四川省两县区乙型肝炎病毒基因型、血清亚型分析

[目的]了解四川省两县区乙型肝炎病毒的基因型和血清型. [方法]从HBsAg、HBeAg均阳性的血清中提取病毒DNA,经多聚酶链反应和S基因核苷酸片段测序后,用进化树和推导氨基酸序列确定基因型和血清亚型.[结果]49份血清标本中,含w亚决定簇的均为B基因型,含r亚决定簇的均为C基因型;其中B基因型/adw2血清亚型31份,B基因型/aywl血清亚型1份,B基因型/adw3血清亚型1份,C基因型/adrq+血清亚型14份,C基因型/ayr血清亚型2份. [结论]两县区乙型肝炎病毒以B基因型/adw2血清亚型和C基因型/adrq+血清亚型为主,B基因型/adw2血清亚型占优势;同时存在少见的B基因型/adw3血清亚型.     

单纯乙型肝炎疫苗免疫后表面抗原携带者“a”决定簇基因变异的分子流行病学特征

目的　了解单纯乙型肝炎疫苗免疫失败后表面抗原 ( HBs Ag)携带者和未免疫携带者 HBs Ag基因变异的流行特点及乙型肝炎病毒 ( HBV)基因型和血清亚型的分布特点。　方法　应用直接测序和基因序列特异固相聚合酶链反应( SS- SPPCR)方法 ,分别检测 69例单纯乙型肝炎疫苗免疫后携带者和 83例未免疫携带者 ,乙型肝炎病毒 HBs Ag“a”决定簇氨基酸的变异及 HBV基因型和血清亚型的分布。　结果　 HBV基因型 B、C和 D均存在 ,其中 B和 C为优势基因型 ;血清亚型 adr、adw2、avr、ayw1、ayw2和 ayw3均存在 ,其中 adr和 adw2为优势血清亚型。直接测序检测的乙型肝炎疫苗免疫后携带者 HBs Ag“a”决定簇氨基酸变异率明显高于未免疫携带者对照 ,变异率分别为 3 1.9% ( 2 2 / 69)和 8.4 % ( 7/ 83 )。14 5、12 6和 13 3位是最常见的氨基酸变异点。应用更为敏感的 SS- SPPCR法分别检测 14 5和 12 6位氨基酸点突变的变异率 ,各组间差别不明显。经直接测序法检测 ,免疫后携带者基因变异危险度 ( OR)是未免疫携带者的 5 .1倍。按基因型和血清亚型分层分析 ,基因型 B和 adw2血清亚型携带者受免疫后出现基因变异的危险度明显高于未免疫携带者 ,分别为3 1.7和 2 8.9。　结论　接种乙型肝炎疫苗者可引起表面抗原基因的免疫逃避     

四川省两县(区)乙型肝炎病毒S基因和P基因变异分析

目的 分析四川省两县(区)乙型肝炎(乙肝)病毒(Hepatitis B Virus,HBV)S基因和P基因变异.方法 从乙肝病毒表面抗原、乙肝病毒e抗原均阳性的血清中提取病毒脱氧核糖核酸,经聚合酶链反应和核苷酸测序后,比较和分析S基因和P基因核苷酸和氨基酸变异.结果 47例慢性HBV感染者血清标本中,12份标本在"a"决定簇内出现氨基酸变异(25.53%),分别为T126A、I126T/S、P127T、T131N、M133L、M133T、T140I;变异主要集中在"a"决定簇的第1环上(92.86%,13/14).1份标本逆转录酶C域中出现rtV2071变异.结论 自然发生的氨基酸变异主要集中在"a"决定簇的第1环上,其抗原性已改变,对乙肝疫苗接种人群构成了潜在的威胁.拉米夫定耐药株也可在未接受核苷(酸)类药物治疗的病人中发现.     

山东省≤15岁人群感染乙型肝炎病毒“a”抗原决定簇变异株的流行病学特征分析

目的了解山东省≤15岁人群感染的乙型肝炎（乙肝）病毒（Hepatitis B Virus,HBV）中,＂a＂抗原决定簇变异株流行强度及分布特征,探讨其流行与乙肝疫苗（Hepatitis B Vaccine,HepB）免疫的关系。方法对2009年国家法定传染病报告系统报告的山东省≤15岁乙肝病例进行个案调查和血标本采集,采用巢式聚合酶链反应方法扩增其血清HBV S基因,测序后与基因数据库中的标准序列进行比对分析。结果山东省2009年共报告≤15岁乙肝326例,对302例（92.64%）进行了个案调查和血标本采集,对其中158份标本进行HBV-脱氧核糖核酸提取,扩增HBV S基因并成功测序137份。14份标本检出＂a＂抗原决定簇变异株,检出率为10.22%;有HepB免疫史和无HepB免疫史者检出率分别为10.66%和6.67%,差异无统计学意义（χ2=0.23,P=0.63）;未发现不同性别、地区、接种HepB种类和母亲乙肝病毒表面抗原携带状态者间检出率的差异有统计学意义（P〉0.05）。14份标本共检出＂a＂抗原决定簇6个氨基酸位点发生9种变异,其中126位点和144位点检出率较高,分别为4.38%（6/137）和2.92%（4/137）,但差异无统计学意义（χ2=7.39,P=0.19）。结论目前山东省≤15岁乙肝病例中,HBV＂a＂抗原决定簇变异株流行率较低,存在多种变异形式,尚未出现强变异株;尚未发现其流行与HepB免疫有关。     

四川遂宁地区居民乙肝病毒基因型别分析

目的了解遂宁地区人群乙型肝炎病毒(HBV)基因型及血清亚型流行特征。方法在遂宁6个县级行政区域内共采集血清样本1 468人份筛出HBsAg检测阳性的血清样本,用巢氏PCR法扩增提取HBV DNA S区,根据PCR产物基因测序结果对样本HBV进行基因分型。结果测出基因序列118例HBsAg阳性标本中,B基因型40例(33.89%),C基因型73例(61.86%),D基因型5例(4.23%),未发现BCD以外的其他基因型。42份(35.59%)血清亚型分型为adr型,76份(64.41%)为adw型。结论遂宁地区乙肝病毒基因型别以B、C为主要基因型,其中C型基因占优势,存在少量D基因型。血清亚型的分布以adr\adw亚型为主,其中adw亚型占优势。     

北半球季节性甲型流感疫苗株HA抗原表位的分析

摘要:目的　分析近20年北半球甲型流感疫苗株血凝素（Hemagglutinin,HA）抗原的氨基酸和N-糖基化位点变异情况。方法　利用生物信息学软件分析1990-2012年季节性流感疫苗株H1N1的4个抗原决定簇Sa、Sb、Ca、Cb和H3N2的4个抗原决定簇A、B、C、D的氨基酸和N-糖基化位点变异情况。结果　（1）H1N1疫苗株Sb抗原决定簇28、40位氨基酸N-糖基化位点相对保守,而142位氨基酸发生改变。（2）Sb抗原决定簇上无N-糖基化位点。（3）H3N2疫苗株B、D抗原决定簇2、479、181、301位氨基酸N-糖基化位点相对保守,而149位氨基酸发生改变。（4）H3N2疫苗株的N-糖基化位点不在抗原位点上。结论　（1）流感疫苗株HA抗原氨基酸变异集中在HA1蛋白环状部位。（2）流感疫苗株的N-糖基化位点在相对保守的序列,并且相同亚型的流感疫苗株有相似的N-糖基化位点。（3）HA蛋白变异可以推测流感病毒基因的改变,为选择与之匹配的流行株提供参考。     

铜川市2013-2015年A型流感病毒HA基因特性研究

目的 应用生物信息学数据库和工具,了解2013-2014年铜川市A型H1N1和2013-2015年A型H3N2流感病毒血凝素(HA)基因特性及其抗原变异情况。 方法 收集铜川市哨点医院流感样病例标本,采用MDCK细胞分离流感病毒。用RT-PCR对部分A型H1N1、H3N2流感病毒进行HA基因序列扩增和纯化,序列测定,并用MEGA软件构建种系发生树分析。 结果 2013-2015年铜川市流感核酸检测标本共2 333份,流感阳性476份,阳性率20.40%。4株A型H1N1亚型流感病毒与WHO推荐A/California/07/2009(H1N1)疫苗株氨基酸序列比对,共发生11次氨基酸突变,其中3个氨基酸位点突变发生在抗原决定簇。3株A型H3N2亚型与WHO推荐的北半球2013-2014年A/Victoria/361/2011(H3N2)疫苗株比对共有9个氨基酸位点发生了突变,其中3个氨基酸位点发生在抗原决定簇;与WHO推荐的北半球2014-2015年A/Texas/50/2012(H3N2)疫苗株比对共有10个氨基酸位点发生了突变,有5个氨基酸位点发生在抗原决定簇。 结论 2013-2015年铜川市流行的A型H1N1、H3N2亚型流感病毒氨基酸发生突变导致抗原漂移。     

乙型肝炎病毒基因型和血清亚型在我国部分地区的分布及其特点

目的 研究乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）基因型和血清亚型的分布特点及其基因的相关性。方法 湖南、广西、河南和河北4省（区）25个县（市）280例慢性HBV携带者,应用聚合酶链反应（PCR）扩增和脱氧核糖核酸（DNA）序列分析,确定HBV基因型和血清亚型。结果 HBV基因型B、C和D均有分布,分别占29.3%、67.9%和2.9%,其中B和C为优势基因型。adr、adw2、ayr、aywl、ayw2和ayw3等6种血清亚型均有分布,其中adr和adw2为优势血清亚型,分别占64.3%和31.4%。基因型B与adw2血清亚型,基因型C与adr血清亚型有非常密切的基因相关性。280例HBV携带者表面抗原基因序列每100个核苷酸的平均置换频数为2.94。基因型B(adw2血清亚型）毒株核苷酸置换频数为5.63(5.48）,而基因型C（adr血清亚型）仅为1.6(1.51）。结论 HBV基因型和血清亚型的分布均有明显的地区性;基因型B及相对应的adw2血清亚型毒株的基因可变性明显高于基因型C及相应的adr血清亚型。     

ABO变异型基因c.425 T>C突变致B抗原弱表达的鉴定分析

目的探讨1例ABO变异型基因c.425 T>C突变对B抗原弱表达的鉴定分析。方法采用凝集法鉴定ABO血型,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)、ABO亚型基因分型等技术进行基因鉴定和序列分析。结果先证者红细胞上含弱B抗原,血清中含抗-A抗体;血型基因型为B01,克隆测序等位基因为B305和O01;B305等位基因序列与标准序列相比发现c.425 T>C突变,引起多肽链P.Met 142Thr替换。结论ABO变异型基因c.425 T>C突变产生B305等位基因,引起B抗原弱表达。     

2004～2006年江西省甲3亚型流感疫苗预防效果的基因分析

[目的]了解江西省2004～2006年分离的甲3亚型流感病毒株HA1基因变异特征,分析WHO甲3亚型疫苗推荐株对江西省甲3亚型流感的预防效果. [方法]采集监测医院和疑似流感疫情的流感样病例鼻咽拭子标本进行流感病毒分离,对分离到的H3型流感病毒进行核酸提取,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒HA1基因后进行核苷酸序列测定,用DNAStar5.0、BioEdit(Version5.0)、Mage生物软件对测序结果进行分析处理,推导出氨基酸序列,进行基因特性分析. [结果]21株甲3亚型流感病毒HA1区域核苷酸序列长度均为960 bp,未发现核苷酸的丢失和插入,平均点突变率为1.09%.2004年甲3亚型流感病毒分离株与当年WHO疫苗推荐株HA1区相比较,不同毒株氨基酸的同源性是97.8%～98.8%,抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为3.17个,但有毒株已出现在2个抗原决定簇区4个氢基酸替换.2005年甲3亚型流感病毒分离株与当年疫苗推荐株HA1区相比较,不同毒株氨基酸的同源性是98.4%～99.1%,抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为20个.2006年甲3亚型流感病毒分离株与当年疫苗推荐株的HA1区相比较,不同毒株氨基酸的同源性是98.1%～98.4%,在2个抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为5.71个. [结论]2004年、2005年和2006年分别根据WHO推荐疫苗株生产的疫苗,对我省2004年度的甲3亚型流感总体上有较好的预防效果,但毒株的变异在增强:对2005年度的甲3亚型流感上有良好的预防效果;对2006年度的甲3亚型流感预防效果不 够理想. 比较,不同毒株氨基酸的同源性是98.4%～99.1%,抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为20个.2006年甲3亚型流感病毒分离株与当年疫苗推荐株的HA1区 比较,不同毒株氨基酸的同源性是98.1%～98.4%,在2个抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为5.71个. [结论]2004年、2005年和2006年分别根据WHO推荐疫苗株生产的疫苗,对我省2004年度的甲3亚型流感总体上有较好的预防效果,但毒株的变异在增强:对2005年度的甲3亚型流感上有良好的预防效果;对2006年度的甲3亚型流感预防效果不 够理想. 比较,不同毒株氨基酸的同源性是98.4%～99.1%,抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为20个.2006年甲3亚型流感病毒分离株与当年疫苗推荐株的HA1区 比较,不同毒株氨基酸的同源性是98.1%～98.4%,在2个抗原决定簇区的氨基酸变异数平均为5.71个. [结论]2004年、2005年和2006年分别根据WHO推荐疫苗株生产的疫苗,对我省2004年度的甲3亚型流感总体上有较好的预防效果,但毒株的变异在增强:对2005年度的     

一起氟乙酰胺蓄积性中毒分析

氟乙酰胺急性中毒时有发生 ,其中毒者临床表现与实验室诊断技术已为预防医学工作者所掌握 ,但氟乙酰胺蓄积性中毒十分罕见 ,经检索国内尚无个案报道。现就集宁市发生的一起氟乙酰胺蓄积性中毒分析报告如下。患者男性 6 3岁 ,2 0 0 1年 6月 2 0日由家属陪送入院 ,主诉神志有时不清 ,妄语 ,肢体阵发性抽搐 ,大小便失禁 ,视力模糊 ,病史已有 4个多月 ,院方即按颠痫收住入院 ,经过 1周对症治疗但疗效甚微 ,遂建议其转入精神病院 ,经精神病专家会诊 ,发现患者有接触鼠药史 ,于是要求卫生防疫部门协助检验。该病例系鼠药商贩 ,同时经销数种鼠药 ,…     

重庆地区乙型肝炎病毒B/adw2和C/adrq+亚型PreS/S基因参照序列的初步建立

目的 建立重庆地区不同亚型乙型肝炎病毒(HBV)流行株PreS/S基因参照序列。方法 扩增18例HBV慢性无症状携带者的PreS/S基因，应用同源性分析和对齐比较等方法确定基因型／血清型，并选同HBV亚型的PreS/S拟定参照序列。结果 9株基因型B/血清型adw2、6株基因型C／血清型adrq 、3株基因型B/血清型aywl；建立的重庆地区基因型B/血清型adw2、基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S参照序列，与华东华南、东北华南地区同亚型的参照序列比较分别有6个、13个核苷酸差异，均可引起4个氨基酸差异。结论 初步建立了重庆地区HBV基因型吲血清型adw2、基因型C/血清型adrq HBV流行株PreS/S基因参照序列。     

α-内收蛋白Gly460Trp、AGT Met235Thr基因多态性与环境因素的交互作用研究

目的探讨α-内收蛋白(α-adducin)Gly460Trp、AGT Met235Thr基因多态性与环境因素之间的交互作用。方法运用logistic回归模型及叉生分析方法,分析α-adducin Gly460Trp、AGTMet235Thr基因多态性与环境因素(体质指数、腰臀比、吸烟、饮酒)之间的交互作用,评价交互作用在原发性高血压发生中的作用。结果α-adducin Gly460Trp基因型与体质指数、腰臀比、饮酒之间呈次相乘模型交互作用,α-adducin Gly460Trp基因型与吸烟之间呈超相乘模型交互作用;而AGTMet235Thr基因型与吸烟之间呈次相乘模型交互作用,AGT Met235Thr基因型与体质指数、腰臀比、饮酒之间交互作用不存在相乘模型,进一步分析其有无相加模型交互作用,结果显示AGTMet235Thr基因型与体质指数、饮酒之间存在负相加模型交互作用,AGT Met235Thr基因型与腰臀比之间存在正相加模型交互作用。结论α-adducin Gly460Trp和AGT Met235Thr基因多态性与环境因素之间存在明显的交互作用。     

遂宁市乙型肝炎病毒主要基因型S区氨基酸位点置换分析

目的分析四川省遂宁市自然人群中乙型肝炎（乙肝）病毒（Hepatitis B Virus,HBV）主要基因型S基因主要亲水区[Major Hydrophilic Region,MHR;氨基酸（Amino Acid,aa）99-169]及人类白细胞抗原I型（The Putative Human Leukocyte Antigen Class I-Restricted,HLA-I）细胞毒性T淋巴细胞（Cytotoxic T Lymphocyte,CTL）表位aa位点置换特点。方法遂宁市乙肝血清流行病学调查中乙肝病毒表面抗原阳性人群,扩增HBV S基因片段并测序得到的完整S基因片段序列,进行生物信息学比对分析。结果在遂宁市共得到108份序列,其中B基因型40份,C基因型68份,在S基因MHR发生aa置换位点为Y100C、Q101H、L110F、T126A/S、T131I、S136F、T143M、G145R、V168A,在HLA-I型CTL表位aa置换位点为V47A、P46L、T47K、L88P、I92T、L98V、Y100C、Q101H、V177A、V194A,位点置换在年龄分布和基因型分布的差异无统计学意义。结论遂宁市HBV S基因MHR及HLA-I型CTL表位aa位点置换与基因型分布无关,未发现接种乙肝疫苗与人群中HBV S区aa位点置换相关。     

耐拉米夫定乙型肝炎病毒聚合酶P区变异与基因分型

目的：分析拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者HBV P区变异和基因分型的关系,为制定针对不同HBV基因型抗病毒的个体化方案提供依据。方法应用聚合酶链反应（ PCR）和酶联免疫吸附试验（ ELISA）对187例拉米夫定耐药患者的HBV DNA载量及HBV-M进行检测,用特异的引物对待检标本HBV P区进行全序列测定,对不同性别、年龄的测序结果的基因分型作比较;并对C、B基因型发生实变模式作分析。结果187例慢性乙型肝炎患者感染的HBV均为B和C基因型,B基因型51例（27.27%）,C基因型134例（71.66%）,并存在混合感染2例（1.07%）;HBeAg含量在B基因型和C基因型间差异有统计学意义（ P〈0.05）;P区基因突变结果显示,B基因型以单纯YMDD突变为主,C基因型以YMDD突变＋ rtL180M 突变为主。结论本研究对象的HBV基因型主要是C型,不同基因型可能决定了与耐药相关的P区变异模式。     

HBsAg无症状携带者乙型肝炎病毒核心基因启动子突变的研究

目的了解HBsAg无症状携带者乙型肝炎病毒(HBV)核心基因启动子双突变(nt1762 A→T,nt1764 G→A)发生情况及其与基因型、病毒量和HBeAg的关系。方法 HBsAg无症状携带者从隆安研究队列中选择,用套式聚合酶链反应(nested PCR)对研究对象血清HBV核心基因启动子、S基因扩增、序列分析及基因分型,用HBV引物和双标记的TaqMan探针扩增和定量病毒DNA。结果观察开始时核心基因启动子为野毒株的109例观察对象,3年后双突变平均年发生率为2.8%;观察开始时已发生nt1762或nt1764点突变的59例对象,3年后另一个位点也发生突变的平均年发生率为6.8%,两率差异有统计学意义(χ2=5.109 0,P<0.05)。nt1762 A→T突变组HBeAg阳性率(45.5%,10/22)与nt1764 G→A突变组HBeAg阳性率(10.8%,4/37)差异有统计学意义(χ2=9.149,P<0.05)。20例基因型B未发生双突变,重组基因型年双突变率为4.8%(2/14),基因型C年突变率为3.1%(7/75),各基因型间突变率差异无统计学意义(P>0.05)。5例双突变发生后HBeAg仍然阳性者病毒量有下降趋势,而另5例突变发生后HBeAg阴性者其病毒量有升有降。结论 HBV核心基因启动子双突变年发生率较高,这两个位点中的任何一个发生突变是双突变的过渡形式,双突变与基因型无关,nt1764 G→A突变与HBeAg阴性有关。