七氟醚预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及自噬在其中的作用

目的 评价七氟醚预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及自噬在其中的作用.方法 成年雄性SD大鼠45只,体重420～450 g,采用随机数字表法分为5组(n=9):对照组(Con组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚预处理组(Sevo组)、特异性自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-MA组)和3-MA+七氟醚预处理组(3-MA+ Sevo组).I/R组胸主动脉球囊阻断+体循环低血压制备大鼠脊髓缺血再灌注模型,Sevo组于缺血前24h时吸入3.4％七氟醚2h,3-MA组和3-MA+ Sevo组分别于再灌注即刻和吸入七氟醚前15 min时鞘内注射20出3-MA(10 mmol/L).于再灌注24h时采用神经功能缺陷评分(NDS评分)法评价大鼠神经功能,随后处死取脊髓,Western blot法检测LC3B、Beclin 1、Bcl-2蛋白的表达水平.结果 与Con组比较,I/R组脊髓LC3B、Beclin 1蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,NDS评分升高(P＜0.05);与I/R组比较,Sevo组、3-MA组和3-MA+ Sevo组脊髓LC3B、Beclin 1蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,NDS评分降低(P＜0.05);Sevo组、3-MA组和3-MA+ Sevo组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚预处理可减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤,其机制可能与上调Bcl-2,抑制自噬溶酶体途径,减轻自噬有关.     

七氟醚对新生小鼠fractalkine/CX3CR1表达及学习记忆功能的影响

目的探讨七氟醚对新生小鼠fractalkine/CX3CR1表达及学习记忆功能的影响。方法取健康6日龄C57BL/6新生小鼠36只,分为对照组(C组)、七氟醚1组(S1组)、七氟醚2组(S2组),每组12只。C组小鼠出生后第6、7和8天每天接受1次2 h的60%氧浓度的吸入;S1组小鼠出生后第6、7和8天每天接受1次2 h的2%七氟醚麻醉,吸入氧浓度为60%;S2组小鼠出生后第6、7和8天每天接受1次2 h的3%七氟醚麻醉,吸入氧浓度为60%。三组分别于出生后第9天(T_1)及出生后第34天(T_2)时各处死6只小鼠,取脑组织,采用Western blot法检测海马脑片fractakine和CX3CR1蛋白含量;real-time PCR检测海马脑片fractalkine和CX3CR1 mRNA的表达量。三组剩余6只小鼠用药3周后即出生第29天时行为期5 d的mirror水迷宫实验进行学习记忆能力测试并记录。记录出生后第29～32天小鼠的逃避潜伏期和游泳速度、原平台穿越次数。结果与C组比较,S1组和S2组学习记忆功能降低且海马脑片fractalkine和CX3CR1蛋白含量和mRNA表达量明显降低(P0.05);与S1组比较,S2组学习记忆功能降低且海马脑片fractalkine和CX3CR1蛋白含量和mRNA表达量明显降低(P0.05)。结论 6日龄小鼠连续吸入七氟醚3 d,3周后出现七氟醚麻醉浓度递增的学习记忆能力障碍。小鼠吸入七氟醚可致幼龄小鼠海马脑片fractalkine、CX3CR1蛋白含量和mRNA表达量降低。     

长链非编码RNA β分泌酶1反义转录物在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)β分泌酶1反义转录物(BACE1-AS)在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用。方法 SPF级健康雄性SD老年大鼠64只,18月龄,体重480～580 g。采用随机数字表法分为四组:对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+阴性对照质粒组(SN组)和七氟醚+BACE1-AS抑制剂(siRNA-BACE1-AS)组(ST组),每组16只。SN组和ST组分别侧脑室注射阴性对照质粒和siRNA-BACE1-AS,C组和S组注射等体积PBS溶液,注射后1 d C组吸入30%氧气6 h, S组、SN组和ST组吸入3.6%七氟醚与30%氧气的混合气体6 h。气体吸入后1 d,采用水迷宫实验测实验第1～5天逃避潜伏期和实验第6天穿越平台次数。水迷宫实验结束后1 h内处死大鼠,取海马组织,采用ELISA法检测海马组织TNF-α、IL-1β、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)浓度,可见分光光度计法检测海马组织caspase-3活性,Western blot法检测海马组织Bax、Bcl-2和BACE1蛋白含量,RT-qPCR法检测海马组织lncRNA BACE1-AS、miR-124和BACE1 mRNA表达量,TUNEL法测定海马组织神经细胞凋亡百分比,苏木素伊红染色法观察海马组织病理结构。结果与C组比较,S组、SN组和ST组水迷宫实验第3～5天逃避潜伏期明显延长(P0.05),实验第6天穿越平台次数明显减少(P0.05),海马组织TNF-α、IL-1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1-AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显升高(P0.05),SOD浓度、Bcl-2蛋白含量、miR-124 mRNA表达量明显降低(P0.05),caspase-3活性明显增强(P0.05)。与S组比较,ST组水迷宫实验第3～5天逃避潜伏期明显缩短(P0.05),实验第6天穿越平台次数明显增多(P0.05),海马组织TNF-α、IL-1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1-AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显降低(P0.05),SOD浓度、Bcl-2蛋白含量、miR-124 mRNA表达量明显升高(P0.05),caspase-3活性明显减弱(P0.05)。S组和SN组上述指标差异均无统计学意义。结论长链非编码RNAβ分泌酶1反义转录物参与七氟醚诱导老年大鼠认知功能下降,其机制与神经细胞炎症、氧化应激损伤、调控miR-124和BACE1表达和促进细胞凋亡有关。     

七氟醚不同吸入时间对老年大鼠认知功能的影响

目的 评价七氟醚不同吸入时间对老年大鼠认知功能的影响.方法 健康SD雄性大鼠40只,月龄18月,体重(600±50)g,采用完全随机法分为5组(每组8只):对照组(C组)、吸入3％七氟醚0.5 h组(S1组)、吸入3％七氟醚1h组(S2组)、吸入3％七氟醚2h组(S3组)、吸入3％七氟醚4h组(S4组).所有组于干预结束后第2天行水迷宫实验,于水迷宫实验结束后15 min处死大鼠,取海马组织,采用Western blot法测定海马N-甲基-D-天门冬胺酸受体2B亚基(N-methyl-D-aspartatereceptor type 2B,NR2B)的表达.结果 与C组平台穿越次数[(5.5±1.2)次]比较,S1组[(7.3±1.7)次]明显增多(P＜0.05),S3组[(3.8±1.0)次]和S4组[(1.9±1.0)次]均明显减少(P＜0.05);与S3组比较,S4组减少较为明显(P＜0.05).与C组目标象限停留时间[(48.2±6.2)s]比较,S1组[(56.8±5.1)s]明显延长(P＜0.05),S3组[(39.1±4.0)s]和S4组[(31.6±3.2)s]均明显缩短(P＜0.05);与S3组比较,S4组缩短较为明显(P＜0.05).与C组(1.00)比较,S1组(0.69±0.88)NR2B蛋白相对密度减少(P＜0.05),S3组(1.47±0.17)和S4组(2.17±0.10)NR2B蛋白相对密度均增多(P＜0.05),与S3组比较,S4组增多更为明显(P＜0.05).结论 吸入3％七氟醚2h或4h均可导致老年大鼠认知功能下降,吸入3％七氟醚4h更为明显,其机制可能与海马中过度表达NR2B蛋白有关.     

七氟醚对不同性别大鼠海马神经元p-CREB1表达的影响

目的 评价七氟醚对不同性别大鼠海马神经元磷酸化cAMP反应元件结合蛋白1(p-CREB1)表达的影响.方法 健康成年雌性SD大鼠30只,3月龄,体重180～220 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n＝15):对照组(Fc组)和七氟醚组(Fs组);健康成年雄性SD大鼠28只,3月龄,体重380-440 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n＝14):对照组(Mc组)和七氟醚组(Ms组).Fc组和Mc组吸入95％氧气(流量4 L/min)2 h,Fs组和Ms组吸入3％七氟醚2h.于停止吸入七氟醚后2d时行避暗实验;于停止吸入七氟醚后3～7d时行Morris水迷宫实验,第7天认知功能测定结束后处死大鼠,取脑组织,剥离海马,采用Western blot法检测海马组织p-CREB1及Bcl-2、caspase-8的表达水平.结果 与Fc组比较,Fs组停止吸入七氟醚后3d时逃避潜伏期延长,游泳总路程增加,海马组织p-CREB1和Bcl-2表达下调,caspase-8表达上调(P<0.05);与Mc组比较,Ms组停止吸入七氟醚后3～6d时逃避潜伏期延长,游泳总路程增加,海马组织p-CREB1和Bcl-2表达下调,caspase-8表达上调(P<0.05);与Fs组比较,Ms组停止吸入七氟醚后4～6d时逃避潜伏期延长,游泳总路程增加,海马组织p-CREB1和Bcl-2表达下调(P<0.05).结论 七氟醚可通过抑制海马神经元CREB1蛋白磷酸化,上调caspase-8蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,促进神经元凋亡,导致大鼠认知功能减退,且对雄性大鼠的效应更明显.     

海马内DNA甲基转移酶在七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤中的作用

目的观察海马内DNA甲基转移酶(DNMTs)在七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤中的作用。方法出生7d雄性SD大鼠64只,随机均分为四组(n=16):对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+生理盐水组(SN组)及七氟醚+5-杂氮胞苷组(5-AZA,DNMTs抑制剂,SA组)。C组吸入30%O22h,连续3d;S组、SN组和SA组吸入3%七氟醚+30%O22h,连续3d;SA组在七氟醚吸入前1h时侧脑室注入5-AZA 1mg/kg;SN组则注射等容量生理盐水。4周后,一部分大鼠行旷场实验和Morris水迷宫实验(n=8),另一部分取海马组织(n=8),采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的mRNA和蛋白含量。结果旷场实验中,四组大鼠探索路程和中央格停留时间差异无统计学意义。与C组比较,S组在Morris水迷宫实验中逃逸潜伏期明显延长,目标象限探索时间明显缩短,海马内DNMT3a及DNMT3b的mRNA和蛋白含量明显增加(P0.05);与SN组比较,SA组逃逸潜伏期明显缩短,目标象限探索时间明显延长,海马内DNMT3a及DNMT3b的mRNA和蛋白含量明显减少(P0.05);四组海马内DNMT1的mRNA和蛋白含量差异无统计学意义。结论七氟醚可致新生大鼠远期认知功能损伤伴海马内DNMT3a和DNMT3b表达增加;5-AZA可降低海马内DNMT3a及DNMT3b表达,减轻七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤,表明DNMTs参与了七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤的过程。     

维生素D对睡眠剥夺小鼠认知功能的影响及其作用机制研究

目的探讨维生素D(vitamin D,VD)对睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)小鼠认知功能的影响及其作用机制。方法将40只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为4组(每组10只):正常对照组(Ctrl组)、SD组、SD+VD组(VD组)、SD+VD+3MA组(3MA组)。Ctrl组不做任何处理,SD组、VD组、3MA组小鼠采用多平台水环境法进行72 h的SD;VD组、3MA组腹腔注射1,25‑二羟维生素D3[1,25‑dihydroxyvitamin D3,1,25(OH)2D3]1.5μg/kg,连续7 d;3MA组腹腔注射自噬抑制剂3MA 2 mg/kg,连续7 d;Ctrl组与SD组腹腔注射等量的生理盐水。造模结束后用Morris水迷宫检测小鼠学习、记忆能力,行为学测试完毕后随即处死取材,采用ELISA试剂盒检测小鼠血清中25羟基维生素D3(25‑hydroxy vitamin D3,25HVD3)的含量以及海马组织中β‑淀粉样蛋白(amyloid β‑protein,Aβ)、TNF‑α、IL‑1β及IL‑6的含量,Western blot法检测小鼠海马组织中自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3B亚基(B subunit of microtubule‑associated protein light chain 3,LC3B)的蛋白水平;免疫荧光染色法标记LC3B。结果与Ctrl组比较,VD组、SD组和3MA组小鼠逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数及目标象限停留时间减少,血清中25HVD3含量均减少,海马组织中Aβ、TNF‑α、IL‑1β及IL‑6含量均增加,海马组织中Beclin 1和LC3B蛋白水平均升高(P<0.05)、绿色荧光表达也明显增强。与SD组比较:VD组逃避潜伏期缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间增加(P<0.05);VD组和3MA组血清中25HVD3含量增加,海马组织中Aβ、TNF‑α、IL‑1β及IL‑6含量均减少(P<0.05);VD组海马组织Beclin 1和LC3B蛋白水平升高(P<0.05),绿色荧光也表达增强。与VD组比较,3MA组小鼠逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数及目标象限停留时间减少,海马组织中Aβ、TNF‑α、IL‑1β及IL‑6含量均增加,海马组织中Beclin 1和LC3B蛋白水平降低(P<0.05)、绿色荧光表达下降。结论VD改善SD小鼠认知功能的机制可能与激活自噬有关。     

米诺环素对异氟醚麻醉后老年大鼠认知功能和海马炎症反应的影响

目的探讨米诺环素预处理对老年大鼠吸入异氟醚后认知功能和海马炎症反应的影响。方法健康雄性SPF级SD大鼠48只,约20月龄,体重350～400g,随机分为3组:生理盐水组(NS组)、异氟醚组(Iso组)、米诺环素预给药组(M组),每组16只。NS组腹腔注射等容量生理盐水;Iso组大鼠开始吸入2.5%异氟醚3min,随后1.5%异氟醚麻醉维持4h;M组于吸入异氟醚前30min腹腔注射米诺环素50mg/kg,余同Iso组。所有大鼠麻醉结束后24h立即进行认知功能测试,包括Morris水迷宫和旷场实验测试,认知功能测试完毕后立即处死大鼠,取海马组织,采用ELISA法测定大鼠海马IL-1、IL-6、TNF-α的浓度。结果与NS组比较,Iso组第2、3和4天逃避潜伏期明显延长(P0.05),第5天平台象限停留时间明显缩短、穿越平台象限次数明显减少(P0.05),第1、2和3天中心区停留时间明显缩短(P0.05)。与Iso组比较,M组第2、3和4天逃避潜伏期明显缩短(P0.05),第5天平台象限停留时间明显延长、穿越平台象限次数明显增多(P0.05),第1、2和3天中心区停留时间明显延长(P0.05)。与NS组比较,Iso组海马IL-1、IL-6、TNF-α浓度明显升高(P0.05),与Iso组比较,M组海马IL-1、IL-6、TNF-α浓度明显降低(P0.05)。NS组和M组不同时点各指标差异无统计学意义。结论米诺环素预处理可减轻异氟醚麻醉所致老年大鼠认知功能障碍,其机制可能与抑制海马炎症反应有关。     

PKD1基因对主动脉平滑肌细胞自噬的影响

目的阐明多囊肾病基因1(PKD1)对小鼠主动脉平滑肌细胞自噬的影响。方法构建PKD1基因的shRNA慢病毒干扰及PKD1基因促进剂ETS-1慢病毒过表达载体,转染小鼠主动脉平滑肌细胞,采用实时荧光定量核酸扩增(qPCR)检验干扰及过表达效率。同时通过qPCR及Western blotting检测对照组、shPKD1组及ETS-1组小鼠主动脉平滑肌细胞自噬标志分子Atg5、Beclin1和LC3的表达水平。结果与正常对照组相比,shPKD1组PKD1 mRNA表达量下降(P<0.05),而ETS-1组ETS-1 mRNA及PKD1 mRNA表达量明显升高(P<0.05)。与对照组相比,shPKD1组自噬标志物Atg5和Beclin1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05),ETS-1组Atg5和Beclin1 mRNA表达水平明显升高(P<0.001)。与对照组相比,shPKD1组Atg5、Beclin1和LC3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),ETS-1组Atg5、Beclin1和LC3蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论PKD1基因的表达能够影响小鼠主动脉平滑肌细胞自噬,即PKD1基因表达下调可抑制主动脉平滑肌细胞自噬,而PKD1基因过表达能够促进小鼠主动脉平滑肌细胞自噬。     

七氟醚对新生大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴发育的影响

目的研究新生期七氟醚暴露对下丘脑-垂体-肾上腺皮质(hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)轴发育及功能的影响。方法新生雄性SD大鼠54只,6日龄,随机分为三组:对照组(C组)、七氟醚组(S组)和布美他尼+七氟醚组(BS组),每组18只。C组:吸入100%氧气6h;S组:吸入2.1%七氟醚6h;BS组:吸入2.1%七氟醚6h,在麻醉前30min和麻醉后3h注射布美他尼。6h后,每组随机选取6只处死收集血清,采用ELISA法测定皮质酮浓度;各组剩余大鼠于第60天行高架十字迷宫测试,第65天行束缚应激30 min,并在应激前后取尾静脉血,采用ELISA法测定血清皮质酮浓度。结果麻醉后S组血清皮质酮浓度明显高于C组(P0.01);BS组血清皮质酮浓度明显低于S组(P0.01)。S组进入开放臂次数明显少于C组(P0.05),开放臂停留时间明显短于C组(P0.05),应激前后血清皮质酮浓度明显高于C组(P0.05或P0.01);BS组进入开放臂次数明显多于S组,开放臂停留时间明显长于S组(P0.05),应激前后血清皮质酮浓度明显低于S组(P0.05)。结论新生期七氟醚麻醉可导致HPA轴功能亢进,其机制与GABAA受体相关。     

反复吸入七氟烷对幼年大鼠认知功能的影响

目的 评价反复吸入七氟烷对幼年大鼠认知功能的影响.方法 健康雄性SD大鼠108只,25～35日龄,体重90～100 g,随机分为6组(n=18),C1组、C2组和C3组每天同一时间吸入纯氧0.5 L/min,1 h/次,分别吸入1、3、5 d;S1组、S2组和S3组每天同一时间吸入2.3%七氟烷及纯氧0.5 L/min,1 h/次,分别吸1、3、5 d.干预结束后7 d,各组随机取10只大鼠进行水迷宫实验,记录达标所需训练次数、逃避潜伏期及进入盲端次数;其余8只记录神经电生理强直刺激后群峰电位(PS)振幅,计算长时程增强(LTP)诱发成功率.结果 各组大鼠水迷宫实验达标所需训练次数、逃避潜伏期及进入盲端次数差异无统计学意义(P>0.05).与C3组比较,S3组LTP诱发成功率降低(P<0.05);C1组与S1组比较、C2组与S2组比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 反复吸入七氟烷虽可抑制幼年大鼠LTP形成,但抑制程度较轻,对认知功能无明显影响.     

反复吸入七氟烷对老年大鼠认知功能的影响

目的 评价反复吸入七氟烷对老年大鼠认知功能的影响.方法 健康Wistar大鼠24只,月龄18月,体重270-450 g,雌雄各半,随机分为3组(n=8):对照组(C组)、2%七氟烷组(S1组)和3%七氟烷组(S2组).C组不吸入七氟烷;S1和S2组分别吸入2%、3%七氟烷,100 min/d,连续5d.于干预结束后1-6d(T1-6)时进行水迷宫实验,记录T1-5时游泳时间和游泳距离及T6时第4象限探索时间和游泳距离.于最后1次水迷宫实验结束后60 min处死大鼠,取海马组织,采用RT-PCR法测定海马N-甲基肌天冬氨酸受体(NMDAR)、NR1和NR2B mRNA的表达.结果 与C组比较,S1组T1时游泳时间和游泳距离延长.T6时第4象限探索时间缩短,NMDAR mRNA表达上调(P<0.05),NRI和NR2B mRNA的表达差异无统计学意义(P<0.05).结论 反复吸入2%七氟烷不会导致老年大鼠认知功能减退;而反复吸入3%七氟烷可导致一过性认知功能减退.     

缺氧条件下大鼠髓核细胞中缺氧诱导因子1α与自噬相关分子的表达及相关性分析

目的探讨缺氧条件下大鼠髓核细胞中缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)与自噬相关分子Beclin1、LC3B的表达及其相关性。方法取健康成年SD大鼠髓核组织,分离培养髓核细胞并传代。取第3代髓核细胞行HE染色和Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色鉴定后,随机分为4组。A组细胞于常氧条件下(37℃、5%CO2、20%O2)培养,B组细胞于缺氧条件下(37℃、5%CO2、1%O2)培养,C组细胞转染HIF-1α-小干扰RNA后于缺氧条件下培养,D组细胞加入自噬抑制剂3-MA后于缺氧条件下培养。各组细胞培养8 h后,采用Western blot和实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测HIF-1α与自噬相关分子Beclin1、LC3B的表达情况。结果经分离纯化的第3代大鼠髓核细胞HE染色后细胞质呈淡粉色,细胞核呈蓝黑色;Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色为阳性。Western blot和qRT-PCR检测示,B组HIF-1α、Beclin1和LC3B蛋白及mRNA相对表达量均显著高于A组(P<0.05),C组均显著低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。D组HIF-1α蛋白和mRNA相对表达量与B组比较差异无统计学意义(P>0.05),Beclin1和LC3B蛋白和mRNA相对表达量均较B组显著降低(P<0.05)。结论缺氧条件能诱导大鼠髓核细胞中HIF-1α和自噬相关分子Beclin1、LC3B的表达,且HIF-1α与自噬相关分子的表达具有相关性,即HIF-1α下调能降低自噬相关分子的表达,而缺氧条件下自噬水平下调对HIF-1α的表达无明显影响。     

长期吸入低浓度七氟烷对小鼠生殖功能的影响

目的 评价长期吸入低浓度七氛烷对小鼠生殖功能的影响.方法 ICR雄性小鼠加只,日龄60 d,体重20～25 g,随机分为4组(n=10):对照组(C组);S1-3组分别吸入0.003%、0.01%和0.03%七氟烷.每天2 h,每周连续5 d,持续8周后处死动物.取睾丸和附皋,测定精子活动率、精子数量、精子畸变率、睾丸组织总乳酸脱氢酶(LDH)及乳酸脱氢酶同工酶-X(LDH-X)的活性,并观察睾丸组织超微结构.结果 与C组比较,S3组精子活动率降低、畸变率升高、睾丸组织LDH-X活性降低(P<0.05),S1,2组各指标差异无统计学意义(P>0.05),仅S3组睾丸组织出现病理学改变.结论 长期吸入0.03%七氟烷可导致雄性小鼠生殖功能异常,而长期吸入≤0.01%七氟烷对生殖功能未见影响.     

Augmenter of liver regeneration-mediated mitophagy protects against hepatic ischemia/reperfusion injury

Augmenter of liver regeneration (ALR) is an anti-apoptotic protein found mainly in mitochondria. It protects hepatocytes from ischemia-reperfusion (I/R) injury, but the underlying mechanism is not clear. We found that in rats, delivery of the ALR gene alleviated hepatic I/R injury during orthotopic liver transplantation as evidenced by reduced serum aminotransferase, oxidative stress and apoptosis, and increased expression of autophagy markers. In an in vitro hypoxia/reoxygenation (H/R) model, overexpression of the ALR gene activated autophagy and relieved defective mitophagy via the PINK1/Parkin pathway. Mechanistically, ALR transfection induced the expression of mitofusin 2 (Mfn2) in the H/R model, which led to PINK1 accumulation and mitochondrial translocation of Parkin. Deletion of Mfn2 abolished mitophagy activation induced by ALR transfection, promoted mitochondrial dysfunction, and eventually increased cell apoptosis. Mfn2 administration prevented the inhibition of mitophagy in ALR-knockout (KO) cells, thus attenuated mitochondrial dysfunction and cell apoptosis. In heterozygous ALR-knockout mice treated with a warm I/R injury, marked aggravation of liver injury was associated with mitophagy inhibition and reduction in Mfn2 expression. Taken together, our results confirm that ALR accelerated Parkin translocation and mitophagy via Mfn2, and protected hepatocytes from I/R-induced injury. Our findings provide a novel rationale for the treatment of hepatic I/R injury.     

孕晚期七氟醚麻醉对子代大鼠认知功能和海马神经元树突棘发育的影响

目的 探讨孕晚期不同浓度七氟醚麻醉对子代大鼠认知功能及树突棘发育的影响.方法 取SD孕鼠16只,用随机数字表法将其分为4组(每组4只):对照组(C组)、1.5％七氟醚麻醉组(S1组)、2.8％七氟醚麻醉组(S2组)和3.3％七氟醚麻醉组(S3组).七氟醚麻醉组母鼠于孕18～20 d进行每天1次的七氟醚麻醉,S1组、S2组和S3组孕鼠分别使用1.5％、2.8％和3.3％的七氟醚吸入4h并保持0.5、1.0、1.5 MAC;C组仅置于麻醉箱内,通入相同流量氧气暴露4h.于出生后21 d对各组子代大鼠水迷宫测定其认知功能,出生后28 d完成水迷宫测试后处死子代大鼠,采用高尔基染色法进行海马树突棘密度测定,采用RT-PCR法测定caspase-3 mRNA表达.结果 各组子代大鼠游泳路程、逃避潜伏期、穿越平台次数及平台所在象限停留时间比较差异无统计学意义(P＞0.05).与C组[(12±3)/10 μm]比较,S3组大鼠海马神经细胞树突棘密度降低[(9±3)/10μm](P＜0.05).各组子代大鼠海马内caspase-3 mRNA表达变化差异无统计意义(P＞0.05).结论 1.5 MAC七氟醚麻醉4h可降低子代大鼠海马内神经细胞树突棘密度,但未对子代大鼠认知功能及caspase-3 mRNA表达产生影响.     

不同浓度七氟醚对人肺腺癌A549细胞侵袭能力及MMP-2、MMP-9表达的抑制作用

目的观察不同浓度七氟醚对人肺腺癌A549细胞侵袭能力及基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9表达的影响。方法人肺腺癌A549细胞接种于培养板,培养24 h后,随机分为对照组（C组）、1.7%七氟醚组（S₁组）、3.4%七氟醚组（S₂组）、5.1%七氟醚组（S₃组）。S₁、S₂、S₃组的A549细胞分别暴露于1.7%、3.4%、5.1%七氟醚2、4、6 h。C组不接受七氟醚处理。四组处理结束后,继续培养48 h。于48 h时,采用Transwell法检测各组A549细胞处理6 h的侵袭细胞数目,酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组A549细胞处理前、处理2、4、6 h的MMP-2和MMP-9的表达水平。结果与C组比较,S₁、S₂、S₃组的侵袭细胞数目降低[（62±7）vs.（46±4）,（35±5）,（27±6）]（P<0.05）;侵袭细胞数目S₁组>S₂组>S₃组（P<0.05）。与C组比较,S₁、S₂、S₃组的MMP-2、MMP-9水平降低,且S₁组>S₂组>S₃组（P<0.05）。结论 1.7%、3.4%、5.1%七氟醚均有抑制人肺腺癌A549细胞侵袭能力的效应。该效应随七氟醚浓度升高而增强,与抑制MMP-2、MMP-9表达有关。     

麻醉药物和手术对幼龄大鼠术后空间学习记忆功能的影响

目的：评价七氟烷和丙泊酚单独麻醉和与外科手术联合应用对于幼龄大鼠术后空间与学习记忆功能的影响。方法：健康雄性幼龄SD大鼠46只,连续在Morris水迷宫中训练5 d,随机分为丙泊酚组（P组）、七氟烷组（S组）、丙泊酚加手术组（PS组）、七氟烷＋手术组（SS组）、对照组（C组）。P组用15 mg/kg丙泊酚诱导,50 mg/（kg·h）维持麻醉2 h;S组用4%七氟烷诱导,2%七氟烷维持麻醉2 h;C组吸入含30%氧气的空氧混合气2 h;手术为剖腹探查术。苏醒24 h后采用Morris水迷宫评价空间学习记忆功能。结果：苏醒后第1 d,P组、S组、PS组、SS组、C组大鼠在目标象限停留时间百分比分别为27.88±9.00%、29.22±8.28%、28.33±5.27%、28.17±4.22%、24.79±3.43%,其中P组、S组、PS组、SS组与C组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）,P组与PS组比较、S组与SS组比较均无统计学意义（P＞0.05）。且苏醒后第7 d、第30 d,P组、S组、PS组、SS组与C组相比空间探索能力的差异无统计学意义（P＞0.05）,P组与PS组比较、S组与SS组比较均无统计学差异（P＞0.05）。结论：全凭丙泊酚和全凭七氟烷麻醉及协同腹部小手术,不改变幼龄大鼠在麻醉手术后长期的空间学习记忆功能。     

七氟烷和东莨菪碱对老年大鼠海马毒蕈碱受体表达的影响

目的 探讨七氟烷和东莨菪碱对老年大鼠海马毒蕈碱受体表达的影响.方法 健康雄性老年SD大鼠48只,月龄18月,体重560～600 g,随机分为对照组(Con组)、七氟烷组(Sev组)和东莨菪碱组(Sco组),每组16只.Sco组腹腔注射东茛菪碱0.8 mg/kg,Con组和Sev组腹腔注射等容量生理盐水,30 min后Sev组吸入3.0%七氟烷、Con组和Sco组吸入空气2 h.于给药后1、3 d时分别取8只大鼠,采用Y型迷宫实验测试学习记忆能力,然后断头处死,取脑分离海马,采用RT-PCR法检测M1受体和M,受体mRNA的表达,采用免疫组化法检测海马神经元M1受体和M2受体的表达.结果 与Con组相比,给药后1d时Sev组和Sco组学习次数增多、训练时间延长,海马M1受体和M2受体的表达下调(P<0.05);各组间给药后3 d时学习次数、训练时间及海马M1受体和M2受体的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 七氟烷和东莨菪碱均可诱发老年大鼠认知功能一过性降低,其机制与海马M1受体和M2受体表达下调有关.