白血病细胞内环核苷酸变化及单抗对其调控研究

本文报道采用放射免疫法检测白血病患者外周血淋巴细胞、白血病瘤细胞株细胞以及单克隆抗体MCAb作用后的瘤细胞株细胞内CAMP、CGMP含量的变化。     

二甲双胍增强放射对CT26WT细胞及小鼠移植瘤效应机制研究

目的 探讨二甲双胍(Met)联合放射对结肠癌CT26WT细胞及移植瘤的抑制作用及其机制研究。方法 利用CellTiter-Glo化学发光细胞活性试验检测0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L的Met对CT26WT细胞活力影响,克隆形成试验检测对照组、10.0μmol/L的Met、15Gy照射、15Gy+10.0μmol/L的Met组对CT26WT细胞的增殖抑制作用。构建Bablc小鼠皮下移植瘤模型,肿瘤体积>150mm³随机分对照组、单纯15Gy照射、Met组、15Gy+Met组,照射前24h给予小鼠750 mg/kg的Met,定期测量肿瘤体积及小鼠体重绘制肿瘤生长曲线及生存时间曲线。蛋白质印迹法检测上述处理条件下CT26WT细胞及移植瘤组织中P-H2AX、Sting蛋白表达;并利用免疫组化方法检测移植瘤组织中CD8a (+) T细胞的浸润情况。结果 0、0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L的Met的相对细胞存活率分别为100%、87.9%、87.8%、87.3%、76.5%(P<0.05),其中10.0μmol/L较5.0μmol/L抑制作用更强(P<0.001)。克隆形成实验结果显示对照组、Met组、15Gy组、15Gy+Met组细胞克隆形成率分别为34.0%、24.0%、22.3%、14.0%(P<0.001)。与对照组比较,Met组、15Gy组、15Gy+Met组细胞内Sting蛋白表达分别增加2.99、1.37、4.41倍(P<0.001、<0.01、<0.001)。15Gy+Met组P-H2AX蛋白表达较15Gy组增加1.43倍(P<0.001)。移植瘤体积15Gy+Met组较对照组生长缓慢,最终结果为(1007.0±388.5)、(2639.0±242.9) mm³,(P<0.05),15Gy+Met组小鼠总生存期较对照组增加(48d︰32d,P<0.001)。移植瘤组织中P-H2AX、Sting蛋白表达量在15Gy+Met组较对照组分别增加8.8、1.6倍(P均<0.001)。15Gy+Met组CD8a (+) T细胞浸润在较对照组明显增高(P<0.01)。结论 Met与放射联合能协同抑制结肠癌细胞增殖、克隆形成,可能作用机制是通过加重DNA损伤、激活Sting信号通路导致肿瘤组织中CD8a (+) T细胞增加加强对肿瘤细胞的杀伤作用。     

二甲双胍增强放射对CT26WT细胞及小鼠移植瘤效应机制研究

目的 探讨二甲双胍(Met)联合放射对结肠癌CT26WT细胞及移植瘤的抑制作用及其机制研究。方法 利用CellTiter-Glo化学发光细胞活性试验检测0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L的Met对CT26WT细胞活力影响,克隆形成试验检测对照组、10.0μmol/L的Met、15Gy照射、15Gy+10.0μmol/L的Met组对CT26WT细胞的增殖抑制作用。构建Bablc小鼠皮下移植瘤模型,肿瘤体积>150mm³随机分对照组、单纯15Gy照射、Met组、15Gy+Met组,照射前24h给予小鼠750 mg/kg的Met,定期测量肿瘤体积及小鼠体重绘制肿瘤生长曲线及生存时间曲线。蛋白质印迹法检测上述处理条件下CT26WT细胞及移植瘤组织中P-H2AX、Sting蛋白表达;并利用免疫组化方法检测移植瘤组织中CD8a (+) T细胞的浸润情况。结果 0、0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L的Met的相对细胞存活率分别为100%、87.9%、87.8%、87.3%、76.5%(P<0.05),其中10.0μmol/L较5.0μmol/L抑制作用更强(P<0.001)。克隆形成实验结果显示对照组、Met组、15Gy组、15Gy+Met组细胞克隆形成率分别为34.0%、24.0%、22.3%、14.0%(P<0.001)。与对照组比较,Met组、15Gy组、15Gy+Met组细胞内Sting蛋白表达分别增加2.99、1.37、4.41倍(P<0.001、<0.01、<0.001)。15Gy+Met组P-H2AX蛋白表达较15Gy组增加1.43倍(P<0.001)。移植瘤体积15Gy+Met组较对照组生长缓慢,最终结果为(1007.0±388.5)、(2639.0±242.9) mm³,(P<0.05),15Gy+Met组小鼠总生存期较对照组增加(48d︰32d,P<0.001)。移植瘤组织中P-H2AX、Sting蛋白表达量在15Gy+Met组较对照组分别增加8.8、1.6倍(P均<0.001)。15Gy+Met组CD8a (+) T细胞浸润在较对照组明显增高(P<0.01)。结论 Met与放射联合能协同抑制结肠癌细胞增殖、克隆形成,可能作用机制是通过加重DNA损伤、激活Sting信号通路导致肿瘤组织中CD8a (+) T细胞增加加强对肿瘤细胞的杀伤作用。     

喉鳞状细胞癌中NF45表达及其对肿瘤细胞辐射敏感性的影响北大核心CSCD

目的探究双链RNA结合蛋白核因子(NF45)在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达,及其对LSCC细胞辐射敏感性的影响及机制。方法实时反转录PCR(RT-qPCR)和免疫组化染色检测LSCC及癌旁组织内NF45表达。将NF45-shRNA慢病毒转染至Hep-2细胞,RT-qPCR和蛋白质印迹法(WB)测定细胞转染效果。将Hep-2细胞分为对照组、2 Gy组、sh-NC+2 Gy组和sh-NF45+2 Gy组,进行慢病毒感染和2 Gy X射线照射处理,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡率。采用mCherry-EGFP-LC3B处理各组Hep-2细胞,免疫荧光染色检测细胞自噬水平,WB测定细胞内自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin-1、p62蛋白表达水平。结果NF45在LSCC组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01)。感染NF45-shRNA的Hep-2细胞中NF45 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均显著低于对照组和sh-NC组(P值均<0.05)。与对照组比较,2 Gy组、sh-NC+2 Gy组及sh-NF45+2 Gy组细胞增殖活性均降低,细胞凋亡率增加,细胞内自噬溶酶体增多,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,Beclin-1蛋白相对表达量增加,p62蛋白相对表达量减少(P值均<0.05)。与2 Gy组比较,sh-NF45+2 Gy组细胞增殖活性降低且细胞凋亡率增加,同时,细胞内自噬溶酶体增多,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,Beclin-1蛋白相对表达量增加,p62蛋白相对表达量减少(P值均<0.05)。结论NF45在LSCC组织中表达升高,靶向下调NF45表达能够抑制LSCC细胞增殖活性,促进细胞凋亡,提高肿瘤细胞的辐射敏感性,该机制可能与调控细胞自噬水平有关。     

SEA诱导Hep-2细胞凋亡的机制研究

目的：观察葡萄球菌肠毒素ASEA对Hep－2细胞株诱导凋亡机制。方法：应用MTT比色法和流式细胞术检测SEA对Hep－2细胞增殖抑制率和对细胞增殖周期的影响,同时应用同位素法检测Hep－2细胞内CAMP水平。结果：SEA对Hep－2细胞株有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。流式细胞术分析,SEA能阻止G1期细胞向S期的过程,G1期细胞堆积。同位素分析,Hep－2细胞内CAMP水平下降。结论：SEA能诱导Hep－2细胞凋亡,抑制Hep－2细胞增殖,具有细胞毒性效应。     

脑胶质瘤不同照射方案生物效应的实验研究

目的 通过对人脑多形性胶质母细胞瘤(BT325细胞系)裸小鼠移植瘤不同分割模式照射后生物效应的实验研究,加深对人脑胶质瘤放射反应生物学特性认识,为临床设计照射计划、制定合理分次治疗方案提供实验依据.方法 对BT325细胞系裸小鼠移植瘤进行单次10、20、30、40、60 Gy照射和2 Gy每周5次每天照射、3 Gy每周3次隔天照射、3 Gy每周5次每天照射、4 Gy每周3次隔天照射,总剂量分别为125、114、126、112 Gy.用肿瘤生长曲线评价剂量效应关系并测定肿瘤体积倍增时间.取贴壁生长的指数生长期BT325细胞,用生长曲线测定细胞倍增时间,细胞克隆形成分析法绘制细胞存活曲线(照射剂量为0、1、2、4、6、8、10 Gy)计算曲线参数值,彗星分析法测定DNA单链断裂半修复时间(T1/2).结果 单次照射各剂量点均不能有效控制肿瘤.2 Gy5次/周和3 Gy3次/周治疗方案对人脑胶质瘤实体瘤也无明显治疗效果.增加分次剂量可使脑胶质瘤实体肿瘤有较明显的消退,其中4 Gy3次/周方案好于其他方案但仍未能达到治愈肿瘤的效果.表明对肿瘤干细胞的控制不理想.各项生物学参数的测定结果:BT325细胞倍增时间为30.16 h,裸小鼠移植瘤肿瘤倍增时间为43 d;细胞存活曲线LQ模型拟合的α=0.360 Gy-1、β=0.057 Gy-2,多靶单击模型拟合的D0=1.394 Gy、Dq=2.127 Gy、SF2=0.714;5 Gy照射DNA单链断裂的T1/2=9.999 min.结论 本实验从实证实验角度印证了临床上脑胶质瘤是一种放射耐受性较高的肿瘤的看法.研究结果提示增高分割剂量有可能提高肿瘤的近期疗效(使肿瘤消退率增加),但如何提高对肿瘤干细胞的控制还需进一步深入研究.各项生物学参数测定结果提示脑胶质瘤细胞内在放射敏感性较差.     

NOX家族在X射线诱导PC-3细胞损伤中的作用

目的:研究NOX家族在X射线诱导人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞损伤中的作用,寻找放疗增敏的潜在靶点。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测0、1、2、4和12 Gy X射线照射后24、48和96 h PC-3细胞存活率;采用DCFH-DA法检测0、1和4 Gy X射线照射后15、30、60和120 min时PC-3细胞中ROS的生成量;采用Western blot方法检测0、1和4 Gy X射线照射后PC-3细胞中NOX1～NOX5 5个亚型蛋白的表达情况。结果:1、2、4和12 Gy X射线照射PC-3细胞后96 h,与未照射组比较,PC-3细胞的存活率明显下降(P0.05)。1和4 Gy X射线照射PC-3细胞60 min后,细胞内ROS水平最高,NOX抑制剂DPI及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理可以减少ROS的生成。1和4 Gy X射线照射后PC-3细胞中NOX1、NOX2和NOX5蛋白表达显著增加。结论:X射线诱导NOX1、NOX2和NOX5蛋白过表达,细胞内产生过量的ROS是X射线诱导PC-3细胞损伤的机制之一。     

SEA诱导Hep-2细胞凋亡的机制研究

目的:观察葡萄球菌肠毒素ASEA对Hep-2细胞株诱导凋亡机制.方法:应用MTT比色法和流式细胞术检测SEA对Hep-2细胞增殖抑制率和对细胞增殖周期的影响,同时应用同位素法检测Hep-2细胞内CAMP水平.结果:SEA对Hep-2细胞株有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.流式细胞术分析,SEA能阻止G1期细胞向S期的过程,G1期细胞堆积.同位素分析,Hep-2细胞内CAMP水平下降.结论:SEA能诱导Hep-2细胞凋亡,抑制Hep-2细胞增殖,具有细胞毒性效应.     

喉鳞状细胞癌中NF45表达及其对肿瘤细胞辐射敏感性的影响

目的探究双链RNA结合蛋白核因子(NF45)在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达, 及其对LSCC细胞辐射敏感性的影响及机制。方法实时反转录PCR(RT-qPCR)和免疫组化染色检测LSCC及癌旁组织内NF45表达。将NF45-shRNA慢病毒转染至Hep-2细胞, RT-qPCR和蛋白质印迹法(WB)测定细胞转染效果。将Hep-2细胞分为对照组、2 Gy组、sh-NC+2 Gy组和sh-NF45+2 Gy组, 进行慢病毒感染和2 Gy X射线照射处理, CCK-8法检测细胞增殖活性, 流式细胞术测定细胞凋亡率。采用mCherry-EGFP-LC3B处理各组Hep-2细胞, 免疫荧光染色检测细胞自噬水平, WB测定细胞内自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比值及Beclin-1、p62蛋白表达水平。结果 NF45在LSCC组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01)。感染NF45-shRNA的Hep-2细胞中NF45 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均显著低于对照组和sh-NC组(P值均<0.05)。与对照组比较, 2 Gy组、sh-NC+2 Gy...     

60C0γ射线诱发人支气管上皮细胞恶性转化模型的建立

目的:建立γ射线辐射诱导支气管上皮细胞恶性转化模型。方法:永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B经总剂量22 Gy ~(60)Coγ射线分3次照射后进行传代培养,应用平板克隆实验、血清抗性实验、细胞软琼脂集落实验检测该细胞系恶性程度;裸鼠皮下种植辐射细胞检测其成瘤能力,成瘤组织H-E染色及免疫组化进行病理学观察。结果:(1)平板克隆实验表明照射细胞培养至35代后其增殖能力明显增加(P<0.05或P<0.01),血清抗性实验显示照射组细胞在第45代后克隆形成增加(P<0.01),而在照射后50代细胞软琼脂集落的形成能力明显增加(P<0.01),显示BEAS-2B细胞经辐射后出现了恶性转化。(2)皮下种植22 Gy 50代细胞的8只裸鼠50 d后1只成瘤,种植22 Gy 60代辐射细胞的8只裸鼠中有4只成瘤;成瘤组织病理检测及免疫组化证实为上皮细胞癌。结论:成功地建立了~(60)Coγ射线诱导的支气管上皮细胞恶性转化模型。     

生物信息传递与细胞癌变

细胞内存在两类调节细胞生长的基因——生长促进基因(即原癌基因)和生长抑制(诱导终端分化)基因。这些基因编码着生长因子、受体和生物信息传递途径中某些蛋白组份,它们的突变引起编码蛋白功能或表达异常、生物信息传递紊乱,最终导致细胞癌变。细胞内生物信息传递的多种途径是细胞癌变多重性的基础,研究细胞内生物信息传递机制对阐明细胞癌变机理具有重要意义。     

剂量分割模式照射人肺腺癌移植瘤后基因表达谱差异的初步研究

目的 研究总相同照射剂量、不同剂量分割方案对BALB/c-nu裸鼠移植瘤(人肺腺癌细胞系Anip973)基因表达的差异.方法 将移植瘤种鼠的肿瘤组织制备成肿瘤组织块,选择裸鼠右后肢外侧小腿腓肠肌处接种,建立移植瘤裸鼠模型.待肿瘤直径达1.0 cm时将48只裸鼠分成4个组:未照射空白对照组、2 Gy30次常规照射组(2 Gy组)、6 Gy10次大分割组(6 Gy组)、10 Gy6次大分割组(10 Gy组).大分割组均在2周内完成,所有照射完成后继续观察裸鼠1个半月.采用基因谱芯片技术检测4个组移植瘤细胞的基因表达差异,并进行实时PCR验证.结果 6、10 Gy组较2 Gy组上调了抑制细胞增殖和诱导凋亡的基因如Bax和BCL2L10,下调了促进细胞增殖基因如c-myc和EGF、抗凋亡基因以及XRCCA、RAD21、RAD23B等DNA损伤修复基因.PCR证实6 Gy10次组c-myc基因表达丰度明显低于2 Gy30次组和10 Cy6次组,分别为2.9%、5.6%、4.8%(P=0.000;P=0.002);10 Gy6次组c-myc基因水平相对于2 Gy30次组也有下降(P=0.069).结论 两个大分割方案较常规分割方案对BALB/c-nu裸鼠移植瘤(人肺腺癌细胞系Xnip973)在基因水平上生长抑制显著,6 Gy10次分割方案较10 Gy6次分割方案有更强的生长抑制作用.     

照射存活后代的鼻咽癌细胞株放射生物学特性研究

目的　了解鼻咽癌细胞系CNE -2Z具有淋巴道转移倾向的克隆株H 5照射存活后代的放射敏感性和体内、体外细胞生长特性。方法　采用克隆形成率检测H 5及照射存活后代 2组癌细胞的放射敏感性 ;体外细胞增殖实验结晶紫染色法检测体外细胞增殖能力 ;用瘤细胞裸鼠体内移植观察 2组细胞的体内增殖、转移能力。结果　H5细胞照射存活后代的放射敏感性比未处理的H5细胞低 ,处理前 2Gy存活率 (SF2 )为 0 .3 0 ,平均致死剂量 (D0 )为 1.93Gy ,处理后细胞的SF2为 0 .49,D0 为 2 .56Gy ;体外细胞增殖减慢 ,有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;体内细胞增殖减慢 ,有显著性差异 (P <0 .0 5) ;成瘤率减小 ,转移率增高 ,体积倍增时间延长 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5)。结论　照射存活后代的细胞放射敏感性降低 ,体内、体外细胞增殖减慢。     

食管小细胞癌(附1例光镜、电镜及免疫组化观察)

对1例食管小细胞癌进行了光镜、电镜及免疫组化观察。肿瘤的组织学特点酷似燕麦细胞癌,但NSE 染色阴性,电镜下瘤细胞内亦未见神经分泌颗粒。作者认为若仅靠光镜观察而未做电镜检查时,将此类肿瘤命名为食管小细胞癌较为妥当。电镜下瘤细胞内有神经分泌颗粒的食管小细胞癌为燕麦细胞癌,无神经分泌颗粒者为储备细胞癌,二者可伴有或不伴有鳞或(和)腺样分化。本文观察结果支持食管小细胞癌起源于全能干细胞(totipotent primitive cell)的观点。     

鼻咽癌中自发凋亡与临床放射敏感性的研究

目的探讨鼻咽癌组织中细胞自发凋亡在预测临床放射敏感性中的意义。方法对38例初治、无远处转移、放疗前鼻咽癌患者活检标本,采用TUNEL法检测细胞自发凋亡,临床观测患者放疗过程中鼻咽部肿瘤的消退情况。结果自发凋亡率与鼻咽癌瘤体的消退率呈显著正相关(放疗剂量为40Gy时,γ=0.836;放疗剂量为70Gy时,γ=0.909;P<0.01)。患者性别、年龄及分期与鼻咽癌瘤体的消退率均无相关性(P>0.05)。结论鼻咽癌中细胞自发凋亡率可以作为鼻咽癌临床放射敏感性可能的预测指标。     

照射后裸鼠人体鼻咽癌移植瘤(NPC—837)的生长延迟

本文报道应用裸鼠人体鼻咽癌移植瘤(NPC—837)和流式细胞分析术研究不同剂量照射后肿瘤体积生长的延迟以及不同时相细胞在细胞周期中分布的变化。照射5.0Gy、7.5Gy、10Gy、15Gy和20Gy后,肿瘤体积分别降到其对照组的80％、70％、50％、35％和10％;特别是在照射20Gy后,肿瘤体积始终未恢复到对照组水平。同样地,照射后肿瘤生长延迟时间与照射剂量之间呈现严格的依赖效应。作者报告照射后平均G_2细     

逆转录病毒介导瘤内基因转移治疗大鼠脑肿瘤

小鼠逆转录病毒作为基因转移载体仅感染增殖并合成DNA的细胞.这提示逆转录病毒基因转移能将目的基因靶向整合至主要由静止、非增殖期细胞组成器官的恶性肿瘤细胞内,而相邻的非分裂细胞不受影响.本文报道了利用该机制和单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(HStk)/Ganciclovir(GCV)基因转移系统,将HStk基因选择性地导入大脑恶性肿瘤细胞内,随后投用GCV,研究其抗瘤效应和瘤内基因转导的动力学.     

蛋白质磷酸化与细胞癌变

机体内物质代谢的重要调节机理之一,是通过细胞内多种蛋白激酶的磷酸化、脱磷酸化反应来控制的。CAMP、CGMP、Ca~(++)、钙调素、膜磷脂等作为细胞膜受体的信息传递物质,均通过相应的蛋白激酶的磷酸化系统而表现出各种生物效应。近年来发现,肿瘤病毒的致癌基因(ONC)产物往往是磷酸化修饰后的活化型蛋白激酶。这类蛋白激酶与通常的蛋白     

"彗星"分析法检测人癌裸鼠移植瘤的放射敏感性

目的　探讨“彗星”分析法应用于人实体肿瘤放射敏感性检测的可能性。方法　应用“彗星”分析法 ,以尾力距之比 (RTM)作为终指标 ,检测人肺腺癌、人食管鳞癌和人鼻咽鳞癌等 3种人癌裸小鼠移植瘤的放射敏感性。裸小鼠移植瘤组织被消化并稀释成细胞浓度为 4× 10 4ml的单细胞悬液后 ,分成对照组 (0Gy)和不同剂量照射组 ,照射组分别给予 2、5、10和 15Gy的 6MVX射线的冰上照射 ,照射后立即进行“彗星”分析。结果　 3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未照射时 (0Gy)的尾力矩 (TM)差异有显著性意义 (F =9.11,P <0 .0 1)。不同剂量 (2、5、10和 15Gy)照射后 ,3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未做校正时的TM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为 :肺腺癌 >食管鳞癌 >鼻咽鳞癌 ,显然与临床一般印象不符 ;而经与对照组进行“本底”校正后的RTM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为 :食管鳞癌 >鼻咽鳞癌 >肺腺癌 ,则符合临床一般印象。结论　①应用“彗星”分析法检测实体肿瘤的放射敏感性 ,尾力矩必须进行“本底”校正 ,即扣除对照组本底误差后的尾力矩才能很好地反映实体肿瘤的放射敏感性差异。②“彗星”分析法可用于检测人体肿瘤组织的放射敏感性。     

三氧化二砷诱导HeLa细胞凋亡与其抑制HPV18 E6表达和端粒酶活性有关

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡时,对14PV18 E6致瘤基因和端粒酶活性的影响。方法 用不同浓度的As2O3作用于HeLa细胞不同时间段后,光镜和电镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞周期改变,MTT法测定细胞生长抑制情况。RT-PCR方法检测HPV18 E6的表达,TRAP-ELISA方法测定细胞内端粒酶活性变化。结果 2μmol／L As2O3处理HeLa细胞48h后,可降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,抑制HPV18 E6的表达,细胞内端粒酶活性明显下降。As2O3对HeLd细胞的这种作用呈时间-剂量依赖关系。结论 As2O3诱导HeLa细胞凋亡可能与其抑制HPV18 E6致瘤基因的表达有关,细胞内端粒酶活性的抑制可能与这种E6致瘤基因的抑制有关。