叶酸缺乏和p16基因CpG岛甲基化对宫颈癌变的作用

目的探讨叶酸缺乏和抑癌基因p16 CpG岛甲基化异常与宫颈癌变的关系,以及两者在宫颈癌变中的相互作用。方法选择经病理学确诊的宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)患者85例,宫颈上皮内瘤样变(cervical intraepithelial neoplasm,CIN)患者60例和宫颈组织正常(normal cervix,NC)妇女103例为研究对象,采用放射免疫法检测其血清叶酸水平,宫颈组织中p16基因CpG岛甲基化状况采用甲基化特异PCR检测。结果在NC、CIN和SCC组,血清叶酸的平均水平依次为2.64 ng/ml、2.07 ng/ml和1.72 ng/ml,随着宫颈病变程度的增加,血清叶酸含量逐渐降低,p16基因CpG岛甲基化率逐渐升高(2趋势=32.22,P<0.001)。交互作用分析显示,叶酸缺乏和p16基因CpG岛甲基化异常在宫颈癌的发生发展中存在正相加交互作用。结论叶酸缺乏与p16基因CpG岛甲基化异常均可增加宫颈癌变的风险,且二者在宫颈癌变中存在正相加交互作用。     

IL-10基因启动子区CpG岛甲基化与宫颈癌的相关性研究

目的:探讨IL-10基因启动子甲基化与HPV感染导致宫颈癌的相关性。方法:采用PCR和甲基化特异性PCR(MSP)分别检测宫颈癌49例、癌前病变50例(19例CIN1、10例CIN2、21例CIN3)及正常对照50例宫颈组织中HPV16及IL-10基因启动子甲基化状态,并分析IL-10基因甲基化状态与不同临床病理特征之间的联系。结果:宫颈癌组及癌前病变组IL-10基因甲基化率与对照组比较差异均有统计学意义(P﹤0.05)。宫颈癌组IL-10基因甲基化和HPV16 E7 DNA检测结果有一定的关联性(χ2=20.163,P<0.05,Pearson列联系数r=0.345)。不同年龄、肿瘤组织大小、病理分级、临床分期及有无淋巴结转移和IL-10基因甲基化未见明显关系(P>0.05)。结论:宫颈癌IL-10基因启动子CpG岛甲基化与高危型HPV16感染具有关联性,IL-10基因启动子区低甲基化与宫颈癌发病相关。     

维吾尔族宫颈鳞癌C/EBP β基因甲基化与HPV16感染关系

目的 通过对新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌组织C/EBP β基因甲基化与HPV16感染关系的研究,探讨该基因在宫颈癌发生发展过程中的作用.方法 提取26份子宫颈癌组织和16份子宫颈正常组织DNA,用PCR方法对样本进行HPV16检测,再利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱方法进行C/EBP β基因甲基化分析.结果 子宫颈鳞癌组织HPV16感染率为69.32％ (18/26),2份正常子宫颈组织感染HPV16,差异有统计学意义(x2=12.780,P＜0.05);子宫颈鳞癌与子宫颈正常组织中C/EBP β基因CpG10/11和CpG17/18 2个CpG岛甲基化差异有统计学意义(t =2.221、2.278,P均＜0.05);C/EBP β基因在以上2个CpG岛位点上的甲基化率与HPV16感染偏相关系数分别为1.323和-4.36,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌发生与HPV16感染相关; C/EBP β基因2个CpG岛位点甲基化与维吾尔族子宫颈鳞癌发生相关,而与HPV16感染无相关性.     

辐射诱发胸腺淋巴瘤c-mye基因启动子甲基化检测

目的 研究辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤c-mcy基因启动子CpG岛甲基化状态和mPNA表达的变化.方法 X射线照射BALB/c小鼠建立胸腺淋巴瘤模型,采用硫化测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BCP)法和逆转录--聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测c-myc基因启动子CpG岛甲基化状态和mRNA的表达.结果 辐射诱发胸腺淋巴瘤c-myc基因启动子CpG岛与正常胸腺组织比较呈去甲基化状态,RT-PCR检测结果显示,胸腺淋巴瘤c-myc基因mPNA相对表达量(1.12±0.99)明显高于正常胸腺组织(0.89±0.08),2组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 c-myc基因启动子去甲基化可能与辐射诱发胸腺淋巴瘤密切有关.     

皮肤鳞状细胞癌中FHIT基因启动子甲基化与FHIT蛋白表达的临床意义

[目的]检测皮肤鳞状细胞癌中FHIT基因的异常甲基化及其表达情况,探讨其异常甲基化与皮肤鳞状细胞癌发生的相关机制及其与临床病理分型的关系。[方法]采用甲基化特异性PCR应方法,测定32例皮肤鳞状细胞癌组织标本FHIT基因启动子甲基化情况,免疫组织化学方法检测其蛋白表达情况。[结果]32例病变癌组织中,有17例发生了甲基化,阳性率为53.1%;皮肤鳞状细胞癌及正常皮肤组织中FHIT蛋白的阳性表达率分别为43.75%(14/32)和100%(20/20),FHIT基因的甲基化与其蛋白的表达和病变组织的组织学分级、淋巴结转移状况均有一定的关联(P﹤0.01)。[结论]FHIT基因的甲基化可能参与疾病的发生发展,且与其临床病理有一定关系,是影响皮肤鳞状细胞癌预后的重要因素之一。     

宫颈液基细胞学样本中DAPK基因甲基化的检测及临床意义

目的:探讨在液基细胞学样本中检测宫颈鳞状细胞癌及其癌前病变的DAPK基因的甲基化临床意义。方法:收集2014年6月~2015年6月在本单位就诊或体检妇女的宫颈液基细胞学检查样本231例,在满足细胞学诊断后,用甲基化特异性聚合酶链反应检测样本中DAPK基因的甲基化状态,同时做宫颈组织病理学检查。结果:总体样本中宫颈液基细胞学DAPK基因的甲基化率为16.9%(39/231),NILM、ASC-US、LISL、HISL、SCC各组中,DAPK基因的甲基化率分别为3.8%(2/53)、3.9%(2/52)、13.8%(8/58)、37.1%(23/62)、66.7%(4/6),HISL组和SCC组基因甲基化率高于NILM、ASC-US和LISL组。根据宫颈组织病理学诊断结果,宫颈炎、宫颈湿疣、宫颈上皮内瘤变(CIN)、鳞状细胞癌(SCC)各组中,DAPK基因的甲基化率分别为3.6%(2/55)、4.0%(2/50)、24.8%(28/113)、53.9%(7/13),SCC组和CIN组DAPK基因甲基化率高于宫颈炎组和宫颈湿疣组;SCC组基因甲基化率高于CIN组。CINⅢ组DAPK基因甲基化率高于CINⅠ及CINⅡ组,而CINⅠ及CINⅡ组间无统计学差异。结论:宫颈液基细胞学样本中,SCC和HISL的DAPK基因的甲基化率相对较高,临床上可以利用少量液基细胞学检测样本,作为诊断宫颈癌及癌前病变的辅助诊断指标。     

高危型HPV感染及CALCA基因启动子甲基化在宫颈病变检测中的临床价值

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染、降钙素基因相关肽α(CALCA)基因启动子甲基化在宫颈病变检测中的应用价值。方法选择2017年1月-2019年12月于河南大学淮河医院进行阴道镜病理组织活检的360例患者作为研究对象,根据阴道镜病理活检结果分为宫颈炎组、低度鳞状上皮内病变(LSIL)组、高度鳞状上皮内病变(HSIL)组、宫颈癌组,分析各组患者HR-HPV和低危型HPV(LR-HPV)感染情况,并检测宫颈病变组织中CALCA基因启动子区CpG位点甲基化情况,分析HR-HPV感染、CALCA基因启动子区CpG位点甲基化与宫颈癌临床特征的关系。结果四组患者HR-HPV阳性率比较差异有统计学意义(χ~2=137.201,P0.001),其中宫颈癌组HR-HPV阳性率最高;四组患者LR-HPV阳性率比较差异无统计学意义(χ~2=4.123,P=0.248);四组CALCA基因启动子区CpG位点甲基化率比较差异具有统计学意义(χ~2=153.190,P0.001),其中宫颈癌组甲基化率为80.00%(36/45); HR-HPV阳性宫颈癌患者临床分期、淋巴结转移与HR-HPV阴性患者比较差异有统计学意义(P0.05); CALCA基因启动子区CpG位点甲基化宫颈癌患者肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移与非甲基化患者比较差异有统计学意义(P0.05)。结论宫颈癌组HR-HPV阳性率较高,HR-HPV感染及CALCA基因启动子区CpG位点甲基化与宫颈癌发生和发展有关,对临床宫颈癌诊断具有重要作用。     

宫颈癌发病过程中相关基因甲基化的研究进展

<正>研究证实,宫颈癌与人乳头瘤病毒(HPV)感染相关,宫颈液基薄层细胞检测(TCT)联合高危人乳头瘤病毒(HR-HPV)筛查的普及极大的提高了筛查出宫颈病变的敏感性。但HPV阳性多提示短暂的感染,对预测宫颈癌的发生价值相对较低。大量研究发现,基因启动子区CpG岛甲基化能致其表达沉     

子宫内膜癌中PR基因表达缺陷及其启动子区CpG岛甲基化的研究

[目的]研究子宫内膜癌中孕激素受体亚型PRA、PRB表达与其启动子区甲基化状态的关系,探讨子宫内膜癌组织、细胞分子变化特征及孕激素受体亚型表达下调的机制。[方法](1)应用免疫组化SP法检测子宫内膜癌组织中PRA、PRB蛋白的表达。(2)应用甲基化特异性PCR检测子宫内膜癌组织及经5-杂氮脱氧胞苷(5′-aza-2′-deoxyóytidine ADC)处理前后子宫内膜癌Hec-1-B细胞系中PRA、PRB的甲基化状态。(3)应用免疫印迹法检测ADC处理Hec-1-B细胞系前后PRA、PRB蛋白的表达。[结果](1)与正常子宫内膜组织比较:PRA蛋白在高、中低分化子宫内膜癌组织中表达差异无统计学意义;PRB蛋白在高分化子宫内膜癌组织中表达无明显降低,差异无统计学意义,在中低分化子宫内膜癌组织中表达明显降低,差异有统计学意义。(2)与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中,PRA启动子区CpG岛甲基化率较低,差异无统计学意义,PRB启动子区CpG岛甲基化率较高,差异有统计学意义,与组织分化程度有关,与病理类型及有无淋巴结转移和有无肌层浸润无关;子宫内膜癌Hec-1-B细胞系中,加入ADC前PRA出现非甲基化条带,PRB出现甲基化条带,加入ADC后,PRA非甲基化条带不变,PRB甲基化条带消失。(3)子宫内膜癌Hec-1-B细胞系中加入不同浓度ADC后,PRA蛋白表达无明显改变,PRB蛋白表达不同程度增加。[结论]子宫内膜癌组织以及Hec-1-B细胞系中,存在PR基因异常甲基化,与PR表达下调关系密切,编码PR基因启动子的选择性B亚型甲基化,导致了PRB的失活,继而PRB蛋白表达下降或消失,可能参与了子宫内膜癌的形成。ADC可通过去甲基化作用使PRB恢复表达,可能提高子宫内膜癌的临床内分泌治疗效果。     

FAM19A4基因启动子DNA甲基化对宫颈病变的诊断价值研究

目的探讨序列相似家族19成员A4(FAM19A4)基因启动子DNA甲基化水平在不同宫颈病变中的差异以及对宫颈癌和癌前病变的诊断价值。方法收集188例不同阶段宫颈病变的宫颈细胞样本,其中正常宫颈组65例,低度鳞状上皮内病变(LSIL)组33例,高度鳞状上皮内病变(HSIL)组56例,宫颈癌组34例。用靶向二代测序法检测FAM19A4基因启动子DNA甲基化的表达水平,分析不同组别甲基化水平差异及对宫颈病变的诊断价值。结果宫颈癌组、HSIL组、LSIL组及正常宫颈组FAM19A4基因启动子DNA甲基化水平的中位数分别为18.89、11.39、9.72、8.89,宫颈癌组明显高于HSIL组、LSIL组及正常宫颈组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。FAM19A4基因启动子DNA甲基化水平与宫颈病变程度呈正相关,相关系数为0.521(P<0.05)。FAM19A4基因启动子DNA甲基化诊断宫颈癌的灵敏度为82.35%,特异度为86.15%,ROC曲线下面积为0.91。结论宫颈癌和HSIL患者的FAM19A4基因启动子DNA甲基化水平异常增高,该指标对宫颈癌具有一定诊断价值。     

人组织样品中SNCG基因CpG岛甲基化拷贝数定量分析

目的 建立准确测定肿瘤组织中SNCG基因CpG岛甲基化拷贝的含量的方法.方法 利用亚硫酸氢钠修饰-克隆测序法确定胃组织该CpG岛中关键性CpG位点,然后利用限制性内切酶建立了测定该位点甲基化状态的分析法(COBRA),再利用变性高效液相色谱技术进行定量.结果 对2个肿瘤细胞系、2个正常人胃黏膜样品、2对原发性胃癌及其癌旁非癌组织进行分析发现,在该CpG岛的16个CpG位点中,-88位等5个CpG位点的甲基化状态与整个CpG岛的甲基化状态一致;利用限制性内切酶Acil能够区分该位点甲基化状态:在该位点未甲基化时(GTGG)不能酶切,而甲基化时(GCGG)酶切敏感;在变性高效液相色谱仪上甲基化片段和非甲基化片段能够完全分离;根据色谱峰面积可知两者的比例,在1.25%～100%范围内有良好的线性关系,重现性较好;对克隆测序样品进行限制性内切酶-变性高效液相色谱测定,结果与克隆测序一致.结论 建立的限制性内切酶-变性高效液相色谱法能够定量测定SNCG基因CpG岛甲基化.     

配对盒家族基因1甲基化状态与宫颈组织病变的相关性研究

目的：探讨定量测定配对盒家族基因1（PAX1）甲基化状态与宫颈组织病变的相关关系。方法：收集正常宫颈组织20例、宫颈上皮内瘤变CINI组织50例、CINII组织50例、CINIII组织50例和宫颈癌组织50例。采用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation specific PCR,MSP）分析宫颈病变组织中PAX1基因启动子区甲基化状态,结合定量PCR（real time-PCR）检测PAX1mRNA表达情况行综合分析。结果：宫颈癌组织中PAX1基因启动子甲基化率达94%（47/50）,CINI组织中PAX1基因启动子甲基化率达40%（20/50）,CINII 52%（26/50）,CINIII 84%（42/50）,而正常对照组织均无甲基化状态（P〈0.05）。不同临床分期的宫颈癌组织PAX1甲基化率也不尽相同（P〉0.05）,病理组织学分化程度不同,PAX1甲基化率不同,呈负向相关性（P〈0.05）。50例甲基化的宫颈癌组织中有PAX1mR N A表达,随着临床分期升级,PAX1mR N A表达增加,有统计学意义（P〈0.05）;而不同组织分化程度的PAX1mR N A表达量差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：DNA修复因子PAX1甲基化状态可能与子宫颈癌的病因学发生存在相关关系,在临床筛查和宫颈癌的早期诊断中可能具有潜在的应用价值。     

维吾尔族宫颈鳞癌C/EBPα基因甲基化意义

目的探讨维吾尔族宫颈鳞癌C/EBPα基因（CCAAT/enhancer-binding proteinαgene）启动子区甲基化的意义。方法收集19例维吾尔族宫颈鳞癌组织和17例宫颈正常组织,提取基因组DNA,用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术（MALDI-TOF）检测C/EBPα基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果 （1）C/EBPα基因启动子区CpG岛甲基化程度在19例维吾尔族宫颈鳞癌病例组与17例对照组中各为（0.137 1±0.088 36）与（0.115 6±0.087 28）,差异有统计学意义（Z=-2.840,P=0.005）;（2）维吾尔族宫颈鳞癌病例组C/EBPα基因启动子区CpG₁、CpG₅和CpG₁4.15甲基化程度各为（0.095 9±0.053 16）（、0.072 1±0.025 07）和（0.261 3±0.050 83）,明显高于对照组的（0.068 1±0.076 09）（、0.044 7±0.026 25）和（0.191 7±0.070 69）,差异有统计学意义（P<0.05）;（3）患者年龄、高危型人类乳头瘤病毒16（HPV16）感染与C/EBPα基因启动子区CpG岛高甲基化状态无关（P>0.05）。结论 C/EBPα基因启动子区CpG岛、尤其是CpG₁、CpG₅和CpG₁4.15的高甲基化状态可能导致该基因沉默,从而促进维吾尔族宫颈鳞癌的发生发展。     

胃癌RUNX3基因甲基化及其蛋白表达临床意义的研究

目的:观察胃癌组织中RUNX3基因启动子区甲基化状态及其对蛋白表达的影响,并分析甲基化及蛋白表达与临床病理特征的关系。方法:采用甲基化特异性定量PCR检测胃癌组织及相应癌旁正常组织中RUNX3的甲基化状态。应用Western Blot法检测RUNX3蛋白表达情况。结果:162例胃癌组织及相应癌旁组织中RUNX3基因甲基化阳性率分别为77.8%(126/162)、38.9%(63/162)(P<0.001)。RUNX3蛋白表达下调/缺失率分别为81.5%(132/162)、12.3%(21/162)(P<0.001)。RUNX3基因甲基化阳性率与胃癌的临床分期、组织分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移具有相关性(P<0.05),RUNX3蛋白表达与胃癌的组织分化程度、淋巴结转移具有相关性(P<0.05)。结论:RUNX3甲基化及其蛋白表达与胃癌的发生发展关系密切,并且甲基化影响其蛋白表达。     

基因LSM2甲基化在上皮性卵巢癌发病中的作用研究

目的:检测上皮性卵巢癌患者肿瘤组织DNA中基因LSM2启动子区CpG岛(CpG island,CGI)的甲基化状态,探讨其在上皮性卵巢癌发病机制中的作用。方法:选取50例上皮性卵巢癌患者和25例卵巢良性病变患者作为实验组和对照组,提取肿瘤组织DNA,用Taqman实时荧光定量PCR(MethyLight)方法检测基因LSM2启动子区CGI在肿瘤组织DNA中的甲基化状态。结果:上皮性卵巢癌和卵巢良性病变患者肿瘤组织DNA中,基因LSM2启动子区CGI的甲基化率分别为10%(5/50)和32%(8/25),与卵巢良性病变患者相比,上皮性卵巢癌患者基因LSM2启动子区CGI的甲基化程度降低,差异具有统计学意义(χ2=5.318,P<0.05)。结论:基因LSM2启动子区CGI在上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中呈现低甲基化改变,有可能成为新的上皮性卵巢癌特异性的低甲基化肿瘤标志物。     

宫颈癌变中叶酸缺乏与脆性组氨酸三联体基因表达异常的相互作用

目的 探讨叶酸缺乏与脆性组氨酸三联体(FHIT)基因异常表达在宫颈癌发生发展中的相互作用。方法 选取经病理学确诊的宫颈炎症(CI)患者80例、低度宫颈上皮内瘤样变(CINⅠ)患者55例、高度宫颈上皮内瘤样变(CINⅡ/Ⅲ)患者55例以及宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者64例作为研究对象。采用微生物法测定其血清叶酸水平、甲基化特异性PCR检测FHIT基因CpG岛甲基化状况。Western blot法检测宫颈组织中FHIT蛋白的表达水平。同时采用体外细胞试验方法, 对宫颈癌细胞CaSki(HPV16阳性)进行叶酸干预, 检测不同叶酸浓度下的相关指标的变化。利用SPSS 17.0软件进行相关资料的χ²检验、Kruskal-Wallis检验、Spearman秩相关分析, 应用相加模型进行交互作用评价。结果 随着宫颈病变的加重, 血清叶酸含量逐渐降低(H=59.08, P<0.001), FHIT基因CpG岛甲基化率逐渐升高(趋势检验χ²=28.34, P<0.001), FHIT蛋白表达量逐渐降低(H=50.93, P<0.001)。血清叶酸含量与FHIT蛋白表达量呈正相关(r=0.213, P=0.001), 在CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ、SCC组中两者均呈现正相加交互作用。细胞试验显示, 随着叶酸浓度增加, 宫颈癌细胞的增殖抑制率(r=0.98, P<0.001)和凋亡率(r=0.99, P<0.001)逐渐增高, FHIT基因CpG岛甲基化程度逐渐减弱, FHIT蛋白的表达量逐渐升高(r=0.97, P<0.001)。结论 叶酸缺乏和FHIT蛋白异常低表达均可增加宫颈癌和癌前病变的发生风险, 两者在宫颈癌变中存在正相加交互作用。     

P16基因启动子在脑胶质瘤患者中的异常甲基化及意义

目的探讨脑胶质瘤患者肿瘤与血浆标本P16基因启动子区CpG岛的甲基化状态及其与临床的关系,分析脑胶质瘤的可能发生机制及早期诊断方法。方法用甲基化特异性PCR对40例脑胶质瘤患者肿瘤及血浆标本P16基因启动子区进行甲基化检测。结果 40例脑胶质瘤标本的P16基因启动子区异常甲基化率为35%(14/40),相应血浆标本的P16的异常甲基化检出率为25%(10/40),两者相比差异无显著性(p>0.05)。20例对照组脑组织标本的P16基因甲基化率为5%(1/20),与胶质瘤标本比较差异具有统计学意义(p<0.05)。P16基因启动子区的异常甲基化与患者年龄、性别、肿瘤病理类型、恶性程度的差异无统计学意义(p>0.05)。结论 P16基因启动子区CpG岛的异常甲基化在脑胶质瘤的发生中起着重要作用,检测血浆标本的P16的异常甲基化对于脑胶质瘤早期诊断具有重要意义。     

抑癌基因ING_1、P21/WAF_1、P53蛋白在宫颈癌中的表达

目的: 研究ING1、P21 /WAF1、P53基因蛋白在宫颈癌组织中的表达、意义及相互关系。方法: 对 69例宫颈癌鳞状上皮组织、21例宫颈原位癌组织、18例宫颈不典型增生组织应用免疫组化法, 检测P33ING1、P21 /WAF1 和P53的表达情况,并选择 10例正常宫颈组织作对照。分析各指标间的相关性。结果: P33ING1在正常宫颈组织中表达全部为阳性, 而宫颈不典型增生组织中P33ING1的阳性表达率为 72 2% (13 /18); 宫颈原位癌组织中P33ING1的阳性表达率为 57 1% (11 /21); 宫颈浸润癌组织中P33ING1的阳性表达率为 59 4% ( 41 /69 )。PING1在原位癌、浸润癌的表达明显低于正常组织和不典型增生 (P<0 01 )。P33ING1与P21 /WAF1、P53表达有相关性 (P<0 01)。结论: ING1 是抑癌基因, 其蛋白P33ING1在宫颈癌中低表达, 对宫颈癌的发生、发展起重要作用。P33ING1、P21 /WAF1、P53表达具有相关性。     

n-3多不饱和脂肪酸对肥胖小鼠瘦素基因启动子区DNA甲基化的影响

目的 从基因启动子区DNA甲基化环节, 探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3 polyunsaturated fatty acids, n-3 PUFAs)对肥胖状态下瘦素表达的表观遗传调控机制。方法 3~4周龄C57BL/6J雄性小鼠30只, 随机被分为3组(每组10只), 分别给予高脂饲料、鱼油n-3 PUFAs高脂饲料(脂肪含量均为34.9%, 供能比为40%)以及正常脂饲料(脂肪含量为4.3%, 供能比为10%)喂养4个月以诱导肥胖。喂养结束时取性腺周围脂肪组织, 应用RT-PCR检测脂肪组织瘦素mRNA水平;应用亚硫酸盐修饰直接测序(bisulfite sequencing-PCR, BSP)法检测瘦素基因启动子区CpG甲基化程度;应用染色质免疫共沉淀-荧光定量PCR(CHIP-RT-PCR)技术测定瘦素基因启动子区结合的DNA甲基化转移酶(DNMTs)、甲基化CpG结合蛋白2(MECP-2)以及RNA聚合酶2(Poly II)的变化。结果 与正常脂饲料组小鼠相比, 脂肪组织中瘦素mRNA 表达在高脂饲料诱导肥胖小鼠明显增加, 而在鱼油高脂饲料组肥胖小鼠无变化。基因启动子区甲基化结果显示, 高脂肥胖小鼠瘦素基因启动子区CpG位点甲基化程度、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和MECP-2含量均较正常饲料组显著升高, 并伴随Poly II含量减少;而鱼油高脂饲料组瘦素基因启动子区结合DNMT3a、DNMT3b and MeCP-2增加, 但启动子区MECP-2含量与高脂饲料组比缺有显著降低, DNMT1和Poly II以及CpG位点甲基化程度无改变。结论 肥胖状态下瘦素表达变化可能与基因启动子区DNA甲基化以及结合的相关调控蛋白、RNA聚合酶等有关;n-3 PUFAs对瘦素基因表达的调节也可能是通过对这些蛋白的影响而实现的。     

乳腺癌组织中APC和Bikunin基因异常甲基化

目的 探讨 APC 和 Bikunin 基因甲基化状态与乳腺癌临床病理特征之间的相关性.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应法检测 152 例乳腺癌组织中 APC 和 Bikunin 基因的甲基化状态.结果 乳腺癌组织中 APC 基因启动子区 CpG 岛甲基化频率为 40.8%,其甲基化状态与肿瘤大小有相关(X2=4.041;P=0.044),但是与患者年龄、生存期、肿瘤的病理类型、组织学分级、临床分期、淋巴结转移以及雌激素或孕激素受体等状态无相关性;Bikunin 基因启动子区 CpG 岛甲基化频率为 24.6%,与肿瘤的临床病理学特征无相关性.结论 APC 和 Bikunin 基因启动子区 CpG 岛异常甲基化是乳腺癌组织中的频发事件,与乳腺癌的预后无相关性.