miR-29c通过TNRC18 调控胃癌组织和细胞阿帕替尼耐药的机制

目的:探讨miR-29c 调控TNRC18 胃癌组织和细胞阿帕替尼耐药性的机制。方法：收集2015 年2 月至2017 年10 月武汉市中心医院具有完整资料的39 例胃癌和癌旁组织标本（其中21 例为阿帕替尼耐药患者、18 例为不耐药患者）,采用qRT-PCR检测miR-29c 在胃癌组织和细胞系中的表达水平。采用CCK-8、Transwell 和Annexin V-FITC/PI 双染流式术检测miR-29c 过表达/敲降对MGC-803/AP耐药细胞增殖、侵袭和凋亡影响,Western blotting 检测miR-29c 调控TNRC18 表达,双荧光素酶报告基因验证miR-29c 与TNRC18 的靶向作用关系。结果：miR-29c 在3 种胃癌细胞系和阿帕替尼耐药癌患者组织中均低表达。双荧光素酶报告基因证实miR-29c 靶向作用TNRC18 并下调其表达水平。miR-29c 通过靶向下调TNRC18 抑制阿帕替药耐药的MGC-803/AP细胞的增殖、侵袭并促进细胞凋亡（均P<0.05 或P<0.01),进而降低胃癌细胞MGC-803/AP对阿帕替尼的耐药性。体内实验同样证实,miR-29c 通过靶向抑制TNRC18 降低胃癌对阿帕替尼的耐药性。结论：miR-29c/TNRC18 分子轴在胃癌组织和细胞MGC-803/AP对阿帕替尼耐药中发挥着一定作用,过表达miR-29c可逆转MGC-803/AP细胞对阿帕替尼耐药。     

lncRNA HOTTIP通过miR⁃637/KLK4轴促进肺癌SPC⁃A⁃1细胞的恶性 生物学行为

目的：探讨 lncRNA HOTTIP 对肺癌细胞增殖、凋亡及 EMT 的影响及其作用机制。方法：利用 qPCR 检测 lncRNAHOTTIP、miR-637和KLK4在肺癌SPC-A-1、正常肺上皮BEAS-2B细胞中的表达量;siRNA干扰SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP的表达后,分别通过CCK-8、Transwell、流式细胞术和WB法检测SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT能力的变化。miRanda软件和双荧光素酶报告基因实验分析 lncRNA HOTTIP 和 miR-637 之间的靶向关系,RNA pull-down 实验检测 lncRNA HOTTIP 和miR-637的吸附作用,检测lncRNA HOTTIP通过miR-637对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。利用TargetScan软件分析 miR-637 与 KLK4 的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测 miR-637 与 KLK4 mRNA 之间的相互作用;检测 miR-637 通过KLK4 mRNA对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。下调lncRNA HOTTIP和miR-637表达后,利用qPCR和WB检测KLK4 mRNA 和蛋白表达水平的变化。结果：与 BEAS-2B 细胞比,在 SPC-A-1 细胞中 lncRNA HOTTIP 呈高表达（P<0.01）,miR-637呈低表达（P<0.01）,KLK4呈高表达（P<0.01）。下调lncRNA HOTTIP后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著减弱,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）;lncRNA HOTTIP与miR-637具有靶向关系;下调miR-637表达后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著上升,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。miR-637与 KLK4 3''UTR特异性结合。miR-637通过 KLK4显著促进了 SPC-A-1细胞增殖、侵袭与 EMT,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。下调 lncRNA HOTTIP 使 KLK4 表达显著降低,而下调 miR-637 可促进KLK4表达（P<0.05）。结论：上调lncRNA HOTTIP可通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的增殖、侵袭与EMT而抑制癌细胞凋亡。     

circ_0001821靶向miR-203调控皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖、凋 亡、迁移和侵袭

目的：探讨circ_0001821通过靶向miR-203调控皮肤鳞状细胞癌（cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC）A431细胞 增殖、凋亡、迁移及侵袭的分子机制。方法：选取2018年2月至2019年8月海南医学院第二附属医院收治的39例CSCC患者的癌 及配对癌旁组织,以及人CSCC细胞系A431,用qPCR法检测CSCC癌和癌旁组织中circ_0001821的表达水平。利用脂质体转染技 术,分别将si-circ_0001821、si-NC、miR-203 mimic、miR-NC、si-circ_0001821与anti-miR-NC、si-circ_0001821与anti-miR-203转染至 A431细胞,用qPCR法检测转染细胞中circ_0001821和miR-203的表达水平,MTT法、流式细胞术和Transwell实验分别检测A431 细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力,WB法检测细胞中增殖、凋亡、迁移及侵袭相关蛋白的表达水平。通过Circinteractome数据库 预测circ_0001821与miR-203存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0001821与miR-203的靶向关系。结果：CSCC组 织中circ_0001821的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）。转染 si-circ_0001821 可显著降低细胞中circ_0001821的表达水平（P<0.01）,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,提高细胞凋亡率（P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实,circ_0001821可 靶向结合miR-203。转染miR-203 mimic可显著降低A431细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,提高细胞凋亡率（P<0.01）。共转染si-circ_0001821与anti-miR-203 可明显逆转下调circ_0001821 表达对 A431 细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论： circ_0001821通过靶向miR-203调控CSCC细胞A431的增殖、迁移、侵袭能力及细胞凋亡。     

过表达miR-141-3p通过靶向下调PTEN并激活PI3K/Akt信号通路促进卵巢癌A2780 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨miR-141-3p 通过靶向PTEN并调控PI3K/Akt 通路对卵巢癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法：收集2014 年4 月至2017 年10 月河南省人民医院妇产科收治的资料完整的28 例卵巢癌患者肿瘤组织和相应的癌旁组织,采用qPCR检测卵巢癌组织和细胞系中miR-141-3p 的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p 和PTEN的靶向关系;过表达或敲降miR-141 及PTEN基因后,采用CCK-8、Transwell 和Annexin V-FITC/PI 双染流式术检测卵巢癌A2780 细胞增殖、侵袭和凋亡水平,WB实验进一步检测miR-141-3p 对PTEN-PI3K/Akt 信号通路的调控作用。结果：miR-141-3p 在卵巢癌组织和细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）。双荧光素酶报告基因证实miR-141-3p 靶向作用于PTEN并下调其表达水平（P<0.01）。与对照组相比,敲降miR-141-3p 后A2780 细胞的增殖受到显著抑制（48 h 时,0.36±0.04 vs 0.82±0.06,P<0.05）、侵袭能力明显降低[穿膜细胞数（45.14±7.88）vs（215.32±16.04）个,P<0.01]、细胞凋亡率显著升高[ （9.29±0.65）% vs（1.85±0.26）%,P<0.01]。过表达PTEN显著抑制了A2780 细胞中p-Akt 的表达（均P<0.01）、抑制细胞增殖和侵袭能力（均P<0.01）而明显促进细胞凋亡（均P<0.01）,在过表达PTEN的同时过表达miR-141-3p 或添加IGF-1 后可逆转上述的变化。结论：miR-141-3p 能够促进A2780 细胞增殖、侵袭和诱导凋亡,其机制可能与靶向调控PTEN并激活PI3K/Akt通路有关。     

miR-182靶向NUMB调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究miR-182对结直肠癌细胞HT-29增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、结直肠癌细胞HT-29中miR-182、NUMB的表达；将anti-miR-con组（转染anti-miR-con）、anti-miR-182组（转染anti-miR-182）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-NUMB组（转染pcDNA-NUMB）、anti-miR-182+si-con组（anti-miR-182和si-con共转染）、anti-miR-182+si-NUMB组（anti-miR-182和si-NUMB共转染）均用脂质体法转染HT-29细胞；Western blot检测各组细胞中NUMB的蛋白表达；Transwell检测各组细胞的迁移和侵袭；MTT法检测各组细胞的增殖；双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光素酶活性。结果:与人正常结肠上皮细胞HCoEpiC相比，结直肠癌细胞HT-29中miR-182表达显著升高，NUMB表达显著降低（P<0.05）；抑制miR-182、过表达NUMB均可下调HT-29细胞的增殖、迁移、侵袭；NUMB是miR-182的靶标。敲减NUMB可逆转抑制miR-182对HT-29细胞增殖、迁移、侵袭的下调作用。结论:miR-182可促进结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭，其机制可能与靶向NUMB有关，将可为miR-182靶向治疗结直肠癌提供依据。     

lncRNA HOTAIR靶向miR-126激活RhoA/ROCK通路促进喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT

目的:探讨长链非编码RNA-Hox转录反义RNA（long non-coding RNA Hox antisense intergenic RNA,lncRNA HOTAIR）对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及其上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响及机制。方法:利用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,RT-qPCR）检测喉癌组织、癌旁组织和Hep-2细胞中lncRNA HOTAIR、微小RNA-126（microRNA-126,miR-126）的表达量;下调lncRNA HOTAIR表达,分别通过细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）、细胞侵袭实验和蛋白质印迹法（Western blot）检测Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT能力。利用miRcode分析HOTAIR的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA HOTAIR和miR-126之间的关系。同时上调lncRNA HOTAIR和miR-126的表达,检测lncRNA HOTAIR通过miR-126对Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT的影响。下调miR-126表达后,Western blot检测RhoA、ROCK蛋白的表达量。Y-27632作用细胞后,检测下调miR-126对Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT的影响。结果:在Hep-2细胞和喉癌组织中lncRNA HOTAIR的表达明显上调（P＜0.01）,miR-126表达明显下调（P＜0.01）。下调lncRNA HOTAIR表达后,抑制了Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT;lncRNA HOTAIR与miR-126具有靶向和负调控关系;下调miR-126表达后,激活了Hep-2细胞内RhoA/ROCK通路,并且促进了Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT。结论:上调lncRNA HOTAIR通过靶向miR-126激活RhoA/ROCK通路促进喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT。     

miR-361-5p通过靶向CCND1逆转胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂耐药性

目的：探讨miR-361-5p对胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂（oxaliplatin,OXA）耐药性的影响及其作用机制。方法：采用qPCR法检测miR-361-5p在胃癌细胞MKN-45、MGC80-3、SGC-7901和OXA耐药细胞SGC-7901/OXA中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将 miR-361-5p mimics/inhibitor、sh-CCND1 转染到 SGC-7901/OXA 细胞中 ,用 CCK-8 法和流式细胞术检测SGC-7901/OXA细胞的增殖、凋亡和细胞周期。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-361-5p与CCND1的靶向关系,用WB法检测 CCND1 的表达水平。结果：miR-361-5p 在多种胃癌细胞和 SGC-7901/OXA 细胞中均低表达（P<0.05 或 P<0.01）。过表达miR-361-5p可显著促进SGC-7901/OXA细胞凋亡,诱导G0/G1细胞周期停滞并抑制细胞增殖（P<0.05或P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果证实,miR-361-5p靶向负调控CCND1的表达（P<0.01）。敲减CCND1抑制SGC-7901/OXA细胞CCND1表达和细胞增殖,并诱导凋亡和G0/G1周期阻滞（P<0.05或P<0.01）。过表达miR-361-5p靶向下调CCND1进而促进SGC-7901/OXA细胞凋亡,诱导G0/G1细胞周期停滞并抑制细胞增殖（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-361-5p过表达可逆转胃癌SGC-7901/OXA细胞对OXA的耐药性,其机制可能与靶向下调CCND1表达有关。     

MicroRNA-4465对结肠癌细胞凋亡和侵袭的影响

目的 探讨microRNA-4465（miR-4465）在结肠癌细胞中的生物学作用及其潜在的调控机制。方法 qPCR检测SW480、HT-29和HCT-116三种结肠癌细胞中的miR-4465水平，然后在HCT-116细胞中过表达miR-4465，MTT法和流式细胞仪分别检测细胞活性和细胞凋亡，试剂盒检测Caspase-3活性，Transwell实验检测细胞侵袭，荧光素酶报告基因检测分别测定miR-4465与HMGA1、HMGA2或EZH2的靶向关系。Western blot和qPCR分别检测HMGA1、HMGA2、EZH2的蛋白和mRNA表达水平。结果 在SW480、HT-29和HCT-116三种结肠癌细胞中，miR-4465表达均显著下调（P<0.05）。过表达miR-4465能够降低结肠癌HCT-116细胞活性，提高细胞凋亡率，增强Caspase-3活性，抑制细胞侵袭（均P<0.05）。miR-4465直接靶向HMGA1、HMGA2或EZH2的3'-非翻译区（3'-UTR），进而负向调控其表达。结论 miR-4465过表达能够降低结肠癌细胞活性，促进细胞凋亡并抑制细胞侵袭，这可能与负向调控HMGA1、HMGA2或EZH2基因有关。     

熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的实验研究

目的探讨熊果酸（UA）诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的作用及机制。方法用不同浓度的UA处理HT-29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法,检测UA对HT-29细胞的增殖抑制效应;采用形态学、TUNEL法和流式细胞术,检测细胞凋亡的发生;应用免疫组织化学S-P法,检测凋亡相关基因caspase-9和bcl-2的表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果UA在体外对HT-29细胞有中度增殖抑制效应,在UA作用下,HT-29细胞出现显著的细胞凋亡征象。TUNEL法显示细胞固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体。流式细胞术检测结果显示,在G1期之前出现Sub—G1峰,凋亡率最高为11．63％,UA的作用具有浓度和时间依赖性。在HT-29细胞凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-9的表达增强,bcl-2的表达减弱。结论凋亡是UA杀伤肿瘤细胞的机制之一;UA诱导结肠癌HT-29细胞凋亡主要与促进caspase-9的活化、下调bcl-2的表达有关。     

过表达miR-145-5p 通过下调IGF1R抑制食管鳞状细胞TE-10 细胞的恶性生物学行为

目的：探究miR-145-5p 对食管鳞状细胞癌TE-10 细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）等恶性生物学行为的分子机制。方法：qPCR法检测miR-145-5p 在食管鳞状细胞癌细胞和正常食管上皮细胞中的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-145-5p 与胰岛素样生长因子1 受体（insulin-like growth factor 1 receptor，IGF1R）的靶向调控关系，Western blotting 检测IGF1R蛋白和EMT相关蛋白的表达，CCK-8 法和Transwell 检测miR-145-5p/IGF1R分子轴对TE-10 细胞增殖、侵袭、迁移的影响。结果：miR-145-5p 在3 株食管鳞状细胞癌细胞中低表达且在TE-10 细胞中表达最低（P<0.01 或P<0.05）。过表达miR-145-5p 可显著抑制TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程（P<0.01 或P<0.05）。双荧光素酶报告基因证实miR-145-5p 靶向下调IGF1R表达（P<0.01）。回复实验进一步证实，与单独过表达IGF1R相比，同时过表达miR-145-5p 和IGF1R能显著缓解IGF1R 对TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT 进程的促进作用（P<0.01 或P<0.05）。结论：过表达miR-145-5p 通过靶向下调IGF1R进而抑制了食管鳞状细胞癌TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程。     

RNAi沉默RON基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和耐药性的抑制作用

目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d'origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响.方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA.Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率及RON蛋白表达水平;Transwell侵袭实验和ATP-TCA(ATP-tumor chemosensitivity assay)检测RON基因对HT-29细胞侵袭和对药物敏感性的影响.结果:慢病毒载体Lv-RON-siRNA感染HT-29细胞对RON基因的沉默效果达到70％.Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞侵袭力较对照组明显降低(0.97±0.072 vs 1.29±0.076,P＜0.05).Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouraci,5-FU)的IC90值和IC50值分别为(14.28 ±1.34)、(8.93±1.20) μg/ml,顺铂(cisplatin,DDP)的IC90值和IC50值分别为(1.91±0.22)、(0.64±0.07) μg/ml,均明显低于对照组(P＜0.01).结论:沉默RON基因表达能抑制HT-29细胞的侵袭力,提高细胞对5-FU和DDP的敏感性.     

miRNA-93对结肠癌HT-29细胞株化疗敏感性的影响

目的 探讨miR-93与结肠癌HT-29细胞株对氟尿嘧啶（5-FU）敏感性的影响及可能机制。方法 miR-93抑制物转染HT-29细胞,同时设置空白对照组和阴性对照组（NC）,采用MTT法检测细胞增殖活性。流式细胞术、Transwell细胞侵袭实验和划痕实验分别检测miR-93抑制物组、空白对照组和NC组HT-29细胞凋亡、侵袭和迁移。双荧光素酶报告实验验证PTEN与miR-93的关系。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测3组细胞miR-93表达,以及对p-VEGFR2、p-Akt、PTEN mRNA表达的影响。结果 miR-93抑制物组中miR-93的相对表达量为0.40±0.05,显著低于空白对照组和NC组的1.13±0.08、1.12±0.09,差异有统计学意义（P＜0.05）。经1、4、16、64、256 μg／ml的5-FU处理后,miR-93抑制物组HT-29细胞的增殖抑制率高于同浓度下NC组和空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。经16 μg／ml 5-FU处理后,miR-93抑制物组HT-29细胞凋亡率、侵袭率和愈合率分别为（52.75±7.44）％、（45.76±15.85）％、（12.64±3.29）％,与空白对照组和NC组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验分析PTEN可能是miR-93的下游靶基因。miR-93抑制物组p-VEGFR2、p-Akt和PTEN表达水平分别为1.28±0.09、0.85±0.08、1.22±0.09,与空白对照组和NC组比较,VEGFR2和Akt磷酸化水平下调,PTEN表达上调。结论 下调miR-93可以增加PTEN的表达,抑制VEGFR-2和Akt磷酸化水平,从而提高结肠癌细胞对5-FU的敏感性。     

下调miR-21对PDCD4表达及结肠癌HT-29细胞功能的影响研究

背景与目的：miR-21可能通过抑制PDCD4表达调控结肠癌浸润及转移等恶性行为。本研究通过下调miR-21表达后,检测结肠癌HT-29细胞功能的变化,并观察PDCD4在蛋白及mRNA表达水平的改变,探讨miR-21及PDCD4的表达在结肠癌恶性行为中的关系及机制。方法：构建靶向miR-21的干扰质粒simiR-21,转染HT-29细胞后,以实时定量PCR(qRT-PCR)法检测转染效率,MTT法检测转染后细胞增殖变化,流式细胞术检测转染后细胞调亡变化,Transwell检测迁移及浸润能力改变,蛋白质印迹法(Western blot)及qRT-PCR法检测干扰后PDCD4表达水平变化。结果：经qRT-PCR检测simiR-21在HT-29细胞转染效率为60%～65%,转染效率佳;MTT显示转染后72、96和120 h,HT-29增殖能力减弱(t=1.276,P<0.05;t=3.276,P<0.01;t=4.523,P<0.01);流式细胞术结果显示,与si-negative control及miR-21组对比转染后HT-29调亡率明显增加(t=2.132,P<0.05;t=3.524,P<0.05);Transwell结果显示,simiR-21转染细胞迁移能力降低(t=2.423,P<0.05;t=3.153,P<0.05),侵袭能力降低(t=3.245,P<0.05;t=5.236,P<0.05);Western blot检测结果显示,PDCD4蛋白在simiR-21细胞的表达水平明显上调(t=2.342,P<0.05;t=4.215,P<0.05);qRT-PCR检测结果显示,PDCD4 mRNA在simiR-21细胞的表达水平明显上调(t=2.261,P<0.05;t=3.492,P<0.05)。结论：simiR-21下调miR-21表达后,结肠癌HT-29细胞增殖能力受抑制,并促进其调亡,抑制迁移及浸润能力,PDCD4上调。miR-21可能通过下调PDCD4表达促进肿瘤细胞恶性行为,可作为结肠癌治疗新的靶向候选基因。     

circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究

目的:探究circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究。方法:将SCC9/DDP细胞分为SCC9/DDP组、si-NC组、si-VAPA组、miR-125b组、miR-NC组、pcDNA-VAPA组、miR-HOXA7组。qRT-PCR检测细胞中circVAPA和miR-125b表达,MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测细胞耐药、增殖、侵袭和凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中HOXA7蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证VAPA、miR-125b和HOXA7的靶向关系。结果:和HOK相比,SCC9和SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显升高,miR-125b表达明显降低（P＜0.05）;且SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显高于SCC9细胞,miR-125b表达明显低于SCC9细胞（P＜0.05）。和SCC9/DDP组相比,si-VAPA组细胞IC50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P＜0.05）。和miR-NC组相比,miR-125b组细胞IC50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P＜0.05）。靶向关系结果显示,miR-125b组荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P＜0.05）;si-VAPA组细胞中miR-125b表达明显高于si-NC组（P＜0.05）,miR-125b组细胞中HOXA7表达明显低于miR-NC组（P＜0.05）。和miR-125b组相比,pcDNA-VAPA组和miR-HOXA7组细胞IC50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显升高,细胞凋亡能力明显降低（P＜0.05）。结论:低表达circVAPA可通过调控miR-125b/HOXA7轴来逆转口腔癌细胞化疗耐药,抑制口腔癌化疗耐药细胞增殖、侵袭并诱导凋亡。     

干扰RNA对HT-29细胞周期和凋亡活性的影响

目的:研究干扰RNA质粒载体对肿瘤细胞的作用.方法:制备了针对FGF3基因的干扰RNA质粒载体(pRNATU6.1/NeoGFP-FGF3),并选用大肠癌细胞株HT-29为实验对象,流式细胞仪观察干扰RNA质粒载体对HT-29细胞周期和凋亡活性的影响.结果:细胞周期分析发现转染pRNATU6.1/NeoGFP-FGF3后,HT-29细胞增殖能力减弱;细胞凋亡实验表明干扰RNA质粒载体有明显的促进肿瘤细胞凋亡作用.结论:干扰RNA质粒载体能明显抑制HT-29肿瘤细胞的增殖,并且能显著促进细胞凋亡.     

MicroRNA-9-5p increases the sensitivity of colorectal cancer cells to 5-fluorouracil by downregulating high mobility group A2 expression

Chemotherapy drug 5-fluorouracil (5-FU) is the first-line treatment for colorectal cancer (CRC); however, 5-FU resistance decreases CRC therapeutic efficiency. A previous study revealed that microRNA (miR)-9-5p serves an antitumor effect in CRC. However, the effect of miR-9-5p in CRC chemoresistance remains unknown. In the present study, two CRC cell lines, including HT-29 and HCT-116 cells, were used to investigate the impact of miR-9-5p in overcoming 5-FU resistance. The results revealed that treatment with 5-FU decreased CRC cell viability and upregulated miR-9-5p expression in both CRC cells. Knockdown of miR-9-5p decreased HCT-116 cell sensitivity to 5-FU and inhibited apoptosis. By contrast, miR-9-5p overexpression enhanced the sensitivity of HT-29 cells to 5-FU and induced apoptosis. Additionally, it was confirmed that miR-9-5p directly targeted high mobility group A2 (HMGA2). HMGA2 overexpression reversed miR-9-5p-induced HT-29 apoptosis. The present study indicated that miR-9-5p enhanced the sensitivity of CRC cells to 5-FU via downregulating HMGA2 expression.     

miR-145-5p靶向TAGLN2调控结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的机制探讨

目的:探究微小RNA-145-5p（miR-145-5p）在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其靶向调控肌动蛋白凝胶蛋白2（TAGLN2）对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术对48例结直肠癌患者癌组织、配对癌旁组织、结直肠癌细胞株（HCT8、SW620、HCT116、HT-29）及结直肠黏膜细胞FHC中的miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达进行定量分析。将SW620细胞设为空白对照组、miR-145-5p mimics组、mimics-NC组、pcDNA3.1-TAGLN2组、pcDNA3.1-Vector组和miR-145-5p mimics+pcDNA3.1-TAGLN2组,采用qPCR检测miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达,采用Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力,采用免疫印迹法（Western blot）检测TAGLN2蛋白及EMT相关蛋白表达,采用双荧光素酶报告实验检测miR-145-5p和TAGLN2间的靶向关系。结果:miR-145-5p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）,并与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）;TAGLN2在结直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,并与miR-145-5p表达呈负相关（P<0.05）;miR-145-5p和TAGLN2在结直肠癌HCT8、SW620、HCT116和HT-29细胞中的表达水平显著低于或高于FHC细胞（均P<0.05）。miR-145-5p过表达可降低SW620细胞的侵袭和迁移能力。miR-145-5p靶向调控TAGLN2表达,单独转染TAGLN2阳性质粒可增加SW620细胞的侵袭和迁移能力,与miR-145-5p mimics同时转染后,TAGLN2蛋白、波形蛋白（Vimentin）和神经钙黏素（N-cadherin）表达降低,上皮钙黏素（E-cadherin）表达升高,TAGLN2对SW620细胞侵袭和迁移能力的增强作用被显著抑制。结论:miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达状态,其表达水平与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移密切相关,miR-145-5p靶向调控TAGLN2抑制结直肠癌细胞的侵袭和迁移能力。     

地锦草乙醇提取物通过circRHOT1/miR-29a-3p轴抑制结直肠癌SW480 细胞的恶性生物学行为

目的：探讨地锦草乙醇提取物（EEEH）对人结直肠癌SW480细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法：体外培养SW480 细胞,实验分为 Con 组、EEEH-L 组、EEEH-M 组、EEEH-H 组、si-NC 组、si-circRHOT1 组、EEEH-H+pcDNA 组、EEEH-H+pcDNA-circRHOT1组,分别以si-NC、si-circRHOT1、pcDNA、pcDNA-circRHOT1转染SW480细胞,采用CCK-8法、细胞克隆形成实验、Transwell实验分别检测转染后各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力,qPCR 法检测转染后各组SW480细胞circRHOT1和miR-29a-3p的表达,WB法检测各组细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验检测circRHOT1与miR-29a-3p之间的靶向关系。结果：与Con组比较,EEEH-L组、EEEH-M组、EEEH-H组SW480细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达均明显降低（均P<0.05）,circRHOT1的表达均降低（均P<0.05）而miR-29a-3p的表达均升高（均P<0.05）且呈剂量依赖性;细胞的存活率、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数均减少（均P<0.05）。circRHOT1可靶向负调控miR-29a-3p的表达。敲减circRHOT1可抑制SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力 ,而过表达 circRHOT1 则可减弱 EEEH对SW480细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论：EEEH可通过调控circRHOT1/miR-29a-3p轴而抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力。