1.560 μmol·L^-1、3.125 μmol·L^-1、6.250 μmol·L^-1、12.500 μmol·L^-1、25.000 μmol·L^-1进行分组培养,24 h后，CCK-8法检测各组B16F10细胞的存活率；RT-PCR分析各组B16F10细胞VEGF-A mRNA的表达，ELISA检测各组B16F10细胞VEGF-A蛋白表达；流式细胞仪检测各组B16F10细胞的细胞周期及凋亡情况。结果　与对照组相比，1.560 μmol·L^-1、3.125 μmol·L^-1、6.250 μmol·L^-1、12.500 μmol·L^-1、25.000 μmol·L^-1石蒜碱作用于B16F10细胞 24 h 后，能够呈浓度依赖性抑制B16F10细胞生长（其半数抑制浓度为7.950 μmol·L^-1），下调B16F10细胞中VEGF-A mRNA的表达，抑制 VEGF-A蛋白分泌，其中25.000 μmol·L^-1石蒜碱抑制效果最显著。流式细胞仪检测结果显示，1.560 μmol·L^-1、3.125 μmol·L^-1、6.250 μmol·L^-1、12.500 μmol·L^-1、25.000 μmol·L^-1石蒜碱干预B16F10细胞24 h后，细胞凋亡率由对照组0.00%，分别上升为12.80%、12.86%、16.68%、18.54%、22.20%；G1期细胞比例由对照组（30.86±0.69）%，分别上升为（56.55±0.95）%、（60.92±0.85）%、（62.65±0.53）%、（67.55±0.92）%、（74.18±0.45）%，与对照组相比，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　石蒜碱在体外能够呈浓度依赖性抑制葡萄膜黑色素瘤细胞B16F10的VEGF水平，引发细胞S期阻滞，诱导细胞凋亡，从而显著抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖。     

二甲双胍在糖尿视网膜病变治疗中的作用及可能机制

目的　探讨二甲双胍调控CD31⁺红系前体细胞（EPCs）治疗糖尿病视网膜病变（DR）的作用及机制。方法　将2019年5月至2021年5月于武汉爱尔眼科医院治疗的DR患者纳入本研究,按照治疗药物的不同,将患者分为胰岛素治疗组和二甲双胍治疗组。选取同时期来本院就诊的2型糖尿病但不合并DR的患者为糖尿病组。流式细胞术检测各组患者外周血EPCs和CD31⁺EPCs的比例,ELISA检测各组患者外周血EPCs培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1 )、白细胞介素6（IL-6）和转化生成因子β(TGF-β)的浓度。取对数生长期的血管内皮细胞分别与3组患者外周血EPCs 共培养,采用MTT法检测3组细胞增殖率,细胞迁移实验检测3组细胞迁移率及划痕愈合率。结果　胰岛素治疗组和二甲双胍治疗组患者外周血EPCs的比例分别为0.73%±0.02%和0.72%±0.02%（P>0.05）;胰岛素治疗组和二甲双胍治疗组患者外周血CD31⁺EPCs的比例分别为0.34%±0.01% 和0.21%±0.01%（P<0.001）。胰岛素治疗组患者外周血EPCs培养上清中VEGF和SDF-1的浓度分别为（2.83±0.10）μg·L^-1和（1.48±0.14）μg·L^-1,二甲双胍治疗组的浓度分别为（1.07±0.09）μg·L^-1和（0.35±0.08）μg·L^-1,两组相比差异均有统计学意义（均为P<0.001）。胰岛素治疗EPCs组血管内皮细胞的增殖率、迁移率和划痕愈合率分别为27.36%±1.19%、5.57%±0.31%和55.50%±2.64%,二甲双胍治疗EPCs组细胞分别为12.17%±1.08%、1.72%±0.20%和27.36%±1.94%,两组相比差异均有统计学意义（均为P<0.001）。结论　二甲双胍通过降低糖尿病患者外周血CD31⁺EPCs比例,可能在DR预防和治疗中发挥重要作用。     

甘草查尔酮A对过氧化氢致视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的　研究甘草查尔酮A（licochalcone A,LCA）对过氧化氢（H₂O₂）致视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGC）损伤的保护作用,为LCA在青光眼治疗方面的应用提供初步的实验依据。方法　体外培养RGC-5细胞,随机分为对照组（正常培养基培养）、H₂O₂组（培养基中加入200 μmol·L^-1 H₂O₂）、LCA组（培养基中除加入200 μmol·L^-1 H₂O₂外,还分别加入10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1、40 μmol·L^-1的LCA溶液）,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting检测各组细胞中Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞中丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。结果　CCK-8法检测结果显示,10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1和40 μmol·L^-1LCA组的细胞存活率分别为（63.7±5.4）%、（78.8±6.3）%和（72.3±6.9）%,与H₂O₂组的（54.3±3.9）%相比,20 μmol·L^-1 LCA组增殖最显著（P＜0.05）。流式细胞术检测结果显示,10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1和40 μmol·L^-1LCA组细胞凋亡率分别为（21.1±1.9）%、（12.3±1.3）%和（14.8±2.0）%,与H₂O₂组的（29.3±2.0）%比较,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。Western blotting检测结果显示,与H₂O₂组比较,不同浓度LCA组Bcl-2蛋白的表达均增加,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白的表达均降低,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。ELISA法检测结果显示,与H₂O₂组比较,不同浓度LCA组RGC-5的丙二醛含量均降低,但超氧化物歧化酶活性均显著增加（均为P＜0.05）。结论　LCA能缓解H₂O₂诱导的RGC损伤,其作用机制可能与抑制细胞凋亡和氧化应激有关。     

阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的 探讨不同浓度阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 取出生24 h的健康雄性SD大鼠眼巩膜组织(均为右眼)进行原代培养。取细胞进行分组：对照组(正常巩膜成纤维细胞),0.1 g·L^-1、1.0 g·L^-1及5.0 g·L^-1阿托品处理组(正常巩膜成纤维细胞分别加入三种不同浓度阿托品溶液),每组5只大鼠原代培养细胞。加药后24 h, CCK-8法检测各组巩膜成纤维细胞活力，流式细胞仪检测各组巩膜成纤维细胞凋亡率，Western blot法检测各组巩膜成纤维细胞光蛋白聚糖、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-14和MMP抑制剂(TIMP)-2蛋白表达情况。结果 CCK-8实验结果显示：与对照组相比，0.1 g·L^-1、1.0 g·L^-1及5.0 g·L^-1阿托品处理组细胞活力均增高，其中以1.0 g·L^-1阿托品处理组增高最显著，差异均有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果表明：阿托品处理组各...     

吴茱萸碱对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响

目的　探讨吴茱萸碱对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,分析整合素β2-反义RNA1（ITGB2-AS1）在视网膜母细胞瘤中的表达和作用。方法　取对数生长期HXO-Rb44细胞铺在96孔板上,用终浓度为1 μmol·L^-1、2 μmol·L^-1、4 μmol·L^-1吴茱萸碱处理细胞24 h,记为吴茱萸碱1 μmol·L^-1组、吴茱萸碱2 μmol·L^-1组、吴茱萸碱4 μmol·L^-1组,同时将不经吴茱萸碱处理的细胞设为对照组;按照Lipofectamine 2000试剂盒说明书将si-NC、si-ITGB2-AS1转染细胞,记为si-NC组、si-ITGB2-AS1组;将pcDNA、pcDNA-ITGB2-AS1转染细胞,再用4 μmol·L^-1吴茱萸碱处理,记为吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA组、吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA-ITGB2-AS1组。采用MTT法测定细胞存活率,平板克隆实验计数克隆形成数, 流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,qRT-PCR检测ITGB2-AS1表达。结果　吴茱萸碱2 μmol·L^-1组、吴茱萸碱4 μmol·L^-1组细胞存活率和克隆形成数较对照组、吴茱萸碱1 μmol·L^-1组减小,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;吴茱萸碱4 μmol·L^-1组细胞存活率和克隆形成数较吴茱萸碱2 μmol·L^-1组减小,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。吴茱萸碱2 μmol·L^-1组、吴茱萸碱4 μmol·L^-1组G₀-G₁期细胞比例较对照组、吴茱萸碱1 μmol·L^-1组下降,G₂-M期细胞比例较对照组、吴茱萸碱1 μmol·L^-1组升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;吴茱萸碱4 μmol·L^-1组G₀-G₁期细胞比例较吴茱萸碱2 μmol·L^-1组下降,G₂-M期细胞比例较吴茱萸碱2 μmol·L^-1组升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。吴茱萸碱2 μmol·L^-1组、吴茱萸碱4 μmol·L^-1组细胞凋亡率较对照组、吴茱萸碱1 μmol·L^-1组升高,ITGB2-AS1表达量较对照组、吴茱萸碱1 μmol·L^-1组降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;吴茱萸碱4 μmol·L^-1组细胞凋亡率较吴茱萸碱2 μmol·L^-1组升高,ITGB2-AS1表达量较吴茱萸碱2 μmol·L^-1组降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。si-ITGB2-AS1组ITGB2-AS1表达量、细胞存活率、克隆形成数和G₀-G₁期细胞比例均较si-NC组降低,G₂-M期细胞比例、细胞凋亡率均较si-NC组升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA-ITGB2-AS1组细胞ITGB2-AS1表达量、细胞存活率和克隆形成数均较吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA组升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA-ITGB2-AS1组G₀-G₁期细胞比例较吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA组高, G₂-M期细胞比例、细胞凋亡率较吴茱萸碱4 μmol·L^-1+pcDNA组低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　吴茱萸碱通过抑制ITGB2-AS1表达降低视网膜母细胞瘤细胞增殖,阻滞G₂-M期细胞周期,并促进细胞凋亡。     

薯蓣皂苷对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨薯蓣皂苷(Dio)对高糖(HG)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的保护作用,并分析其机制.方法 用细胞计数试剂8(CCK-8)法筛选葡萄糖浓度和无细胞毒性的Dio剂量范围.将ARPE-19细胞分为对照组(5 mmol·L-1葡萄糖处理48 h)、模型组(50 mmol·L-1葡萄糖处理48 h)和低、中...     

信号转导及转录激活因子4（STAT4）介导的circ_0001879表达对高糖条件下人视网膜微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨信号转导及转录激活因子4（STAT4）介导的circ_0001879表达对高糖处理的人视网膜微血管内皮细胞(HREC)增殖和凋亡的影响。方法　将HREC分为正常组（5.5 mmol·L^-1葡萄糖）、高糖组（25.0 mmol·L^-1葡萄糖）和甘露醇对照组（5.5 mmol·L^-1葡萄糖+19.5 mmol·L^-1甘露醇）,继续培养。将高糖组细胞进一步分组,进行相应转染处理。采用实时荧光定量PCR检测各组细胞circ_0001879、miR-338和多效生长因子（PTN）的表达。通过MTT、流式细胞术分析circ_0001879调控miR-338/PTN对HREC增殖和凋亡的影响。采用双荧光素酶报告实验确定miR-338和circ_0001879、miR-338和PTN之间的相互作用;ChIP实验验证STAT4与circ_0001879的结合。结果　与甘露醇对照组HREC中 circ_0001879（1.21±0.13）、miR-338（0.99±0.08）和PTN（1.12±0.11）的表达相比,高糖组HREC中circ_0001879（2.93±0.21）和PTN（3.62±0.33）的表达显著升高,而miR-338（0.44±0.05）的表达降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。通过MTT和流式细胞术检测各组细胞增殖活力和凋亡率,结果显示,过表达miR-338能够抑制高糖处理的HREC的增殖活力,促进HREC凋亡,而敲减miR-338的表达则作用相反;miR-inhibitor对高糖处理的HREC的作用能够被si-circ部分抑制。双荧光素酶报告实验结果显示,PTN是miR-338的一个靶基因,且其表达受miR-338和circ_0001879的影响。ChIP实验结果显示,STAT4与circ_0001879启动子区域的B1、B3结合,STAT4能够与circ_0001879的启动子结合并且促进circ_0001879的转录。结论　STAT4能够激活circ_0001879的转录,circ_0001879进一步通过调节miR-338/PTN轴促进高糖条件下HREC增殖,抑制细胞凋亡。     

槲皮素对转化生长因子β1介导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化过程的影响

目的　探讨槲皮素对转化生长因子β1（TGF-β1）介导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、迁移、I型胶原蛋白含量、上皮-间质转化相关标志物表达以及Smad信号通路的影响。方法　取人RPE细胞系（ARPE-19细胞）进行培养,依据干预药物浓度筛选结果设置4个组:对照组、10.0 mg·L^-1TGF-β1组、10.0 mg·L^-1TGF-β1+25 μmol·L^-1槲皮素组、10.0 mg·L^-1TGF-β1+50 μmol·L^-1槲皮素组,ARPE-19细胞在4种不同的条件下培养24 h和48 h。采用CCK-8法测定各组细胞活性,Transwell实验检测细胞迁移情况,ELISA检测细胞中I型胶原蛋白含量,Western blot 检测各组细胞上皮-间质转化标志物表达情况及Smad2/3磷酸化情况。结果　处理细胞24 h或48 h,10.0 mg·L^-1TGF-β1组细胞存活率均高于其他各组（均为P<0.05）;10.0 mg·L^-1TGF-β1+25 μmol·L^-1槲皮素组细胞存活率高于10.0 mg·L^-1TGF-β1+50 μmol·L^-1槲皮素组（P<0.05）。处理细胞24 h或48 h,10.0 mg·L^-1TGF-β1组细胞迁移数均多于其他各组（均为P<0.05）;10.0 mg·L^-1TGF-β1+25 μmol·L^-1槲皮素组细胞迁移数多于10.0 mg·L^-1TGF-β1+50 μmol·L^-1槲皮素组（P<0.05）。10 mg·L^-1 TGF-β1处理细胞48 h后,培养基上清液I型胶原蛋白含量升高（P<0.05）,而加入不同浓度槲皮素均能够有效抑制I型胶原蛋白含量的升高（均为P<0.05）。槲皮素以浓度依赖的方式显著降低了TGF-β1所引起的N-钙黏合素和α平滑肌肌动蛋白的表达增高作用;槲皮素可以使紧密连接蛋白ZO-1和E-钙黏合素的表达增高。10 mg·L^-1 TGF-β1处理细胞48 h后,Smad2/3磷酸化显著增加,而槲皮素可以抑制Smad2/3磷酸化。结论　槲皮素能够显著抑制TGF-β1介导的RPE细胞增殖、迁移和胶原分泌,通过调节Smad2/3磷酸化来抑制TGF-β1介导的RPE细胞的上皮-间质转化过程。     

川芎嗪对过氧化氢致大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的抑制作用及机制

目的　探讨川芎嗪对H₂O₂诱导的大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell,RGC）氧化损伤的抑制作用及其机制。方法　在DMEM培养基中培养RGC-5细胞。将细胞分成5组:正常对照组:不做任何处理；阴性对照组:用20 g·L^-1川芎嗪孵育24 h；氧化损伤组:用100 μmol·L^-1的H₂O₂孵育24 h；川芎嗪低浓度组:用20 g·L^-1川芎嗪孵育24 h后加入100 μmol·L^-1的H₂O₂孵育12 h；川芎嗪高浓度组:用40 g·L^-1川芎嗪孵育24 h后加入100 μmol·L^-1 的H₂O₂孵育12 h。通过MTT法测定细胞增殖情况，荧光标记法检测RGC-5细胞内活性氧含量，Hoechst-PI染色观察细胞凋亡情况，使用721D分光光度计测定细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果　MTT法测定结果显示，氧化损伤组RGC-5细胞活性明显下降(24.67%±2.90%)，与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。与氧化损伤组比较，川芎嗪低、高浓度组RGC-5细胞活性分别提高到51.33%±4.35%和60.00%±3.65%，差异均有统计学意义(均为P<0.05)。荧光标记法显示，氧化损伤组DCF荧光信号明显增强，不同浓度川芎嗪干预后，荧光信号强度逐渐减弱。Hoechst-PI染色显示，氧化损伤组凋亡细胞数增多，甚至出现红染的坏死细胞，细胞凋亡率为66.00%±2.98%；川芎嗪干预后，凋亡及坏死细胞逐渐减少，川芎嗪低、高浓度组细胞凋亡率分别为52.33%±4.11%和46.04%±3.52%，两组细胞凋亡率与氧化损伤组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与阴性对照组比较，氧化损伤组RGC-5细胞内SOD、GSH-PX含量明显下降，MDA含量升高，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与氧化损伤组比较，川芎嗪高浓度组SOD、GSH-PX含量升高，MDA含量下降，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与氧化损伤组比较，川芎嗪低浓度组 SOD 与MDA含量变化不大（均为P>0.05），GSH-PX含量升高（P<0.05）。结论　川芎嗪通过改变RGC-5细胞内抗氧化酶表达发挥对氧化损伤的RGC的保护作用。