应用表观遗传学位点检测孕妇血浆中的胎儿DNA

随着对遗传病分子基础认识的不断深入和检测特异基因突变技术能力不断提高,为以DNA检测为基础的产前诊断提供了理论和技术基础,对胎儿DNA进行遗传分析已成为常规检测手段。传统的产前诊断中获取胎儿组织样本的方法包括羊膜腔穿刺、绒毛膜取样、脐带取血等,这些方法均有创伤性,对胎儿和孕妇都有一定的危险性。近年孕妇外周血中胎儿DNA的发现开创了非侵入性产前诊断的可能性,同时母体血浆中相对高纯度和相对浓缩胎儿DNA技术发展促进了非侵入性产前诊断的临床应用。但是,区分孕妇血浆中的母体DNA和胎儿DNA是关键,目前已发现有印迹基因、胎盘组织特异性表达基因和病理情况下胚胎组织基因组特异性甲基化基因,这3类基因位点均可用于区分检测孕妇血浆中的母体DNA和胎儿DNA。     

母血清及血浆中胎儿游离DNA的研究进展

发现母血浆及血清中胎儿游离DNA,为无创性产前诊断技术开辟新途径.利用母血中有男胎睾丸确定基因(SRY)特异性序列确定胎儿DNA存在.用PCR技术扩增SRY的单拷贝序列(DYS14),确定性别敏感性60%～100%.利用实时定量PCR技术测定母血清和血浆中胎儿DNA浓度,妊娠7周母血清中可确定胎儿DNA,随妊娠周增加胎儿DNA量也增高.另证明非整倍体核型胎儿在母血浆中的DNA浓度高于正常核型胎儿,母血浆中定量测定胎儿游离DNA技术可能成为筛查染色体非整倍体核型胎儿的一种手段.     

母血清及血浆中胎儿游离DNA的研究进展

发现母血浆及血清中胎儿游离DNA，为无创性产前诊断技术开辟新途径。利用母血中有男胎睾丸确定基因(SRY)特异性序列确定胎儿DNA存在。用PCR技术扩增SRY的单拷贝序列(DYSl4)，确定性别敏感性60％～100％。利用实时定量PCR技术测定母血清和血浆中胎儿DNA浓度，妊娠7周母血清中可确定胎儿DNA，随妊娠周增加胎儿DNA量也增高。另证明非整倍体核型胎儿在母血浆中的DNA浓度高于正常核型胎儿，母血浆中定量测定胎儿游离DNA技术可能成为筛查染色体非整倍体核型胎儿的一种手段。     

非侵入性产前诊断研究及临床应用新进展

由于环境情况不良、生育年龄延迟,出生缺陷的发病率在升高。非侵入性产前诊断是研究热点。通过分离母体血中胎儿细胞、经宫颈收集胎儿细胞,由母体血清中提取胎儿游离DNA及mRNA可对染色体异常疾病、基因异常疾病及RhD血型进行的产前诊断称之为非侵人性产前诊断（non—invasiveprenataldiagnosis,因该检查手段并非完全无创,故认为非侵入性产前诊断更为合适）。     

孕妇外周血胎儿有核红细胞在产前诊断中的作用

目前对遗传性疾病的产前诊断有数种方法。根据采样途径或诊断方法是否构成对胎儿的影响可分为侵入性产前诊断和非侵入性产前诊断。前者包括羊膜腔穿刺术、绒毛细胞吸取术及胎儿脐血穿刺等，虽然诊断精确度较高，但可导致流产等并发症，只能在高危孕妇中实施；后者的优点是既能行产前诊断又无危险性，适用于低风险的孕妇大群体筛选，尽早发现和杜绝异常胎儿，达到优生目的。许多学者致力于利用胎儿细胞进行产前诊断。利用孕妇外周血的胎儿细胞进行产前基因诊断三个关键性技术为：(1)证实母血中存在胎儿细胞和DNA。(2)建立可靠稳定的方法分离胎儿细胞和DNA。(3)应用灵敏性、特异性强的技术以微量胎儿细胞和DNA为模板诊断遗传性疾病。这是最具潜力的非侵入性产前诊断方法之一。     

利用孕妇外周血作非侵入性产前检查的研究进展

近年来人们对利用孕妇外周血作非侵入性产前诊断 (因其材料简便易获 )的研究越来越多。非侵入性产前诊断可用于诊断常见的染色体疾病 ,检测胎儿性别 ,甚至诊断单基因遗传病等。对孕妇外周血的研究主要包括三方面的内容 :血清生化指标测定、胎儿有核红细胞 (NRBC)的研究及胎儿 DNA的研究等     

定量检测孕妇血浆中胎儿DNA在产前诊断的应用

目的探讨应用荧光定量PCR技术检测孕妇血浆中胎儿DNA量，了解胎儿DNA和母体DNA随孕周增长的变化，为将来应用于非创性产前诊断做临床前期研究。方法选择妊娠7～42周，B超确诊为单胎的孕妇58例，使用DNA试剂盒提取孕妇血浆中的胎儿DNA，用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术测定血浆中β-actin基因和SRY基因的量。结果58例正常孕妇，有37例男性胎儿，检出率为100％。胎儿DNA的量在早孕组为9．08拷贝／ml（3．5～12．8），中孕组为45．41拷贝／ml（14．38～76．5），晚孕组为300．95拷贝／ml（84～840）。21例女性胎儿均未检出SRY基因。结论胎儿DNA随着孕周的增加而增长，母体血浆是进行无创性产前诊断的非常有价值的底物。     

细胞游离胎儿DNA产前诊断胎儿非整倍体异常

细胞游离胎儿DNA（cffDNA）已被成功在妊娠妇女血循环中检测到。与母体血循环中胎儿细胞不同,cffDNA最早可在妊娠4周检测出,并能在产后迅速消失。cffDNA可能源于胎盘部位的滋养细胞等并通过凋亡机制释放进入母体血循环中。通过检测cffDNA可产前诊断胎儿非整倍体异常,但因其在妊娠妇女血中含量较少,检测具有挑战性。目前已有多种新检测方法用于非整倍体异常的产前诊断,尚需不断完善。     

细胞游离胎儿DNA产前诊断胎儿非整倍体异常

细胞游离胎儿DNA(cffDNA)已被成功在妊娠妇女血循环中检测到。与母体血循环中胎儿细胞不同,cffDNA最早可在妊娠4周检测出,并能在产后迅速消失。cffDNA可能源于胎盘部位的滋养细胞等并通过凋亡机制释放进入母体血循环中。通过检测cffDNA可产前诊断胎儿非整倍体异常,但因其在妊娠妇女血中含量较少,检测具有挑战性。目前已有多种新检测方法用于非整倍体异常的产前诊断,尚需不断完善。     

多重连接依赖探针扩增技术检测胎儿非整倍体染色体异常

目的 探讨多重连接依赖探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplifiea-tion,MLPA)在检测胎儿非整倍体染色体异常中的作用. 方法 2007年6月至2008年12月对263例需进行产前诊断的孕妇(产前诊断组)取羊水或脐血进行MLPA检测,同时进行传统的染色体核型分析.对26例发生稽留流产或死胎的孕妇取胎儿组织提取DNA进行MLPA检测. 结果 产前诊断组检出5例21-三体,4例18-三体,1例13-三体和3例45,X,与细胞核型分析结果一致.稽留流产或死胎组检出2例45,x和1例18-三体. 结论 MLPA可用于检测胎儿最常见的13、18、21、X、Y染色体非整倍体异常,用于产前诊断,快速简单,准确经济,有一定的临床推广价值.     

孕妇血浆和血清中胎儿DNA在产前诊断中的应用

长久以来许多学者致力于研究利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行非创伤性产前诊断 ,虽然取得了一些重要进展 ,但母血中的胎儿细胞数量稀少 ,富集效率不高且价格昂贵 ,成为常规应用的主要障碍。母体血浆中存在较高浓度胎儿DNA的发现 ,为非创伤性产前诊断开辟了一个新途径。一、孕妇血浆和血清中的胎儿DNA肿瘤患者的血浆和血清中癌源性DNA的发现[1 ,2 ] ,激发了研究人员将血浆用于分子分析的兴趣。由于胎盘的滋养层和恶性肿瘤细胞的生物学行为类似 ,均有侵入性和致癌基因表达 ,故一些研究人员把胎盘喻为“假恶性物”[3] 。这就提示 :癌症患者…     

孕妇血浆中胎儿DNA在产前诊断中的初步应用--胎儿SRY基因、STR基因型的鉴定

目的 :利用孕妇血浆中游离胎儿 DNA进行非创伤性产前基因诊断。方法 :对 6 5例 5～ 4 1孕周孕妇血浆胎儿DNA进行 SRY的 PCR扩增 ,以检出男性胎儿 DNA;同时采用短串联重复序列 (STR)多态位点即 CSFIPO、TPOX、THO1(CTT)三个位点的复合扩增方法对 19例妊娠女性胎儿的孕妇血浆 DNA进行扩增 ,以检出女性胎儿 DNA。两种扩增均采用母体血浆直接作为模板进行。结果 :SRY- PCR中 ,4 6例妊娠男性胎儿的孕妇中 ,有 30例血浆中出现 SRY基因扩增带 ,19例妊娠女性胎儿的孕妇血浆中仅 1例孕中期者为假阳性 (5 .3% )。本研究孕早、中、晚期的性别符合率分别为 6 0 %、84 .0 9%、5 0 % ,总符合率为 73.85 % .CTT- PCR中 ,19例妊娠女胎孕妇血浆中有 15例检出父源性等位基因即女性胎儿 DNA。结论 :应用孕妇血浆中胎儿 DNA作产前诊断敏感性和特异性较高 ,尤其是在孕中期 ,它是一种非创伤性产前诊断方法 ,适用于临床。     

游离胎儿DNA高通量基因测序技术在产前筛查的临床应用

目的:探讨应用孕妇血浆中游离胎儿DNA高通量基因测序技术在无创性产前诊断中的可行性.方法:采用化学发光法对22977例孕中期妇女进行唐氏综合征筛查,对筛查结果为高风险的1173例孕妇采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA,分析胎儿染色体拷贝数,检测结果为高危的孕妇再做羊膜腔穿刺及脐血穿刺术进行胎儿染色体核型分析.结果:1173例孕妇中游离胎儿DNA高通量基因测序技术检测出11例染色体高风险胎儿,羊水/脐血核型分析证实其中10例为染色体异常,分别为7例21-三体和2例18-三体,1例13-三体.游离胎儿DNA高通量基因测序技术的敏感度为100.00％(10/10),特异度为99.91％(1162/1163),假阴性率为0(0/1173),假阳性率为0.09％(1/1173).结论:母体血浆游离DNA高通量基因测序技术可用于胎儿染色体拷贝数异常的检测,有准确性高、假阴性和假阳性率低、无创取样的优点,但由于费用较高,可结合血清学唐氏综合征筛查在有条件的地区进行推广应用.     

利用母血胎儿游离DNA检测胎儿遗传信息的应用进展

目前临床广泛开展的产前诊断技术主要是侵入性产前诊断技术,包括妊娠早期(7～11周)绒毛活检技术、妊娠早中期胚胎(胎儿)镜检查技术、妊娠中期羊膜腔穿刺取样技术、妊娠中晚期脐静脉穿刺胎血取样技术等,因其创伤性、有一定的流产风险使得有创产前诊断的普及率不高.目前,利用孕妇外周血中胎儿细胞或胎儿DNA开展产前诊断已成为非侵入性产前诊断临床探索的新方向.然而,由于参与母体血循环的胎儿细胞数量极少、母血胎儿有核红细胞含量随孕周变化差异巨大,且分离、提纯、富集胎儿有核红细胞技术复杂、价格昂贵,导致利用母血胎儿细胞检测胎儿遗传信息发展缓慢[1].     

胎儿游离RNA在产前诊断中的研究进展

传统产前诊断依靠有创性操作,具有潜在风险。目前无创性产前诊断方法集中于从母体血液中分离胎儿细胞或从血清或血浆中提取胎儿游离DNA,二者在临床的应用尚存不足。近年,妊娠妇女血循环中游离胎儿RNA的发现和应用,是无创性产前诊断领域的突破。已经证实,游离胎儿RNA分子主要来源于胎盘,在母体血循环中比较稳定,易于检测。同时,由于其无需依赖于胎儿性别或是父源性多态性位点,临床应用领域优于胎儿游离DNA;结合对分子标记物的定量检测方法更适用于产前诊断领域,并已取得初步成果。预测其具有很好的应用前景。     

应用Rh阴性孕妇外周血胎儿游离DNA进行RhD血型产前基因诊断

目的探讨利用Rh阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性产前诊断胎儿RhD血型的方法。方法通过SRY基因确定胎儿DNA的存在，采用PCR-SSP技术对32例妊娠11～40周的单胎RhD阴性孕妇血浆中胎儿游离DNA进行RHD基因外显子5、7、10和内含子4的特异性扩增，其基因型结果与产后新生儿脐血血清学检测结果进行对比性分析，回顾性评价胎儿基因分型结果的准确性。结果32例样本中，28例基因定型结果与血清学表型相符，准确率达到87．5％，通过检测RHD1227A等位基因鉴定了RhD放散型，使结果达到93．75％（30／32）的准确率。结论利用Rh阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性诊断胎儿RhD血型，是一种简便、快速且无损伤性的产前基因诊断的可行性方法，可用于新生儿溶血病的预防和诊断，值得临床推广应用。     

胎儿游离RNA在产前诊断中的研究进展

传统产前诊断依靠有创性操作,具有潜在风险。目前无创性产前诊断方法集中于从母体血液中分离胎儿细胞或从血清或血浆中提取胎儿游离DNA,二者在临床的应用尚存不足。近年,妊娠妇女血循环中游离胎儿RNA的发现和应用,是无创性产前诊断领域的突破。已经证实,游离胎儿RNA分子主要来源于胎盘,在母体血循环中比较稳定,易于检测。同时,由于其无需依赖于胎儿性别或是父源性多态性位点,临床应用领域优于胎儿游离DNA;结合对分子标记物的定量检测方法更适用于产前诊断领域,并已取得初步成果。预测其具有很好的应用前景。     

STR-PCR在产前诊断胎儿唐氏综合征中的应用

目的:研究通过多重荧光定量PCR诊断胎儿染色体非整倍体用于临床快速产前诊断的可行性。方法:从孕中期羊水中提取胎儿DNA,通过多重荧光定量PCR使用STR对13、18、21号染色体进行非整倍体筛查,筛查结果异常者再进行快速诊断。用PCR诊断的羊水标本同时使用"金标准"染色体核型分析法做对比。结果:34例羊水标本中2例标本由于母血污染严重未行PCR检测,1例标本经PCR及核型分析均失败,29例标本经PCR和核型分析诊断为正常染色体,2例标本经PCR和核型分析诊断为21-三体。结论:通过STR-PCR法使用多重荧光酶联聚合反应探针产前诊断胎儿唐氏综合征是临床快速产前诊断的有效方法之一。     

胎儿保健的进展

胎儿保健包括对胎儿疾病的产前诊断、对胎儿生长发育及胎儿宫内安危进行监测和评价 ;并提供相应的咨询、指导和医疗保健。1　产前诊断[1,2 ]产前诊断是采用多种方法来了解胎儿的健康状况 ,并对某些先天性、遗传性疾病作出诊断。产前诊断的方法可分为侵入性和非侵入性两类。侵入性方法包括羊膜腔穿刺、绒毛活检、胎血分析、胎儿组织活检、胎儿镜检、羊水造影等。非侵入性方法包括母血清生化指标的检查、母血中胚胎细胞分析、超声诊断、Ｘ线诊断及磁共振检查等。不同的方法只能在相应的时间进行。1 1　侵入性检查方法1 1 1　羊膜腔穿刺术　在…     

利用母胎间基因甲基化的差异性检测母血中微量胎儿DNA方法的建立

随着表观遗传学方法 在无创性产前诊断中的逐步应用,第一个普通应用的胎儿表观遗传学标记低甲基化maspin基因突破了胎儿性别和基因多态性的局限,为母血中胎儿DNA应用于临床开辟了新的领域,象征着非创伤性产前诊断的研究向前迈进了一大步[1].甲基化特异的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术是低甲基化maspin序列检测的重要手段,然而该方法 操作复杂且造成大量DNA降解,给微量胎儿DNA的定量分析带来困难.有研究者发现,RASSF1A基因启动子区在母血细胞中处于低甲基化状态,而在胎盘细胞中处于超甲基化状态[2-3];同时发现母血浆中超甲基化的RASSF1A序列中存在胎儿SNP基因型.