端粒酶与p53、C—myc,K—ras在肺癌组织中的表达

目的研究端粒酶活性在肺癌及癌旁组织中的表达,并探讨端粒酶的表达与p53、C-myc、K-ras之间可能存在的关系.方法采用TRAP-SYBRGreen染色法检测36例肺癌和36例癌旁组织,20例肺部良性病变组织和20例正常肺组织及A549肺腺癌细胞株端粒酶活性的表达,并利用免疫组化技术检测肺癌组织p53、C-myc、K-ras表达水平.结果83.3%的肺癌组织25.0%的癌旁组织、15.0%肺部良性病变级织表达端粒酶活性,正常肺组织未检测到端粒酶活性.端粒酶活性的表达与肺癌组织的病理类型、肿瘤大小、临床分期无相关.在30例端粒酶活性阳性的肺癌组织中有24例(80%)表达p53蛋白,18例(60%)表达C-myc蛋白,22例(73%)表达K-ras蛋白.利用Spearman分析方法分析端粒酶活性与p53、C-myc、K-ras蛋白表达水平之间的相关关系,相关系数分别为r=0.60,P＜0.01r=0.335,P＜0.01;r=0.427,P＜0.01.结论端粒酶活性的定性检测可作为肺部恶性肿瘤诊断的辅助指标之一;肺癌组织的端粒酶活性与p53、C-myc、K-ras蛋白表达水平之间存在正相关关系.     

卵巢上皮性肿瘤端粒酶活性原位检测与bcl-2和p53蛋白表达的相关性研究

目的探讨卵巢上皮性肿瘤端粒酶活性与bcl-2和p53蛋白表达的相关性及其与卵巢肿瘤发生的关系.方法对88例卵巢上皮性肿瘤组织,采用端粒酶活性原位检测法(ISLT法)检测端粒酶活性,S-P法免疫组化技术检测bcl-2和p53蛋白.结果 1.卵巢囊腺癌,交界性囊腺瘤,囊腺瘤及癌旁组织端粒酶检出率分别为92.3%,42.8%,0,0.囊腺癌组端粒酶阳性率与交界性囊腺瘤,囊腺瘤,囊腺癌癌旁组织间存在显著性差异(P＜0.01).端粒酶活性强度与囊腺癌分化程度无明显相关性(P＞0.05).2.卵巢囊腺癌,交界性囊腺瘤,囊腺瘤,囊腺癌癌旁组织中bcl-2的阳性表达率分别为65.38%,52.38%,26.66%,0.卵巢囊腺癌、交界性囊腺瘤与囊腺瘤、囊腺癌癌旁组织间存在显著性差异(P＜0.05),端粒酶活性程度随bcl-2蛋白表达增强而升高(γ=0.91,P＜0.01).3.卵巢囊腺癌,交界性囊腺瘤,囊腺瘤,囊腺癌癌旁组织中p53的阳性表达率分别为57.69%,14.28%,0,0.卵巢囊腺癌与交界性囊腺瘤、囊腺瘤、囊腺癌癌旁组织间存在显著性差异(P＜0.01).囊腺癌端粒酶活性程度与p53蛋白表达强度无明显相关性(γ=0.12,P＞0.05).结论 bcl-2蛋白的过度表达可能与端粒酶激活有关,bcl-2可能通过激活端粒酶使卵巢上皮细胞恶性转化导致卵巢囊腺癌发生,而p53基因突变似对端粒酶的激活无直接影响.     

成人肺癌切除组织和支气管切缘p53基因突变及端粒酶活性表达的研究

目的探讨肺癌切除组织和支气管p53基因突变及端粒酶活性表达,并对肺癌切除后的效果进行了评价.方法用PCR-SSCP方法,检测60例肺癌和10例肺良性肿瘤手术切除标本的支气管切缘(切缘病理切片无癌细胞残留)的p53基因突变及端粒酶活性的表达.结果在60例肺癌中有16例(26.7%)肺癌支气管切缘和30例(50.0%)肺癌组织存在p53基因突变及端粒酶活性阳性表达.肺癌切除组织基因突变及端粒酶活性表达为小细胞癌(100%)最高,次为鳞癌(70%)、腺鳞癌(60%)、腺癌(40%).p53基因突变及端粒酶活性表达与TNM分期有关.Ⅲ期(72.7%)最高,其次为Ⅱ期(58.3%),Ⅰ期(25.5%).术后随访3～8个月支气管切缘p53基因突变及端粒酶活性表达,10例(62.5%)发生支气管残端复发转移.而p53及端粒酶阴性者术后无残端癌复发.肺癌组织p53及端粒酶阳者中有20例(66.7%)在随访中发现癌复发转移,而p53及端粒酶阴性者中未发现癌复发转移.结论检测支气管切缘p53基因突变及端粒酶活性表达,作为肺癌切除后的"分子边界",可作为早期预测肺癌术后残端复发重要依据.     

卵巢恶性肿瘤组织细胞中端粒酶活性表达的研究

目的：研究端粒酶活性在卵巢恶性肿瘤组织发生、发展中的作用，探索端粒酶活化对卵巢恶性肿瘤的诊断、鉴别诊断和筛查的临床意义。方法：应用以TRAP为基础的PCR－ELISA方法检测23例卵巢恶性肿瘤及对应的癌旁组织、10例的交界性卵巢肿瘤组织、12例正常卵巢与28例良性卵巢肿瘤组织的端粒酶活性。结果：在23例卵巢恶性肿瘤中有21例（91．3％）端粒酶活性阳性，癌旁组织中4例（17．3％）阳性，交界性卵巢恶性肿瘤中2例（20％）阳性，正常卵巢中未见增高，28例良性卵巢肿瘤中2例（7．1％）弱阳性。端粒酶在卵巢恶性肿瘤组中表达明显高于正常卵巢和良性卵巢组（P＜0．05）、交界性卵巢肿瘤组、癌旁组织组（P值均＜0．05）；交界性卵巢肿瘤组高于正常卵巢和良性卵巢肿瘤组（P＜0．05），而在正常卵巢和良性卵巢肿瘤中表达无差异（P＞0．05）。各种病理类型的卵巢恶性肿瘤组织中端粒酶活化无差异，端粒酶活性增高在肿瘤的临床分期、恶性（分化）程度上差别显著，临床分期高、恶性度高的卵巢肿瘤其端粒酶活性也高。结论：端粒酶在卵巢恶变的过程中起重要作用，是卵巢恶性肿瘤形成中的普遍现象，端粒酶活性的检测有助于卵巢肿瘤的诊断和鉴别诊断，而且有助于预后的预测。     

人体肺癌端粒酶表达的研究

目的 :研究肺癌端粒酶活性和临床特征的相关性 ,评价端粒酶作为肺癌诊断标记物的可行性 ,初步探讨吸烟和端粒酶激活在肺癌发病机制中的作用。方法 :组织标本取自 2 0 0 0年 6月～ 2 0 0 1年 1月华西医大附一院胸外科住院手术病人 ,其中原发性肺癌 2 7例 ,结核瘤 2例 ,炎性假瘤 1例。用 TRAP- EL ISA法检测端粒酶活性。结果 :2 7例组织病理学确诊的肺癌有 81.4 8% (2 2 / 2 7)端粒酶活性检测阳性。在不同组织病理学分型中 ,阳性率由高到低依次为 SCL C (小细胞肺癌 )、鳞癌、复合性腺鳞癌、细支气管肺泡腺癌、腺癌。肺癌组织端粒酶活性明显高于癌旁 (P=0 .0 0 0 )和良性组织 (P=0 .0 13)。结论 :端粒酶是一种较理想的诊断性肿瘤标志物。吸烟可能通过端粒酶激活途径促发鳞癌。     

乳腺癌端粒酶活性与PCNA表达关系

目的探讨端粒酶活性与增殖细胞核抗原（PCNA）表达之间的关系及联合检测对乳腺癌术后治疗方案制定和预测预后的意义。方法采用端粒重复序列扩增聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定法（TRAP-PCR-ELISA）和免疫组织化学链霉素生物蛋白过氧化物酶（S-P）法对80例乳腺癌组织、36例乳腺癌相应癌旁组织和10例乳腺良性病变的端粒酶活性及增殖细胞核抗原进行检测。结果（1）80例乳腺癌患者癌组织标本、36例乳腺癌相应癌旁组织标本中端粒酶表达阳性率分别为65．0％和8．3％。差异有统计学意义（P〈0．01）；10例乳腺良性病变组织标本中未检测出端粒酶活性；腋窝淋巴结有无转移与端粒酶阳性表达率差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）80例乳腺癌组织中PCNA的阳性表达率为63．75％；乳腺癌有淋巴结转移组PCNA阳性表达率显著高于无淋巴结转移组（P〈0．01），且呈正相关（P〈0．01），即淋巴结转移程度越低。PCNA阳性表达率亦越低。（3）端粒酶活性与PCNA表达具有一致性（P〈0．01）。且呈正相关（P〈0．01），一致率为86．25％。结论端粒酶活性与PCNA表达具有一致性，端粒酶活性与PCNA联合检测，可为乳腺癌术后治疗方案的制定和预测预后提供辅助依据。     

食管癌端粒酶表达与其活性关系

目的探讨食管癌端粒酶亚基因表达及其与端粒酶活性的关系。方法采用端粒末端重复序列扩增技术检测29例食管鳞癌组织及其相应癌旁正常组织、47例食管鳞状上皮不典型增生组织的端粒酶活性;采用逆转录聚合酶链反应技术检测端粒酶各亚单位基因mRNA的表达。结果端粒酶活性阳性检出率、亚单位基因端粒酶逆转录酶(mTERT)mRNA表达在食管癌、不典型增生组织和癌旁正常组织之间差异有统计学意义(P<0.001);而端粒酶亚单位基因hTR或TP1mRNA在3种食管组织中表达差异无统计学意义(P>0.05)。在105例食管癌组织、癌旁正常组织和不典型增生组织中hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈显著正相关(P<0.001);而hTR或TP1mRNA表达与端粒酶活性无明显相关(P>0.05)。结论端粒酶在食管癌的发生发展过程中可能起关键性作用:hTERT与端粒酶活性密切相关;端粒酶有望成为食管癌的生物标志物。     

端粒酶活性测定方法的改进与探讨

目的：判断改良TRAP银染法在端粒酶活性测定中的应用价值。方法：建立支气管灌注煤焦沥青法诱导大鼠肺癌的模型，用改良TRAP银染法测定大鼠肺癌、癌前及正常组织中的端粒酶活性，同时用A549细胞系进行方法学鉴定。结果：端粒酶较特异地表达于肺癌组织中，改良TRAP银染法有较好的特异性，敏感性（10^2个细胞）比原方法（10^3个细胞）有了进一步提高，较原方法简单且染色更为充分，便于观察结果。结论：银染法无放射性、成本较低，有推广使用的价值。有望通过改进取材和测定方法，达到早期诊断肺癌的目的。     

基质金属蛋白酶与肺癌的侵袭和转移

目的 :探讨基质金属蛋白酶 (m atrix m etalloproteinases,MMPs)、端粒酶与肺癌侵袭和转移的关系。方法 :运用酶谱法 (zym ography) ,TRAP(端粒末端重复扩增 )法定量分析肺癌和癌旁组织 MMP- 2、MMP- 9、端粒酶活性与肺癌侵袭和转移的关系。结果 :MMP- 9几乎见于所有肺癌组织 ,且活性较强 ,MMP- 2表达较弱 ,仅部分表现为阳性。癌组织平均 MMP- 9含量高于癌旁 ,但差异无显著性 (P=0 .5 98)。 2 7例肺癌中有 12例癌组织 MMP- 9含量高于癌旁 ,另外 15例低于癌旁 ,分别占 4 4 .4 %和 5 5 .6 % ,癌组织和癌旁组织 MMP- 9含量差异有显著性 (P=0 .0 4 5 )。结核瘤 MMP- 9含量明显高于癌旁 (P=0 .0 12 ) ,平均含量高于癌组织 ,但差异无显著性。不同组织类型的肺癌 MMP- 9活性不同 (P<0 .0 5 ) ,细支气管肺泡腺癌比腺癌和鳞癌 MMP- 9活性低。尚无证据表明 ,肺癌端粒酶与 MMP- 9活性、淋巴结转移显著相关。结论 :MMP-9不仅在预测肺癌病人预后、术后随访、判断复发等方面有重要意义 ,并且 ,随着各种 MMPs抑制剂研究的深入 ,以 MMPs为靶的抗肺癌转移和血管生成的抗癌策略有望进入临床应用阶段。在以 MMP- 9判断肺癌侵袭转移能力时 ,要注意与结核瘤鉴别     

端粒酶活性检测在肺癌诊断中的价值研究

目的 探讨端粒酶活性检测在肺癌诊断中的应用价值.方法 采用PRAP-PcR-ELISA和PAGE-银染色法对48例肺癌患者和48例肺部良性疾病患者的肺刷落细胞端粒酶活性进行定量和定性分析.结果 小细胞肺癌饲肺刷落细胞端粒酶阳性率为100%,非小细胞肺癌饲肺刷落细胞端拉酶阳性率为79.4%,均明显高于肺癌对侧肺和肺部良性疾病的检侧结果.组间比较有显著性差异(P<0.001).结论 肺刷落细胞端粒酶活性的检侧可为肺部肿瘤的早期诊断提供可靠的依据.     

线阵CCD声带振动波形采集系统取景器的设计

为了使用线阵ＣＣＤ高速采集系统直接记录声带振动影像,通过设计取景器克服线阵ＣＣＤ成像无法实时观察这一困难。线阵ＣＣＤ高速采集系统通过取景器和喉镜相连接即可记录声带振动的波形。     

胃癌与胃炎组织中端粒酶活性的比较研究

目的研究胃癌与胃炎组织中端粒酶活性的差异，探讨端粒酶活性与胃癌发生的关系。方法收集经病理证实的胃癌标本60例和胃炎标本40例，用原位杂交方法检测端粒酶活性。结果60例胃癌标本中端粒酶阳性率为88．3％，其中高分化腺癌组阳性率为90％，中分化腺癌组阳性率为95％，低分化腺癌组阳性率为80％；40例胃炎标本中端粒酶阳性率为20％，其中慢性浅表性胃炎组阳性率为5％，慢性萎缩性胃炎伴中重度不典型增生组阳性率为35％。胃癌组与两组胃炎相比差异均有统计学意义（P〈0．01）；慢性萎缩性胃炎伴中重度不典型增生组与慢性浅表性性胃炎组相比差异也有统计学意义（P〈0．01）；不同组织学类型的胃癌之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论胃癌和部分癌前病变组织中端粒酶活性增高；端粒酶活性与胃癌的发生密切相关，但与胃癌的组织学类型关系不明显。     

反式二羟环氧苯并(a)芘-DNA加合物在肺癌发病中的作用

[目的]反式二羟环氧苯并 (a)芘 (BPDE)为苯并 (a)芘在体内的代谢产物 ,是一种直接的致癌物 ,可攻击DNA形成BPDE_DNA加合物 ,本研究目的为探明该加合物在人群肺癌发生中的作用及其分子机制。[方法]使用针对BPDE_DNA加合物的单克隆抗体 ,通过免疫学方法检测150例肺癌、120例癌旁肺组织、40例肺良性病变和40例正常肺组织中BPDE_DNA加合物的含量 ,同时检测相应肺组织中P53、C_MYC、K_ras、BCL_2、hTERT等癌变相关基因的表达 ,分析BPDE_DNA加合物与上述基因的关系。并在BPDE诱导的体外人气管上皮细胞癌变模型上检测癌变过程中BPDE_DNA加合物的变化。[结果]82.0 % (123/150)的肺癌组织 ,37.5 % (45/120)的癌旁肺组织 ,15.0% (6/40)的肺良性病变和2.5% (1/40)的正常肺组织可检出BPDE_DNA加合物 ,肺癌组织中加合物的含量显著高于其他肺组织 ,P<0.01。分层分析发现男性肺癌病例加合物检出率为89.9% (107/119)高于女性的检出率51.6 % (16/31) ,P<0.05。有吸烟史的肺癌患者加合物检出率为99.1% (113/114)高于非吸烟肺癌患者的27.8% (10/36),P<0.01。肺癌组织P53、K_ras、BCL_2基因的阳性表达与BPDE_DNA加合物有关联 ,而C_MYC、hTERT基因的表达与BPDE_DNA加合物无关联。在体外用BPDE作用于人气管上皮细胞系 ,可诱导     

肺癌组织中的8-OH-dG及其与几种癌变相关基因的关系

为探讨 8 羟基 脱氧鸟苷 (8 OH dG)与人群肺癌发生及癌变相关基因的关系 ,使用针对 8 OH dG加合物的鼠抗人单克隆抗体 ,通过免疫学方法检测 1 50例肺癌、1 2 0例癌旁肺组织、40例肺良性病变和 40例正常肺组织中氧化损伤标志物 8 OH dG的含量 ;同时检测相应肺组织中P53、C MYC、K RAS、BCL 2、hTERT等癌变相关基因的表达 ,分析 8 OH dG与上述癌变相关基因表达的关系。结果显示 ,92 7% (1 39 1 50 )的肺癌组织中可检出氧化损伤标志物 8 OH dG ,其阳性标志细胞的比率为 (2 4 0 0± 2 5 1 1 ) % ;1 7 5 % (2 1 1 2 0 )的癌旁肺组织可检出 8 OH dG ,阳性标志细胞的比率为 (2 42± 5 98) % ;1 0 0 % (4 40 )的肺良性病变组织可检出 8 OH dG ,阳性标志细胞的比率为 (0 80± 1 30 ) % ;5 0 % (2 40 )的正常肺组织可检出 8 OH dG加合物 ,阳性标志细胞的比率为 (0 34± 1 0 1 ) % ,肺癌中 8 OH dG的含量高于其它肺组织 (P <0 0 1 )。将肺癌病例按性别、年龄、细胞类型和吸烟史分层 ,它们皆与 8 OH dG无关联。分析 8 OH dG与癌变相关基因的关系 ,发现肺癌组织K RAS、BCL 2基因阳性表达者 8 OH dG的含量高于上述基因阴性表达者 ,P值分别为 0 0 35和 0 0 34 ;而P53、C MYC和hTERT基因表达与 8 OH dG的含     

人子宫颈病变组织中P53表达及其与端粒酶hTR mRNA的关系

目的:探讨人子宫颈病变组织中P53的表达及其与端粒酶hTR mRNA表达的相关关系。方法:51例宫颈病变组织中,包括宫颈炎10例,LSIL10例,HSIL20例,SCC11例,分别利用免疫组化S-P法和原位杂交法检测病变组织中P53蛋白、端粒酶hTRmRNA的表达活性。结果:P53表达在宫颈炎组与LSIL组无差别,但显著低于HSIL和SCC组;hTR基因在HSIL/SCC中的阳性表达与CC/LSIL组以及在LSIL和HSIL/SCC之间差异有统计学意义(P<0.05);P53蛋白表达与端粒酶hTRmRNA基因表达之间具有显著相关性(P=0.042,P<0.05)。结论:端粒酶hTR和P53蛋白表达及相关性对于人子宫颈癌的早期病理诊断有较好地应用价值。同时,对该肿瘤的发生、发展规律提供一定的客观依据。