大黄素对精索静脉曲张缺氧模型精原细胞的保护作用

目的观察大黄素对精索静脉曲张缺氧模型精原细胞的保护作用。方法选用小鼠GC-1精原细胞,设置对照组(A组)、对照+大黄素组(B组)、模型组(C组)、模型+大黄素组(D组)。C组和D组加入氯化钴(CoCl2)至终质量浓度为100μmol/L,然后培养细胞24 h构建精索静脉曲张缺氧模型。B组和C组加入大黄素至终质量浓度为40μmol/L。采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法及流式细胞仪测定细胞凋亡水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白质表达水平,采用实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞Caspace-3和bax的基因表达水平,组间比较采取t检验。结果CCK-8实验示C组和D组细胞存活率低于A组[(51.70±3.52)%、(77.84±5.18)%比(100.00±0.00)%,t=23.767、7.410,P值均<0.05],差异有统计学意义,且D组细胞存活率高于C组[(77.84±5.18)%比(51.70±3.52)%,t=7.229,P<0.05],差异有统计学意义。流式实验示D组凋亡细胞比例低于C组[(10.54±0.68)%比(21.23±1.01)%,t=15.207,P<0.05],差异有统计学意义。Western blot结果示D组Caspace-3和bax蛋白表达水平低于C组(0.713±0.020、0.819±0.022比1.134±0.025、1.271±0.019,t=22.722、26.813,P值均<0.05),差异有统计学意义。RT-qPCR结果示D组Caspace-3和bax表达水平低于C组(1.52±0.18、1.80±0.21比3.53±0.23、4.27±0.31,t=11.920、11.426,P值均<0.05),差异有统计学意义。结论大黄素通过抑制细胞凋亡对精索静脉曲张缺氧模型的精原细胞起保护作用。     

铁死亡在重症急性胰腺炎引起的急性肾损伤中的作用及其机制

目的探讨铁死亡在重症急性胰腺炎(SAP)诱发急性肾损伤(AKI)的作用及其机制。方法胰腺炎建模后24 h,将36只SD大鼠(购自青岛大学医学部实验室动物中心)采用完全随机分组法分为3组(n=12):假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、铁死亡抑制剂Ferrostatin-1干预组(SAP+Fer组)。建立SAP模型24 h后,检测血清淀粉酶(AMY)、肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN)水平;检测肾组织中铁含量、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)变化及谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)活性;苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺和肾脏组织学改变;透射电镜(TEM)观察铁死亡的形态学特征;蛋白质印迹法(Western blot)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色等方法分析长链脂酰CoA合成酶4(ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1)等铁死亡相关蛋白和基因的表达。组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果SAP组大鼠血清AMY[(6276.5±562.2)比(1086.6±192.3)U/L]、Cr[(98.0±16.2)比(19.5±5.2)μmol/L]、BUN[(17.1±2.8)比(7.2±1.7)mmol/L]水平明显高于SO组(t=30.314、15.927、10.375,P值均<0.01),差异均有统计学意义;肾组织铁[(0.65±0.13)比(0.44±0.12)mg/g]、MDA[(7.25±0.81)比(1.84±0.24)μmol/g]、ROS[(68.54±7.04)比(15.67±5.21)×104/mg]高于SO组(t=3.855、22.167、11.496,P值均<0.01),GSH[(358.38±41.59)比(518.64±55.72)nmol/g]和GPX4[(7.75±1.09)比(14.72±2.56)U/mg]明显低于SO组(t=7.984、8.674,P值均<0.01),差异有统计学意义;胰腺和肾组织病理损伤程度增加;线粒体出现明显萎缩;肾脏ACSL4蛋白(0.84±0.03比0.34±0.02)表达高于SO组(t=7.876,P<0.01),GPX4、FTH1蛋白(0.69±0.03比1.04±0.06、0.26±0.02比0.83±0.04)表达低于SO组(t=5.651、8.134,P值均<0.01),差异有统计学意义;ACSL4、铁响应元件结合蛋白2(IREB2)mRNA(0.87±0.06比0.24±0.03、1.23±0.05比0.32±0.02)表达高于SO组(t=12.864、15.163,P均<0.01),差异有统计学意义。SAP+Fer组大鼠血清AMY[(5124.3±483.5)比(6276.5±562.2)U/L]、Cr[(55.2±13.7)比(98.0±16.2)μmol/L]、BUN[(9.8±2.1)比(17.1±2.8)mmol/L]水平显著低于SAP组(t=5.287、6.989、7.359,P值均<0.01),差异有统计学意义;肾组织铁[(0.54±0.07)比(0.65±0.13)mg/g]、MDA[(4.67±0.73)比(7.25±0.81)μmol/g]、ROS[(28.39±6.36)比(68.54±7.04)×104/mg]低于SAP组(t=2.639、7.176、8.247,P值均<0.05),GSH[(448.21±45.51)比(358.38±41.59)nmol/g]和GPX4[(11.31±1.89)比(7.75±1.09)U/mg]高于SAP组(t=5.048、5.639,P值均<0.01),差异有统计学意义;胰腺和肾组织病理损伤程度减轻;线粒体轻度萎缩;肾脏ACSL4蛋白(0.49±0.02比0.84±0.03)表达低于SAP组(t=2.781,P<0.05),GPX4、FTH1蛋白(0.69±0.03比1.04±0.06、0.26±0.02比0.83±0.04)表达高于SAP组(t=2.427、2.876,P值均<0.05),差异有统计学意义;ACSL4、IREB2 mRNA(0.52±0.04比0.87±0.06、0.74±0.04比1.23±0.05)表达低于SAP组(t=5.843、6.781,P值均<0.01),差异均有统计学意义。结论铁死亡参与SAP引起的AKI,抑制铁死亡能改善肾功能,减轻肾组织脂质过氧化和病理损伤。     

大鼠精索静脉曲张氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能的影响

目的:探索精索静脉曲张(VC)大鼠模型中氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能影响。方法:将45只体重220～235 g的SD大鼠随机分为假手术组(单纯暴露并分离左肾静脉)、实验组(部分缩窄左肾静脉并充分结扎精索静脉侧支)和治疗组[造模术后给予150 mg/(kg·d)维生素E灌胃60 d],每组各15只。模型构建后60d分别观察左侧附睾组织学改变,采用qPCR、免疫组化染色、免疫荧光染色及Western印迹等检测左侧附睾上皮连接蛋白ZO-1及连接相关蛋白表达水平,同时检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性,丙二醛(MDA)、α葡糖苷酶含量以及精子活力指标。结果:与假手术组相比,实验组左侧附睾上皮结构紊乱,上皮细胞数量减少,可见部分上皮细胞脱落至附睾管腔。qPCR检测claudin11、β-catenin、JAM-A、cadherin12、ZO-1等多个连接蛋白表达,结果显示除实验组较假手术组ZO-1表达明显下调外(P0.05),其余蛋白均无显著差异。免疫组化染色、免疫荧光染色Western印迹结果显示,与假手术组相比,实验组ZO-1表达明显降低(P0.05);经维生素E治疗后,治疗组ZO-1表达较实验组明显升高(P0.05)。实验组较假手术组大鼠附睾组织中MDA明显升高[(1.21±0.18)nmol/mg protein vs(0.41±0.05)nmol/mg protein,P0.05)],SOD[(298.62±67.84)U/mg protein vs(814.65±73.64)U/mg protein,P0.05)]、T-AOC[(0.24±0.04)nmol/mg protein vs(0.84±0.07)nmol/mg protein,P0.05)]、α葡糖苷酶[(5.82±1.24)U/mg protein vs(11.72±2.72)U/mg protein,P0.05)]明显降低;经维生素E干预后,治疗组SOD [(497.73±48.03)U/mg protein]、T-AOC[(0.42±0.06)nmol/mg protein]、α葡糖苷酶[(9.11±1.91)U/mg protein]较实验组明显回升(P0.05),MDA[(0.69±0.12)nmol/mg protein]明显下降(P0.05)。附睾精子活力检测,实验组较假手术组前向运动精子百分率明显降低[(31.33±6.32)%vs(71.21±5.21)%,P0.05],经维生素E干预后治疗组[(60.68±5.31)%]明显提高(P0.05)。结论:精索静脉曲张通过氧化应激导致附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1表达下调,附睾功能损伤。抗氧化剂维生素E能有效改善精索静脉曲张附睾氧化应激水平,促进ZO-1表达上调,改善附睾功能。     

通精灵对实验性精索静脉曲张大鼠精子DNA完整性与睾丸组织氧化应激的影响

目的:探讨通精灵对实验性精索精索静脉曲张大鼠精子DNA完整性与睾丸组织氧化应激的影响。方法:雄性Wistar大鼠75只随机分为假手术组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组15只。参照文献制备大鼠精索静脉曲张模型,"夹尾激怒法"建立合并中医肝气郁结证模型。造模完成后4周开始给药,持续8周。观察大鼠的一般情况,精子染色质结构分析法(SCSA)检测附睾精子DFI。化学比色法测睾丸过氧化氢(H_2O_2)含量、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与假手术组相比较,模型组大鼠附睾精子DFI[(8.36±2.49)%]显著升高(P0.01),睾丸组织H_2O_2含量[(431.22±97.01)mmol/g prot]显著升高(P0.01),CAT[(10.53±2.69)U/ml]、SOD[(87.30±25.33)U/ml]活性显著升高(P0.01)。与模型组相比较,通精灵各组附睾精子DFI显著降低,睾丸组织H_2O_2的含量显著降低。结论:精索静脉曲张模型大鼠附睾精子DNA完整性降低,睾丸组织呈氧化应激状态,精子DNA完整性与氧化应激有相关性,通精灵可能通过增加CAT、SOD活性,降低H_2O_2含量减轻了睾丸组织氧化应激状态,从而提高精子DNA完整性。     

经脐单孔单通道与单孔双通道腹腔镜手术治疗青少年精索静脉曲张的对比研究

目的:对比经脐单孔单通道与单孔双通道腹腔镜手术治疗青少年精索静脉曲张的疗效。方法:将80例精索静脉曲张患儿随机分成两组(单通道组及双通道组各40例)。对比两组的手术时间、术后住院时间、切口疼痛评分、术后并发症、腹壁美容满意度评分。结果:两组手术均获成功。虽然双通道组术后切口疼痛视觉模拟评分(VAS)高[(3.6±1.1)分vs(4.8±1.4)分,t=-4.986,P0.01],但两组的手术时间[(31.2±4.6)min vs(29.8±4.2)min,t=1.383,P=0.171]、术后住院时间[(1.82±0.8)d vs(1.95±0.7)d,t=-0.784,P=0.436]、术后并发症(0 vs 0)和腹壁美容满意度[(4.8±0.5)分vs(4.6±0.6)分,t=1.253,P=0.214]均无明显差异。术后6个月两组均无复发,无脐疝、鞘膜积液及睾丸萎缩等并发症,腹壁无可见手术瘢痕。结论:在严格掌握手术适应证的前提下,经脐单孔单通道与单孔双通道腹腔镜治疗精索静脉曲张疗效相当,腹壁不留瘢痕,双通道腹腔镜手术无需特殊器械,更值得临床推广。     

腹腔镜下2种精索内静脉高位结扎术式的临床效果比较

目的探讨腹腔镜下精索血管集束高位结扎和腹腔镜下保留睾丸动脉精索内静脉高位结扎术治疗精索静脉曲张的术后精液参数变化及并发症。方法回顾性分析2012年9月~2015年3月我院行腹腔镜精索静脉高位结扎术的精索静脉曲张94例资料,其中腹腔镜精索血管集束高位结扎术45例(A组),腹腔镜下保留睾丸动脉精索内静脉高位结扎术49例(B组),比较2组术后6个月精液参数的变化以及术后并发症。结果术后随访8~56个月,平均26个月。术后6个月A、B组精液质量较术前均有明显改善,且术后精子数量[(35.9±2.1)×10~6vs.(44.9±2.3)×10~6,t=-19.541,P=0.000],精子密度[(25.6±2.1)×10~6/ml vs.(28.1±2.9)×10~6/ml,t=-4.874,P=0.000],精子活力(56.2%±3.3%vs.66.9%±4.0%,t=-14.124,P=0.000),B组明显好于A组。术后阴囊水肿[20.0%(9/45)vs.6.1%(3/49),χ~2=4.057,P=0.044],继发性鞘膜积液[17.8%(8/45)vs.4.1%(2/49),χ~2=4.629,P=0.031],附睾炎[24.4%(11/45)vs.6.1%(3/49),χ~2=6.212,P=0.013],睾丸萎缩[8.9%(4/45)vs.0%(0/49),Fisher检验,P=0.049],术后总并发症[73.3%(33/45)vs.20.4%(10/49),χ~2=26.674,P=0.000],A组均明显高于B组;2组术后精索静脉曲张复发率[2.2%(1/45)vs.4.1%(2/49),χ~2=0.262,P=0.608]无明显差异。术后自然妊娠率[40.0%(18/45)vs.73.5%(36/49),χ~2=10.749,P=0.001],B组明显高于A组。结论术中保留睾丸动脉有益于提高精液质量和自然妊娠率,减少术后睾丸萎缩、附睾炎、阴囊水肿。     

茶多酚对精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的:研究茶多酚对精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响,分析茶多酚对精索静脉曲张大鼠生精功能是否具有保护作用。方法:清洁级青春期Wistar大鼠32只随机分为4组,每组8只:假手术组(仅模拟手术过程,不结扎血管)、模型组(建立左精索静脉曲张模型)、茶多酚低剂量组[建立精索静脉曲张模型并给予10 mg/(kg·d)茶多酚干预]、茶多酚高剂量组[建立精索静脉曲张模型并给予40 mg/(kg·d)茶多酚干预]。建立左侧精索静脉曲张模型4周后,假手术组及模型组均给予生理盐水1 ml/100 g,茶多酚低剂量组及茶多酚高剂量组分别给予茶多酚10 mg/kg(用生理盐水配置成浓度为1 mg/ml)和40 mg/kg(用生理盐水配置成浓度为4 mg/ml),灌胃,1次/日,持续4周。4周后4组大鼠均处死并分别取左侧睾丸组织,检测低氧诱导因子-1(HIF-1)、Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt C)和caspase-3在睾丸组织中的表达及生精细胞的凋亡并计算凋亡指数(AI)。结果:茶多酚干预组大鼠Bcl-2表达高于模型组(110.03±3.07),低于假手术组(154.18±2.96);茶多酚低剂量组大鼠Bcl-2(127.67±1.28)表达低于茶多酚高剂量组(136.41±1.95),差异有统计学意义(P0.05)。茶多酚干预组大鼠HIF-1、Bax、Cyt C和caspase-3的表达低于模型组,高于假手术组;茶多酚低剂量组大鼠HIF-1、Bax、Cyt C和caspase-3的表达高于茶多酚高剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。假手术组AI最低,茶多酚干预组AI低于模型组,茶多酚高剂量组AI低于茶多酚低剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:茶多酚能显著降低精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞的凋亡。     

经腹股沟和经腹股沟下途径显微镜精索静脉结扎术的疗效对比

目的比较经腹股沟和经腹股沟下途径显微镜精索静脉结扎术治疗精索静脉曲张的安全性和疗效。方法回顾性分析我院2016年1月至2019年6月显微镜精索静脉结扎术治疗精索静脉曲张145例资料,经腹股沟途径53例,经腹股沟下途径92例。比较两组手术时间、结扎精索静脉数量、阴囊疼痛缓解率、精子质量改善情况及并发症(睾丸鞘膜积液、睾丸萎缩、复发)。结果经腹股沟途径手术比经腹股沟下途径手术时间短[(34.2±5.0)min vs(37.8±8.4)min,t=–3.245,P=0.001],且结扎精索内静脉数量少[(6.1±1.3)根vs(8.3±1.5)根,t=–9.171,P<0.001]。两组术后精子质量改善情况、阴囊疼痛缓解率及并发症发生率差异无统计学意义。结论显微镜下经腹股沟和经腹股沟下途径精索静脉结扎术治疗精索静脉曲张均疗效确切而且安全。经腹股沟途径需结扎的精索内静脉少,手术时间短。     

去铁胺在大鼠自体肝移植术后余肝细胞凋亡中的作用

目的 探讨去铁胺预处理对大鼠自体肝移植余肝细胞凋亡的作用及机制.方法 建立大鼠自体肝移植模型,将96只健康雄性SD大鼠随机分为去铁胺预处理(D组)32只,注射用水对照组(C组)32只和假手术模型(S组)32只.分别于术后0.5、2、6、24 h各时间点处死大鼠,检测血清ALT和AST水平;做病理组织学检查,免疫组织化学检测缺氧诱导因子(HIF)-1α、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1及bcl-2蛋白的表达,TUNEL测定细胞凋亡.结果 在各个时间点,D组血清ALT及AST水平及IL-1、TNF-α蛋白表达量和凋亡指数明显低于C组(P<0.01),而HIF-1α和bcl-2蛋白表达量明显高于C组(P<0.01).结论 去铁胺预处理对大鼠自体肝移植余肝细胞凋亡具有保护作用,其作用机制部分可能与促进HIF-1α表达上调,从而降低炎性因子水平,促进bcl-2表达达到抑制细胞凋亡的作用.     

去铁胺对自体肝移植大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法 建立大鼠自体肝移植模型,将96只健康雄性SD大鼠随机分为去铁胺预处理(deferoxamine,D组),注射用水对照组(control group,C组)和假手术模型(shsm operation,S组)各32只.分别于术后0.5 h、2 h、6 h、24 h各时间点处死大鼠,检测血清ALT和AST水平和肝组织SOD活性与MDA含量;做病理组织学检查,免疫组化检测HIF-1α、TNF-α及IL-1蛋白的表达.结果 在30 min、2 h、6 h及24 h各个时间点,D组大鼠血清ALT及AST水平、肝组织MDA含量及IL-1、TNF-α蛋白表达量明显低于C组,再灌注后2 h、6 h、24 h,D组大鼠肝组织SOD含量(411±70;384±53;379±46)和各时间点HIF-1α蛋白表达量(0.0413±0.0040;0.0684±0.0032;0.0583±0.0032;0.0491±0.0026)明显高于C组[SOD(341±21;323±25;303±25)和HIF-1α(0.0254±0.0024;0.0312±0.0022;0.0381±0.0022;0.0257±0.0015)](F>59.881;P<0.01).结论 去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与促进HIF-1α表达上调,减轻氧化损伤和降低炎性因子水平有关.     

蒲葵子提取物对膀胱癌细胞增殖凋亡的影响及其相关机制

目的:探讨蒲葵子提取物对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制。方法:将T24细胞分别用含蒲葵子提取物且终浓度分别为0、25、50、100 mg/L的培养液培养,分别记为对照组和蒲葵子低、中、高剂量组。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数量;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法...     

黄连素体外诱导人脐带间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究

目的探讨黄连素体外诱导人脐带间充质干细胞(hUMSCs)向神经细胞分化的作用。方法体外对hUMSCs进行培养,以不同浓度黄连素(分4组:对照组即0 mg/L组、50 mg/L组、100 mg/L组和200 mg/L组)诱导其向神经样细胞分化,显微镜下观察细胞形态改变并记录,并通过细胞免疫化学及免疫荧光技术检测细胞表面神经标志物巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。组间比较采用重复测量数据的方差分析。结果经黄连素诱导72 h,细胞呈典型神经细胞样形态,且80%以上细胞表达神经细胞特异性标志物Nestin、NSE、GFAP。不同药物浓度作用下,神经样细胞分化率随时间变化情况为,200 mg/L组阳性细胞率在诱导48 h即可达峰值,高于100 mg/L组和50 mg/L组[(81.4±5.8)%比(50.4±4.7)%比(3.6±2.3)%,F=25.806,P<0.05],差异有统计学意义,但诱导72 h后明显下降,阳性表达细胞出现漂浮凋亡;100 mg/L组阳性细胞率在诱导72 h达到峰值,高于200 mg/L组和50 mg/L组[(87.7±4.6)%比(57.7±7.7)%比(14.3±5.3)%,F=24.815,P<0.05],差异有统计学意义,且高表达可持续维持3 d,诱导120 h后仍高达(85.2±5.0)%;50 mg/L组阳性细胞率一直相对较低,在诱导6 d达到峰值,低于100 mg/L组、高于200 mg/L组[(15.8±6.5)%比(64.5±6.6)%比(8.3±4.0)%,F=22.516,P<0.05],差异有统计学意义。结论黄连素体外可诱导hUMSCs向神经样细胞分化,浓度为100μg/ml时诱导最为明显,且存活时间最长。     

长链非编码RNA Linc00472靶向微小RNA-381对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的观察长链非编码RNA Linc00472(LncRNA Linc00472)靶向调控微小RNA-381(miR-381)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法收集2017年3月至2018年5月郑州大学第一附属医院收治的骨肉瘤患者29例为研究对象,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测骨肉瘤组织和瘤旁组织中Linc00472的表达。将骨肉瘤U2OS细胞分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-Linc00472组、pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组、pcDNA3.1-Linc00472+miR-381组。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭。双荧光素酶报告实验鉴定Linc00472与miR-381的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果Linc00472在骨肉瘤组织中的表达水平低于瘤旁组织(0.31±0.03比1.03±0.10,t=37.138,P<0.05),差异有统计学意义;与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Linc00472组细胞存活率[(100.29±10.12)%比(53.29±5.44)%]低于pcDNA3.1组(t=12.272,P<0.05),差异有统计学意义,迁移细胞数[(266.00±23.61)个比(124.00±12.01)个]与侵袭细胞数[(131.00±13.06)个比(62.00±6.24)个]少于pcDNA3.1组(t=16.082,P<0.05;t=14.301,P<0.05),差异有统计学意义,而细胞凋亡率[(8.58±0.91)%比(26.61±2.64)%]高于pcDNA3.1组(t=19.370,P<0.05),差异有统计学意义;miR-381过表达可抑制野生型载体WT-Linc00472细胞的荧光素酶活性(t=19.827,P<0.05),差异有统计学意义;与pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组比较,pcDNA3.1-Linc00472+miR-381组可增强细胞增殖[(53.17±5.33)%比(85.26±8.62)%]、迁移[(122.00±12.31)个比(223.00±22.18)个]及侵袭[(64.00±6.36)个比(104.00±10.20)个]能力高于pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组(t=9.499,P<0.05;t=11.945,P<0.05;t=9.983,P<0.05),细胞凋亡率[(26.11±2.62)%比(13.11±1.34)%]低于pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组(t=13.253,P<0.05),差异有统计学意义。结论LncRNA Linc00472通过靶向调控miR-381可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭并诱导细胞凋亡。     

右美托咪定联合尼卡地平对老年脊柱手术患者控制性降压及炎症因子的影响

目的探讨右美托咪定联合尼卡地平对老年脊柱手术患者控制性降压及炎症因子的影响。方法前瞻性收集大连市第二人民医院2017年6月至2019年6月收治的老年脊柱手术患者100例(ASA分级Ⅰ~Ⅱ级),男56例,女44例,平均(70±6)岁。依据随机数字表法分为右美托咪定复合尼卡地平组(D+N组)和单用尼卡地平组(N组),每组50例,记录两组患者在麻醉前10 min(T₁)、手术开始后10 min(T₂)、手术开始后20 min(T₃)、手术开始后30 min(T₄)、停药时(T₅)、手术结束(T₆)时心率(HR)、平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)以及术前和术后2 h、6 h的炎症因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)和术野清晰度、术中失血量、不良反应发生情况。结果D+N组T₂、T₃、T₄、T₅、T₆的HR[(78.5±5.8)次/min、(80.3±5.7)次/min、(81.6±5.9)次/min、(81.8±6.12)次/min、(80.1±8.6)次/min]、MAP[(58.2±3.3)mm Hg、(58.8±3.5)mmHg、(59.1±3.5)mm Hg、(84.1±6.6)mm Hg、(83.1±6.2)mm Hg]、CVP[(4.0±0.5)cm H₂O、(4.1±0.5)cm H₂O、(4.2±0.5)cm H₂O、(5.2±0.5)cm H₂O、(5.1±0.5)cm H₂O]低于N组[(85.6±6.5)次/min、(88.1±6.7)次/min、(89.3±6.9)次/min、(88.7±6.57)次/min、(86.4±6.4)次/min,(62.2±3.5)mm Hg、(63.3±3.5)mm Hg、(63.6±3.8)mm Hg、(92.6±6.4)mm Hg、(90.2±6.2)mm Hg,(4.7±0.5)cm H₂O、(4.9±0.5)cm H₂O、(5.0±0.5)cm H₂O、(7.1±0.7)cm H₂O、(6.6±0.7)cm H₂O],差异有统计学意义(F=58.462,F=72.428,F=76.921;F=167.562,F=204.382,F=257.691;均P<0.05);D+N组术野清晰度评分[(2.1±0.3)分]、术中失血量[(392±71)ml]低于N组[(2.6±0.3)分、(684±95)ml],差异有统计学意义(t=8.333,t=17.331,均P<0.05);D+N组术后2 h、6 h的IL-6[(182.5±20.3)pg/ml、(253.6±30.2)pg/ml]、TNF-α[(35.7±4.0)ng/ml、(44.4±5.7)ng/ml]、CRP[(27.2±2.2)mg/L、(42.1±5.0)mg/L]低于N组[(214.3±25.7)pg/ml、(342.4±36.1)pg/ml,(41.5±4.7)ng/ml、(56.4±6.2)ng/ml,(34.3±2.7)mg/L、(58.4±6.4)mg/L],差异有统计学意义(F=64.871,F=82.653,F=93.254;F=94.268,F=125.436,F=151.367;F=74.216,F=90.843,F=98.630;P均<0.05);D+N组不良反应发生率(10.0%)明显低于N组(30.0%),差异有统计学意义(χ²=6.250,P<0.05)。结论右美托咪定联合尼卡地平可有效改善老年脊柱手术患者控制性降压效果,有利于改善患者血流动力学、术野清晰度,且可减少患者术后炎症应激反应及不良反应,值得临床推广。     

益生菌对大鼠回肠造口模型肠道菌群和并发症的作用

目的探讨益生菌制剂对大鼠回肠造口术后肠道功能恢复和造口周围刺激性皮炎的影响。方法取周龄相似(10~13周)体重相近(340~370 g)的无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠18只采用随机数字表法将其平均分为嗜酸乳杆菌组、布拉式酵母菌组和对照组,每组6只,行回肠造口术。分别予嗜酸乳杆菌、布拉式酵母菌及常规饮食不同干预。于第10天评估血清前白蛋白(PA)和白蛋白(ALB)、小肠推进率、造口周围刺激性皮炎(DET)和粪便布里斯托(Bristol)评分、肿瘤坏死因子-α,并比较3组间菌群差异。计量资料组间比较采用单因素方差分析,而进一步两两比较采用LSD分析。结果术后第10天布拉氏酵母菌组和嗜酸乳杆菌组体重、PA、ALB均高于对照组[(287.67±20.00)g比(263.67±18.25)g比(231.00±19.56)g、(194.27±6.76)mg/L比(186.00±9.23)mg/L比(166.09±3.77)mg/L、(20.14±2.06)g/L比(19.81±1.91)g/L比(15.67±1.17)g/L],差异均有统计学意义(F=13.051、26.013、11.987,P<0.01);小肠推进率、DET、Bristol评分和肿瘤坏死因子-α水平均低于对照组[(36.16±7.93)%比(42.18±3.73)%比(46.08±5.38)%、(4.50±1.05)比(5.00±1.10)比(7.33±0.82)、(4.45±0.19)比(4.60±0.19)比(5.52±0.26)、(58.28±20.85)ng/L比(51.00±18.10)ng/L比(99.44±41.90)ng/L],差异均有统计学意义(F=4.248、13.876、43.382、4.883,P<0.05)。线性判别分析效应量(LefSe)分析显示,益生菌组的梭菌属-产气荚膜梭菌的含量明显低于对照组(线性判别分析值=3,P<0.05),差异有统计学意义。结论益生菌制剂有助于促进回肠造口术后肠道功能恢复,维持肠道菌群稳态,减少并发症发生。     

KIF1A过表达对氧糖剥夺-再灌注损伤PC12细胞的作用机制研究

目的:研究Kinesin-3家族成员蛋白(Kinesin-3 family member1A,KIF1A)对氧糖剥夺-再灌注诱导的PC12细胞活力、自噬和凋亡的影响,为进一步研究KIF1A在脊髓缺血再灌注损伤治疗方面提供理论依据。方法:PC12细胞(美国ATCC公司)分为四组:A组,对照组,无处理;B组,氧糖剥夺再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)组,PC12细胞用无糖DMEM培养基,于含混合气体(95%N2和5%CO2)的37℃恒温箱内密闭缺氧培养4h;C组,pcDNA3.1空质粒组,PC12细胞转染pcDNA3.1空质粒48h,进行OGD/R处理;D组,pcDNA3.1-KIF1A质粒组,PC12细胞转染pcDNA3.1-KIF1A质粒48h,进行OGD/R处理。B、C、D组经OGD/R处理后,更换常规培养基,正常孵育24h,收集细胞总RNA及蛋白质,进行实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT PCR)和Western blot检测KIF1A mRNA和蛋白的表达情况;CCK8检测细胞存活率变化;凋亡ELISA及Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞凋亡及Caspase-3活性;Western blot检测各组自噬相关基因LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的蛋白表达变化。结果:与A组(1.00±0.00)相比,B组细胞KIF1A mRNA(0.41±0.05)和蛋白表达水平(0.52±0.07,P<0.05)显著下调;细胞活力[(51.60±7.35)%,P<0.05]显著降低。与B组(1.00±0.00)相比,C组空质粒对KIF1A mRNA(0.91±0.13)及蛋白质(1.08±0.08)表达,细胞活力[(51.60±7.35)%vs(47.30±4.16)%],细胞凋亡(1.95±0.18 vs 2.08±0.16,P>0.05)等无显著影响。而D组KIF1A过表达后能显著上调KIF1A mRNA(2.63±0.16)以及蛋白表达(2.51±0.18,P<0.05),显著缓解OGD/R引起的细胞存活率下降[(51.60±7.35)%vs(86.40±9.03)%]及凋亡[1.95±0.18 vs 1.36±0.12,P<0.05];与B组相比,D组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(1.68±0.14 vs 1.19±0.09,P<0.05)及pmTOR的表达(1.00±0.00 vs 1.26±0.02,P<0.05)显著受抑制,P62表达显著升高(0.53±0.05 vs 0.89±0.09,P<0.05)。结论:KIF1A过表达可促进缺血再灌注损伤诱导的PC12细胞存活、抑制细胞自噬与凋亡,其机制可能与抑制mTOR通路相关。     

阿司匹林能降低血液透析患者血清C反应蛋白水平

目的 评价阿司匹林对血液透析患者高敏C反应蛋白(hsCRP)的影响及预防血透患者动静脉内瘘栓塞的有效性和安全性。 方法 采用前瞻性随机对照研究设计。纳入采用自身动静脉内瘘血管通路进行透析≥3个月的维持性血液透析患者110例,按随机数字表法分为干预组（55例）和对照组（55例）,并进一步根据年龄分为≤60岁和>60岁亚组。干预组服用阿司匹林100 mg/d 6个月,随访两组患者的微炎性反应和凝血指标、内瘘栓塞率以及服药后的不良反应。 结果 干预组年龄≤60岁的患者服药6个月后,血小板聚集率（PAR）和 hsCRP 水平分别为（68.14±8.45）%和（4.79±4.81） mg/L,较服药前（82.37±9.12）%和（6.94±10.26） mg/L显著下降（均P < 0.05）,并显著低于对照组PAR（74.7±11.50）%和hsCRP（5.12±9.25） mg/L（均P < 0.05）。研究过程中干预组和对照组各发生2例内瘘栓塞,内瘘栓塞率两组间差异无统计学意义（P = 0.676）。干预组的不良事件发生率高于对照组,但差异无统计学意义（20.0%比7.2%,P = 0.052）,两组间的病死率差异无统计学意义（3.6%比0,P = 0.495）。 结论 使用阿司匹林100 mg/d 6个月,可以显著降低年龄≤60岁的血液透析患者的PAR及hsCRP水平,改善微炎性反应状态,不会引起严重不良反应,但是对动静脉内瘘栓塞的预防作用还有待于更长时间、更大样本的研究证实。     

不同剂量右美托咪定预注对利多卡因神经毒性的影响

目的 比较不同剂量右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)预注对利多卡因致白兔中枢神经毒性的影响及可能机制. 方法 将40只新西兰白兔按随机数字表法分为4组(A、B、C、D组),每组10只:A组通过颈内静脉泵入含Dex 10 μg/kg的生理盐水8 ml,10 min后以4 mg· kg-1· min-1泵入利多卡因直到出现惊厥;B组泵入含Dex 5 μg/kg的生理盐水8 ml,同法泵入利多卡因;C组泵入等量生理盐水,同法泵入利多卡因;D组只泵入生理盐水8 ml.于白兔惊厥时抽血测利多卡因浓度,记录利多卡因剂量及发生惊厥时间,测脑组织天冬氨酸(aspartate,Asp)、谷氨酸(glutamic acid,Glu)、甘氨酸(glycine,Gly)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量. 结果 产生中枢神经毒性所需利多卡因剂量、利多卡因血药浓度及发生惊厥时间,A组[分别为:(240±48) mg,(6.4±0.8)μg/kg,(822±122)s]、B组[分别为:(230±51) mg,(6.3±0.5)μg/kg,(802±114)s]较C组[分别为:(137±37) mg,(5.4±0.6) μg/kg,(510±76)s]明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);Asp、Glu、Gly、GABA的含量,A组[分别为:(3.5±1.0)、(4.0±1.9)、(10.1±1.9)、(16.5±2.2) μmol/g]、B组[分别为:(3.7±0.8)、(4.2±1.9)、(11.4±2.2)、(17.4±2.4) mol/g]、C组[分别为:(4.7±1.0)、(6.8±1.9)、(13.7±1.9)、(20.9±3.4) μmol/g]明显高于D组[分别为:(1.5±0.8)、(2.4±1.2)、(4.7±1.6)、(5.7±2.8) μmol/g],差异有统计学意义(P＜0.05),而C组又明显高于A、B组(P＜0.05). 结论 预注Dex可以延缓利多卡因致惊厥反应的发生,增加利多卡因神经毒性的阈值,对中枢神经有一定的保护作用.     

臭椿酮抑制ENST00000441270/miR-149轴影响结直肠癌细胞增殖和凋亡的实验研究

目的探讨臭椿酮对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法根据检测结果实施分组,采用低(0.2μmol/L)、中(0.4μmol/L)、高剂量(0.6μmol/L)的臭椿酮干预结直肠癌SW1116细胞24 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,集落形成实验检测克隆形成数,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ENST00000441270和微小RNA-149(miR-149)的表达水平。转染ENST00000441270小干扰RNA(si-ENST00000441270)至SW1116细胞,采用上述方法检测干扰ENST00000441270表达对SW1116细胞活力、克隆形成以及凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验验证ENST00000441270与miR-149之间靶向关系。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果臭椿酮低剂量组SW1116细胞的活力[(0.84±0.05)比(0.84±0.05),t=0.529,P>0.05]、克隆形成数[(110.00±3.56)个比(111.33±3.86)个,t=0.499,P>0.05]、凋亡率[(7.56±0.80)%比(7.35±0.63)%,t=0.307,P>0.05]、ENST00000441270[(0.98±0.06)比(0.99±0.06),t=0.238,P>0.05]和miR-149[(1.01±0.07)比(0.99±0.07),t=0.303,P>0.05]表达与对照组比较,差异均无统计学意义。臭椿酮中、高剂量组SW1116细胞的活力(0.63±0.04、0.40±0.03比0.84±0.05,t=7.667、12.667,P<0.05]、克隆形成数[(85.67±2.87)个、(58.33±2.62)个比(111.33±3.86)个,t=9.487、24.666,P<0.05]、ENST00000441270表达[(0.69±0.05)、(0.41±0.03)比(0.99±0.06),t=7.138、13.799,P<0.05]低于对照组,差异均有统计学意义,细胞凋亡率[(12.61±0.91)%、(21.66±0.97)%比(7.35±0.63)%,t=7.715、12.036,P<0.05]、miR-149表达[(1.48±0.08)、(1.92±0.10)比(0.99±0.07),t=7.415、14.074,P<0.05]高于对照组,差异均有统计学意义。si-ENST00000441270组SW1116细胞活力[(0.35±0.02)比(0.88±0.05),t=17.047,P<0.05]、克隆形成数[(49.67±2.87)个比(112.67±3.40)个,t=24.525,P<0.05]低于阴性对照(si-NC)组,细胞凋亡率[(22.62±0.82)%比(7.58±0.65)%,t=24.896,P<0.05]高于si-NC组,差异均有统计学意义。miR-149是ENST00000441270的靶基因。结论0.4、0.6μmol/L的臭椿酮能够抑制结直肠癌细胞SW1116增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制ENST00000441270/miR-149分子轴有关。