可溶性CD20在肾移植排斥反应中的表达及其意义

目的 观察血清中可溶性CD20分子(sCD20)在肾移植急性排斥反应时的变化,探讨血清sCD20水平变化与移植肾预后的关系.方法 收集50例肾移植患者外周血,酶联免疫吸附测定法检测血清中sCD20水平.结果 25例急性排斥反应患者术前血清sCD20为(1750.60±359.59) ng/L,与稳定组(936.96±181.71) ng/L比较,差异有统计学意义(P＜0.05);移植术后急性排斥反应组血清sCD20为(2516.20 ±511.33) ng/L,与稳定组(988.40 ±215.78)ng/L比较,差异有统计学意义(P＜0.05);而且sCD20值水平较高的患者移植肾存活时间明显少于sCD20值水平较低的患者.结论 CD20分子在移植肾急性排斥反应和预测肾移植预后中可能起重要作用.     

腹主动脉瘤和肝、肾囊肿关系的临床观察

目的:探讨腹主动脉瘤(AAA)和肝、肾囊肿的关系.方法:统计并比较103例AAA连续病例及103例对照组肝、肾囊肿的发病率,以及囊肿的直径.结果:AAA肝囊肿发生率高于对照组(32.0% VS 18.4%,P＜0.05),肝囊肿直径大于对照组[(31±25)mm VS (18±10)mm,P＜0.05].肾囊肿的发生率:AAA组41.7%,对照组34.0%,(P=0.25);肾囊肿直径:AAA组(18±12)mm,对照组(12±10)mm,AAA组较大(P＜0.05).结论:腹主动脉瘤和肝、肾囊肿之间的联系提示它们可能存在共同的病因基础,也提示系统性因素对腹主动脉瘤的形成有作用.     

胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞及白细胞介素-2、-6、-7水平测定的研究

目的 检测60例胰腺癌患者及60例正常人外周血CD4-CD8-T细胞及白细胞介素(IL)-2、IL-6、IL-7水平,探讨其与胰腺癌的关系.方法 采用流式细胞仪检测60例胰腺癌患者外周血CD4 - CD8 -T细胞水平;酶联免疫吸附试验( ELISA)法检测60例胰腺癌患者外周血清IL-2、IL-6、IL-7水平,并与60名健康人群进行对照比较.结果 胰腺癌患者外周血CD4 - CD8 -T细胞占CD3+T细胞的比例为(3.43±0.88)％,低于正常人群(5.66±1.23)％(P＜0.05);胰腺癌患者外周血中IL-2水平为(2.00 ±0.42) ng/L,低于正常对照组(5.50 ±0.64) ng/L(P＜0.05);IL-6水平为(210.68±10.82) ng/L,高于正常对照组(1.77 ±0.22) ng/L(P＜0.05);IL-7水平为(1.89±0.32) ng/L,低于正常对照组(6.35 ±0.56) ng/L(P ＜0.05).结论 胰腺癌患者外周血中CD4-CD8-T细胞的比例降低,IL-2、IL-7水平降低及IL-6水平升高可能与胰腺癌的发生有关.     

CD40表达及其配体血清水平的动态变化对慢加急性肝衰竭预后的评估价值

目的研究慢加急性肝衰竭(ACLF)不同病程CD40L血清水平以及外周血单个核细胞(PBMCs)CD40表达的动态变化,旨在探讨CD40L血清水平及单核细胞上CD40的表达对慢加急性肝衰竭病情的预测价值。方法采用流式细胞术(FACS)分别对慢加急性肝衰竭早期(ACLF-E)和晚期(ACLF-L)组(25例)、慢性乙型肝炎(CHB)组(28例)、肝炎肝硬化(LC)组(13例)及健康对照(HC)组(20例)的PBMCs上CD40的表达进行检测,同时血清中可溶CD40L(即sCD154)的水平采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定。结果与HC组比较,CHB组、LC组、ACLF-E组及ACLF-L组PBMCs的CD40表达水平呈逐渐增加趋势,ACLF-E组增加尤其明显;ACLF-E组中血清可溶性CD40L浓度也明显高于HC组、CHB组、LC组及ACLF-L组;ACLF死亡组病程早期与晚期CD40及CD40L表达的水平均高于存活组。结论血清CD40L浓度及CD40表达与ACLF病情及预后密切相关,血清CD40L水平及PBMC上CD40表达水平可以作为ACLF病情评估和预后判断的重要标志之一。     

阻断OX40和CD40协同共刺激信号延长小鼠胰岛移植物存活时间

目的 研究阻断OX40/OX40L和CD40/CD154L协同共刺激通路对小鼠胰岛移植物存活的影响及其机制.方法 以DBA/2小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,制作胰岛移植模型.受鼠分为4组.(1)对照组,注射IgG; (2)抗OX40组,注射抗OX40L单克隆抗体;(3)抗CD154组,注射抗CD154单克隆抗体;(4)联合治疗组,注射抗OX40L单克隆抗体和抗CD1 54单克隆抗体.记录各组胰岛移植物平均存活时间(MST).将CD154敲除小鼠处死,取其脾脏T淋巴细胞,体外检测活化T淋巴细胞表面OX40的表达;在活化T淋巴细胞中加入不同浓度的抗OX40L单克隆抗体,体外检测T淋巴细胞增殖情况.结果 对照组胰岛移植物MST为19 d,抗CD154组胰岛移植物MST为48 d(P＜0.05);抗OX40组胰岛移植物MST为22 d,与前两组相比较,差异无统计学意义(P＞0.05);联合治疗组胰岛移植物MST＞ 150 d,高于另外3组(P＜0.05).66％的胞表达OX40,较初始T淋巴细胞的表达率高(2％,P＜0.05);加入抗OX40L单克隆抗体后,T淋巴细胞增殖受抑制且呈剂量依赖性.结论 阻断OX40/OX40L和CD40/CD154L双通路可诱导小鼠胰岛移植物长期存活, 其发挥作用的关键机制是抑制了T淋巴细胞的增殖.     

过敏性紫癜患儿外周血核细胞CD40/CD40L的表达与预后的相关性

目的:探讨过敏性紫癜患儿外周血核细胞CD40/CD40L的表达与预后的相关性。方法:45例初发过敏性紫癜患儿(观察组)积极采用综合治疗,同期选择正常健康儿童45例(对照组),采集外周抗凝血进行核细胞CD40/CD40L的表达检测。结果:45例患儿显效42例,无效3例,无死亡患儿,有效率为93.3%。两组CD40mRNA的表达水平差异无统计学意义,观察治疗前后对比也无明显差异(P>0.05)观察组中CD40LmRNA表达高于正常对照组(P0.05)。结论:过敏性紫癜患儿外周血核细胞CD40/CD40L的高表达可扩大B细胞活化的规模,从而导致大量抗体的生成而参与发病,与预后呈负相关。     

腹主动脉瘤患者外周血CD4+CD28-调节性T细胞的变化及意义

目的：探讨CD4+ CD28-T细胞在不同阶段腹主动脉瘤患者血清中的数量变化及临床意义。
方法:腹主动脉瘤患者20例,其中小腹主动脉瘤10例,大腹主动脉瘤10例,正常健康对照组10例,采用流式细胞术测定3组受检者外周血CD4+,CD8+,CD4+ CD28-T亚群数量及占淋巴细胞的比例,运用酶联吸附实验（ELISA）方法检测上述各组人群血浆中Th1细胞因子（IFN-γ,TNF-α）表达水平。
结果:腹主动脉瘤组CD4+ CD28-T细胞表达水平显著升高,其中CD4+ CD28-T细胞在小腹主动脉瘤组升高最为显著（P＜0.05）。Th1细胞因子（IFN-γ,TNF-α）表达水平亦呈显著升高。
结论:不同发展阶段腹主动脉瘤患者血清中CD4+ CD28-T细胞表达升高,AAA患者外周血T淋巴细胞处于活化状态,在AAA发生发展的过程中,机体存在全身免疫反应的激活,外周血中T细胞亚组发生改变,导致炎症及自身免疫反应性扩展。

     

抑制性受体CD305表达在移植肾排斥反应监测中的意义

目的 探讨抑制性受体CD205的表达在移植肾排斥反应中的意义.方法 应用双单克隆抗体夹心ELISA法检测153例肾移植术后患者血清中可,溶型CD305(sCD305)的表达水平,20例健康志愿者标本作为对照组.结果 对照组和98例移植肾功能正常患者血清sCD305表达分别为(4.3±2.3)和(6.3±3.7)μg/L.20例移植肾急性排斥及5例移植肾失功患者血清sCD205表达明显增加,分别为(36.3±14.7)和(28.8土9.4)μg/L,显著高于对照组和移植物功能正常组(P＜0.01).30例移植.肾慢性排斥及6例尿毒症透析患者血清sCD205分别为(13.1±5.5)和(11.2±4.6)μg/L,亦明显高于对照组和移植肾功能正常组(P=0.00).结论 发生移植肾排斥反应的患者血清sCD3205有较高水平的表达,可望作为移植肾排斥反应的监测指标之一.     

前列腺癌患者外周血中CD4+CD25high调节性T细胞及调节因子TGF-31和COX-2的表达

目的:通过检测前列腺癌患者以及健康志愿者外周血中CD4+ CD25high调节性T细胞、TGF-β1及COX-2的表达,初步探讨CD4+ CD25high调节性T细胞在前列腺癌发病机制中的作用及其与TGF-β1和COX-2的相关性.方法:应用流式细胞术检测30例前列腺癌患者治疗前后(其中前列腺癌局限组11例,非局限组19例)及20例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+ CD25high调节性T细胞占CD4+T细胞的比例;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其外周血清中TGF-β1和COX-2的表达.对前列腺癌患者上述指标进行术前术后对比分析,另对CD4+ CD25high调节性T细胞与TGF-β1及COX-2的相关性进行分析;并探讨上述指标在前列腺癌患者局限组和非局限组间是否存在差异性.结果:流式细胞术检测显示,前列腺癌患者治疗前PBMC中CD4+ CD25high调节性T细胞占CD4+T细胞的比例为(18.32±7.49)%,高于健康志愿者对照组(7.77±1.86)%(P＜0.05).前列腺癌患者治疗后其比值为(17.34±5.87)%,较治疗前稍减低,但两者相比无显著差异(P＞0.05).ELISA检测外周血清中TGF-β1和COX-2显示,前列腺癌组分别为(215.97±55.16) ng/ml和(6.88±5.14) ng/ml,对照组分别为(149.75±:47.11) ng/ml和(5.65±2.69) ng/ml;前列腺癌患者外周血清中TGF-β1的表达水平高于健康志愿者对照组(P＜0.05),COX-2的表达水平与对照组无显著差异(P＞0.05).通过多重线性回归分析表明,前列腺癌患者PBMC中C14+ CD25high调节性T细胞的表达与血清中TGF-β1和COX-2的表达无显著相关.前列腺癌局限组和非局限组外周血中CD4+ CD25 high调节性T细胞、TGF-β1及COX-2的表达均无显著性差异(P＞0.05).结论:前列腺癌患者PBMC中CD4+ CD25high调节性T细胞可能参与前列腺癌的发生,其增殖机制与血清中TGF-β1和COX-2的表达无关,可能与肿瘤本身及肿瘤局部微环境相关.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞 CD40及CD40配体分子表达的研究

目的探讨CD40及CD40配体(CD40L)分子在活跃期SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)上的表达及在SLE发病中的可能作用机制.方法采用流式细胞仪检测13例初发活跃期及13例复发活跃期SLE患者PBMC表面CD40及CD40L分子的表达.结果初发及复发活跃期SLE患者PBMC表达CD40分子(25.94±10.10)%及(27.34±12.94)%,均较正常对照组(13.99±5.26)%明显升高(P＜0.001);初发活跃期SLE患者PBMC表达CD40L分子(1.74±1.66)%较正常对照组(0.91±0.39)%亦明显升高(P＜0.05).初发与复发活跃期SLE患者之间比较PBMC表达CD40及CD40L分子无显著性差异.结论活跃期SLE患者外周血PBMC存在CD40及CD40L分子的异常表达,提示CD40及CD40L分子在SLF患者T、B细胞之间的信号传导及SLE发病机制中可能起着重要的作用.     

CD40在肝硬化门静脉高压症脾脏中的表达与临床意义

目的 探讨CD40在肝硬化门静脉高压症患者脾脏中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学S-P法测定50例肝硬化门静脉高压症患者和15例正常脾脏中CD40的表达情况.结果 CD40在正常脾脏与巨脾组织中的表达率分别为86.7%和36.0%,存在显著性差异(P＜0.05).CD40表达与肝功能Child分级及巨脾病理分级均呈负相关(P＜0.05).结论 CD40可能为临床评估肝硬化门静脉高压症患者脾脏免疫功能状态的重要指标.

Abstract：

Objective To investigate the expression and clinical significance of CD40 in the spleen of cirrhotic portal hypertension. Methods Expression of CD40 was determined with S-P immunohistochemistry in spleen specimens from 50 cases of cirrhotic portal hypertension and 15 healthy individuals. Results The CD40 positive rates in normal spleen and cirrhotic spleen were 86.7% and 36.0%, respectively. There was a significant difference between the 2 groups (P＜0.05). There was a negative correlation between the expression of CD40 and Child grades of liver function and cirrhotic splenic types(P＜0. 05). Conclusion CD40 might reflect the changes of splenic immune function,which might be one of more exact clinical examination indexes of splenic immune function.     

血管紧张素Ⅱ诱导Toll样受体4在腹膜间皮细胞的表达及其对脂多糖诱导CD40表达的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对原代培养大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）Toll样受体4（TLR4）表达的影响及其在脂多糖（LPS）诱导的核转录因子κB （NF-κB）活化及CD40表达中的作用。 方法 分离及培养RPMC。用不同浓度AngⅡ（10－9、10－8、10－7、10－6 mol/L）刺激细胞及用10-7 mol/L AngⅡ刺激细胞不同时间（mRNA为1、2、4、8、12、24、48 h和蛋白为6、12、24、36、48 h），观察血管紧张素1型受体（AT1R）阻滞剂洛沙坦（10－5 mol/L）和血管紧张素2型受体（AT2R）阻滞剂PD123177（10-5 mol/L）对AngⅡ诱导TLR4表达的影响。将细胞随机分为下列4组：对照组、AngⅡ (10－7 mol/L)组、LPS(1 mg/L)组、AngⅡ (10－7 mol/L)+LPS(1 mg/L)组，观察AngⅡ对LPS诱导的NF-κB激活和CD40表达的影响。RT-PCR检测TLR4、CD40 mRNA表达；Western印迹检测TLR4、IκBα、磷酸化IκBα（p-IκBα）、NF-κB p65、磷酸化NF-κB（p-p65）蛋白表达；免疫荧光检测细胞NF-κB p65亚单位的表达及分布。 结果 (1)10－9、10－8、10－7、10－6 mol/L AngⅡ作用RPMC 12 h，TLR4 mRNA表达分别增加70.5%、89.5%、102.9%和121.9%；作用24 h TLR4蛋白表达分别增加12.1%、27.7%、51.2%和41.6%。AngⅡ（10－7 mol/L）作用RPMC不同时间，TLR4 mRNA表达高峰为8 h和12 h（P < 0.01），蛋白表达高峰为12 h和24 h（P < 0.01）。(2)洛沙坦阻断后，AngⅡ诱导的TLR4表达与未阻断组比较，下调33.5%（P < 0.05）。PD123177对AngⅡ诱导的TLR4表达无显著影响（P > 0.05）。(3) 与正常对照组比较，LPS作用60 min p-IκBα/IκBα、p-p65/p65表达分别上调362.6%（P < 0.01）和67.4%（P < 0.05）；作用4 h CD40 mRNA表达上调299.9%（P < 0.01）；与LPS组比较，AngⅡ预刺激24 h加LPS作用60 min，p-IκBα/IκBα、p-p65/p65表达分别上调49.1%（P < 0.01）和29.3%（P < 0.05）；作用4 h CD40 mRNA表达上调56.8%（P < 0.01）。(4)免疫荧光结果显示正常对照组与AngⅡ组细胞中，p65信号定位于细胞胞质；LPS作用60 min，p65信号从胞质进入胞核；AngⅡ+LPS组NF-κB p65胞核信号显著增强。 结论 AngⅡ呈浓度、时间依赖性诱导RPMC TLR4表达，并显著增强LPS诱导NF-κB激活及CD40的表达。提示腹膜组织局部产生的AngⅡ可能对LPS诱导的腹膜组织炎性反应具有放大作用。     

原发性肝细胞癌组织中CD40分子表达的研究

目的探讨原发性肝细胞癌组织中CD 40分子的表达情况。方法用SABC免疫组化法对60例原发性肝细胞癌组织中CD 40分子的表达情况进行回顾性研究,并用25例非肝癌组织作为对照。结果51.4%的原发性肝细胞癌组织检测到CD 40抗原;与非肝癌组织相比,具有显著性差异(P<0.05)。结论原发性肝细胞癌组织中有CD 40分子的表达,为进一步研究肝癌的肿瘤生物学及基因治疗打下基础。     

构建含有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因腺病毒并体外检测

目的 构建载有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因片段的腺病毒载体,并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况.方法 提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc-GFP质粒,测序成功后包装构建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-GFP,转染293细胞.出毒后大量复制病毒并纯化,测定病毒滴度,体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的 蛋白情况并检测目的 蛋白表达量.结果 成功构建了质粒及病毒,体外感染显示该病毒能有效的感染细胞并表达蛋白(荧光显示),检测目的 蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加.当病毒浓度增加到一定程度时目的 蛋白表达趋于无明显差异性.结论 构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内,分泌表达目的 蛋白是可行的,为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定了基础.     

共刺激后淋巴细胞产生Th1/Th2细胞因子的变化及免疫抑制剂的影响

目的 探讨CD28、CD40通路共刺激后淋巴细胞产生Th1(IL-2、IFN-γ、IL-12)及Th2细胞因子(IL-4、IL-10)的变化及免疫抑制剂环孢素(CsA)、雷帕霉素(RPM)及霉酚酸(MPA)对共刺激通路激活后淋巴细胞产生Th1及Th2细胞因子的影响.方法采用单克隆抗体(mAb)与淋巴细胞表面CD3、CD28及CD40L分子结合产生相应刺激信号,单刺激及共刺激组分为:a组,CD3 mAb单刺激;b组,CD3 mAb加CD28 mAb共刺激;c组,CD3 mAb加CD28 mAb加CD40 L mAb共刺激;d组,CD3 mAb加CD28 mAb加CTLA4 mAb共刺激.各mAb的终浓度均为100 ng/ml.干预组分别将终浓度为300 ng/ml的CsA、RPM、MPA加入上述4组.ELISA法测定上述细胞培养上清中的细胞因子值.结果 a、b、c 3组IFN-γ分别为(248.91±11.20)、(555.08±24.42)、(548.19±33.06)ng/ml,IL-2分别为(29.48±8.61)、(1100.82±99.29)、(842.23±29.31)ng/ml,IL-4分别为(32.29±6.76)、(116.02±15.03)、(147.28±18.07)ng/ml,IL-10分别为(147.01±10.47)、(291.79±12.47)、(302.52±35.18)ng/ml.b、c组与a组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);b、c组IL-2、IL-12、IL-4比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).d组IFN-γ、IL-2及IL-10分别为(497.42±29.03)、(739.77±18.58)及(120.33±13.21)ng/ml,与b组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).CsA、RPM及MPA对共刺激后Th1/Th2细胞因子的产生均有抑制作用,CsA对4种细胞因子产生的抑制作用强于RPM和MPA,其中对IL-2及IL-4的抑制作用更为明显.CsA与CTLA4 mAb有协同作用.共刺激后IL-12产生升高,MPA可抑制单刺激和共刺激后IL-12的产生,CsA和RPM对IL-12的产生无明显抑制作用.结论 CD28、CD40共刺激通路在淋巴细胞活化中起关键作用.CsA、RPM、MPA及CTLA4 mAb对共刺激后Th1/Th2细胞因子的产生均有抑制作用,CsA的抑制作用更为明显.CD40 L mAb使Th1细胞因子及IL-12水平下降,又促进Th2细胞因子(以IL-4为主)产生,该作用可能是抗CD40 L抗体诱导移植物存活期延长的机制之一.     

CD40在肝硬化门静脉高压症脾脏中的表达与临床意义

Objective To investigate the expression and clinical significance of CD40 in the spleen of cirrhotic portal hypertension. Methods Expression of CD40 was determined with S-P immunohistochemistry in spleen specimens from 50 cases of cirrhotic portal hypertension and 15 healthy individuals. Results The CD40 positive rates in normal spleen and cirrhotic spleen were 86.7% and 36.0%, respectively. There was a significant difference between the 2 groups (P＜0.05). There was a negative correlation between the expression of CD40 and Child grades of liver function and cirrhotic splenic types(P＜0. 05). Conclusion CD40 might reflect the changes of splenic immune function,which might be one of more exact clinical examination indexes of splenic immune function.     

CD40-CD40L在儿童持续性免疫性血小板减少症发病机制中的作用研究

目的：通过检测CD40-CD40L在持续性免疫性血小板减少症（Persistent ITP）患儿外周血单个核细胞中的表达情况,以揭示其在儿童持续性ITP发病机制中的作用。方法应用流式细胞术检测20例持续性ITP患儿治疗前后及20例对照组儿童外周血单个核细胞中CD40-CD40L的表达情况,用ELISA法检测血小板抗体（PAIgG）。结果与对照组比较,CD40和CD40L治疗前后的表达均增高（P＜0.01,P＜0.05）, CD40治疗前高于治疗后（P＜0.05）,CD40L在两组的表达则差异无统计学意义（P＞0.05）;CD40、CD40L的表达与PAIgG均呈正相关（r分别为0.713、0.746,P＜0.05）。结论 CD40-CD40L共刺激信号异常可能为儿童持续性ITP发病机制之一,阻断此共刺激途径可能获得较好的治疗效果。     

中药狼疮方对狼疮样BXSB小鼠脾细胞CD134/CD134L表达的影响

目的:探讨CD134/CD134L共刺激信号在SLE发病机制中的可能作用及狼疮方对其表达的影响.方法:采用狼疮样BXSB小鼠模型,随机分为3组:狼疮方治疗组、泼尼松治疗组、空白模型组,每组6只,疗程10周.另设与BXSB小鼠同基因的正常C57BL/6小鼠6只为正常对照组.分别采集上述各组小鼠外周血和脾组织进行检测.结果:(1)与正常对照组比较,模型组BXSB小鼠的血清IgG和抗ds-DNA抗体水平和脾组织CD4 CD134 、CD8 CD134 、CD19 CD134L 、CD23 CD134L 的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著增高(P＜0.05或P＜0.01).(2)狼疮方治疗组或泼尼松治疗组的血清IgG、抗ds-DNA抗体水平和脾组织CD4 CD134 、CD8 CD134 、CD19 CD134L 、CD23 CD134L 的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著低于模型组(P＜0.05或P＜0.01),而与正常对照组比较无统计学差异(P均＞0.05).结论:狼疮样BXSB小鼠存在CD134/CD134L的异常表达.狼疮方可减轻狼疮样小鼠高丙种球蛋白血症,减少体内自身抗体产生,对CD134/CD134L存在泼尼松相当的下调作用,抑制T、B细胞的异常活化,有效地治疗SLE.