胃癌耐药细胞株SGC-7901/5-FU的建立及其耐药机制的初步探讨

目的构建耐5-FU的胃癌耐药细胞株,初步探讨细胞发生5-FU耐药的可能机制.方法 通过药物耐药间歇冲击并浓度梯度递增法诱导建立胃癌耐药细胞株SGC-7901/5-FU.应用MTT法检测亲代细胞对4种化疗药物的IC50并计算耐药指数(RI).通过MTT法绘制细胞的生长曲线计算细胞倍增时间.流式细胞仪分析细胞周期分布.RT-PCR检测抑癌基因P53、癌基因Bcl-2、促凋亡基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)、死亡相关蛋白激酶(death associated protein kinase,DAPK)家族成员(DAPK-1、DAPK-2、DAPK-3)、多药耐药蛋白(multidrug resistance proteins,MRP)亚家族中的MRP-6、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)、切除交叉互补修复基因(excision repair cross-complementing 1,ERCC-1)的表达.Western Blot检测MDR1 编码的P糖蛋白(P-gp)的表达水平.结果SGC-7901/5-FU对5-FU、顺铂、环磷酰胺的耐药指数分别为6.26、3.71、5.25.SGC-7901与SGC-7901/5-FU细胞倍增时间分别为(30.82±1.46)h和(46.01±4.15)h,SGC-7901/5-FU细胞增殖速率显著变缓(P＜0.05).与亲代细胞比较,耐药子株S期细胞显著减少,G0/G1期细胞则显著增高(P＜0.01),而G2/M期细胞无显著差异(P＞0.05).耐药子株SGC-7901/5-FU细胞MDR-1、MRP-6、DAPK-3和P-gp表达显著上调(P＜0.01),而ERCC-1、caspase-3、P53、DAPK-1、DAPK-2、Bcl-2的表达均无显著变化(P＞0.05). 结论成功构建胃癌耐5-FU细胞株SGC-7901/5-FU,其对顺铂、环磷酰胺具有交叉耐药,耐药机制与细胞周期S期细胞比例减少、G0/G1期细胞比例升高有关,可能与MDR-1、MRP-6、DAPK-3基因及P-gp蛋白表达上调有关.     

小剂量顺铂联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖抑制及其机制的研究

目的:探讨小剂量顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)在体外联合用药对SGC-7901胃癌细胞及胃癌耐药细胞株 SGC-7901/5-FU细胞增殖及其相关基因表达的影响.方法:采用MTT法观察在小剂量DDP、5-FU联合用药前后SGC-7901与SGC-7901/5-FU存活率的差异,同时应用免疫组化方法检测SGC-7901与SGC-7901/5-FU中p53、Fas/Fas L基因的表达情况.结果:DDP与5-FU均有抑制肿瘤细胞增殖作用,且有浓度相关性;尤以DDP联合5-FU后对细胞存活率的影响明显高于两种药物的单独使用(P＜0.01),小剂量DDP联合应用5-FU时效果最明显,但对SGC-7901/5-FU细胞增殖抑制作用明显小于SHC-7901;小剂量联合DDP+5-FU,p53、Fas L 基因表达的阳性率显著高于单纯的5-FU组或DDP组 (P＜0.01),而Fas基因表达则相反.结论:小剂量DDP联合5-FU对胃癌细胞具有明显抑制作用,对耐药株也有一定抑制作用,但效果弱于非耐药株.p53、Fas/Fas L基因对胃癌细胞的增殖活性有重要作用,在小剂量DDP联合5-FU比各单药应用组基因的改变更明显(P＜0.01).     

丹参酮ⅡA联合5-FU对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡与突变型p53蛋白表达的研究

目的:观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌SGC7901细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,及其与突变型p53蛋白表达变化的关系.方法:不同浓度的TanⅡA单独及联合应用10.0 mg/L的5-FU作用于SGC7901细胞24、48和72 h,MTT法检测细胞活力,HO-ECHST染色法检测细胞凋亡;不同浓度的Tan ⅡA单独及联合10.0 mg/L的5-FU作用于SGC-7901细胞48 h后,免疫细胞化学法检测突变型p53蛋白的表达.结果:实验所选各种浓度Tan ⅡA均能抑制SGC7901细胞的增殖并诱导其凋亡,且呈时间和剂量依赖性(P值均＜0.01),10.0 mg/L Tan ⅡA作用细胞72 h后,其抑制率及凋亡率分别达47.17%和45.63%.与单用5-FU相比,联合应用TanⅡA细胞增殖抑制率和凋亡率显著增加(P均＜0.01),10.0 mg/L TanⅡA联合5-FU作用细胞72 h后,其抑制率及凋亡率分别为65.51%和57.28%.不同浓度的Tan ⅡA单独及联合应用5-FU作用48 h后,突变型p53表达呈剂量依赖性降低(P均＜0.01).结论:Tan ⅡA可显著增强5-FU对SGc7901细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,该效应可能与其抑制突变型p53蛋白的表达有关.     

5-氮杂-2-脱氧胞苷及曲古抑菌素A对人胃癌SGC-7901细胞生长及CHFR基因表达水平的影响

背景与目的:抑癌基因甲基化具有可逆性,相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞活性及CHFR基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法:使用不同浓度的5-Aza-dC和(或)TSA处理SGC-7901细胞,分为对照组、TSA组(250 nmol/L)、5-Aza-dC组(5μmol/L)及TSA(250 nmol/L)联合5-Aza-dC(5μmol/L)组等4个组,采用台盼蓝染色法检测细胞活性,并利用RT-PCR及蛋白质印迹法(Westernblot)方法检测CHFR基因mRNA和蛋白表达的水平。结果:5-Aza-dC和TSA作用24、48、60和72 h后SGC-7901细胞活性均被抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性,两药联合作用更明显;SGC-7901细胞经5-Aza-dC单独或与TSA联合干预后,能提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-Aza-dC和(或)TSA均能抑制细胞活性,提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,两药联合的效果比单药明显增加,为临床胃癌患者的化疗方案提供了实验依据。     

白藜芦醇联合TRAIL抑制乳腺癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl表达

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,RES)联合TRAIL对乳腺癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-xl表达的影响。方法:50μmol/L RES、100ng/ml TRAIL及二者联合分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,Real time PCR检测Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1的mRNA表达,Western blot检测Bcl-xl、Bcl-2和Mcl-1蛋白表达。结果:MTT结果显示RES、TRAIL均能明显抑制乳腺癌细胞增殖,且联合组抑制率高于单独处理组(P<0.05)。RES、TRAIL单独或联合能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,凋亡率分别为(16.34±0.34)%,(43.52±0.99)%和(73.60±2.80)%,与对照组的(4.13±0.25)%比较有统计学意义(P<0.05);而对MCF-7凋亡影响不明显。Realtime PCR结果显示RES联合TRAIL能明显抑制MDA-MB-231细胞Bcl-xl mRNA表达,联合组与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示RES联合TRAIL能抑制Bcl-xl蛋白的表达而对Bcl-2和Mcl-1抑制不明显。结论:RES能增强TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡敏感性,这可能与二者抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达有关。     

选择性环氧合酶-2 抑制剂 NS-398 抑制多药耐药细胞株 P-糖蛋白表达

目的:探讨选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS-398对多药耐药细胞株K562/ADM细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响。方法:K562/ADM细胞经浓度分别为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L的NS-398处理,24h、48h、72h后用RT-PCR法检测MDR1mRNA的表达、用流式细胞仪检测mdr1蛋白表达。结果:随着NS-398浓度的升高以及作用时间延长,MDR1mRNA、p-gp表达降低,不同浓度的药物与测量时间之间存在着交互作用(P<0.05)。结论:选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398可抑制K562/ADM细胞的MDR1/P-gp表达。     

塞来昔布诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡和自噬

目的:观察塞来昔布对人胃癌细胞株SGC-7901凋亡和自噬的影响,并探讨其凋亡的机制。方法:不同浓度塞来昔布处理SGC-7901细胞后,MTT法检测SGC-7901细胞的增殖,TUNEL法检测SGC-7901细胞的凋亡,透射电镜观察SGC-7901细胞超微结构的改变,流式细胞术检测SGC-7901细胞的凋亡率,实时定量荧光PCR法检测SGC-7901细胞中caspase-8和caspase-9 mRNA的表达。结果:塞来昔布时间(24、48、72 h)和剂量(50、75、100、125μmol/L)依赖性抑制SGC-7901细胞的增殖,125μmol/L塞来昔布作用SGC-7901 72 h细胞的增殖抑制率高达(85.6±4.51)%。塞来昔布可诱导SGC-7901细胞凋亡,透射电镜下观察到典型的凋亡小体和自噬体,细胞凋亡率从(2.2±1.32)%上升到(35.7±5.73)%(P<0.01)。塞来昔布作用后,SGC-7901细胞中caspase-8和caspase-9 mRNA表达明显增加,呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。结论:塞来昔布通过激活依赖caspase-8的死亡受体途径和依赖caspase-9的线粒体途径诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,同时诱发自噬性细胞死亡。     

长链非编码RNA CASC9在胃癌化疗耐药中的机制研究

目的:观察长链非编码RNA CASC9对胃癌（gastric cancer,GC）细胞增殖、凋亡以及对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗耐药的影响，并探讨其机制。方法:首先采用实时荧光聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测永生化胃上皮细胞(GSE-1)和GC细胞(SGC-7901、BGC-823)中CASC9和P-gp的表达水平；在胃癌细胞SGC-7901和BGC-823中抑制CASC9表达后，通过RT-PCR检测P-gp的表达水平；在胃癌细胞SGC-7901中抑制CASC9表达后，再过表达P-gp，应用CCK-8法检测转染后各组光密度值以评价增殖率，应用Annexin V-APC单染色流式细胞术检测各组转染48 h后的细胞凋亡率，在培养基中加入不同浓度的5-FU检测各组细胞存活率。结果:与正常胃黏膜细胞相比，GC细胞中CASC9、P-gp过表达(P＜0.05)；抑制CASC9表达后胃癌细胞中P-gp表达下调(P＜0.05)；胃癌细胞抑制CASC9表达后细胞增殖转移能力明显减弱（P＜0.05），凋亡增加（P＜0.05），化疗耐药减弱（P＜0.05）；而过表达P-gp后恶性表型明显恢复（P＜0.05）。结论:CASC9可通过促进P-gp的表达调节GC细胞的增殖、凋亡和化疗耐药，参与GC的发生发展。     

香菇多糖对人乳腺癌细胞MCF-7行紫杉醇化疗的增敏作用

【摘要】目的 探讨香菇多糖(LNT)对人乳腺癌细胞MCF 7行紫杉醇(PTX)化疗增敏的作用机制。方法 将人乳腺癌MCF 7细胞株随机分为对照组、LNT组、PTX组和LNT+PTX组。PTX组加入100 μl 4 nmol／L的PTX,LNT组加入100 μl 01 μmol／L的LNT,LNT+PTX组加入50 μl 4 nmol／L的PTX和50 μl 01 μmol／L的LNT,与细胞孵育24 h;对照组只加入RPMI 1640培养液与等体积的DMSO,培养24 h;用MTT法检测PTX组和LNT+PTX组的细胞抑制率,TUNEL法检测4组细胞的凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白Caspase 3、Bcl 2和Bax的表达水平,实时荧光定量(RT) PCR检测耐药相关基因多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白的表达水平。结果 PTX组MCF 7细胞的凋亡率明显高于对照组［(2386±387)％ vs.(626±124)％］,LNT+PTX组的细胞抑制率、细胞凋亡率明显高于PTX组(P<005),半数抑制浓度（IC50）明显低于PTX组(P<005);PTX和LNT+PTX组凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达量明显高于对照组,Bcl 2的表达量明显低于对照组(P<005);PTX组耐药基因MDR1、MRP1和BCRP的表达与对照组无显著差异(P>005),LNT组和LNT+PTX组的MDR1、MRP1和BCRP表达量明显低于对照组(P<005);LNT+PTX组凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达量明显高于PTX组,Bcl 2和耐药基因MDR1、MRP1、BCRP的表达量明显低于PTX组(P<005)。结论 LNT可以抑制耐药基因MDR1、MRP1和BCRP的表达,增强MCF 7细胞对PTX的敏感性,促进PTX的细胞抑制和促凋亡作用。     

稳定转染Bcl-2 shRNA对胃癌细胞SGC-7901化疗敏感性的影响

目的:探讨稳定转染靶向Bcl-2基因的短发夹RNA(shRNA)对胃癌细胞株SGC-7901化疗敏感性的影响.方法:筛选出稳定转染Bcl-2 shRNA质粒的胃癌SGC-7901细胞株,将其与不同浓度的氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂(DDP)作用,未转染的细胞作为对照.RT-PCR法检测稳定转染前后SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达水平,MTT法检测5-FU或DDP的IC50,流式细胞仪分析细胞的凋亡率.结果:稳定转染shRNA的胃癌SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达明显下降;shRNA联合5-FU的IC50为(14.36±1.63)mg/L,对照组为(35.62±1.95)mg/L,t=2.57,P＜0.05;shRNA联合DDP的半数抑制浓度(IC50)为(2.53±0.46)mg/L,对照组为(6.89±0.52)mg/L,t=2.52,P＜0.05;流式细胞术检测显示,shRNA联合化疗明显提高SGC-7901细胞的凋亡率,t=2.60,P＜0.05.结论:稳定转染Bcl-2 shRNA的胃癌SGC-7901细胞株,其Bcl-2 mRNA的表达能够在较长时间内受到抑制,并提高对化疗药物5-FU及DDP的敏感性.     

沉默ERK5对胃癌SGC-7901、BGC-823细胞生物学功能的影响

目的 探讨沉默细胞外信号调节激酶5（extracellular signal regulated kinase 5,ERK5）对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生物学功能的影响。方法 实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测人胃癌细胞株和人胃黏膜上皮细胞株ERK5 mRNA的表达水平。应用短发荚RNA（shRNA）干扰技术沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达。CCK-8法检测ERK5沉默后胃癌细胞的生长能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布。结果 与胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、AGS、HGC-27中ERK5 mRNA均呈高表达,相对表达量分别为2.696±0.501、1.865±0.185、1.793±0.137和1.530±0.093（P<0.05）。ERK5-shRNA有效沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达水平,沉默效率分别为（74.4±1.5）%和（69.1±3.9）%,差异有统计学意义（P<0.05）。沉默 ERK5的表达能有效抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力（P<0.05）,而促进胃癌细胞凋亡（P<0.05）,并诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 沉默ERK5可显著抑制胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的生长侵袭,促进细胞凋亡,ERK5可能是胃癌治疗的潜在靶点。     

柴胡皂苷d通过AKT/mTOR信号通路调控胶质瘤C6细胞自噬

目的 探讨柴胡皂苷d在胶质瘤C6细胞自噬中的作用及其机制。方法 分别以终浓度为0 μmol/L（Control组）、2 μmol/L、4 μmol/L、6 μmol/L、8 μmol/L、10 μmol/L、12 μmol/L的柴胡皂苷d作用胶质瘤C6细胞后,用CCK⁃8检测细胞增殖能力,后续分别采用克隆形成实验、划痕实验检测柴胡皂苷d（8 μmol/L）对胶质瘤C6细胞增殖能力和细胞迁移能力的影响,Western blot和qRT⁃PCR检测胶质瘤C6细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3和AKT/mTOR信号通路相关蛋白及基因的表达情况。结果 与Control组比较,各浓度柴胡皂苷d均能抑制胶质瘤C6细胞增殖且增殖抑制率随着药物浓度的升高而升高（均P<0.01）。8 μmol/L柴胡皂苷d作用24 h后,与Control组比较,胶质瘤C6细胞的克隆形成数目显著减少［（479.33±30.66）个 vs （258.66±73.35）个,P<0.01］,细胞迁移率显著降低［（70.83±4.29）% vs （19.47±1.71）%,P<0.001］,自噬相关蛋白Beclin1和LC3的蛋白及mRNA表达水平均显著升高（均P<0.01）,而AKT和mTOR信号蛋白及mRNA表达水平均降低（均P<0.01）。结论 柴胡皂苷d可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导胶质瘤C6细胞发生自噬并抑制其增殖与迁移。     

环氧合酶-2对人SGC-7901胃癌细胞E-cadherin的表达及迁移能力的影响

目的 研究环氧合酶-2（COX-2）通过调控E-钙黏素（E-cadherin）对胃癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法 分别应用塞来昔布（Celecoxib）及前列腺素E2(PGE2)对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901进行干预,采用实时荧光定量反转录PCR检测COX-2、E-cadherin mRNA的表达;运用免疫荧光标记法结合激光共聚焦荧光显微镜分析E-cadherin的蛋白表达量;应用Transwell法检测细胞迁移能力的变化。结果 实时荧光定量反转录PCR检测塞来昔布明显抑制体外培养人胃癌细胞SGC-7901中COX-2 mRNA的表达（P＜0.01）,而E-cadherin mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性升高（P＜0.01）;运用PGE2干预后E-cadherin mRNA表达呈浓度与时间依赖性下降（P＜0.05或P＜0.01）。塞来昔布30 μmol/L干预人胃癌细胞SGC-7901 24、36、48 h后,激光共聚焦荧光显微镜检测E-cadherin的蛋白表达量明显升高（P＜0.05）;PGE2 1 μmol/L干预24、48 h后,E-cadherin蛋白表达量明显下降（P＜0.05）。塞来昔布组穿过Transwell小室的细胞数明显少于对照组（P＜0.01）,PGE2组穿过Transwell小室的细胞数明显高于对照组（P＜0.05）。结论 COX-2特异性抑制塞来昔布通过抑制COX-2的表达,上调E-cadherin表达量,抑制体外培养人胃癌细胞SGC-7901的迁移能力;外源性PGE2能够下调SGC-7901胃癌细胞E-cadherin表达量从而促进肿瘤细胞的迁移能力。     

白藜芦醇逆转胃癌细胞对阿帕替尼耐药性的实验研究

目的 探讨白藜芦醇（RES）在胃癌细胞对阿帕替尼耐药性中的影响及可能机制。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞和SGC7901／AR耐药细胞,MTT法和划痕实验检测单药不同浓度阿帕替尼或联合RES对SGC7901和SGC7901／AR细胞增殖和迁移的影响,分别计算SGC7901和SGC7901／AR细胞耐药指数、RES的逆转倍数（RF）和相对逆转率（RRR）。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测上述处理细胞株中miR-122、p-VEGFR2、p-Akt mRNA表达。结果 阿帕替尼显著抑制SGC7901细胞的增殖和迁移能力,并呈浓度依赖性（P＜0.05）,但对SGC7901／AR细胞无影响,耐药指数为15.57;阿帕替尼联合50.0 μmol／L RES可显著抑制SGC7901和SGC7901／AR细胞的增殖和迁移能力,并呈浓度依赖性（P＜0.05）,耐药指数为2.13,RES的逆转倍数为7.91倍,相对逆转率为93.4％。未经处理SGC7901细胞中miR-122、p-VEGFR和p-Akt mRNA表达水平分别为0.74±0.11、0.76±0.13和0.67±0.09,显著高于SGC7901／AR细胞（P＜0.05）;经10 μmol／L阿帕替尼作用后,SGC7901细胞中p-VEGFR2和p-Akt mRNA表达水平显著下降（P＜0.05）。经10 μmol／L阿帕替尼+50.0 μmol／L RES处理后,SGC7901和SGC7901／AR细胞中miR-122表达显著升高（P＜0.05）,而p-VEGFR2和p-AktmRNA表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 RES能逆转胃癌细胞株对阿帕替尼的耐药性,其机制可能通过上调miR-122并抑制VEGFR2和Akt磷酸化水平来实现。     

UGCG通过调控MDR1/P-gp参与人结肠癌奥沙利铂耐药的初步研究

目的 建立人结肠癌耐奥沙利铂（L-OHP）细胞株,检测该细胞株的多药耐药性并初步探讨其可能的耐药机制。方法 以人结肠癌细胞HCT116为对象,采用药物浓度梯度递增诱导法建立人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT-116/L-OHP。CCK-8法检测L-OHP、顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）对亲本细胞和耐药细胞株的半数抑制浓度（IC50）。使用UDP-葡萄糖神经酰胺糖基转移酶（UGCG）siRNA转染HCT-116/L-OHP细胞,实时荧光定量 PCR和Western blot检测干扰前后UGCG基因和多药耐药基因1（MDR1）mRNA及其编码的蛋白表达水平。结果 HCT-116/L-OHP对L-OHP的耐药指数为10.5,与DDP有一定程度的交叉耐药,耐药指数为4.61,但对5-Fu无交叉耐药。耐药细胞HCT-116/L-OHP中UGCG、MDR1 mRNA和UGCG、P-糖蛋白（P-gp, MDR1编码的蛋白）表达均增加,相比HCT-116细胞,差异具有统计学意义（P<0.05）。UGCG siRNA成功抑制HCT-116/L-OHP细胞中UGCG的表达,各干扰组MDR1 mRNA、P-gp表达减少,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 成功构建了人结肠癌耐药细胞株;UGCG基因通过调控MDR1/P-gp的表达参与人结肠癌奥沙利铂的耐药机制的形成。     

马齿苋多糖对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的  探讨马齿苋多糖对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞，分别用不同浓度（25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL）马齿苋多糖作用胃癌SGC7901细胞，以生理盐水溶液为阴性对照组，5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照组，采用MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 不同浓度马齿苋多糖作用胃癌SGC7901细胞的增殖抑制率随着作用时间的延长和药物浓度的提高而增加。作用48 h后，200 μg/mL、300 μg/mL马齿苋多糖组的细胞增殖抑制率分别为（53.02±2.46）%、（57.20±2.14）%，与5-FU组细胞增殖抑制率（56.36±3.26）%相当（P＞0.05）；各浓度组的细胞凋亡率依次为31.92%、38.39%、40.45%、48.49%、55.71%，与阴性对照组比较均升高（均P＜0.05）；与5-FU组比较，低浓度（25 μg/mL、50 μg/mL、100μg/mL）组的细胞凋亡率降低（P＜0.05），而高浓度（300 μg/mL）组的细胞凋亡率升高（P＜0.05）。结论 马齿苋多糖可抑制胃癌SGC7901细胞增殖并诱导其凋亡。     

不同方法检测K-Ras基因突变与转移性结直肠癌疗效及预后的关系

目的 探讨直接测序法和肽核酸钳制PCR（PNA-PCR）法检测K-Ras基因突变状态与转移性结直肠癌患者疗效及预后的相关性。方法 收集110例转移性结直肠癌患者的石蜡包埋肿瘤组织,采用直接测序法和PNA-PCR法分别检测肿瘤组织的K-Ras基因第2外显子第12、13密码子的突变状态,并分析其与患者预后的关系。结果 直接测序法检测到43例K-Ras基因突变,PNA-PCR法除了检测出这些突变之外,还在直接测序法检测的野生型中发现了10例突变。对K-Ras突变状态与患者的预后分析发现,直接测序法检测的K-Ras野生型及突变型患者的中位生存时间（OS）分别为20.5个月和15.6个月（P=0.067）。PNA PCR法检测的野生型和突变型患者的中位OS分别为21.3个月和15.8个月（P=0.014）。两种方法检测的野生型与突变型的有效率和无病进展时间（PFS）差异均无统计学意义。按照这两种方法的检测结果分为3组,高突变组、低突变组和野生型组,仅高突变组与野生型组的OS差异有统计学意义（15.6个月vs.21.3个月,P=0.040）。Cox多因素分析显示,ECOG评分（HR=2.70,95％CI：1.39～5.25,P=0.003）和K-Ras丰度（HR=1.52,95％CI：1.52～2.19,P=0.026）与患者的预后相关。结论 K-Ras突变不是以伊立替康或奥沙利铂为主方案的疗效预测因子。PNA-PCR法检测的K-Ras突变状态与患者的预后有关。建议用PNA-PCR法确定野生型患者,而突变型患者则用直接测序法来确定。     

COX-2通过NF-κB通路上调胃癌细胞P-gp表达的实验研究

目的 探讨紫杉醇（TAX）作用下环氧化酶-2（COX-2）诱导胃癌细胞株SGC-7901多药耐药P蛋白（P-gp）表达可能的信号通路。方法 MTT法检测TAX、COX-2抑制剂NS-398和核因子-κB （NF-κB）信号通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）不同剂量对胃腺癌细胞株SGC-7901生长的影响;Western blotting检测TAX作用于SGC-7901细胞株以及联合NS-398、PDTC对COX-2、NF-κB p65和P-gp表达的影响。结果 TAX、NS-398和PDTC均对胃癌细胞株SGC-7901的生长具有细胞毒作用,并呈剂量依赖性。TAX（0.1、0.3、0.5μmol／L）可诱导COX-2、p65和P-gp表达,随剂量增加,3种蛋白表达显著增加;与NS-398（5、10μmol／L）联用时,随剂量增加和时间延长,3种蛋白表达减少;与PDTC（0.2μmol／L）联用时,随作用时间延长,p65和P-gp表达减少。结论 在TAX作用下,COX-2可能通过激活NF-κB通路而引起胃癌SGC-7901细胞株P-gp表达增加。