微小RNA - 184促进滋养层细胞凋亡而引起复发性流产的研究

目的 探究微小RNA - 184（miR - 184）在调控女性滋养层细胞凋亡中的作用及其分子机制，为复发性流产的预防和治疗提供新思路。 方法 采用复发性流产绒毛膜组织和滋养层Swan 71细胞，采用含过表达miR - 184的质粒转染Swan 71细胞后，流式细胞仪测定细胞凋亡率，CCK8测定细胞增殖，实时荧光定量PCR和western blot法测定细胞中miR - 184、Noxa1和MCL1的表达水平。同时也在复发性流产组织中测定上述分子的表达水平。采用t检验比较两组数据的差异，采用重复测量方差分析比较两组增殖曲线。结果 与人工流产组相比，复发性流产组中miR - 184上调6.24倍（t = 3.59，P＜0.05），Noxa1上调2.19倍（t = 2.55，P＜0.05），MCL1下调80.3%（t = 2.63，P＜0.05）。与对照组相比，过表达miR - 184的滋养层细胞凋亡率增加6%（t = 4.62，P＜0.05），细胞增殖下降（F = 10.52, P＜0.05），Noxa1表达上调1.94倍（t = 7.20，P＜0.05），MCL1表达下调55.7%（t = 7.20，P＜0.05）。结论 miR - 184在复发性流产组织中高表达，其通过活化Noxa1/MCL1凋亡通路而诱导滋养层细胞凋亡，最终引发流产，为miR - 184参与调控复发性流产的发生发展提供了实验依据。     

姜黄素对氯化铝染毒的NG108 - 15细胞凋亡及PKC - NMDAR通路表达的影响

目的 探讨姜黄素对氯化铝染毒所致NG108 - 15细胞凋亡的影响及其机制,为铝致学习记忆损伤的治疗提供参考。方法 取对数生长期NG108 - 15细胞,随机分为空白对照组、DMSO组（溶剂对照）、姜黄素组（16 μmol/L姜黄素）、铝组（160 mg/L氯化铝染毒 ）、铝+姜黄素组（160 mg/L氯化铝染毒24 h后,给予16 μmol/L姜黄素处理24 h）。收集各组细胞,采用吖啶橙/嗅化乙锭（AO/EB）双荧光染色观察细胞凋亡形态,计数凋亡细胞数并计算凋亡率;流式细胞术检测细胞凋亡率, qRT - PCR检测细胞中PKC、NMDAR1、NMDAR2B 的mRNA表达水平,western blot检测细胞中凋亡相关蛋白（caspase3、Bax）和PKC、NMDAR1、NMDAR2B的蛋白表达水平。多组间均数的比较采用单因素方差分析（one - way ANOVA）,组间两样本均数的比较采用LSD法。结果 与空白对照组相比,铝染毒组的caspase3、Bax蛋白表达水平升高（t = - 5.547、 - 4.948,P＜0.001）,PKC、NMDAR1、NMDAR2B的mRNA（t = 4.926,P = 0.003;t = 6.330,P＜0.001;t = 4.224,P = 0.019）和蛋白（t = 20.638,P＜0.001;t = 4.509,P＜0.001;t = 17.388,P = 0.002）表达水平降低, AO/EB染色和流式细胞术结果均表明细胞凋亡率升高（t = - 5.153、 - 7.390,P＜0.001）;加入姜黄素处理后,与铝染毒组相比,铝+姜黄素组的caspase3、Bax蛋白表达水平降低（t = 2.930,P = 0.006;t = 4.907,P＜0.001）,PKC、NMDAR1、NMDAR2B 的mRNA（t = - 10.337、 - 6.621、 - 6.847,P＜0.001）和蛋白（t = - 30.551、 - 7.451、 - 26.294,P＜0.001）表达水平升高,AO/EB染色和流式细胞术结果均表明细胞凋亡率降低（t = 2.707,P = 0.01;t = 4.632,P＜0.001）。结论 上调PKC - NMDAR信号通路表达,可能是姜黄素减轻氯化铝染毒所致NG108 - 15细胞凋亡的机制之一。     

二甲双胍联合阿帕替尼对胃癌细胞的增殖抑制作用

目的 探讨二甲双胍联合阿帕替尼对胃癌BGC823细胞系的增殖抑制作用及其可能的机制。方法 MTT法检测不同浓度二甲双胍（0～30 mmol/L)、不同浓度阿帕替尼（0～60 μmol/L）及两药联合应用处理BGC823细胞24、48、72 h的增殖抑制率,结晶紫染色法检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,western blot检测细胞中血管内皮生长因子信号通路及凋亡相关蛋白VEGFR2、PI3K、p - AKT、AKT、Bax、Bcl - 2表达水平。结果 二甲双胍和阿帕替尼单独处理BGC823后,细胞增殖抑制率均增加（P＜0.05）,联合用药产生协同作用（CI＜1）,二甲双胍和阿帕替尼单独及联合应用均能抑制细胞集落形成并使总凋亡比例增加（P＜0.05）。与对照组和单药组相比,联合用药可明显下调细胞中VEGFR2、PI3K、p - AKT、AKT、Bcl - 2蛋白的表达水平,上调Bax蛋白表达水平（P＜0.05）。结论 二甲双胍联合阿帕替尼具有协同抑制胃癌BGC823细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制VEGF信号通路有关。     

雷公藤红素抑制MGC - 823细胞增殖和迁移及诱导凋亡

目的 探索雷公藤红素对MGC - 823细胞的增殖，迁移及诱导凋亡的作用，并探讨其作用机制。方法 0、1、2、4、6、8、12 μM雷公藤红素作用于MGC - 823细胞，采用MTT法检测增殖比率。0、1、2和4 μM雷公藤红素作用于MGC - 823细胞0、24、48和72 h，显微镜下观察细胞形态，采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力，流式细胞术检测细胞凋亡，western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bcl - 2、Bax、Akt、p - Akt等的表达水平。结果 经雷公藤红素作用后，MGC - 823细胞的增殖率均下降（P＜0.05）；细胞数量减少，体积缩小，皱缩变圆，部分不再贴壁，细胞核缩小；细胞迁移率减小（P＜0.05）；早期凋亡率增加（P＜0.05）；MGC - 823细胞中Bax表达升高，Bcl - 2和p - Akt表达降低（P＜0.05）。结论 雷公藤红素对MGC - 823细胞的增殖和迁移有抑制作用，并诱导其凋亡。     

下调LOX基因对肾癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及机制研究

目的 探讨LOX对肾癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其作用机制。方法 将si-con、si-LOX质粒分别转染至786-0细胞中,记为si-con组、si-LOX组,转染采用脂质体法。蛋白质印迹（Western Blot）检测赖氨酰氧化酶(LOX)、周期素依赖性激酶4（CDK4）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、蛋白激酶B（Akt）表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果 与正常肾小管上皮细胞HK-2相比,肾癌细胞786-0、GRC-1、A498中LOX表达水平显著升高（P＜0.001）。敲减LOX肾癌细胞786-0的活力显著降低（t=8.440,P＜0.001）,786-0细胞的凋亡率显著升高（t=25.628,P＜0.001）,G0/G1期细胞所占比例增加（t=7.211,P＜0.001）,S期细胞所占比例减少（t=13.190,P＜0.001）,786-0细胞中CDK4、Bcl2、p-Akt表达水平显著降低（t=15.660、13.914、12.349,P＜0.001）,786-0细胞中Bax表达水平显著升高（t=22.057,P＜0.001）。结论 敲减LOX能抑制肾癌细胞增殖,促进细胞凋亡,影响细胞周期,其机制可能与PI3K/Akt信号通路有关,可为肾癌的治疗提供新思路。     

藤梨根提取物对食管癌EC109细胞抑制作用

目的 观察藤梨根乙酸乙酯提取物对食管癌EC109细胞生长、凋亡影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养食管癌EC109细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测用药后EC109细胞凋亡率变化,免疫组化法检测用药后EC109细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl -2)、Bcl -2相关X蛋白(Bax)蛋白表达变化,激光共聚焦显微技术测定用药后EC109细胞胞内[Ca2+]i变化.结果 细胞培养24、48、72 h后,对照组细胞凋亡率分别为(1.67±0.76)％、(2.32±0.45)％、(2.98±0.89)％,Bcl -2蛋白表达率分别为(50.12±3.41)％、(49.78±5.65)％、(51.25±6.34)％,Bax蛋白表达率分别为(17.98±2.85)％、(18.27±3.12)％、(17.76±3.64)％,而各干预组细胞凋亡率为7.05％ ～51.11％,均明显增加(t=5.419～17.826,P＜0.05),存在时-效和量-效趋势,同时其细胞Bcl -2蛋白表达降低,为43.32％ ～ 10.46％,Bax蛋白表达上调,为24.54％～ 63.47％,均存在时-效和量-效趋势,当作用时间≥48 h或浓度≥100 μg/mL时,干预组上述变化与对照组比较,差异有统计学意义(Bcl-2∶t=3.58～10.14;Bax∶t =5.047 ～ 11.065,P＜0.05);用药后细胞内[Ca2+]i明显升高,12h达高峰,此后缓慢减低,至48 h仍明显高于对照组.结论 藤梨根乙酸乙酯提取物可以明显抑制食管癌EC109细胞增殖,并诱导细胞发生凋亡,可能与降低其Bcl -2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,升高细胞内[Ca2+]i有关.     

萝藦果壳多糖诱导人肺癌A549细胞凋亡的研究

目的 探究萝藦果壳多糖（MJP-1’）诱导人肺癌A549细胞凋亡的作用。方法 采用CCK8法检测萝藦果壳多糖对A549细胞活力的影响;采用比色法检测A549细胞内乳酸脱氢酶的释放量变化情况;通过TUNEL实验探究萝藦果壳多糖对A549细胞凋亡的影响;通过JC - 1荧光探针探究萝藦果壳多糖对A549细胞线粒体膜电位的影响;通过蛋白质分子印迹法探究萝藦果壳多糖作用后A549细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果 CCK8法显示萝藦果壳多糖抑制A549细胞的增殖,并呈剂量依赖趋势（125 μg/ml组:t = 3.092,P = 0.015;250 μg/ml组:t = 3.929,P = 0.004;500 μg/ml组:t = 5.626,P＜0.001;1 000 μg/ml组:t = 7.512,P＜0.001;2 000 μg/ml组:t = 9.677,P＜0.001;4 000 μg/ml组:t = 12.290,P＜0.001;8 000 μg/ml组:t = 16.000,P＜0.001）;比色法显示A549细胞乳酸脱氢酶释放量增加（2 mg/ml组:t = 8.233,P = 0.001;4 mg/ml组:t = 12.640,P＜0.001;8 mg/ml组:t = 27.530,P＜0.001）;TUNEL实验显示萝藦果壳多糖可促进A549细胞凋亡（2 mg/ml组:t = 7.803,P＜0.001;4 mg/ml组:t = 12.460,P＜0.001;8 mg/ml组:t = 39.340,P＜0.001）;JC - 1探针实验结果显示萝藦果壳多糖导致A549细胞线粒体膜电位降低（2 mg/ml组:t = 24.120,P＜0.001;4 mg/ml组:t = 28.530,P＜0.001;8 mg/ml组:t = 31.600,P＜0.001）;蛋白质分子印迹法结果显示萝藦果壳多糖可以下调Bcl - 2蛋白表达（2 mg/ml组:t = 3.790,P = 0.019;4 mg/ml组:t = 6.598,P = 0.003;8 mg/ml组:t = 12.840,P＜0.001）,并使Bax、cleaved - caspase - 3蛋白表达增加（Bax组:2 mg/ml组:t = 17.280,P＜0.001;4 mg/ml组:t = 36.040,P＜0.001;8 mg/ml组:t = 22.520,P＜0.001;cleaved - caspase - 3组:2 mg/ml组:t = 6.487,P = 0.003;4 mg/ml组:t = 9.326,P＜0.001;8 mg/ml组:t = 22.380,P＜0.001）。结论 本研究发现萝藦果壳多糖可以诱导人肺癌A549细胞凋亡,为进一步开发利用萝藦果壳多糖奠定了基础。     

白藜芦醇抑制NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡信号通路改善肥胖小鼠认知功能

目的 观察白藜芦醇（RES）对肥胖小鼠认知功能的保护作用,并探讨其海马组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体—细胞焦亡信号通路机制。方法 50只小鼠随机均分为:正常对照组、模型组和白藜芦醇高（100mg/kg）、中（50mg/kg）、低（25mg/kg）剂量组,喂养6个月后,检测小鼠认知功能,海马组织细胞焦亡水平,海马组织沉默信息调节因子1（SIRT1）、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-18和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等蛋白表达情况。采用单因素方差分析或重复测量方差分析进行结果分析。结果 与模型组比较,白藜芦醇高剂量组小鼠终体质量降低（t=-14.453,P=0.021）,海马组织细胞焦亡水平降低（t=-17.328,P=0.011）,学习记忆能力改善,海马组织SIRT1蛋白表达升高（t=32.812,P＜0.001）,NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18和TNF-α蛋白表达均下降（t=-28.462,P=0.003;t=-38.148,P＜0.001;t=-38.809,P＜0.001;t=-47.239,P＜0.001;t=-48.811,P＜0.001）,白藜芦醇低剂量组组小鼠终体质量、海马组织细胞焦亡水平、学习记忆能力均无改善,海马组织SIRT1、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18和TNF-α蛋白表达无统计学差异（t=12.012,P=0.132;t=-14.252,P=0.104;t=-19.219,P=0.083;t=-7.252,P=0.512;t=-15.252,P=0.286;t=-21.252,P=0.068）。结论 RES具有浓度效应,可以改善肥胖及其所致认知功能障碍,其机制可能与促进海马组织SIRT1、抑制NLRP3炎性小体—细胞焦亡信号通路有关。     

镉诱导LLC-PK1细胞凋亡对基因表达的影响

目的探讨镉诱导猪肾近曲小管上皮细胞（LLC-PK1）凋亡对bcl-2、p53（mtp53）、c-myc、c-fos与ras基因表达的影响.方法采用流式细胞仪分别测定bcl-2、p53、c-myc、c-fos与ras基因表达产物.结果不同浓度CdCl2（0,10,20,40 μmol/L）作用LLC-PK1细胞,8 h后bcl-2表达逐渐下降,并呈良好的剂量-反应关系（r=-0.910,P＜0.05）;4,8 h p53表达均明显下降,呈剂量-反应关系（r值分别为-0.716,-0.972,P均＜0.05）;8 h后c-myc表达逐渐下降,呈剂量-反应关系（r=-0.694,P＜0.05）;8 h后c-fos表达未见剂量-反应关系;8 h后ras表达逐渐下降,呈明显的剂量-反应关系（r=-0.887,P＜0.05）.结论镉诱导LLC-PK1细胞凋亡的机制可能与镉抑制bcl-2、p53、c-myc、ras基因表达有关.     

CD74小干扰RNA通过NF - κB途径诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察CD74小干扰RNA（siRNA）对胃癌细胞BGC - 823细胞生长增殖、DNA合成、细胞凋亡的影响,通过检测NF - κB信号通路家族成员P65及细胞凋亡关键调控因子Bcl - 2和Bax的表达变化,探讨CD74在胃癌发生发展中的可能机制。方法 选取胃癌细胞BGC - 823进行体外培养,选取对数生长期的细胞进行后续实验。实验分成3组:空白对照组（mock组）,转染对照组（control siRNA组）和CD74 siRNA转染组。western blotting检测细胞中CD74 siRNA对胃癌细胞BGC - 823中CD74的干涉效能;MTT法测定不同分组胃癌细胞BGC - 823的增殖率;BrdU掺入法测定BGC - 823细胞的DNA合成;流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡情况;western blotting检测细胞中P65蛋白、Bcl - 2和Bax的蛋白表达。结果 与2组对照组比较,CD74 siRNA组CD74蛋白表达降低,BGC823细胞的增殖和DNA合成明显受抑制,细胞凋亡比例增加,P65蛋白和Bcl - 2蛋白表达减少,Bax的表达增加。结论 下调CD74的表达抑制胃癌细胞BGC - 823增殖和DNA合成,诱导胃癌BGC823细胞发生凋亡,其作用机制可能与抑制NF - κB家族成员P56的表达,进而改变细胞凋亡关键调控因子Bcl - 2和Bax的表达相关。     

胰高糖素样肽-1受体激动剂通过JNK信号通路促进肝星形细胞凋亡的机制研究

目的 探讨胰高糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)通过JNK信号通路促进肝星形细胞(HSC)凋亡的机制.方法 体外培养人HSC并进行形态学鉴定,将HSC样本随机分成对照组(20份)、GLP-1RA组(20份)和JNK阻断组(20份).对照组HSC在常规培养基础上加入高糖(终浓度25 mmol/L),GLP-1RA组在对照组基础上加入GLP-1RA利拉鲁肽(终浓度10 mmol/L),JNK阻断组在GLP-1RA组基础上加入JNK信号通路阻断剂SP600125(终浓度20 μmol/L)进行培养;培养120 h后用流式细胞术检测各组的HSC凋亡情况.同时采用Western印迹法检测各组的p-JNK蛋白表达水平.结果 三组的平均凋亡率和平均p-JNK的表达水平差异均有统计学意义(F=19.412和66.451,P均＜0.01).GLP-1RA组的凋亡率和p-JNK蛋白表达水平分别为(30.61±4.07)％和(22.79±3.80)％,均高于对照组,差异均具有统计学意义(t=0.530和9.854,P均＜0.01);JNK阻断组的细胞凋亡率和p-JNK蛋白表达水平分别为(23.48±4.41)％和(10.66±4.15)％,均低于GLP-1RA组,差异有统计学意义(t=-5.428和-8.757,P均＜0.01).结论 JNK信号通路在GLP-1RA介导的HSC凋亡中起着关键作用,GLP-1RA可以通过JNK信号通路促成经高糖诱导活化的HSC发生凋亡.     

IRE1通路在高碘诱导甲状腺细胞凋亡中的作用

目的 观察IRE1通路在高碘诱导甲状腺细胞凋亡中的特征,进一步分析高碘诱导甲状腺细胞凋亡的作用机制.方法 用0(对照)、1、10、50 mmol/L的碘化钾(KI)染毒体外培养的Nthy-ori 3-1细胞,24h后采用流式细胞术检测Nthy-ori 3-1细胞凋亡率,用荧光定量PCR及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、肌醇需求酶-1(IRE1)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)基因蛋白的表达水平.结果 与0(对照)、l、10 mmol/L KI染毒组相比,50 mmol/L KI染毒组细胞凋亡率升高(P＜0.05);与对照组相比,各染毒组GRP78、IRE1 mRNA表达水平均无统计学差异(P＞0.05),CHOP mRNA表达水平升高(P＜0.05),GRP78、IRE1和CHOP蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 内质网应激中IRE1通路可能没有参与高碘诱导的Nthy-ori 3-1细胞凋亡过程.     

镉激活JNK/c-Jun信号通路诱导小鼠GC-2 spd精母细胞凋亡

目的探讨氯化镉对小鼠GC-2 spd精母细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法氯化镉(0、5、10μM)处理GC-2 spd细胞,流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS)的水平;Western blot检测JNK/c-Jun信号通路调节蛋白和促凋亡因子Bax及抗凋亡因子Bcl-2的表达水平。结果与对照组相比,随着氯化镉浓度(5、10μM)升高,细胞凋亡率和ROS含量显著上升,且呈现剂量依赖性(P0.05);氯化镉处理组的细胞中c-Jun蛋白表达水平无显著差异(P0.05),但p-JNK及p-c-Jun蛋白水平明显增加(P0.05)。镉暴露导致Bax蛋白表达升高而Bcl-2蛋白表达降低(P0.05),引起细胞凋亡。结论镉通过增加ROS生成并调控JNK/c-Jun信号通路诱导GC-2 spd细胞凋亡。     

HMGB1 - TLR9 - MyD88 - TRAF6 - NF - κB信号通路在急性胰腺炎肠粘膜屏障损伤中的作用

目的 探讨雨蛙素和脂多糖诱导的小鼠重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）模型中肠道粘膜屏障损伤的机制。方法 采用雨蛙素和脂多糖诱导小鼠SAP模型。将雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和SAP组,每组12只。每组分为6 h和12 h两个时间点。HE染色观察胰腺及回肠病理学,ELISA法检测TNF - α、IL - 1β、IL - 6、DAO和EndoCAb的表达水平,Western blot检测HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6、NF - κB p65、p - NF - κB p65和occludin表达水平,TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况。采用单因素方差分析比较不同处理组之间的结果,组间差异进一步采用LSD - t多重比较。结果 与对照组相比,SAP组血清中 IL - 1β、IL - 6、TNF - α、DAO 和EndoCAb水平升高（F = 104.50,P＜0.05;F = 140.36,P＜0.05;F = 328.21,P＜0.05;F = 372.23,P＜0.05;F = 80.67,P＜0.05）;HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6和p - NF - κB p65蛋白表达升高（F = 65.95,P＜0.05;F = 84.16,P＜0.05;F = 58.27,P＜0.05;F = 122.26,P＜0.05;F = 178.38,P＜0.05）,occludin的表达降低（F = 456.91,P＜0.05）、小鼠肠上皮细胞凋亡增加(F = 400.47,P＜0.05)。与12 h SAP组相比,6 h SAP组血清IL - 1β、IL - 6和TNF - α水平及p - NF - κB p65蛋白表达升高更明显(ｔ = 4.95,P＜0.05;ｔ = 4.57,P＜0.05;ｔ = 3.32,P＜0.05;ｔ =2.93,P＜0.05)。与6 h SAP组相比,12 h SAP组回肠组织中occludin水平降低更明显（ｔ = - 3.52,P＜0.05）,血清DAO、EndoCAb水平、HMGB1、TLR9、MyD88、TRAF6蛋白表达水平更高（ｔ=6.55,P＜0.05;ｔ = 4.96,P＜0.05;ｔ = 6.88,P＜0.05;ｔ = 8.52,P＜0.05;ｔ = 7.37,P＜0.05;ｔ = 7.78,P＜0.05）,肠上皮细胞出现细胞凋亡更明显 (ｔ = 3.10,P＜0.05)。结论 HMGB1 - TLR9 - MyD88 - TRAF6 - NF - κB信号通路可能参与了SAP肠粘膜屏障损伤。     

白僵蚕水提物对镉致胰岛β细胞毒性的影响研究

目的 探讨白僵蚕水提物对硫酸镉（CdSO4）致胰岛β细胞NIT-1细胞毒性的影响。方法 采用冷水浸泡法提取白僵蚕的水溶性成分。分别用（0、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4mg/mL）白僵蚕水提物染毒细胞24h;用4μmol/L CdSO4分别与（0.4和0.8mg/mL）白僵蚕水提物混合后共处理24h;以及用（0.4和0.8mg/mL） 白僵蚕水提物预处理2h,再以4μmol/L CdSO4分别染毒24h。采用CCK8、Hoechst33258染色以及荧光探针等方法分别检测NIT-1细胞存活率、细胞凋亡及活性氧ROS的水平。结果 （1）与对照组比较,细胞存活率随白僵蚕水提物染毒浓度的增加呈现出先升高后下降的趋势（P<0.05）;（2）与单独处理组相比,4μmol/L CdSO4与（0.4和0.8mg/mL）白僵蚕水提物共处理组细胞存活率均降低（P<0.05）,且预处理组细胞存活率相比白僵蚕单独处理组也降低（P<0.05）;（3）联合处理组细胞变圆、细胞核呈致密浓染,细胞凋亡率均高于白僵蚕和CdSO4单染组（P<0.05）;同时,联合处理组ROS荧光强度也升高,分别为白僵蚕和CdSO4单染组的1.18和1.05倍（P<0.05）。结论 白僵蚕水提物在低浓度下可促进NIT-1细胞的增殖,高浓度则降低细胞的存活率;低浓度的白僵蚕水提物无法拮抗CdSO4诱导的细胞死亡,反而增强了细胞毒性,其机制可能与凋亡和ROS水平增加有关。     

菌灵诱导小鼠睾丸支持细胞凋亡及周期阻滞的研究

目的 观察多菌灵对小鼠睾丸支持细胞系（TM4）周期及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制。方法 不同浓度(0.25、0.5、1、2、4、8 μg/ml)的多菌灵体外作用TM4细胞48 h,运用MTT法检测OD值及计算细胞存活率,PI染色法检测TM4细胞周期的分布变化,Annexin V/PI双标识标记法检测TM4细胞的凋亡情况,应用荧光探针DCFH - DA法检测TM4细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）的相对荧光强度,qRT - PCR法检测TM4细胞内Bax和Bcl - 2 mRNA的表达水平。结果 随着多菌灵浓度的升高,TM4细胞的增殖受到抑制,细胞周期分布发生变化,G2/M期的细胞呈现增加的趋势（P＜0.01）,胞内Bax mRNA和ROS表达水平也逐步升高（P＜0.05,P＜0.01）,而Bcl - 2 mRNA表达则逐步下降（P＜0.01）。结论 多菌灵可诱导TM4细胞凋亡并发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与Bax、Bcl - 2 mRNA及ROS的异常表达有关。     

西玛津调控SPAG6介导AP - 1转录活性对小鼠生精细胞凋亡的影响

目的 研究与探讨西玛津对小鼠精母细胞（GC - 2 spd）增殖的影响及作用机制。方法 COS - 7细胞共转染pAP1 - luc和Spag6基因的表达质粒，荧光素酶报告基因实验检测SPAG6对AP - 1转录活性的影响。以不同浓度西玛津（0、5、25、125 μg/mL）染毒GC - 2 spd细胞24、48和72 h，采用CCK - 8法检测细胞存活率。西玛津染毒24 h后，western blot检测SPAG6和COPS5蛋白的表达变化，qPCR检测促凋亡因子Bax及抗凋亡因子Bcl - 2 mRNA的表达。结果 COS - 7细胞内过表达SPAG6能抑制AP - 1的转录活性。与对照组比较，25和125 μg/mL西玛津染毒组中GC - 2 spd细胞存活率、细胞内SPAG6蛋白及Bax mRNA的表达水平均下降，差异具有统计学意义（P＜0.05），然而COPS5蛋白及Bcl - 2 mRNA的表达没有显著变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 西玛津对GC - 2 spd细胞具有毒性作用，可能通过抑制SPAG6蛋白表达从而调节AP - 1介导的凋亡基因的表达，诱导生精细胞凋亡。     

内质网应激与细胞凋亡

死亡受体活化和线粒体损伤是两条经典的介导细胞凋亡信号传导通路 ,近来研究发现过度内质网应激可启动细胞凋亡 ,是一条新的细胞凋亡信号传导通路 ,这一信号传导通路包括非折叠蛋白反应和钙离子起始信号等机制 ,内质网应激可特异性激活Caspase_12 ,Caspase_12裂解Caspase_3等下游效应蛋白酶 ,最终导致细胞凋亡。本文对该凋亡途径的研究进展作了简要综述。     

镉致293细胞凋亡过程中JNK信号传导通路与Bax基因关系研究

目的利用RNAi技术探讨JNK、c-Jun、Bax基因在镉致293细胞凋亡过程中的作用及相互关系。方法细胞转染siRNA-JNK或siRNA-Bax后染镉,用Western blotting法测基因蛋白表达,流式细胞术测细胞凋亡。结果 30μmol/L氯化镉可使293细胞相关基因表达明显增高,细胞凋亡增加。siRNA-JNK可抑制这些效应,而siRNA-Bax只能抑制Bax表达和细胞凋亡,对其他基因无明显影响。结论 JNK信号传导通路可能通过上调Bax基因表达促进细胞凋亡。     

Bcl-2/Bax蛋白表达与星形细胞瘤恶性程度的相关性研究

目的　探讨星形细胞瘤中Bcl -2和Bax蛋白表达与其恶性程度的关系。方法　用免疫组织化学法和原位缺口末端标记 (TUNEL)法分别检测 10例正常脑组织和 80例经病理证实的不同恶性程度的星形细胞瘤中Bcl-2、Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率。结果　正常脑组织中未见Bcl -2和Bax蛋白阳性表达 ,且凋亡细胞百分率仅为 (0 6± 0 1) % ;不同恶性程度的星形细胞瘤间Bcl-2、Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率的差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,且随着恶性程度的增高 ,Bcl -2蛋白表达阳性率有降低的趋势 ,而Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率均有升高的趋势。相关分析显示 ,星形细胞瘤的恶性程度与Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率呈正相关 (r =0 90 1,P <0 0 5 ) ,而与Bcl-2蛋白表达阳性率呈负相关 (r =-0 93 2 ,P <0 0 5 )。结论　Bcl -2、Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率可能与星形细胞瘤的恶性程度有关