高低转移人卵巢癌细胞系基因表达谱差异

目的 用基因芯片技术研究高低转移人卵巢癌细胞系（HO－8910PM和HO－8910）基因表达谱差异,筛选与转移相关的基因。方法 分别抽提高低转移人卵巢癌细胞和对照正常卵巢上皮的总RNA并纯化mRNA;分别将等量的mRNA逆转录合成以图像,用软件对扫描图像进行数字化处理和分析。结果 HO－8910细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有355个基因;HO－8910PM细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有323个基因。HO－8910PM与母系HO－8910比较差异2倍以上共有163个基因,差异3倍以上共有21个基因。结论 两株人卵巢癌细胞与正常卵巢上皮细胞基因表达谱存在差异,提示这些基因与卵巢癌的发生和发展有关;HO－8910PM与HO－8910比较存在差异的基因可能与高转移特性相关。     

Study of the Gene Expression Profile of Human Ovarian Carcinoma by a Gene Chip

OBJECTIVE To study the difference in gene expression between human ovarian carcinoma and normal ovarian tissues, and screen the novel associated genes by cDNA microarrays.METHODS Total RNA from 10 cases of ovarian cancer and from normal ovarian tissues were extracted by a single step method. The cDNA was retro-transcribed from an equal quantity of mRNA derived from the 10 cases of ovarian carcinoma and normal ovarian tissues, followed by labeling the cDNA strands with Cy5 and Cy3 fluorescence as probes. The mixed probes were hybridized with BiostarH 8464 dot human somatic cell genes.Fluorescence signals were assessed by a ScanArray 4000 laser scanner and the images analyzed by Gene Pix Pro 3.0 software with a digital computer.RESULTS By applying the cDNA microarray we found a total of 185 genes for which expression levels differed more than 5 times comparing human ovarian carcinoma with normal ovarian epithelium. Among these genes 86 were up-regulated ＞5 times and 99 were down regulated ＜0.2.CONCLUSION The cDNA microarray technique is effective in screening the differential gene expression between human ovarian cancers and normal ovarian epithelium. It is suggested that these genes identified are related to the genesis and development of ovarian carcinoma.     

A STUDY OF MULTI-GENE EXPRESSION IN THE HIGHLY METASTASIZING HUMAN OVARIAN CANCER CELL LINE HO-8910PM AND ITS MOTHER CELL LINE HO-8910

Ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｏｆｔｕｍｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓｈａｖｅｐｒｏｖｅｄｔｈａｔｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅａｎｄｔｕｍｏｒｓｕｐｒｅｓｏｒｇｅｎｅｐｌａｙｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅ...     

P16 GENE EXPRESSION IN OVARIAN EPITHELIAL CYSTADENOCARCINOMA

Itiswellknownthatc-oncogeneovereXPressionaswellasantioncogeneabsenceorinactivationplayaveryimportantroleincarcinogenesis.P16gene(orMTSI,Multipletumorsuppresser1)hasbeenwidelyanalyzedinvariousprimarytumors,suchasmelanoma,neuroblastomaandtumorsinkidney,esophagus,stomach,bladder,breastandpancreas.Theresultsfromdifferentresearchshowedahigh-frequentP16genemutationandabsence.'-ToexplaintherelationshipbetweenP16geneandovarian'cancer,wehadanalyzedP16expressioninhumanovarianpoorlydifferentiatedcyst…     

Identification and chromosomal localizations of signal transduction genes associated with human ovarian cancer metastasis

Gene chip technology can be used to identify and localize signal transduction genes associated with metastasis. We used the human genome U133A gene chip to detect differences in gene expression profiles among high (H) and low (L) metastatic human ovarian cancer cell lines (HO-8910PM, HO-8910), and normal ovarian tissues (C), to identify metastasis-associated signal transduction genes and determine their chromosomal localizations. A total of 37 signal transduction genes showed more than twofold differences in expression levels between the H and L metastatic ovarian cancer cell lines; of these, 21 genes were up-regulated [signal log ratio (SLR) ≥?1], and 16 genes were down-regulated (SLR ≤?-1). Most genes were located on chromosome 1 (7 genes, 18.9%), followed by chromosome 8 (5 genes, 13.5%), then chromosomes 6, 11, and 17 (3 genes each, 8.1%). A total of 21 of the differentially expressed genes (56.7%) were localized on the short arm of the chromosome (q). The disruption of signal transduction gene expression may be an important factor associated with ovarian cancer metastasis. The affected signal transduction genes were localized to chromosomes 1, 8, 6, 11, and 17.     

胰腺癌伴淋巴结转移的基因芯片研究

目的 利用基因芯片技术分析伴与不伴淋巴结转移胰腺癌组织中的差异表达基因。方法 将4000个人类全长基因的PCR产物点样于特殊处理后的玻片上制备基因芯片。用逆转录的方法,分别将两种荧光Cy3-dUTP和Cyt-dUTP标记正常胰腺组织和胰腺癌组织mRNA,以制备cDNA探针,并与芯片杂交。以ScanArray 3000荧光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,获得的荧光信号图像用计算机分析。每点上两种荧光信号的强度分别代表Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的量。最后,计算每点的Cy5和Cy3比值。结果 在所检测的2例伴淋巴结转移和2例不伴淋巴结转移的胰腺癌标本中,56个基因（其中包括24个已知基因）有表达差异。结论 基因芯片技术为阐明人类胰腺癌伴淋巴结转移的特异性基因表达提供了有效方法。     

采用基因表达谱芯片筛选肺癌细胞系差异表达基因的初步探讨

目的:探讨基因芯片技术分析高低不同转移能力肺癌细胞系的差异表达基因.方法:采用基因芯片技术检测具有高低不同转移能力的肺癌细胞系BE-1和LH-7的差异表达基因.抽提细胞mRNA,利用荧光标记dUTP逆转录制备cDNA探针,与人肺癌表达谱基因芯片杂交,以ScanArray 4000荧光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,获得的荧光信号图像用计算机分析,每点上两种荧光信号的强度分别代表Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的量,最后计算每点的Cy5和Cy3的比值.结果:在所检测的人高低肺癌转移细胞系BE-1和LH-7中,20个基因有表达差异,其中高表达14条,低表达6条.结论:基因芯片技术为筛选人类肺癌转移基因提供了有效方法.     

人卵巢浆液性乳头状囊腺癌相关基因表达谱

[目的]探讨人卵巢上皮性癌与正常卵巢组织基因表达谱差异。[方法]采用基因芯片技术，按一步法分别抽提10例卵巢浆液性乳头状囊腺癌患者的癌组织和正常卵巢组织的总RNA并纯化mRNA；逆转录合成以Cy5荧光标记卵巢癌细胞和Cy3荧光标记正常卵巢上皮细胞的cDNA作为探针，在含有8464点人类体细胞基因模板的表达谱cDNA芯片上进行杂交。用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像，用计算机软件对扫描图像进行数字化处理分析。[结果]卵巢浆液性乳头状囊腺癌与正常卵巢上皮比较，差异5倍以上共有185个基因，其中表达上调（其荧光强度增强〉5）有86个，表达下调（其荧光强度减弱〈0.2）有99个。[结论]卵巢上皮性癌与正常卵巢上皮比较差异表达5倍以上的185个基因，可能与卵巢上皮癌的发生和发展有关。     

基因芯片检测Ⅰ期低分化肺腺癌基因表达谱

目的 用基因芯片技术分析Ⅰ期低分化肺腺癌的异常基因表达。方法 提取肺癌组织及正常肺组织的mRNA,分别用Cy5-dUTPCy3-dUTP标记,再与8192点基因芯片杂交,用ScanArray4000扫描仪及GenePix3．0分析软件处理杂交信号获取结果。结果 肺癌组织与正常肺组织表达差异基因有580条,涉及到细胞生长调节、细胞间信息转导等多个方面。其中癌组织中上调基因为405条,下调基因175条;差异极显著性基因66条,表达上调35条,下调24条,另外有7条为未知基因。结论 多基因参与Ⅰ期低分化肺腺癌发病,基因芯片技术是疾病基因筛选的有效方法。     

食管癌患者外周血基因表达谱研究

目的用基因芯片技术研究食管癌患者外周血和正常人基因表达谱差异,筛选与食管早期癌变相关的基因。方法分别抽提食管癌患者外周血细胞和正常人外周血细胞总RNA并纯化mRNA;将各mRNA逆转录合成以Cy5和Cy3标记的cDNA一链做探针,混合后在1张含有4096条双点人类全长基因的芯片上进行杂交。用扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用软件对扫描图象进行数字化处理和分析。结果食管癌患者外周血细胞和正常人外周血比较差异2倍以上的共有92个基因。其中差异3倍以上共有36个基因。有2个人尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)基因显著上调,80K—L蛋白基因、蛋白酪氨酸磷酸酶基因、原癌基因蛋白mRNA显著上调,胶原V型α-2基因显著下调。结论80K-L蛋白基因、蛋白酪氨酸磷酸酶基因、原癌基因蛋白、胶原V型α-2基因异常可能与食管癌发生、发展和转移相关。uPAR基因可能被利用在外周血诊断食管癌微转移具有重要意义。     

食管癌和癌旁上皮基因表达谱差异

目的：用基因芯片技术研究食管癌和癌旁组织基因表达谱差异,筛选与早期癌变相关的基因,方法：分别抽提食管癌组织,癌旁组织和正常食管上皮的总RNA并纯化mRNA,将各mRNA逆转录合成以Cy5和Cy3标记的cDNA-一链做探针,分别混合后在2张含有4096条双点人类全长基因的芯片上进行杂交,用扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用软件对扫描图像进行数字上处理和分析,结果：食管癌与正常食管上皮比较差异2倍以上共有135个基因,癌旁上皮与正常食管上皮比较差异2倍以上共有31个基因,其中13个基因与食管癌中出现相同,结论：通过三者的基因谱平行比较提示食管癌与正常食管上此比较差异2倍以上的135个基因可能与食管癌的发生和发展有关,癌旁上皮与正常食管上皮比较差异2倍以上的31个基因可能与早期食管癌变的启动和演化有关。     

结肠癌淋巴结转移相关基因的表达谱研究

 目的 利用基因芯片技术分析伴与不伴淋巴结转移结肠癌组织中的差异表达基因。方法 将含有16 084 条人类全长基因的PCR 产物点样于特殊处理后的玻片上制备基因芯片。用反转录的方法，分别将两种荧光Cy3-dUTP 和Cy5-dUTP 标记结肠癌组织和淋巴结转移组织mRNA，以制备cDNA 探针，并与芯片杂交。以Agilent 荧光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号，获得的荧光信号图像用计算机分析。结果 在16 084条基因中，结肠癌原发灶与转移淋巴结组织间存在差异表达的基因共999条，有537 条基因出现显著性表达上调，462条基因出现显著性表达下调。在4 例患者中出现共同表达上调基因44条，共同表达下调基因30条。包括癌基因、抑癌基因、黏附分子、基质金属蛋白酶、信号转导因子、细胞代谢和免疫相关基因等。结论 结肠癌转移是多基因作用的综合结果，转移相关基因表达谱的分析为预防和控制结肠癌的转移提供了新的思路与线索。     

高转移人卵巢癌细胞系及其母系多基因表达研究

为研究高转移人卵巢癌细胞系ＨＯ８９１０ＰＭ及其母系ＨＯ８９１０多基因表达情况及其彼此关系,采用ＳＰ免疫组化染色方法,观察了９种基因产物的表达。结果显示,除ｂａｘ外,其余８种基因产物在２株细胞均呈不同程度的阳性表达。在ＨＯ８９１０ＰＭ细胞系中,以ｐ５３、ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤ４４Ｖ６、ＥＧＦＲ的表达强度强于母系;而ｐ１６、ｎｍ２３表达强度则较母系弱。２株细胞ｃｅｒｂＢ２、ｂｃｌ２表达无明显不同。结果表明,ＨＯ８９１０ＰＭ是一株较母系ＨＯ８９１０更具侵袭和转移生长潜能的细胞株。同时也证实肿瘤的发生、浸润和转移是多基因参于、多阶段协同作用的结果     

Silencing of IQGAP1 by shRNA inhibits the invasion of ovarian carcinoma HO-8910PM cells in vitro

Background

IQGAP1 is a scaffolding protein and overexpressed in many human tumors, including ovarian cancer. However, the contribution of IQGAP1 to invasive properties of ovarian cancer cells remains unknown. Here, we investigated the effect of IQGAP1-specific short hairpin RNA (shRNA) expressing plasmids on metastatic potential of ovarian cancer HO-8910PM cells.

Methods

We used RT-PCR and Western blot analysis to characterize expression of IQGAP1 in three human ovarian cancer-derived cell lines SK-OV-3, HO-8910 and HO-8910PM. We then determined whether expression of endogenous IQGAP1 correlated with invasive and migratory ability by using an in vitro Matrigel assay and cell migration assay. We further knocked down IQGAP1 using shRNA expressing plasmids controlled by U1 promoter in HO-8910PM cells and examined the proliferation activity, invasive and migration potential of IQGAP1 shRNA transfectants using MTT assay, in vitro Matrigel-coated invasion assay and migration assay.

Results

IQGAP1 expression level seemed to be closely associated with the enhanced invasion and migration in ovarian cancer cell lines. Levels of both IQGAP1 mRNA and protein were significantly reduced in HO-8910PM cells transfected with plasmid-based IQGAP1-specific shRNAs. RNAi-mediated knockdown of IQGAP1 expression in HO-8910PM cells resulted in a significant decrease in cell invasion and migration.

Conclusion

Our findings support the hypothesis that IQGAP1 promotes tumor progression and identify IQGAP1 as a potential therapeutic strategy for ovarian cancer and some other tumors with over-expression of the IQGAP1 gene.     

肿瘤抑制基因DOC-2真核表达载体的构建及在卵巢癌细胞HO-8910中的表达鉴定

目的构建肿瘤抑制基因DOC-2的真核表达载体pCDNA3.1-p93,将其转入人卵巢癌细胞系HO-8910中,对其基因表达进行相关检测,为进一步研究DOC-2的功能奠定基础。方法利用XhoI酶切含有p93cDNA的质粒得到p93cDNA基因片段,将其连接入真核表达载体pCDNA3.1,并通过酶切鉴定。用脂质体介导法将真核表达载体pCDNA3.1-p93转染HO-8910,通过G418筛选稳定表达克隆;用免疫组化法观察人DOC-2蛋白在HO-8910中的表达。结果构建了DOC-2的真核表达载体pCDNA3.1-p93,并通过酶切鉴定。免疫细胞化学结果显示pIRES2-EGFP-p93成功转入HO-8910中。结论成功构建了真核表达载体pCDNA3.1-p93并在HO-8910中得到稳定表达,为研究DOC-2蛋白的功能奠定了基础。     

应用基因芯片技术筛选卵巢癌紫杉醇耐药差异表达基因

目的应用基因芯片技术研究人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC3/Tax300与其亲本细胞OC3(敏感株)之间的基因表达谱差异,筛选耐药相关基因,探讨基因表达谱差异与卵巢癌肿瘤耐药之间相关性。方法分别提取C3/Tax300与OC3细胞的总RNA并纯化mRNA;将等量的mRNA逆转录,以Cy5和Cy3标记的cDNA做探针,在Biostar H140S基因表达谱芯片上进行杂交。扫描芯片荧光信号图像,用基因图像分析软件对扫描图像进行数字化处理和分析。结果共筛选出显著表达差异基因134条,其中117种基因表达水平下调,17种基因表达上调,主要涉及细胞信号蛋白和传递蛋白,蛋白翻译合成类以及细胞骨架和运动、离子通道和运输蛋白、代谢、发育等14大类相关基因。下调基因主要为EBNA-3、COP9、StIP1,上调的基因主要是JAK2、HSPS、NADH等。结论这些基因表达差异与卵巢癌化疗耐药有关。     

DOC-2对卵巢癌细胞HO-8910致瘤力的影响

背景与目的：作为近年发现的新的肿瘤抑制基因，DOC-2的作用机制还不完全清楚。本实验的目的在于观察DOC-2转染后对卵巢癌细胞系HO-8910在克隆形成率、细胞周期、裸鼠致瘤能力等方面的影响，并对其作用机制进行初步探讨。方法：实验分3组：卵巢癌细胞系HO-8910（无DOC-2基因的表达）、8910-P93（经转染并表达DOC-2基因）、8910-pcDNA3．1（转染空载体pcDNA3．1），首先通过软琼脂克隆形成实验比较3组细胞克隆形成率的差异，之后利用流式细胞仪观察其细胞周期的变化，最后用裸鼠荷瘤实验进一步验证DOC-2对肿瘤细胞致瘤能力的影响。结果：卵巢癌细胞系HO-8910在转染DOC-2后其克隆形成率明显降低，与转染前差异明显（P〈0．05），同时G．和G，期细胞明显增多而S期细胞明显减少，移植瘤裸鼠荷瘤实验显示HO-8910-P93细胞在裸鼠体内生长缓慢，肿瘤体积及重量均明显低于对照组（P〈0．05）。结论：DOC-2基因能明显抑制卵巢癌细胞系HO-8910的致瘤力。     

p16基因在人卵巢上皮癌细胞系中的缺失分析研究

目的：了解新型抑癌基因ｐ１６在人卵巢上皮癌细胞系中的变异情况,为认识卵巢上皮癌的形成和发展依据。方法：应用ＰＣＲ扩增、ｍＲＮＡ原位杂交和免疫细胞化学方法,对５种人卵巢上皮癌细胞系ＣＡＯＶ３、ＯＶＣＡＲ３、ＡＯ、ＨＯ－８９１０及ＨＯ－８９１０ＰＭ进行分析。结果：５种人卵巢上皮癌细胞系中只有ＣＡＯＶ３（２０％）显示ｐ１６基因纯合性缺失,ＣＡＯＶ３细胞亦无ｐ１６基因ｍＲＮＡ及蛋白表达。ＯＶＣＡＲ３、Ｈ０     

人反义VEGF基因表达载体的构建及其对卵巢癌细胞增殖的影响

目的：构建人反义VEGF基因真核表达载体,进行抗血管生成治疗卵巢癌实验。方法：RT－PCR法获得人VEGF基因,将VEGF基因反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定结果。用此真核表达载体转染人卵巢癌细胞HO－8910,G418筛选获得阳性克隆,RNA斑点杂交鉴定HO－8910细胞中VEGF表达。Western blot及间接免疫荧光法检测转染前后HO－8910 细胞中VEGF蛋白表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状及裸鼠体内致瘤性。结果：RT－PCR法得到VEGF基因,并获得反向构建的VEGF真核表达载体。VEGF反义RNA部分阻断了HO－8910细胞中VEGF表达,转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变。裸鼠体内致瘤性降低。结论：成功构建了反义VEGF基因真核表达载体,该载体可明显抑制卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的基因治疗提供了一定的实验依据。