半乳糖血症全自动筛查试剂盒的性能分析

目的:对一种检测新生儿滤纸干血片样品中总半乳糖含量的全自动检测试剂盒进行性能分析。方法:采用荧光分析法检测总半乳糖含量,评判试剂盒的性能指标。结果:该试剂盒的有效检测范围为2.5~70mg/dl,检测试剂盒的分析灵敏度为0.1mg/dl。批内、批间的不精密度分别为≤10%与≤15%,校准品的不精密度≤20%。试剂盒在37℃放置7d后荧光值变化≤15%,稳定性好。本试剂盒检测结果与国外公司的同类试剂盒有很好的相关性,差异无统计学意义(P0.05)。结论:该试剂盒对比国外产品,操作简单快速,已实现自动化,适合应用于新生儿半乳糖血症大批量样本的筛查。     

免疫比浊法PGⅠ/PGⅡ试剂在全自动生化分析仪上检测性能验证分析

目的:在临床开展血清胃蛋白酶原Ⅰ和Ⅱ(PGⅠ/PGⅡ)检测前,对PGⅠ/PGⅡ试剂盒在全自动生化分析仪上检测性能进行评价。方法:以厂家配套的高、低值浓度样品为样本,进行批内精密度和批间精密度验证。以厂家配套的质控标准品为样本,进行正确度验证。将质控标准品稀释,PGⅠ范围为2.5~160.0 ng/mL,PGⅠI范围为2.0~70.0 ng/mL,将结果做回归与相关分析。以厂商提供干扰物进行抗干扰能力验证。结果:PGⅠ和PGⅡ的低值浓度样品批内精密度的分别为3.23%CV和2.93%CV,批间精密度分别为2.87%CV和2.80CV%。PGⅠ和PGⅡ的高值浓度样品批内精密度的分别为1.75%CV和2.60%CV,批间精密度分别为1.75%CV和2.46%CV。PGⅠ和PGⅡ准确度偏倚均在±5%以内。在PGⅠ范围为2.5~160.0 ng/mL,线性系数r=0.999;PGⅡ范围为2.0~70.0 ng/mL,线性系数r=0.996,均到达要求。结论:免疫比浊法PGⅠ/PGⅡ检测试剂盒在日立7600-010全自动生化分析仪上检测性能符合临床要求。     

甘胆酸均相酶免疫检测方法的建立及性能评估

目的建立一种均相酶免疫检测甘胆酸(glycocholic acid hydrate,CG)方法。方法采用竞争法,均相酶免疫分析技术,建立甘胆酸(CG)均相酶免疫检测方法,并对本方法进行了检出限、精密度、准确度、线性、干扰和相关性试验。结果本法试剂最佳pH值为7.8,最优兔抗人甘胆酸多克隆抗体浓度为25μg/ml。检测限为0.3μg/ml;精密度用低、高2种浓度的质控品检测,重复性精密度分别为3.43%、2.12%,中间精密度分别为5.43%、4.06%;准确度检测低、高2种浓度的质控品,相对偏差分别为-5.71%、-2.42%;线性范围为0.00μg/ml～50.00μg/ml。3种干扰物在试验浓度内(胆红素≤800μmol/L,血红蛋白≤0.500 g/L,维生素C≤6 mmol/L)的偏差分别为3.2%、2.2%、1.6%。与甘胆酸(CG)放射免疫检测试剂盒的决定系数(r~2)为0.992。以放射免疫法为标准,均相酶免疫法敏感度为97.53%,特异度为83.33%,符合率为94.95%。结论该研究建立了CG均相酶免疫检测方法,其测定结果准确、稳定、可靠,与参比试剂盒的测定结果具有较高的相关性。     

3种血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C试剂的比较

目的:对3种血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C试剂盒性能进行评价。方法:比较3种试剂盒的稳定性、精密度、准确度、线性范围及抗干扰能力。结果:3种Cys C试剂盒试剂空白CV分别为:2.56%、5.71%、0.62%;总精密度的CV分别为2.39%、8.50%、5.17%,不同试剂盒检测结果差异明显(P<0.001);平均回收率分别为96.65%、104.41%、62.80%;校准验证的偏差分别为:3.44%、-7.17%、3.05%;在0.5~6.0 mg/L范围内线性良好;黄疸、溶血和脂血对CysC测定均无明显干扰。结论:3种Cys C试剂盒性能均存在不足之处,尚不能满足临床实验室需求。     

两种白喉IgG抗体酶联免疫吸附试验检测试剂盒的评价

目的 对IBL公司和Virion公司白喉IgG抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒进行评价,以获得试剂盒的稳定性和准确度的相关数据.方法 购买IBL和Virion公司的白喉IgG抗体 ELISA 检测试剂盒,检测标本来自31份健康从业人员体检血清以及试剂盒内标准品.标准品同时进行10孔检测.血清样品双孔检测,标准品每天检测1次,共检测3次.分析试剂盒检测结果的批内差异及批间差异以检测其稳定性,将标准品的测得浓度与实际浓度相比较,评价试剂盒的准确度.结果 IBL 试剂盒标准品检测的批内变异系数(Coefficient of Variation,CV)为13.550 7%,批问CV为9.989 0%;血清样品检测的批内CV为14.527 0%,批间CV为11.003 9%.Virion试剂盒标准品检测的批内CV为5.9541%,批间CV为2.472 8%;血清样品检测的批内CV为11.0612%,批间CV为8.030 0%,标准品的测得浓度与实际浓度之间的CV:IBL试剂盒为17.688 9%,Virion试剂盒为1.396 6%.IBL和Virion试剂盒检测结果与间接血球凝集试验(IHA)检测结果的符合率均为65%.结论 两公司试剂盒的检测结果均满足试剂盒自身的质量控制标准,CV满足 ELISA 的常规质量控制标准(CV<20%).标准品的测得值和实际值之间比较,Virion试剂盒的CV较小.与IHA相比,两种试剂盒的符合率相同.     

基于TaqMan-MGB荧光定量PCR技术检测 HIV-1 DNA基因方法的建立

目的建立一种基于TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量PCR方法检测人类免疫缺陷病毒(human immanodeficiency virus,HIV-1)感染者外周血中HIV-1 DNA的含量。方法根据HIV-1病毒基因序列设计特异性引物和TaqMan-MGB荧光探针,建立TaqMan-MGB实时荧光定量PCR检测方法和定量标准曲线,优化反应方案,分析方法的灵敏度、准确性、重复性和精密度。采用该方法对20份HIV-1感染者和10份正常人的外周血进行HIV-1 DNA检测分析,并将结果与罗氏HIV DNA检测试剂盒作比较。结果成功建立了检测HIV-1 DNA TaqMan-MGB双标记探针实时荧光定量检测方法。灵敏度:该体系最低检出限可达10拷贝/ml,标准曲线方程为:Y=-3.339X+45.883,R~2=1。准确性:20份HIV-1阳性样本,HIV-1 DNA检出率100.00%,10例HIV-1阴性的健康对照,检测结果全部阴性;该检测结果与罗氏试剂盒检测结果完全一致。重复性和精密度:对高值(3×10~6拷贝/ml),低值(3×10~2拷贝/ml)2个浓度进行批内批间验证,批内CV分别为2.53%、3.02%;批间CV分别为2.87%,4.52%,均10%。结论成功建立了HIV1-DNA的TaqMan-MGB荧光探针实时定量PCR方法;该方法具有较高的准确性、灵敏度以及精密度和重复性,能够为临床HIV1感染者提供早期诊断和治疗效果监测。     

血清酸性磷酸酶测定法的实验研究

目的　建立以 2 ,6 -二氯 - 4-乙酰基磷酸盐 (DCAP -P)为底物的一种新的酸性磷酸酶 (ACP)的测定方法。方法　在ISP半自动生化分析仪上研究测定法的试剂配方与实验参数。结果　本法测定DCAP -P吸收峰为 :32 6nm ;Km =0 .139mmol/L ;340nm时DCAP -P的摩尔消光系数为 14 4 4 0L/(mol .cm) ;缓冲液浓度 0 .1mol/L ,最适条件 :pH 5 .4 ,底物浓度 2 .0mmol/L ,延滞期 30s ,线性反应期 15min ;线性范围为 0～ 1188u/L ;高、低值回收率均在 95 %～ 10 5 % ;高、中、低值批内CV分别为 :2 .6 %、1.9%、1.2 % ,批间CV值分别为 :2 .8%、2 .1%、1.2 % ;血红蛋白 (Hb) <115 .6 2mg/L对测定结果无影响 ;黄疸对测定结果无影响 ;与长征试剂盒相比r =0 .978;试剂在 - 2 0℃可稳定一个月 ;本方法的参考值范围为 9u/L～ 2 6u/L。结论　此方法重复性好 ,线性反应期长 ,线性范围广 ,干扰因素少适用于自动生化分析     

快速定量检测试剂盒(热消解)法测定尿中碘

目的了解尿碘快速定量检测试剂盒(热消解)法测定尿碘的准确度、精密度和检出限。方法对低、中、高三种不同浓度的尿样做精密度试验和准确度试验,并与国家标准方法进行比对。结果试剂盒法的检出限为7.90μg/L;低、中、高三种不同浓度(75.20μg/L、207.50μg/L、315.00μg/L)的尿样,8次测定结果的相对标准偏差分别为3.10%、1.60%、1.20%;加标回收率为96.60%～104.00%;试剂盒法和国标法的测定结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论尿碘快速定量检测试剂盒法测定尿碘精密度和准确度高,操作简单,不需要特殊仪器和设备,适合基层开展尿碘测定使用。     

可溶性人胎盘生长因子ELISA检测试剂盒的建立及性能分析

目的:研发人血清及尿液可溶性胎盘生长因子(sPLGF)的ELISA检测试剂盒并进行性能测试。方法:以抗人PLGF单克隆抗体包被微孔板,加入重组sPLGF和生物素标记的检测抗体,形成抗原抗体复合体,加入链亲合素辣根过氧化物酶和底物TMB实现比色反应;从线性范围、准确度、精密度、样品基质及样品前处理方法等指标进行性能评价,并与市售进口同类产品进行比较。结果:捕获抗体的最适包被量为400ng/well,包被条件为4℃孵育16~20h,检测抗体的最适工作浓度为1μg/ml,样品最适反应条件为37℃孵育2h,适合的封闭液及样品稀释液组合为3%BSAPBS和0.1%BSA-PBS;验证该试剂盒的有效检测范围为15.6~2000pg/ml,准确度为85%~115%;批次内变异系数CV≤10%,批次间变异系数CV≤15%;其检测范围、准确度、精密度、灵敏度及样品适用范围等与市售进口试剂盒基本一致。结论:本项目开发的人sPLGF检测试剂盒实现了人血清和尿液中的内源sPLGF的定量检测,其检测性能稳定、可靠,具有比进口试剂盒检测范围更广、价格更低的优势,可用于临床检测血液及尿液中的内源性sPLGF水平。     

溶剂解吸-气相色谱法测定工作场所空气中甲基丙烯酸缩水甘油酯

目的建立工作场所空气中甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)的活性炭管采集溶剂解吸-气相色谱测定方法。方法采用活性炭管采集空气样品,二甲基甲酰胺-二硫化碳(1∶1,V/V)溶液解吸,经毛细管气相色谱柱分离,火焰离子化检测器检测。结果 GMA质量浓度在3.78~151.00 mg/L呈线性关系,相关系数为0.999 8,检出限为0.06 mg/L,定量下限为0.20 mg/L,最低检出浓度和最低定量浓度分别为0.02和0.07 mg/m3(以采集3.00 L空气计);平均解吸效率为94.00%~99.10%,批内、批间精密度分别为1.34%~2.46%和2.30%~4.11%。空气样品在-20℃冰箱中至少可保存7 d。结论本方法灵敏度高,精密度和准确度好,操作方法简单,适用于工作场所空气中GMA的采样与检测。     

一种血细胞分析仪检测项目的性能验证与评价

目的验证XN-2000型血细胞分析仪的性能是否满足检测需要。方法收集临床血液样本及试剂盒质控品,参照国家卫生行业标准WS/T 406-2012检测白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板,从本底计数、携带污染率、批内精密度、批间精密度、正确度、准确度、线性范围等方面进行性能验证及方法学评价。结果 XN-2000型血细胞分析仪的白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板本底平均值≤0.33,携带污染率≤0.76%,批内精密度变异系数0.67%～2.63%,日间精密度变异系数0.46%～1.31%,平均偏倚均在1.00%以内,最大相对偏差为8.18%,线性范围验证显示,a=0.95～1.05,相关系数R2≥0.998,均在行业标准质量要求的范围内。结论 XN-2000型血细胞分析仪的方法学性能可靠,能满足检测需求。     

梅毒抗体酶联免疫吸附法检测试剂盒性能验证及评价

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测中试剂盒的性能验证评价方法,并对该实验室梅毒抗体(anti-TP)检测中所使用的英科新创生产的ELISA试剂盒进行性能验证评价,以判断所用试剂盒是否能满足实验室检测工作的基本要求。方法利用全自动酶标仪进行ELISA检测,从试剂盒最低检出限、重复性、精密度、正确度四个方面,评价该试剂盒的性能指标,并对试剂盒的CUTOFF值进行验证,判断其是否适合本实验室常规检测人群。结果梅毒抗体(anti-TP)ELISA检测中,该实验室所用英科新创试剂盒最低检出限为0.25 NCU/m L,低于厂家声称的0.3 NCU/ml,适合大批量样本筛检,避免了漏检;批内精密度试验中,弱阳性浓度水平(0.5 NCU/m L)和临界值浓度水平的变异系数(CV)分别为4.0%和3.2%;批间精密度实验中,在弱阳性浓度水平(0.5 NCU/m L)和临界值浓度水平的CV为8.5%和7.6%,均低于厂家声明的标准;正确度验证方面,阴阳性符合率达到100%;CUTOFF值验证实验中,检测的样本OD值的x+3SD=0.027,小于试剂盒提供的CUTOFF值0.105.结论该梅毒抗体检测试剂盒的各项性能指标符合本实验室的要求,CUTOFF值适合本实验室日常检测工作和受检人群。     

同型半胱氨酸检测试剂与厂家声明的一致性验证

目的对同型半胱氨酸检测试剂进行验证,确定其分析性能是否与厂家声明一致。方法根据EP-15中生化定量检测试剂性能验证方案,对同型半胱氨酸试剂的准确度、精密度、线性范围、分析灵敏度、特异性进行系统评估。结果准确度低值偏差为5.24%,高值偏差为1.84%,偏差10%;重复性标准差为0.182 4,变异系数为1.838 6%,偏差10%;线性回归方程:y=63.790x+3.3442,r2=0.998 3;分析物灵敏度均值为-0.057 5,标准差为0.132,灵敏度为0.338 5;血清中分别加入特异性干扰物,测定结果偏差最大为8.17%,最小为-2.78%,正负偏差均10%。结论北京九强公司生产的同型半胱氨酸检测试剂在测定准确度、精密度、线性范围、灵敏度、特异性方面与厂家声明的一致性良好,各项性能指标符合临床和实验室规范的要求。     

ARCO PC全自动生化分析仪使用评价

ARCO PC是意大利生产的小型全自动生化分析仪,经一系列评价试验表明,其准确度、精密度良好,交叉污染小于1%,对定值血清测试结果与参考值的相对偏差最大为3.1%,批内CV最大为3.4%,日间CV最大为5.7%.性能可靠,使用方便.因为是单通道连续流动式自动分析仪,速度不高,适合中小医院日常标本的常规生化分析.     

乙肝两对半定量检测试剂盒性能评估报告

目的:通过重复性实验对乙肝两对半定量检测试剂盒的总不精密度进行评估,以确认该试剂盒是否满足日常标本检测的需要。方法:使用Lica光化学发光免疫分析系统,对6个乙肝血清盘进行为期5天的重复定量检测。结果:HBsAg的最小总CV为5.88%,最大总CV为7.08%;HBsAb的最小总CV为3.81%,最大总CV为12.63%;HBeAg的总CV为5.80%;HBeAb最小总CV为6.85%,最大总CV为7.45%;HBcAb的最小总CV为6.60%,最大总CV为8.81%。结论:乙肝两对半定量检测试剂盒的总不精密度达到进口同类试剂盒的水平,可满足日常标本检测的需要。     

自建检测系统性能验证方法初探

目的:探讨自建检测系统分析性能的确认方法。方法:本研究参照美国国家临床实验室标准化委员会(CLSI)颁布的多个EP文件、NCCLS C28-A2和我国《医疗机构临床实验室管理办法》制定验证方案,对某国产β2-微球蛋白试剂和西门子ADVIA1800全自动生化分析仪组成的检测系统的最低检测限(空白限)、精密度(重复性精密度和期间精密度)、正确度(正确度相对偏差、比对试验)、线性范围进行性能验证。结果:最低检测限为0.0156≤2.000,批内精密度为0.92%、0.67%,批间精密度为0.49%,线性范围为0~15mg/L,正确度相对偏差均小于8%,与西门子原装配套试剂进行比对试验得到回归方程为:y=0.884x+0.3202,相关系数R=0.9624。结论:该检测系统性能指标均满足相关法规和试剂说明书要求,验证结论为合格。本研究提供的验证方案方便实用,较适合于临床实验室的性能评价。     

便携式气相色谱-质谱法检测空气中甲硫醇和乙硫醇

目的建立便携式气相色谱-质谱法(GC/MS)测定工作场所空气中甲硫醇和乙硫醇。方法采用静态配气法,以高纯氮气为稀释气,配制不同浓度的甲硫醇和乙硫醇混合标准气体,便携式GC-MS手持探头直接采集、进样,便携式GC/MS检测,以保留时间和特征离子定性,选择离子峰面积定量。结果本方法甲硫醇和乙硫醇的线性范围分别为0.996~19.9 mg/m3和0.967~19.34 mg/m3,相关系数r分别为1.000和0.999,检出限分别为0.1和0.2 mg/m3。批内、批间精密度均≤10%,平均加标回收率为91.7%~109.8%。结论本方法操作简便、精密度好、准确度高,适用于工作场所空气中甲硫醇和乙硫醇的日常及应急检测。     

酶法检测糖化血红蛋白在妊娠期糖尿病中的应用评价

目的:对酶法测定糖化血红蛋白(HbAIc)进行方法学评价,探讨其在妊娠期糖尿病(GDM)诊断中的临床意义.方法:系统研究酶法测定HbAIc的灵敏度、精密度及干扰因素.并将正常妊娠组和GDM组进行比较.结果:酶法测定HbAIc批内平均变异系数(CV)为3.36％,批间平均CV为3.51％,平均回收率99.40％.抗坏血酸低于4 mg/dl时对结果无干扰,血红蛋白(Hb)在2.0 g/L以下对测定结果无干扰,三酰甘油4.5 mmol/L以下对测定结果无干扰,与DS5糖化血红蛋白仪比较有良好的相关性,Y=0.895X+0.29,r=0.924 (P ＜0.01),GDM组结果高于正常妊娠组,差异具有统计学意义(P＜0.0l).结论:酶法测定HbAIc具有较高的灵敏度和精密度,适于大批量及临床常规使用.     

坑道内硫化氢快速检测方法的评价

目的 评价硫化氢检测管方法的精密度和准确度,为其应用于坑道内硫化氢快速检测提供科学依据.方法 模拟坑道气体环境(101.3 kPa,49％ RH,27℃),采用硫化氢检测管分别对低、中、高(0.06 ～0.09 mg/m3、0.14 ～0.18 mg/m3、0.29～0.39 mg/m3)3个质量浓度的硫化氢进行检测,并与国家标准方法检测结果比较,评价其准确度及精密度.结果 检测管精密度的相对偏差在10％以内,准确度的相对误差在13％以内.结论 该方法符合GB 7230-87的要求,此检测管可用于坑道内硫化氢的快速检测.     

磁珠法结合实时荧光PCR试剂检测HBV-DNA临床性能验证

目的 分析磁珠法提取核酸结合实时荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA的性能及其临床应用价值,有助于选择试剂。方法 按照CNAS-CL36能力验证要求,收集四川省人民医院乙肝病人血清样本,对三家磁珠法核酸提取实时荧光定量PCR试剂（A、B、C试剂）的精密度、正确度、检出限、可报告范围、抗干扰能力等等性能参数进行方法学性能验证和评价。结果 试剂A和B均能检出HBV-DNA,检出率100%,试剂C的检出率为83.3%,与厂家公布的定量检测下限20 IU/ml不一致。试剂A检测低浓度和高浓度标本的批内变异系数（CV）均低于5%;试剂B检测低浓度标本的批间CV≥5%,高浓度标本批间CV≤5%,试剂C检测低浓度和高浓度标本的批间CV均≥5%。3种试剂在分析测量范围内均线性关系良好。干扰试验显示,3种试剂均受到严重溶血、脂血标本的影响,但不受轻微溶血、脂血标本的影响。结论 通过对3种试剂的性能验证,达安基因公司的一步法（磁珠法）HBV-DNA定量检测试剂灵敏度高,有利于乙肝筛查和临床疗效的监测、随访。