妊娠高血压综合征患者胎盘还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶基因的表达

目的　研究还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH)脱氢酶基因在妊娠高血压综合征 (妊高征 )患者胎盘组织中的表达 ,了解其在妊高征发病中的作用。方法　采用32 P标记的NADH脱氢酶cDNA探针斑点印迹杂交方法 ,对 10例正常妊娠妇女 (对照组 )及 10例中、重度妊高征患者 (妊高征组 )的胎盘组织总RNA进行检测 ,以图像处理系统测量每个杂交点的平均吸光度 (A)值 ,比较两组胎盘组织NADH脱氢酶mRNA水平。结果　妊高征组和对照组胎盘组织NADH脱氢酶平均A值分别为 2 1± 6、5 6± 16;妊高征组胎盘组织NADH脱氢酶mRNA的表达明显高于对照组 ,两组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　妊高征患者胎盘组织NADH脱氢酶基因表达的增加 ,可能在妊高征发病中起一定作用     

基因芯片研究妊娠高血压综合征患者胎盘组织基因表达的变化

目的 检测妊娠高血压综合征(妊高征)患者胎盘组织和正常妊娠胎盘组织差异表达基因谱。方法 Trizol法抽提组织总RNA并纯化mRNA；应用cDNA阵列人类全基因表达谱分析芯片检测6例妊高征患者胎盘组织和5例正常妊娠者胎盘组织中差异表达的基因，扫描仪分析结果。结果 所检测的17000个基因中，妊高征患者胎盘组织与正常妊娠者胎盘组织之间存在差异表达基因96个，表达上调基因数为78个，下调基因数为18个。初步分析发现，有85个已知功能基因，其中79个功能分类基因，大致分为癌基因和细胞周期蛋白、细胞骨架和运动蛋白、细胞分裂、离子通道和运输蛋白、细胞凋亡和应激反应蛋白、细胞受体、免疫、细胞信号和传递蛋白、转录和翻译系统、代谢、发育、细胞分化相关基因，另外有6个未分类基因、8个未知基因表达序列标签、3个cDNA片段。结论 妊高征发病的分子机制可能涉及了一些基因表达的变化。     

妊高征患者胎盘滋养细胞中转化生长因子β1的表达及意义

目的 :探讨胎盘组织中转化生长因子 β1 (TGF β1 )的定位 ,检测滋养细胞中TGF β1mRNA的表达水平 ,评估TGF β1在妊娠高血压综合征 (妊高征 )中的作用。方法 :用免疫组化法对 30例正常孕妇、2 5例妊高征孕妇的胎盘组织进行TGF β1定位 ;用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测正常妊娠滋养细胞 6例、妊高征滋养细胞 6例中TGF β1mRNA表达水平 ,并进行定量分析。结果 :(1 )胎盘TGF β1主要位于绒毛小叶的合体滋养细胞及细胞滋养细胞 ;(2 )与正常组比较 ,妊高征组胎盘TGF β1的平均光密度显著增加(P <0 .0 5) ;(3)与正常滋养细胞比较 ,妊高征滋养细胞TGF β1mRNA的表达强度显著增强(P <0 .0 5)。结论 :胎盘组织中TGF β1主要位于胎盘小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞 ,胎盘滋养细胞合成TGF β1的增多与妊高征的发生有关     

缺氧诱导因子1α在妊娠高血压综合征患者胎盘组织中的表达

目的　研究缺氧诱导因子 1α在妊娠高血压综合征 (妊高征 )患者胎盘组织中的表达 ,及其在妊高征发病机制中的作用。方法　采用组织芯片技术和免疫组化方法检测 4 9例妊高征患者 (妊高征 1组 )及 2 6例正常孕妇 (对照 1组 )的胎盘组织中缺氧诱导因子 1α蛋白的表达。采用RT PCR技术检测 12例 (从妊高征 1组中选出 )妊高征患者 (妊高征 2组 )及 12例 (从对照 1组中选出 )正常孕妇(对照 2组 )的胎盘组织中缺氧诱导因子 1αmRNA的表达。结果　 (1)妊高征 1组缺氧诱导因子 1α蛋白的阳性表达率为 6 3 1%、中度阳性表达率为 2 3 3% ,显著高于对照 1组缺氧诱导因子 1α阳性表达率的 2 0 9%、中度阳性表达率的 7 0 % (P <0 0 1)。 (2 )妊高征 2组缺氧诱导因子 1αmRNA表达水平为 0 96± 0 37,对照 2组为 0 95± 0 2 0 ,两组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 (1)妊高征患者胎盘组织中缺氧诱导因子 1αmRNA的表达水平与正常胎盘组织相似 ,但缺氧诱导因子 1α蛋白水平明显高于正常胎盘组织。 (2 )缺氧诱导因子 1α通过蛋白水平上的调节参与妊高征病理生理过程 ,而不是在转录水平。     

妊娠高血压综合征胎盘组织差异表达基因的筛选与确定

目的 了解妊娠高血压综合征(妊高征)胎盘组织基因表达的改变，确定与妊高征发病相关的基因，为研究妊高征的发病机理提供线索。方法 收集2001年3月至2002年9月西安地区以剖官产终止妊娠的42例妊高征患者及22例正常产妇的产前、产后临床资料；收集胎盘组织，制作胎盘组织芯片；建立妊高征患者数据库。采用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization，SSH)建立妊高征胎盘组织cDNA消减文库i利用差异筛选技术筛选出妊高征胎盘高表达基因，用RT-PCR和免疫组织化学技术验证部分高表达基因。结果 建立了由42例中、重度妊高征患者和22例正常产妇组成的数据库；用66例胎盘组织制成150点的胎盘组织芯片。利用SSH和差异筛选共分离出103个阳性克隆，测序成功90个。测序结果显示90个cDNA片断与GenBank／EM-BL中36条已知功能基因有95％以上的同源性。结论 妊高征患者胎盘组织基因表达发生较大变化；有必要研究血管内皮生长因子受体、卵巢抑制素、丝氨酸蛋白酶抑制素、细胞角蛋白7以了解妊高征的发病机理。     

妊高征患者胎盘组织血管紧张素Ⅱ 1型受体和血管紧张素原的表达

目的　探讨血管紧张素Ⅱ 1型受体 (angiotensinⅡtype 1receptor ,AT1R)和血管紧张素原 (angiotensinogen ,AGT)在妊娠高血压综合征 (妊高征 )患者胎盘组织中表达的变化及其在妊高征发病中的意义。　方法　采用免疫组织化学染色法 (免疫组化 )和逆转录聚合酶链反应法 (RT PCR) ,检测 2 0例中、重度妊高征患者 (妊高征组 )和 15例正常妊娠妇女 (正常组 )的胎盘组织AT1R水平及AT1RmRNA和AGTmRNA的表达。　结果　 ( 1)AT1R主要定位于胎盘绒毛滋养细胞、血管内皮细胞及血管平滑肌细胞。 ( 2 )免疫组化定量灰度分析 ,妊高征组胎盘组织AT1R阳性表达( 112 .4 3± 11.75 )显著强于正常组 ( 170 .4 7± 10 .5 9) (P <0 .0 1)。 ( 3)妊高征组胎盘组织AT1RmRNA的表达水平 ( 0 .96± 0 .2 0 )高于正常组 ( 0 .5 6± 0 .14 ) (P <0 .0 1)。妊高征组胎盘组织AGTmRNA的表达水平 ( 1.0 8± 0 .2 2 )亦显著高于正常组 ( 0 .6 0± 0 .12 ) (P <0 .0 1)。　结论　在妊高征患者胎盘组织中 ,AT1R和AGT表达均有明显增加 ,说明胎盘组织局部肾素 血管紧张素系统与妊高征发病有相关性     

妊娠高血压综合征患者胎盘组织中血管内皮生长因子的表达

目的　探讨血管内皮生长因子（VEGF）在妊娠高血压综合征（妊高征）患者胎盘组织中的表达及对妊高征患者胎盘滋养细胞功能和绒毛毛细血管网形成的影响。方法　采用免疫组织化学SP法检测21例正常孕妇（对照组）,60例妊高征患者（妊高征组,其中轻、中、重度妊高征患者各20例）胎盘组织VEGF的表达强度。结果　VEGF主要表达于胎盘绒毛滋养细胞;中度及重度妊高征患者胎盘绒毛滋养细胞VEGF表达强度均明显低于对照组及轻度妊高征患者(P＜0.05),而轻度妊高征患者与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05),各组间蜕膜组织VEGF表达强度差异无显著性(P＞0.05)。　结论　VEGF在胎盘中主要由绒毛滋养细胞分泌,妊高征患者VEGF分泌减少,可能是引起局部胎盘绒毛及血管病变的原因之一。     

妊高征患者胎盘组织中胎盘异铁蛋白的表达及其与血清VCAM-1的相关性研究

目的 :观察胎盘异铁蛋白 (PLF)在妊娠高血压综合征 (妊高征 )患者胎盘组织中的表达 ,及其与患者血清中血管细胞粘附分子 1(VCAM 1)的相关性。方法 :用免疫组化染色法检测 4 5例妊高征胎盘组织 (妊高征组 )和 15例正常妊娠胎盘组织 (正常组 )中PLF的表达 ,通过高清晰度彩色病理图文分析系统对其定量分析 ;用酶联免疫吸附双抗体夹心法 (ELISA)测定血清VCAM 1含量。结果 :在中、重度妊高征胎盘组织中PLF的表达明显低于轻度妊高征组和正常组 (P <0 .0 1) ;妊高征组血清VCAM 1水平 (1310± 177ng/ml)比正常组 (6 0 9± 72ng/ml)升高显著 (P <0 .0 1) ;胎盘组织中PLF表达水平与血清VCAM 1水平呈负相关 (r=- 0 .5 8,P <0 .0 1)。结论 :妊高征患者胎盘组织中PLF表达水平降低 ,与血清VCAM 1水平呈负相关 ,这可能与妊高征的发病有关     

妊娠高血压综合征胎盘滋养细胞中胰岛素样生长因子Ⅱ及其mRNA的表达

目的　检测胎盘滋养细胞中胰岛素样生长因子Ⅱ (insulin likegrowthfactorⅡ ,IGF Ⅱ )及其mRNA的表达 ,评估IGF Ⅱ在妊娠高血压综合征 (妊高征 )发病中的作用。　方法　 (1)用免疫组化法检测正常及妊高征孕妇胎盘组织中IGF Ⅱ的表达 ,并用计算机图像分析系统进行定量分析比较。 (2 )用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测正常妊娠及妊高征胎盘滋养细胞IGF ⅡmRNA表达水平 ,并通过紫外凝胶图像分析进行定量分析比较。　结果　 (1)IGF Ⅱ主要位于绒毛小叶的合体滋养细胞及细胞滋养细胞。此外 ,也存在于羊膜绒毛层 ,但染色较以上两种细胞明显减弱。(2 )与正常妊娠胎盘组 (0 36 0± 0 0 72 )比较 ,妊高征组IGF Ⅱ的平均光密度 (0 32 4± 0 0 4 2 )显著降低 (P <0 .0 5 )。 (3)妊高征胎盘滋养细胞IGF ⅡmRNA的表达 (0 72± 0 72 )亦显著低于正常妊娠者(0 96± 0 30 ,P <0 .0 5 )。　结论　胎盘滋养细胞表达IGF Ⅱ减少可能与妊高征的发病有关。     

妊娠高血压综合征合并胎儿生长受限胎盘组织血管细胞粘附分子1的表达

目的：探讨血管细胞粘附分子1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)在妊娠高血压综合征（简称妊高征）合并胎儿生长受限（fetal growth restriction,FGR)发病过程中的作用。方法：采用免疫组化法测定30例妊高征合并FGR患者、28例非妊高征合并FGR及30例正常妊娠者胎盘组织中血管内皮及滋养细胞的VCAM－1表达。结果：妊高征合并FGR组胎盘底蜕膜内血管内皮VCAM－1的表达阳性率（80％）及表达强度（＋＋＋）14例，与正常妊娠组25％（＋＋＋）0例及非妊高征合并FGR组155％（＋＋＋）0例相比明显增高（P＜0．005），而前两者间无显著差异，随妊高征病情加重，其表达强度逐渐增强；胎盘绒毛毛细血管VCAM－1阳性表达强度妊高征合并FGR组（73．3％）和非妊高征FGR组（67．8％）明显增强，与正常组（10％）相比差异有显性（P＜0．005）；所有GFR患者胎盘滋养细胞VCAM－1表达强度明显降低（妊高征FGR为0％，非妊高征FGR组3．6％，正常组40％），并且在妊高征组随妊高征病情加重其表达强度急剧减低。结论：胎盘血管内皮及绒毛滋养细胞异常表达的VCAM－1参与了妊高征引起FGR的病理生理过程，可以作为判定妊高征对胎盘损伤程度的一个指标。     

TNFα、IL-4及IL-10在妊高征孕妇胎盘中的表达

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素(IL)-4及IL-10在妊高征(PIH)孕妇胎盘中的表达规律,探讨它们与妊高征发病的关系。方法:用原位杂交法对TNFαmRNA、IL-4mRNA及 IL-10mRNA在54例 PIH孕妇和32例正常血压的晚期妊娠(NLP)孕妇胎盘的表达进行检测。结果:TNFαmRNA、IL-4mRNA及IL-10mRNA在两组均主要表达于胎盘的合体滋养细胞浆,经图像分析处理:①TNFαmRNA在PIH及NLP组的平均光密度分别为0.1947±0.0303及0.1681±0.028　8(P　<0.001)。②　PIH组的IL-4mRNA、IL-10mRNA平均光密度分别为0.1478 ±0.0468、0.1585±0.0402,均低于NLP组(0.2081±0.0280、0.2019±0.0289),P　<0.001。结论:孕妇母-胎界面的TNFαmRNA表达升高、IL-4mRNA及IL-10mRNA表达降低导致的免疫失衡可能是PIH的病因之一。     

Th1/Th2细胞因子在妊高征患者胎盘组织中的表达

目的 :探讨T辅助细胞 (Th) 1/Th2细胞因子在妊娠高血压综合征 (PIH)孕妇和血压正常的晚期妊娠妇女 (NLP)胎盘中的表达规律 ,从免疫学角度研究妊高征的发病原因及机制。方法 :选取PIH和NLP孕妇作为研究组和对照组 ,应用原位杂交法对两组胎盘的Th1型细胞因子 [肿瘤坏死因子 (TNF)α、白细胞介素 (IL) 2 ]和Th2型细胞因子 (IL 10 )进行标记并通过彩色病理图像分析系统对染色结果进行定量检测并作比较。结果 :(1)TNFαmRNA、IL 2mRNA在PIH及NLP组胎盘合体滋养细胞表达的平均光密度分别为0 .1978± 0 .0 32 1、0 .2 0 39± 0 .0 4 11及 0 .16 79± 0 .0 30 9、0 .16 0 0± 0 .0 4 46 (P <0 .0 0 1) ,随着PIH病情加重 ,表达逐渐增强 (P <0 .0 5 ) ;(2 )IL 10mRNA在PIH及NLP组胎盘合体滋养细胞表达的平均光密度分别为 0 .15 6 4± 0 .0 4 36及 0 .2 0 17± 0 .0 32 1(P <0 .0 0 1) ,随着PIH病情加重 ,表达逐渐减弱 (P <0 .0 5 )。结论 :在妊高征孕妇胎盘中表现为免疫杀伤的Th1型细胞因子表达增强 ,与病情呈正相关。表现为免疫保护或免疫营养的Th2型细胞因子则表达减弱 ,与病情呈负相关。提示母胎界面的Th1/Th2细胞因子平衡偏离可能是导致PIH发病的病因之一。     

正常妊娠和妊高征胎盘中血管内皮生长因子的表达及其意义

目的　观察血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在妊高征（ＰＩＨ） 胎盘中的变化。　方法　用免疫组织化学法,检测２０ 例正常妊娠胎盘（ 对照组）和２３ 例妊高征胎盘（ 妊高征组） 中ＶＥＧＦ的水平。　结果ＶＥＧＦ在正常妊娠胎盘和妊高征胎盘中分布基本一致,分布在滋养细胞、血管及绒毛间质。在妊高征组ＶＥＧＦ为轻度表达占７９－２％ ,无重度表达;而在对照组ＶＥＧＦ 轻度表达占２５％ ,中度表达占４５％ ,重度表达占３０ ％ 。妊高征组中ＶＥＧＦ表达明显低于对照组（ Ｐ＜ ０．０１）。　结论　妊高征胎盘中ＶＥＧＦ的减少可能与胎盘血管生成减少及胎盘滋养叶细胞侵入异常有关,在妊高征发病中占有一定的地位。     

妊高征胎盘绒毛组织内皮素-1及其mRNA表达和血浆内皮素-1的变化

目的探讨内皮素１（ＥＴ１）在妊高征发病中的作用。方法采用放射免疫法检测７０例妊高征患者（妊高征组）和３０例正常妊娠妇女（正常妊娠组）血浆ＥＴ１水平,用免疫组化及原位杂交方法检测ＥＴ１及ＥＴ１ｍＲＮＡ在妊高征及正常妊娠胎盘绒毛组织的表达。结果（１）妊高征组血浆ＥＴ１水平（７５０８±１６．３５）ｎｇ／Ｌ,明显高于正常妊娠组（４７６２±８６６）ｎｇ／Ｌ,病情越重其值越高,且ＥＴ１水平与妊高征患者平均动脉压呈正相关关系。（２）胎盘绒毛组织合体滋养细胞及胎儿血管内皮细胞有ＥＴ１及ＥＴ１ｍＲＮＡ的表达,且妊高征组胎盘绒毛组织ＥＴ１及ＥＴ１ｍＲＮＡ阳性信号较正常妊娠组增强。结论血管内皮损伤与妊高征的发病有关,胎盘绒毛组织ＥＴ１增高在妊高征的发病中起重要作用。     

妊高征患者绒毛合体滋养细胞一氧化氮合酶含量及活性相关性的研究

目的　探讨妊高征患者绒毛合体滋养细胞一氧化氮合酶含量与活性的相关性。方法　采用免疫组织化学ABC法和酶组织化学法 (四唑盐法 ) ,检测 32例妊高征患者 (妊高征组 )和 32例正常足月妊娠妇女 (正常组 )绒毛合体滋养细胞一氧化氮合酶 (NOS)含量及活性的改变。结果　两组绒毛均存在eNOS、iNOS抗原及NOS活性的阳性表达 ,且部位相同。两组绒毛血管内皮细胞中eNOS、iNOS抗原及NOS活性的表达强度基本一致 ;而合体滋养细胞中的表达 ,则妊高征组低于正常组。两组合体滋养细胞中 ,NOS活性表达强度的例数分布与eNOS含量表达强度的例数分布呈正相关 ,而与iNOS含量无相关性。中、重度妊高征患者合体滋养细胞中 ,NOS活性与eNOS含量间也呈正相关。结论　绒毛合体滋养细胞eNOS含量及活性的改变 ,可能在妊高征的发病中起重要作用。     

应用改良消减杂交技术克隆妊娠高血压综合征致病相关基因

目的：研究妊娠高血压综合征（妊高征）致病相关基因,探讨妊高征的发病机理。方法：采用基于聚合酶链反应（PCR）基础上的改良消减杂交技术,克隆妊高征患者及正常产妇的胎盘组织中差异表达的cDNA,并进行DNA的序列测定。结果：从86个消减杂交获得的cDNA克隆中,确定、筛选出14个含有妊高症患者及正常产妇胎盘组织差异表达的cDMA,即为可能与妊高征发病相关的基因片段。经与美国国立卫生研究院国家生物技术信息中心的表达序列标签数据库（dbEST）比较,发现其中11个为已知序列片段,3个为未知序列片段,将3个未知序列片段登录美国国立卫生研究院基因库,登录号分别为AF232216、AF232217、AF233648。结论：采用消减杂交技术从妊高征患者胎盘组织中克隆出14个可能与妊高征发病相关的基因片段,为妊高征发病机理的研究提供了新的思路和方法。     

胎盘组织中人类主要组织相容性抗原G mRNA的表达变化与特发性胎儿生长受限发病的关系

目的探讨人类主要组织相容性抗原G(HLA G) mRNA在特发性胎儿生长受限(IFGR)产妇胎盘组织中的表达及其与IFGR发病的关系。方法采用原位杂交法,检测20例IFGR产妇(IFGR组)及28例正常产妇(对照组)胎盘组织中HLA GmRNA的表达水平和表达部位,并对两组产妇的胎盘组织进行病理学观察。结果( 1 )IFGR组产妇胎盘出现病理改变的发生率为75%(15 /20), 主要为慢性绒毛膜炎、胎盘梗死及绒毛发育迟缓;明显高于对照组的18% (5 /28),两组比较,差异有统计学意义(P=0 001)。(2)IFGR组产妇胎盘HLA GmRNA的阳性表达率为45% ( 9 /20),明显低于对照组的79% ( 22 /28 )。两组比较,差异有统计学意义(P= 0 017 )。( 3 )HLA GmRNA的阳性表达部位主要位于胎盘绒毛外细胞滋养细胞及合体滋养细胞的细胞质内,呈紫蓝色的颗粒状沉淀,轮廓清晰。(4)HLA GmRNA表达阴性者,出现胎盘病理改变的例数较HLA GmRNA表达阳性者明显增多(r=-0 638,P=0 008 )。结论IFGR产妇胎盘组织中HLA GmRNA表达水平明显下降,HLA GmRNA的异常表达可能参与了IFGR的发病过程。