miR-146a对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞增殖和新生血管生成的影响及其机制

目的　探讨miR-146a对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（HRMEC）增殖和新生血管生成的影响及其机制。方法　选取对数生长期的HRMEC,将细胞分为正常组、高渗组、高糖组、阴性对照组、miR-146a mimics组、miR-146a mimics+IL-17A组。正常组细胞用含5.5 mmol·L^-1 D-葡萄糖的培养基培养24 h,高渗组细胞用含5.5 mmol·L^-1 D-葡萄糖和50 mmol·L^-1甘露醇的培养基培养24 h;其余各组细胞先用含30 mmol·L^-1 D-葡萄糖的培养基培养24 h后,阴性对照组、miR-146a mimics组、miR-146a mimics+IL-17A组分别转染阴性对照序列+pcDNA3.1空质粒、miR-146a mimics质粒、miR-146a mimics+pcDNA3.1-IL-17A质粒。采用MTT法检测细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移活性,Matrigel法检测细胞管腔形成情况,Western blot法检测相关蛋白表达。结果　与正常组相比,高糖组细胞活力、细胞迁移率和细胞环状结构数量均升高,VEGF、VEGF受体2、白细胞介素-17A、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT)蛋白表达亦均升高（均为P<0.05）;而miR-146a mimics组上述指标则较高糖组均降低（均为P<0.05）;miR-146a mimics+IL-17A组上述指标均高于miR-146a mimics组（均为P<0.05）。结论　上调miR-146a表达可有效地降低高糖诱导的HRMEC增殖和新生血管生成,其作用机制可能与降低IL-17A表达进而抑制PI3K/AKT通路激活有关。     

miR-218在高浓度葡萄糖诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞凋亡中的作用

目的　探讨miR-218在高浓度葡萄糖诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞（rat retinal microvascular endothelial cells,rRMECs）凋亡中的作用及其相关机制。方法　将rRMECs分为对照组、高糖组、miR-218阴性抑制组和miR-218抑制组。对照组细胞用DMEM低糖培养基培养;高糖组在培养基中添加D-葡萄糖,终浓度为25 mmol·L^-1;miR-218抑制组及miR-218阴性抑制组是在高糖组培养基的基础上,按照说明书操作,利用Lipo2000将miR-218抑制剂和阴性抑制剂转染rRMECs,共同孵育24 h。提取各组rRMECs总RNA并分析miR-218含量,检测细胞活力,计算细胞凋亡率以及采用Western blot检测各组rRMECs Caspase-3蛋白表达,利用SPSS 19.0统计学软件对实验数据进行单因素方差分析并进行两两比较。结果　对照组、高糖组、miR-218阴性抑制组、miR-218抑制组miR-218相对表达量分别为1.00±0.08、1.48±0.12、1.46±0.14、1.03±0.08;细胞活力分别为100.0%、（72.3±7.5）%、（70.7±9.3）%及（98.4±9.4）%;与对照组相比,高糖组和miR-218阴性抑制组的miR-218相对表达量明显升高（均为P<0.05）,miR-218抑制组的miR-218相对表达量较对照组变化不显著（P>0.05）;高糖组和miR-218阴性抑制组rRMECs细胞活力与对照组相比均明显降低（均为P<0.05）,miR-218抑制组与对照组相比细胞活力未见明显变化（P>0.05）。对照组、高糖组、miR-218阴性抑制组、miR-218抑制组rRMECs细胞凋亡率分别为（2.3±0.0）%、（20.3±3.1）%、（23.1±3.2）%及（2.9±0.1）%;高糖组和miR-218阴性抑制组的细胞凋亡率均显著高于对照组（均为P<0.05）;而miR-218抑制组与对照组相比,细胞凋亡率变化不明显,差异无统计学意义（P>0.05）。对照组rRMECs Caspase-3蛋白相对表达量为（18.6±2.3）%、高糖组为（43.3±4.5）%、miR-218阴性抑制组为（41.6±3.9）%、miR-218抑制组为（20.0±2.8）%。与对照组相比,高糖组和miR-218阴性抑制组的Caspase-3蛋白相对表达量明显增加（均为P<0.05）,miR-218抑制组Caspase-3蛋白相对表达量变化不明显（P>0.05）。结论　高浓度葡萄糖能促使rRMECs miR-218相对表达量增高;当miR-218相对表达量增高时,细胞凋亡明显,细胞活力显著下降,细胞内Caspase-3蛋白的相对表达量明显上调。     

藤黄酸通过CYLD/NF-κB信号通路抑制高糖环境下RPE细胞上皮-间充质转化的作用

目的　基于去泛素化酶圆柱瘤蛋白/核因子κB（CYLD/NF-κB）通路,研究藤黄酸（GA）对高糖环境下视网膜色素上皮(RPE)细胞上皮-间充质转化(EMT)的作用。方法　体外培养ARPE-19 细胞,高糖诱导,实验分为NC组（含5.5 mmol·L^-1葡萄糖）,HG组(含30 mmol·L^-1葡萄糖),HG+不同剂量GA组(2 μmol·L^-1、4 μmol·L^-1、8 μmol·L^-1 GA分别预处理RPE细胞1 h,加30 mmol·L^-1葡萄糖)。CCK-8检测各组RPE细胞增殖活力,免疫荧光染色检测RPE细胞中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、去泛素化酶圆柱瘤蛋白(CYLD)表达;Western blot检测RPE细胞中α-SMA、CYLD、磷酸化核转录因子κB（p-NF-κB）蛋白表达。结果　与NC组相比,HG组RPE细胞出现明显增殖,RPE细胞中α-SMA、p-NF-κB蛋白表达均增加,CYLD蛋白表达减少（均为P<0.01）;与HG组相比,HG+不同剂量GA组RPE细胞增殖均明显受到抑制,RPE细胞中α-SMA、p-NF-κB蛋白表达均减少,CYLD表达均增加（均为P<0.01）,且均呈剂量依赖性。结论　GA可抑制高糖环境下RPE细胞EMT,其抑制作用与上调CYLD,抑制NF-κB活化有关。     

补阳还五汤对高糖环境下miR-21介导的人视网膜微血管内皮细胞自噬的影响

目的　观察补阳还五汤对高糖环境下miR-21介导的人视网膜微血管内皮细胞（HRCECs）自噬的影响，以期为DR自噬调控机制及药物治疗提供依据。方法　HRCECs随机分5组，即正常对照组、高糖组、补阳还五汤组、miR-21 mimic组、miR-21 mimic+补阳还五汤组。除正常对照组外，其余各组细胞于25.0 g·L^-1葡萄糖环境中培养,建立高糖损伤模型，补阳还五汤组加用5 g·L^-1补阳还五汤水提液干预；miR-21 mimic组孵育转染 miR-21 mimic的HRCECs；miR-21 mimic+补阳还五汤组用5 g·L^-1补阳还五汤水提液干预转染 miR-21 mimic的HRCECs。荧光显微镜下观察转染效率，实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-21的表达，Western blot检测各组细胞中LC3蛋白表达。结果　经转染miR-21 mimic后，大部分HRCECs呈绿色荧光，荧光强度为32.708±1.001。实时荧光定量PCR检测结果显示，miR-21 mimic组HRCECs的miR-21相对表达量为106.677±5.787，明显高于高糖组（5.892±0.341）和正常对照组（0.993±0.015），差异均有统计学意义（均为P<0.05）。高糖组和miR-21 mimic组HRCECs中LC3蛋白相对表达量均较正常对照组升高，差异均有统计学意义（均为P<0.05），且miR-21 mimic组HRCECs中LC3蛋白相对表达量高于高糖组（P=0.001）。补阳还五汤组HRCECs中LC3蛋白相对表达量低于高糖组和miR-21 mimic组（均为P<0.05），与正常对照组比较差异无统计学意义（P=0.197）。miR-21 mimic+补阳还五汤组HRCECs中LC3蛋白相对表达量低于miR-21 mimic组，但高于补阳还五汤组，差异均有统计学意义（均为P<0.05），与高糖组比较差异无统计学意义（P=0.930）。结论　高糖环境下，miR-21介导HRCECs的自噬，补阳还五汤可以下调HRCECs的miR-21表达，进而减少细胞自噬。     

KIF11通过激活Wnt/β-catenin通路调控高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞损伤

目的　探究KIF11在高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（HRMECs）损伤中的作用和机制。方法　将正常培养的HRMECs随机分成四组:正常组（给予5 mmol·L^-1葡萄糖）、高糖组（给予30 mmol·L^-1葡萄糖）、高糖+si-NC组（转染100 nmol·L^-1 si-NC后给予30 mmol·L^-1葡萄糖）、高糖+si-KIF11组（转染100 nmol·L^-1 si-KIF11后给予30 mmol·L^-1葡萄糖）。Real-time PCR检测各组HRMECs的KIF11、VEGF和HIF-1α mRNA表达,Western blot检测KIF11、VEGF、HIF-1α和Wnt/β-catenin通路相关蛋白（β-catenin、cyclin D1和c-Myc）表达,CCK-8法检测细胞活力,Transwell检测迁移细胞数目。通过LiCl激活Wnt/β-catenin通路进一步确证KIF11是否通过该通路发挥作用。结果　与正常组相比,高糖组中HRMECs细胞活力增加,迁移细胞数增多,KIF11、VEGF和HIF-1α mRNA和蛋白水平以及β-catenin、cyclin D1和c-Myc蛋白表达均上调（均为P<0.05）;与高糖组相比,高糖+si-KIF11组中HRMECs细胞活力降低,迁移细胞数减少,KIF11、VEGF和HIF-1α mRNA和蛋白水平以及β-catenin、cyclin D1和c-Myc蛋白表达均下调（均为P<0.05）;而高糖+si-NC组中上述指标与高糖组相比差异均无统计学意义（均为P>0.05）。与高糖+si-KIF11组相比,高糖+si-KIF11+LiCl组HRMECs细胞活力增加,迁移细胞数增多,VEGF和HIF-1α蛋白表达上调（均为P<0.05）。结论　KIF11在高糖诱导的HRMECs中表达上调,下调其表达可通过抑制Wnt/β-catenin通路缓解高糖诱导的HRMECs损伤。     

miR-106调控CC趋化因子配体2对增生型糖尿病视网膜病变中人视网膜微血管内皮细胞增殖、血管生成和炎症反应的影响

目的　探讨miR-106调控CC趋化因子配体2（CCL2）对增生型糖尿病视网膜病变（PDR）中人视网膜微血管内皮细胞（HRMEC）增殖、血管生成、炎症反应的影响。方法　GEO数据库筛选PDR中差异表达的miRNAs。高糖（25.0 mmol·L^-1葡萄糖,HG）诱导HRMEC建立PDR细胞模型,qRT-PCR检测miR-106和CCL2在正常葡萄糖（5.5 mmol·L^-1葡萄糖,NG）和HG培养条件下HRMEC中的表达。将PDR患者的血清外泌体做miR-106过表达处理后与HG处理的HRMEC共培养,同时干预HRMEC中CCL2的表达以探讨血清外泌体miR-106和CCL2在PDR中的功能。采用MTT法、小管形成实验和ELISA法分别检测各组HRMEC增殖、血管生成和炎症因子的表达。双荧光素酶报告实验用以验证miR-106和CCL2的靶向关系。结果　与NG组细胞中miR-106表达（1.04±0.10）、CCL2表达（1.02±0.09）相比,HG培养的HRMEC中miR-106表达（0.68±0.06）降低,CCL2表达（1.38±0.11）升高（均为P<0.05）。PDR患者血清外泌体中miR-106表达较NDR患者血清外泌体中表达降低（P<0.05）。与HG+PDR-exo+miR-NC组相比,HG+PDR-exo+miR-106 mimic组HRMEC活力降低,血管生成被抑制,细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低,而SOD、CAT和GSH水平升高（均为P<0.05）。双荧光素酶报告实验证实了CCL2是miR-106的一个靶点。与HG+PDR-exo+miR-106 mimic+oe-NC组相比,HG+PDR-exo+miR-106 mimic+oe-CCL2组HRMEC活力提高,血管生成被诱导,TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高,而SOD、CAT和GSH水平降低（均为P<0.05）。结论　血清外泌体miR-106能够抑制CCL2表达,进而对PDR中的HRMEC增殖、血管生成和炎症反应起抑制作用。     

OTUD6B-AS1通过miR-21-5p对高糖诱导的ARPE-19细胞增殖、迁移的影响

目的　探讨高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19)中含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA 1(OTUD6B-AS1)的功能及其作用机制。方法　取ARPE-19细胞,加入含30 mmol·L^-1葡萄糖的培养基培养,设为高糖组,另取ARPE-19细胞不做任何处理设为对照组。用Lipofectamine^TM 2000转染试剂分别将过表达空质粒（pcDNA-NC组）、OTUD6B-AS1过表达质粒（pcDNA-OTUD6B-AS1组）和OTUD6B-AS1过表达质粒＋miR-21-5p 模拟物（pcDNA-OTUD6B-AS1+miR-21-5p mimics组）转染进高糖诱导的ARPE-19细胞。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中OTUD6B-AS1和miR-21-5p的表达;用CCK-8法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力;荧光素酶报告基因实验验证OTUD6B-AS1与miR-21-5p的靶向关系。结果　与对照组比较,高糖组ARPE-19细胞中OTUD6B-AS1表达量显著降低、miR-21-5p表达量显著升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与对照组比较,高糖组细胞凋亡率显著升高,细胞增殖率和迁移率均显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05）。与pcDNA-NC组比较,pcDNA-OTUD6B-AS1组中细胞增殖率和迁移率显著升高,细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示,OTUD6B-AS1可靶向miR-21-5p。与pcDNA-OTUD6B-AS1组比较,pcDNA-OTUD6B-AS1＋miR-21-5p mimics组细胞凋亡率显著升高,细胞增殖率和迁移率显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05）。结论　OTUD6B-AS1可抑制高糖诱导的ARPE-19细胞凋亡,并促进细胞增殖和迁移,其作用机制与miR-21-5p有关。     

过表达低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对体外培养人视网膜血管内皮细胞增殖、炎症反应及血管生成的影响

目的　检测过表达低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α）对体外培养人视网膜血管内皮细胞（human retinal capillary endothelial cell,HREC）增殖、炎症反应及血管生成的影响。方法　将体外培养HREC转染人工合成的pEGFP-HIF-1α重组载体,并采用荧光定量PCR检测转染前后HREC中HIF-1α的表达变化。采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）、酶联免疫吸附实验（ELISA）和Western blot分别检测过表达HIF-1α对HREC增殖、炎症反应及血管生成的影响。结果　体外转染pEGFP-HIF-1α可显著增加HREC中HIF-1α mRNA 和蛋白表达。过表达HIF-1α可显著促进HREC增殖,HREC转染pEGFP-HIF-1α后24 h、48 h及72 h A值分别为:0.34±0.04、0.57±0.04、0.83±0.05,而HREC转染pEGFP-C1后24 h、48 h及72 h A值分别为:0.26±0.03、0.44±0.04、0.61±0.04,两者相比差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。过表达HIF-1α可显著增加HREC中肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α、白细胞介素（interleukin,IL）-1β及IL-6的蛋白表达水平,TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为（2.63±0.57）ng·L^-1、（1.94±0.41）ng·L^-1、（5.32±0.83）ng·L^-1,而转染pEGFP-C1后HREC中TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为（1.20±0.34）ng·L^-1、（0.66±0.27）ng·L^-1、（1.89±0.60）ng·L^-1,两者相比差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。过表达HIF-1α可显著增加HREC中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达,转染pEGFP-HIF-1α后细胞VEGF蛋白的表达为6.72±0.96,而转染pEGFP-C1后细胞VEGF蛋白的表达为2.31±0.47,两者相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　过表达HIF-1α可促进体外培养HREC增殖、炎症反应及血管的生成。     

miR-181a靶向沉默信息调节因子相关酶1在过氧化氢诱导的人小梁网细胞氧化应激中的调节作用

目的　探讨miR-181a对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人小梁网细胞（HTMCs)氧化应激的调节作用及其机制。方法　HTMCs随机分为空白组（0 μmol·L^-1 H₂O₂）、200 μmol·L^-1 H₂O₂组、400 μmol·L^-1 H₂O₂组、600 μmol·L^-1 H₂O₂组,分别使用相应浓度H₂O₂处理HTMCs,24 h后MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-181a mRNA表达,Western blot检测各组细胞中沉默信息调节因子相关酶1（SIRT1）蛋白表达。根据转染物的不同分为miR-181a inhibitor组、miR-181a NC组、miR-181a mimics组、miR-181a inhibitor+si-SIRT1组和miR-181a inhibitor+si-NC组,使用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针检测各组细胞内活性氧（ROS）含量,使用超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）ELISA试剂盒检测各组细胞SOD和MDA活性,使用Annexin V FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中SIRT1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验对靶点进行验证。结果　与空白组比较,200 μmol·L^-1 H₂O₂组、400 μmol·L^-1 H₂O₂组、600 μmol·L^-1 H₂O₂组细胞存活率均降低（均为P<0.05）。细胞miR-181a mRNA的表达随着H₂O₂浓度的增加而增加,SIRT1蛋白的表达随着H₂O₂浓度的增加而降低（均为P<0.05）。与miR-181a NC组比较,miR-181a mimics组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均降低,miR-181a inhibitor组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均降低,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均升高（均为P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-181a靶向抑制SIRT1蛋白的表达。与miR-181a inhibitor+si-NC组比较,miR-181a inhibitor+si-SIRT1组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,SOD活性降低（均为P<0.05）。结论　miR-181a可能通过靶向SIRT1调节H₂O₂诱导的HTMCs氧化应激作用。     

石蒜碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的作用及其可能机制

目的　探讨石蒜碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的作用，并分析其可能机制。方法　取B16F10葡萄膜黑色素瘤细胞株，按石蒜碱浓度为0 μmol·L^-1（对照组）、1.560 μmol·L^-1、3.125 μmol·L^-1、6.250 μmol·L^-1、12.500 μmol·L^-1、25.000 μmol·L^-1进行分组培养,24 h后，CCK-8法检测各组B16F10细胞的存活率；RT-PCR分析各组B16F10细胞VEGF-A mRNA的表达，ELISA检测各组B16F10细胞VEGF-A蛋白表达；流式细胞仪检测各组B16F10细胞的细胞周期及凋亡情况。结果　与对照组相比，1.560 μmol·L^-1、3.125 μmol·L^-1、6.250 μmol·L^-1、12.500 μmol·L^-1、25.000 μmol·L^-1石蒜碱作用于B16F10细胞 24 h 后，能够呈浓度依赖性抑制B16F10细胞生长（其半数抑制浓度为7.950 μmol·L^-1），下调B16F10细胞中VEGF-A mRNA的表达，抑制 VEGF-A蛋白分泌，其中25.000 μmol·L^-1石蒜碱抑制效果最显著。流式细胞仪检测结果显示，1.560 μmol·L^-1、3.125 μmol·L^-1、6.250 μmol·L^-1、12.500 μmol·L^-1、25.000 μmol·L^-1石蒜碱干预B16F10细胞24 h后，细胞凋亡率由对照组0.00%，分别上升为12.80%、12.86%、16.68%、18.54%、22.20%；G1期细胞比例由对照组（30.86±0.69）%，分别上升为（56.55±0.95）%、（60.92±0.85）%、（62.65±0.53）%、（67.55±0.92）%、（74.18±0.45）%，与对照组相比，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　石蒜碱在体外能够呈浓度依赖性抑制葡萄膜黑色素瘤细胞B16F10的VEGF水平，引发细胞S期阻滞，诱导细胞凋亡，从而显著抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖。     

ghrelin-GHSR-1a对高糖环境下视网膜血管内皮细胞的保护作用

目的 观察ghrelin及其受体生长激素分泌素受体1a(GHSR-1a)在高糖环境下对视网膜血管内皮细胞的保护作用.方法 将体外培养的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)分为对照组和高浓度葡萄糖组.对照组细胞在含5.5 mmol·L-1葡萄糖的M199培养基中培养48 h,高浓度葡萄糖组细胞在含30.0 mmol·L-...     

二甲双胍对高糖诱导的RF/6A细胞增殖、迁移和血管形成的影响及其可能机制

目的 研究二甲双胍(MET)对高糖诱导的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞RF/6A增殖、迁移和血管形成的影响,并初步探讨其作用机制。方法 RF/6A细胞随机分为5组：NC组、HG组、HG+15 mmol·L^-1MET组、HG+30 mmol·L^-1 MET组、HG+45 mmol·L^-1MET组,CCK-8法检测细胞增殖情况。将RF/6A细胞随机分为4组：NC组和NC+15 mmol·L^-1MET组、NC+30 mmol·L^-1MET组、NC+45 mmol·L^-1MET组,CCK-8法检测MET的细胞毒性。将RF/6A细胞随机分为3组：NC组、HG组和HG+15 mmol·L^-1MET组,细胞划痕法和Transwell法检测细胞迁移,Matrigengel法检测细胞血管形成,RT-PCR、Western blot检测Hippo信号通路的核心成分YAP、TEAD1的mRNA及蛋白表达。结果 CCK-8法检测结果显示,与NC组比较,HG组R...     

视网膜色素上皮细胞通过分泌含有miR-4488的外泌体抑制糖尿病视网膜病变进展的机制研究

目的　探讨视网膜色素上皮细胞通过分泌含有miR-4488的外泌体抑制糖尿病视网膜病变进展的分子机制。方法　将人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞分为空白组、高糖组。将人视网膜微血管内皮细胞（HRMECs）分为NG组、HG组、NG+外泌体组和HG+外泌体组。空白组、NG组和NG+外泌体组细胞用含5.5 mmol·L^-1正常浓度葡萄糖的培养基培养24 h;高糖组、HG组和HG+外泌体组细胞用含30 mmol·L^-1高浓度葡萄糖的培养基培养24 h;NG+外泌体组和HG+外泌体组细胞在培养基中分别加入空白组或高糖组ARPE-19细胞分泌的外泌体40 μg·L^-1。PKH67绿色荧光标记外泌体;利用CCK-8法、Transwell小室法检测HRMECs增殖、迁移和血管生成。取空白组和高糖组ARPE-19细胞外泌体进行miRNA微阵列分析。采用双荧光素酶报告分析检测miR-4488和转化生长因子β受体Ⅱ（TGFβR2）基因序列的靶向关系。采用Western blot或免疫荧光染色检测各组HRMECs中TGFβR2、Smad2、p-Smad2ser467或Desmin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果　空白组和高糖组ARPE-19细胞分泌的被PKH67标记的外泌体加入培养基后都可被HRMECs吸收。与NG组相比,HG组HRMECs细胞增殖率、迁移率、血管结点数和血管总长度、TGFβR2和p-Smad2ser467蛋白表达量、Desmin和α-SMA蛋白荧光强度均增加（均为P<0.05）;与HG组相比,HG+外泌体组上述指标均被逆转（均为P<0.05）;NG+外泌体组与NG组上述指标相比差异均无统计学意义（均为P>0.05）。与空白组相比,高糖组ARPE-19细胞分泌的外泌体中miR-4488相对表达量增加,且miR-4488模拟物和TGFβR2wt共转染可增加双荧光素酶活性（均为P<0.05）。结论　在高糖条件下,ARPE-19细胞释放的外泌体可通过miR-4488/TGFβR2/Smad信号通路抑制HRMECs间充质转化。     

薯蓣皂苷对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨薯蓣皂苷(Dio)对高糖(HG)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的保护作用,并分析其机制.方法 用细胞计数试剂8(CCK-8)法筛选葡萄糖浓度和无细胞毒性的Dio剂量范围.将ARPE-19细胞分为对照组(5 mmol·L-1葡萄糖处理48 h)、模型组(50 mmol·L-1葡萄糖处理48 h)和低、中...     

高糖环境下Ndufa4线粒体复合体相关蛋白2(Ndufa4l2)对小鼠视网膜感光细胞661W的影响

目的 探讨高糖环境下Ndufa4线粒体复合体相关蛋白2(Ndufa4l2)对视网膜感光细胞661W功能的影响及其相关机制.方法 体内实验:选取C57BL/6J小鼠12只,采用随机数字表法分为糖尿病组和正常组,每组各6只,糖尿病组小鼠采用腹腔注射链脲佐菌素造模,正常组小鼠腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液.采用免疫组织化学法检测...     

高迁移率族蛋白B1对高糖诱导的晶状体上皮细胞凋亡和自噬的影响

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对高糖诱导的晶状体上皮细胞(LEC)凋亡和自噬的影响。方法 本研究以糖尿病性白内障患者和年龄相关性白内障(ARC)患者晶状体前囊膜以及高糖和正常糖条件下培养的人晶状体上皮细胞株(SRA01/04)为研究对象。选取2021年10月至2022年3月在南通大学第二附属医院眼科确诊为白内障的患者20例,依据白内障类型分为糖尿病性白内障组(DC组)和ARC组,每组各10例,取患者晶状体前囊膜进行实验。将细胞分为正常糖组和高糖组,正常糖组培养基含5.5 mmol·L^-1葡萄糖,高糖组培养基含25.0 mmol·L^-1葡萄糖,处理24 h后进行实验。采用Western blot检测各组HMGB1蛋白的表达水平。利用siRNA技术对HMGB1进行敲降,将细胞分为正常对照组、scr-siRNA组和si-HMGB1组。正常对照组：不作任何处理;scr-siRNA组：加入等量的Lipofectamine 3000和scr-siRNA;si-HMGB1组：加入等量的Lipofectamine 3000和si-HMGB1。三组...     

基于miR-224-5P调控的IL6ST/JAK/STAT信号通路在糖尿病视网膜病变发生发展中的作用

目的 探讨miR-224-5P在糖尿病视网膜病变(DR)患者中的表达变化及其在高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)中的作用和机制。方法 抽取DR患者及健康人群各6名的外周血,RT-qPCR检测miR-224-5P相对表达量。将正常培养的ARPE-19细胞随机分成高糖组(给予30 mmol·L^-1高糖)、高糖+miR-224-5P mimics组(转染100 nmol·L^-1miR-224-5P mimics后给予30 mmol·L^-1高糖)、高糖+miR-224-5P inhibitor组(转染100 nmol·L^-1miR-224-5P inhibitor后给予30 mmol·L^-1高糖)、高糖+OE-IL6ST组(转染100 nmol·L^-1OE-IL6ST后给予30 mmol·L^-1高糖)和高糖+miR-224-5P mimics+OE-IL6ST组(转染100 nmol·L^-1miR-224-...