含人AFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染树突状细胞瘤苗的制备

目的:构建含人AFP基因的腺病毒载体,体外转染树突状细胞,制备树突状细胞肝癌瘤苗.方法: 将AFP基因亚克隆到pIND 载体和Shuttle2载体中,构建穿梭载体Shuttle2-AFP.用PI-Sce Ⅰ和I-CeuⅠ双酶切后将所获AFP基因片段再与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接,构成pAdeno-AFP重组腺病毒载体.其后,用重组腺病毒载体转染HEK293细胞,包装腺病毒表达载体.通过酶切、PCR对腺病毒载体进行鉴定.包装好的重组病毒载体pAdeno-AFP体外感染树突状细胞制备树突状细胞肝癌瘤苗后,FACS分析pAdeno-AFP/DC表面分子的表达,酶联免疫吸附试验法( ELISA) 检测AFP水平.结果: 酶切、PCR鉴定证实,穿梭质粒插入片段为AFP基因.包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒,腺病毒载体内携带AFP基因感染树突状细胞,pAdeno-AFP/DC能高水平的表达CD1a,CD11c,CD80,CD86以及HLA-DR,并分泌较高水平的AFP.结论: 构建成功的含AFP腺病毒载体可以在树突状细胞中表达AFP,为DC瘤苗的进一步研究奠定了基础.     

含人AFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染树突状细胞瘤苗的制备

目的：构建含人AFP基因的腺病毒载体,体外转染树突状细胞,制备树突状细胞肝癌瘤苗。方法：将AFP基因亚克隆到pIND载体和Shuttle2载体中,构建穿梭载体Shuttle2-AFP。用PI—SceⅠ和I—Ceu Ⅰ双酶切后将所获AFP基因片段再与线性化的腺病毒载体pAdeno—X连接,构成pAdeno—AFP重组腺病毒载体。其后,用重组腺病毒载体转染HEK293细胞,包装腺病毒表达载体。通过酶切、PCR对腺病毒载体进行鉴定。包装好的重组病毒载体pAdeno—AFP体外感染树突状细胞制备树突状细胞肝癌瘤苗后,FACS分析pAd-eno—AFP／DC表面分子的表达,酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测AFP水平。结果：酶切、PCR鉴定证实,穿梭质粒插入片段为AFP基因。包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒,腺病毒载体内携带AFP基因感染树突状细胞,pAdeno—AFP／DC能高水平的表达CD1a,CD11c,CD80,CD86以及HIA—DR,并分泌较高水平的AFP。结论：构建成功的含AFP腺病毒载体可以在树突状细胞中表达AFP,为DC瘤苗的进一步研究奠定了基础。     

腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞瘤苗的制备

目的:构建含人HBsAg基因的腺病毒载体,体外转染树突状细胞,制备树突状细胞肝癌瘤苗。方法:将HBsAg基因亚克隆到pIND载体和Shuttle2载体中,构建穿梭载体Shuttle2-S。用PI-SceⅠ和I-CeuⅠ双酶切后将所获HBsAg基因片段再与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接,构成pAdeno-S重组腺病毒载体。其后,用重组腺病毒载体转染HEK293细胞,包装腺病毒表达载体。通过酶切、PCR对腺病毒载体进行鉴定。包装好的重组病毒载体pAdeno-S体外感染树突状细胞制备树突状细胞肝癌瘤苗后Westernblot法检测其表达,流式细胞仪检测其能否诱导树突状细胞凋亡。结果:酶切、PCR鉴定证实,穿梭质粒插入片段为HBsAg基因。包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒,腺病毒载体内携带HBsAg基因感染树突状细胞,经Westernblot法鉴定证实能够表达转染基因,并且不会诱导树突状细胞凋亡。结论:构建成功的含HBsAg腺病毒载体可以在树突状细胞中表达HBsAg,为DC瘤苗的进一步研究奠定了基础。     

GM-CSF重组腺病毒转染外周血树突状细胞的研究

目的:利用GMCSF重组腺病毒转染外周血单核细胞,诱导培养树突状细胞(dendriticcell,DC),并与细胞因子培养的DC进行生物学特性的比较。方法:将GMCSF重组腺病毒转染正常人外周血单核细胞,或用重组细胞因子GMCSF,诱导培养获得DC,通过相差显微镜观察DC表面形态变化,FACS分析GMCSF基因转染对DC表面免疫分子表达的影响,Westernblot鉴定GMCSF的表达,ELISA检测IL12分泌水平,MTT法检测DC激发同种异体T细胞增殖的能力。结果:GMCSF重组腺病毒转染外周血单核细胞,能扩增获得DC,该DC高表达CD1a、HLADR、CD80和CD86等免疫分子,并表达细胞因子GMCSF和IL12,对同种异体淋巴细胞有更强的刺激活性。结论:用GMCSF重组腺病毒可从外周血单核细胞中扩增到DC,为DC瘤苗临床应用提供实验基础。     

制备源自HBsAg基因修饰树突状细胞的外切体

目的:制备一种新型负载HBsAg基因的外切体(exosome)瘤苗,并探讨其生物学特性、免疫学功能。方法:运用分子克隆和病毒载体转染HBsAg基因构建AdVHBsAg-DC肝癌瘤苗,采用流式细胞术鉴定转染基因表达;提取exosome;以透射电镜观察、Western blot法鉴定exosome。结果:构建的重组AdVHBsAg腺病毒载体,经PCR和酶切鉴定,结果显示HBsAg基因片段已正确插入腺病毒载体中。包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒。提取的exosome在透射电镜下可观察到直径为50-100nm的膜性微囊,圆形或椭圆形,有完整包膜。Western blot检测结果表明,exosome含有DC的特征分子和HBsAg基因。结论:成功制备并获得HBsAg基因修饰树突状细胞为来源的exosome瘤苗,为治疗乙肝相关肝癌提供新的思路。     

sFv及重组人IFN—α融合基因表达载体的构建及瞬时表达

目的：构建pEGFP-sFv-rhIFN－α表达载体，观察其在成骨肉瘤细胞9901中的瞬时表达。方法：应用PCR方法对各目的基因进行扩增交经测序载体pGEM-T-Easy测序后，以逆转录病毒载体pLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因sFv-rhIFN－α，并将其亚克隆至pEGFP-N3的EcoRI和BamHI位点间，成功构建表达载体pEGFP-sFv-rhIFN－α，并在该载体转梁人成骨肉瘤细胞9901后观察融合蛋白表达情况。结果：酶切鉴定证实sFv-rhIFN－α融合基因片段已克隆到pEGFP-N3的EcoRI和BamHI位点间，并在转梁人成骨肉瘤细胞9901中观察到sFv-rhIFN－α融合基因及绿色荧光蛋白的表达。结论：pEGFP-sFv-rhIFN－α表达载体便于观察转染细胞中sFv-rhIFN－α融合蛋白的表达情况及蛋白定位，为单链抗体基因联合细胞因子基因疗法提供有利条件。     

HSV-TK2重组TNF-α融合基因表达载体的构建及在肝细胞癌细胞中的瞬时表达

目的：构建双特异性细胞因子融合基因表达载体及在肝细胞癌细胞中瞬时表达。方法：应用PCR方法对各目的基因进行扩增并经测序载体pGEM-T-Easy测序后，以逆转录病毒载体pLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因TK-TNF-α，并将其亚克隆至pEGFP-N3的EcoRl和BamHl位点间，成功地构建表达载体pEGFP-TK-TNF-α仅，并在该载体转染人肝细胞癌细胞HCC9204后观察融合蛋白表达情况。结果：酶切鉴定证实TK-TNF-α融合基因片段已克隆到pEGFP-N3的EcoRl和BamHl位点问，并在转染人肝细胞癌细胞7901中观察到TK-TNF-α融合基因绿色荧光蛋白的表达。结论：pEGFP-TK-TNF-α表达载体便于观察转染细胞中融合蛋白的表达情况及蛋白定位，为双特异细胞因子基因疗法提供有利条件。     

AFP基因转染的树突状细胞的生物学特性及靶向性CTL细胞毒作用

目的:观察基因转染的树突状细胞生物学特性及靶向性CTL对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:用重组IL-4和GM-CSF诱导扩增小鼠骨髓来源的单个核细胞,将表达AFP基因的重组腺病毒转染DC(dendriticcells,DC),构建基因转染的DC瘤苗,并免疫C57BL/6小鼠。用流式细胞术(FCS)检测转染前后DC细胞表面分子MHCI、MHCII、LFA、ICAM、B7.1、和B7.2等的变化。取免疫小鼠脾细胞诱导细胞毒性CTL,LDH非放射性细胞毒性试验检测其对不同肿瘤细胞的杀伤作用。用ELISA法检测CTL诱导过程中TNF-α和IFN-γ分泌变化规律。结果:AFP基因转染后的DC分子表面高表达MHCI、MHCII、LFA、ICAM、B7.1、和B7.2等分子,尤其是MHCII、ICAM和LFA分子,与转染前比较具有显著性差异(P<0.05)。与对照组比较,AFP抗原诱导的靶向性CTL对AFP分泌性肿瘤细胞具有更强的杀瘤活性,且在CTL诱导过程中TNF-α和IFN-γ分泌水平较对照组也有显著性差异。结论:AFP基因重组腺病毒修饰的DC能表达高水平的MHCI、MHCII、LFA、ICAM、B7.1、和B7.2等分子,为CTL进一步活化提供了共刺激信号;用该瘤苗免疫C57BL/6J小鼠,能诱导出针对AFP抗原的靶向性CTL,从而实现对AFP分泌性肿瘤细胞的特异性杀伤作用。     

人TNFα真核表达载体的构建及其在人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM中的稳定表达

目的：构建可在真核细胞内表达人肿瘤坏死因子alpha （hTNF-α） 基因的真核表达载体,建立稳定表达hTNF-α基因的细胞模型.方法： 应用RT-PCR 的方法从分离的正常人外周血单核细胞（LPS刺激）中,扩增出hTNF-αcDNA ,连接至载体pMD18-T vector中,经酶切鉴定与序列测定证实;以亚克隆法构建于真核表达载体pBK-CMV的相应酶切位点, 转化至大肠埃希菌DH5α,最后将表达的pBK-hTNFα重组蛋白行SDS-PAGE电泳,并作考马斯亮蓝染色分析,Western blot鉴定;经脂质体Lipofectamine2000转染HepG2/ADM细胞后,经G418筛选,通过ELISA、RT-PCR方法检测其在体外转染肝癌耐药细胞HepG2/ADM后hTNFα基因和蛋白的表达.结果：自正常人外周血单核细胞中克隆的hTNF-αcDNA 成功连接到pMD18-T vector,用BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切、经序列测定证实,与Genbank的序列完全一致;pBK-hTNFα的克隆表达重组蛋白经Western blot证实此蛋白为hTNFα.克隆基因正确插入载体pBK-CMV中.pBK-hTNFα经脂质体介导转染肝癌耐药细胞后, ELISA、RT-PCR方法检测到其在转染细胞中稳定表达.结论：通过DNA重组技术成功地构建了可在体外稳定表达hTNF-αcDNA 全长的真核表达载体pBK-hTNFα.     

IL-27基因转染对树突状细胞表型和功能的影响

目的 探讨转染IL-27基因体外对人外周血单个核细胞来源树突状细胞表型和功能的影响。方法 采集健康成人外周血,密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,用GM-CSF、IL-4诱导树突状细胞（Dendritic cell, DC）,第5天后将DC分为3组：IL-27基因转染组、TNF-α组和阴性对照组。倒置显微镜观察DC形态;流式细胞术检测DC表面分子CD1a、CD80、CD83和CD86的表达情况;MTT法检测DC刺激T细胞增殖的能力;ELISA法检测细胞培养上清中IL-12和IFN-γ的含量。结果 转染IL-27基因后外周血单个核细胞来源DC呈现典型的成熟DC形态学特征。IL 27基因转染组DC表面CD1a、CD80、CD83和CD86表达水平较阴性对照组均明显上调（P<0.05）。IL-27基因转染组DC诱导T细胞增殖的能力较对照组DC明显增高（P<0.05）。IL-27基因转染组DC培养上清中IL-12和IFN-γ的含量均明显高于对照组DC（P<0.01）。结论 转染IL-27基因可以上调成熟DC的细胞表型,增强DC的免疫学活性。     

以树突状细胞为基础的肿瘤免疫治疗和基因治疗研究进展

近年来随着大量肿瘤抗原的发现,以肿瘤疫苗为基础的主动性免疫治疗和T细胞介导的抗肿瘤免疫应答成为肿瘤治疗新的热点.抗原的识别、加工、提呈及T细胞的致敏、激活和扩增依赖于抗原提呈细胞(Anitgen-presenting cells,APC)的参与和作用.目前认为,树突状细胞(Dendritic cells,DC)是功能最强的专职性APC,DC能摄取和加工抗原,表达高水平MHC分子、共刺激分子、粘附分子并分泌高水平Thl型细胞因子IL-12,故其有很强的抗原提呈能力,可有效激发T细胞应答.因此,DC在免疫学乃至其他学科中的意义愈来愈受到重视.本室曾就DC的基础研究和临床应用的现状及进展作过综述,详见曹雪涛,树突状细胞的基础与临床研究新进展《中国免疫学杂志》,1998;14:161～168;曹雪涛,树突状细胞的研究热点及其与疾病的防治《中华医学杂志》,1999,79:163～165.曹雪涛:树突状细胞研究在免疫学中的意义及其发展趋势,《国外医学》免疫学分册,1998,21:281～285.本文仅就1997年成都会议以来,尤其是近1年来的DC与研究进展简介如下.     

表达CD40L基因的卵巢癌细胞诱导树突状细胞成熟及分泌Th1型细胞因子的作用机制

目的 探讨转染CD40L cDNA的卵巢癌细胞株OVHM对树突状细胞(DC)成熟、分化的影响及诱导其分泌细胞因子的机制.方法 采用脂质体转染法将鼠全长CD40L基因转染人小鼠卵巢癌细胞株OVHM中,用G418筛选出表达CD40L基因的抗药性克隆细胞(CD40L-OVHM).应用免疫磁珠分选并纯化小鼠骨髓DC.将DC与转染和未转染CD40L cDNA的OVHM细胞混合培养,流式细胞术检测DC细胞表面人主要组织相容性复合物Ⅰ类分子(MHC-Ⅰ)、Ⅱ类分子(MHC-Ⅱ)、CD80、CD86和CCR7的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测共培养细胞中白细胞介素(IL)-12、IL-23、IL-27、IL-18、γ干扰素(IFN-γ)、Mig基因的表达.结果 DC与CD40L-OVHM细胞混合培养后可形成集落,且上调了DC细胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CCR7的共刺激分子和黏附分子的表达.在DC+CD40L-OVHM组可检测到细胞因子IL-12、IL-23、IL-27、IL-18、IFN-γ、Mig基因的表达,而在DC组、DC+OVHM组、CD40L-OVHM组、OVHM组未检测到这些基因的表达.结论 表达CD40L的卵巢癌细胞促进了DC的成熟,诱导了Th1型细胞因子的分泌,这可能是转染CD40L基因的卵巢癌细胞产生抗肿瘤效应的机制之一.     

膜结合型TNF-α基因转导人胃癌细胞株的建立及其生物学特性研究

本研究利用逆转录病毒载体LXSN构建了插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体,将重组载体及空载体导入包装细胞CRIP,筛选G418抗性克隆。测定病毒滴度均为1×10~4CFU/ml,并转入胃癌细胞MGC-803,经筛选分别获得抗性克隆MGC-803~T及MGC-803~P。经Southern杂交证实目的基因已整合在MGC-803~T细胞基因组中。MGC-803~T对L929细胞有杀伤作用,而对照细胞无杀伤作用。MGC-803~T细胞的形态、体外增殖率无明显改变。裸鼠体内接种结果表明,与对照组相比,MGC-803~T细胞在裸鼠体内的生长受到明显抑制,表现为肿瘤发生延缓,肿瘤重量明显减轻。上述结果表明,逆转录病毒介导的突变型膜结合型TNF-α基因可在人胃癌细胞中获得有效表达,并能改变其生物学特性。     

腺病毒介导的AFP基因修饰树突状细胞的体外生物学特性

目的: 探讨腺病毒介导AFP基因修饰树突状细胞瘤苗体外生物学活性。方法:将携带小鼠AFP全长cDNA的重组腺病毒表达载体AdAFP转染BMDC，构建AFPDC肝癌瘤苗，采用电化学发光免疫测定法确证AFPDC转染的有效性，FACS检测表面分子和内吞功能，3HTdR掺入法检测T细胞增殖反应的能力，51Cr 释放法检测CTL活性。结果: AFP基因转染12 h后DC及其培养上清中可检到AFP的表达，表明腺病毒介导的AFP基因转染的有效性。AFPDC与BMDC比较B7分子明显上调，MHC分子也有轻度升高，内吞功能降低(P<0.05)。AFPDC激发同基因型小鼠T细胞增殖功能均明显高于DC对照组和LacZDC组(P<0.05)。AFPDC体外诱导CTL对Hepa16肿瘤细胞的杀伤作用具有特异性。结论: 肝癌相关基因AFP可作为抗肝癌基因治疗的切入点，该研究为肝癌树突状细胞体内免疫治疗提供了实验依据。     

小鼠骨髓树突状细胞对胃癌细胞杀伤作用的研究

目的研究小鼠骨髓树突状细胞的制备及其对胃癌细胞的杀伤作用。方法添加细胞因子培养扩增小鼠骨髓源树突状细胞;流式细胞仪检测DC表面标志物CD11c、CD86的表达;MTT法测定DC对胃癌细胞的杀伤作用。结果培养第7天出现扩增之骨髓源DC,加入TNF-α24 h后,成熟骨髓源DC形成。每只615小鼠平均能分离出3×10^7个骨髓细胞,一只小鼠的骨髓单个核细胞DC的产量约为7×10^6个。加入TNF-α48 h后,DC表面标志物CD86阳性表达率较加入TNF-α前增高;CD11c阳性表达率加入TNF–α前后无差别。成熟DC与615小鼠胃癌细胞共孵育24 h、48 h,效靶比分别为10∶1、20∶1、30∶1时,DC对胃癌细胞的杀伤活性随效靶比的增大而增强。结论提取纯化小鼠骨髓细胞,经细胞因子GM-CSF、IL-4、TNF-α的刺激诱导可产生成熟DC,成熟DC对胃癌细胞有较强的杀伤作用,其杀伤活性随效靶比的增大而增强,随共孵育时间的延长杀伤活性有增强的倾向。     

MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白的构建、表达及其双重生物学功能的初步研究

目的:利用基因工程技术制备具有双重生物学活性的MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白.方法:通过引物设计和分级克隆的策略构建了MIP-2γ/GM-CSF融合基因真核表达载体,MIP-2γ与GM-CSF由(Gly4Ser)3相连;瞬时转染293-T细胞后收集含融合蛋白的细胞培养上清;研究了该融合蛋白在体外的促造血细胞增殖活性和对免疫细胞的趋化活性.结果:MIP-2γ/GM-CSF融合基因载体构建正确;融合蛋白分子量约为24.9 kD;初步生物学功能研究表明,融合蛋白能有效促进TF-1细胞增殖,比活性约为2.2×107IU/mg,并能显著刺激骨髓细胞的集落形成;融合蛋白能有效趋化未成熟树突状细胞和CD3 T细胞.结论:MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白具有促进造血和趋化免疫细胞的双重活性,有望成为在造血调控和抗肿瘤免疫中具有良好开发应用前景的新型细胞因子.     

次级淋巴组织趋化因子(SLC)转染树突状细胞抗肝癌细胞特异性免疫的实验研究

[目的]构建携带次级淋巴组织趋化因子(SLC)基因的重组腺相关病毒载体并转染肝癌患者外周血来源的树突状细胞(DC),探讨其对肝癌细胞特异性的免疫作用。[方法]采用PCR法扩增出SLC基因,将SLC基因片段克隆至腺相关病毒PAG-AAV载体上,GFP作为成功转染的示踪蛋白。经HEK293T细胞的包装扩增后得到携带SLC基因的重组腺相关病毒体外转然DC,制备AAV-SLC-DC疫苗,流式细胞仪检测感染率,免疫荧光、RT-PCR法检测SLC表达。并以MTT法检测DC刺激T淋巴细胞增殖能力(MLR)及对肝癌细胞株HepG2的CTL效应。[结果]成功得到SLC基因,并将SLC基因片段克隆至PAG-AAV载体上,可检测到序列正确的SLC基因的正确表达,经HEK293T细胞包装出病毒颗粒;测定病毒滴度为6.3×1010μg/ml。重组腺相关病毒PAG-AAV-SLC体外感染DC,流式细胞仪检测感染率达48.37%。SLC基因转染不影响DC的表型表达,与对照组无显著差异(P>0.05);转染后DC较对照组有较强的刺激T淋巴细胞增殖的能力;并可诱导出特异性的CTL效应,不同效靶比与对照组相比均有显著差异(P<0.05)。[结论...     

HSP70L1与OVA融合蛋白的制备及其生物学功能的初步研究

目的： 〖HT5"SS〗获取原核表达的新型热休克蛋白分子HSP70L1与模型抗原卵清蛋白(OVA)片段的融合蛋白,并观察其生物学功能。〖HT5W〗方法： 〖HT5"SS〗构建表达载体pQE30OVAHSP70L1,在相应的表达宿主菌中诱导表达后,从包涵体中依次以Ni2+螯合层析柱和DEAE层析柱纯化目的蛋白;通过获得的融合蛋白对树突状细胞的成熟和细胞因子释放的促进作用初步检测其生物学活性。〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗pQE30OVAHSP70L1载体构建正确;纯化的OVAHSP70L1融合蛋白相对分子质量约68 000,纯度大于95％;活性研究表明,OVAHSP70L1融合蛋白可以有效地促进树突状细胞的成熟和Th1型细胞因子IL12和TNFα的产生。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗 纯化的HSP70L1与抗原OVA融合蛋白具有一定的生物学功能,融合蛋白的获取为进一步开展HSP70L1佐剂效应机制研究奠定了基础。     

人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定

树突状细胞(DC)作为抗原提呈细胞,在激发T细胞免疫应答及T细胞依赖性抗体生成中起重要作用,骨髓及外周血的CD34造血前体细胞在GM-CSF和TNF-α的作用下,可在体外分化发育,生成树突状细胞.本研究从正常人外周血分离获得单核细胞,加入100ng/ml hGM-CSF、500U/ml hIL-4,体外培养1周后,获得大量高纯度的树突状细胞,其高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子及共刺激分子B7-1和CD40,能强烈激发同种异体T淋巴细胞增殖,培养条件以应用自体血清或胎牛血清为最佳;单独应用hGM-CSF只能生成巨噬细胞;在培养末期加入TNFα可促进DC进一步成熟.本研究为DC的深入研究与临床应用奠定了基础.     

IL-27促进人单个核细胞来源树突状细胞的分化成熟及其作用机制

目的:探讨IL-27对人外周血单个核细胞来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)形态和功能的影响及其作用机制。方法:从正常健康人外周血中分离出单个核细胞,将其用GM-CSF、IL-4体外培养7 d,并于培养的第5天加入不同刺激因子,并将细胞分为4组:阴性对照组、阳性对照组(20 ng/ml TNF-α)、IL-27(20 ng/ml)组、IL-27+TNF-α组(即双细胞因子组,10ng/ml TNF-α+10 ng/ml IL-27)。用倒置显微镜观察培养7 d的DC形态,用流式细胞术检测DC表面共刺激分子CD1a/CD83和CD80/CD86的水平,RT-PCR检测DC表面趋化因子受体CCR5、CCR7 mRNA的表达,混合淋巴细胞实验检测DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力,Western blotting检测DC信号通路蛋白P-STAT1/STAT3的含量。结果:IL-27组和双细胞因子组诱导7 d时DC呈现典型的成熟形态学特征;DC表面CD1a和CD83双阳性表达[(35.75±4.10)%、(52.49±2.65)%vs(23.29±4.49)%,P<0.05]、CD80和CD86双阳性表达[(39.06±1.61)%、(54.10±0.46)%vs(22.66±3.20)%,P<0.05]、趋化因子受体CCR7 mRNA[3.98±0.09、4.75±0.11 vs 3.09±0.18,P<0.05]和转录因子蛋白P-STAT1/STAT3水平均较阴性对照组明显上调,而CCR5 mRNA[0.99±0.03、0.61±0.02 vs 1.23±0.26,P<0.05]表达含量则明显下降;IL-27组和双细胞因子组DC均可明显刺激T细胞增殖,且随DC与T细胞比例增加而增强,以双细胞因子组的刺激作用更为明显。结论:细胞因子IL-27可以直接或者协同TNF-α诱导人DC分化成熟,并增强DCs的抗原提呈功能,其机制可能与活化P-STAT1/STAT3信号通路有关。