增生性瘢痕中差异性miRNA的筛选及作用初探

目的筛选出增生性瘢痕中异常表达的miRNA,检测miR-637对增生性瘢痕的调节作用。方法通过Real time PCR的方法验证芯片分析得到的差异性miRNAs在30例增生性瘢痕患者组织中的表达情况;报告基因实验检测miR-637对SMAD3的作用。通过MTT和Transwell方法检测miR-637对HACAT细胞增殖和迁移的作用。通过Western Blot检测miR-637对细胞中SMAD3、Cyclin D1和MMP2的影响。结果 Real time PCR证实,增生性瘢痕中miR-637、miR-487、miR-154、miR-582、miR-194等表达显著下调;miR-21、miR-503、miR-550等表达上调。报告基因实验检测显示,miR-637与SMAD3具有结合位点;MTT和Transwell实验检测显示,miR-637可以抑制HACAT细胞的增殖和迁移。Western blot实验证明,miR-637可以抑制SMAD3、Cyclin D1和MMP2的表达。结论 miR-637在增生性瘢痕中呈低表达,可能成为预防和治疗增生性瘢痕的潜在靶点。     

下调MicroRNA-21对胃癌细胞生物学行为及PTEN表达的影响

目的:探讨抑制MicroRNA 21(miR-21)的表达对胃癌细胞的生物学行为及PTEN表达的影响,并分析miR-21参与肿瘤发生、发展的可能机制。方法:应用细胞瞬转的方法将miR-21 inhibitor转染课题组前期试验证实的miR-21高表达胃癌细胞株,应用细胞增殖试验(CCK8方法)、流式细胞技术(Annexin-Ⅴ标记)、Transwell试验检测抑制胃癌细胞株中miR-21表达后,对其细胞增殖、凋亡、周期、迁移的影响;并用Western印迹技术和双荧光素酶报告载体技术检测下调miR-21后,胃癌细胞株PTEN表达的变化。结果:体外增殖试验显示,下调miR-21后对胃癌细胞株的增殖抑制作用明显(P<0.05);体外凋亡试验显示,下调miR-21能增加胃癌细胞株的凋亡(P<0.05);Western印迹试验显示,抑制miR-21表达后胃癌细胞株PTEN蛋白表达明显增加,荧光素酶相对活性明显增加(P<0.05)。结论:下调miR-21的表达对胃癌细胞株的增殖有明显的抑制作用,且促进其凋亡,能降低其体外迁移能力;下调miR-21后,PTEN活性明显增加;PTEN可能是miR-21参与胃癌发生、发展的靶标之一。     

miR-21在肝癌中的表达及其与PTEN的关系

目的:探讨miR-21在肝癌中的表达及其与PTEN的关系。方法:用RT-PCR检测119例肝癌组织与癌旁组织中miR-21与PTEN的表达情况;双报告基因实验检测肝癌细胞中miR-21对PTEN转录水平的影响;分析miR-21表达与肝癌患者临床病理因素的关系;在肝癌细胞中分别过表达及抑制miR-21的表达之后,检测细胞增殖与PTEN及其下游通路蛋白的表达。结果:肝癌组织中miR-21表达明显高于癌旁组织,而PTEN则相反(均P0.05);miR-21与PTEN的表达具有一定相关性(r2=0.6767,P0.05);miR-21可并抑制PTEN转录活性;miR-21的表达与肝癌患者AFP水平及TNM分期有关(均P0.05);肝癌细胞过表达miR-21后,肝癌细胞增殖明显增强,PTEN表达明显调,并影响其下游蛋白的表达,而抑制miR-21则相反(均P0.05)。结论:miR-21在肝癌中表达升高,且miR-21可以通过下调PTEN表达进一步促进肝癌细胞的增殖。     

miR-506-3p靶向Beclin-1调控烧伤后皮肤成纤维细胞的自噬和增殖机制研究

目的:探讨烧伤后皮肤成纤维细胞中miR-506-3p表达与Beclin-1的靶向关系及增殖调控作用,为烧伤后瘢痕的治疗提供新靶点。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测烧伤组织和热损伤皮肤成纤维细胞中miR-506-3p水平;Targetscan在线预测,双荧光素酶验证miR-506-3p与Beclin-1靶向关系;qRT-PCR和Western blot检测miR-506-3p模拟物或抑制剂转染对Beclin-1表达的影响;qRT-PCR检测热刺激后miR-506-3p模拟物(10nM或30nM)转染成纤维细胞miR-506-3p的表达并采用CCK-8检测转染细胞增殖效率。结果:与正常组织相比,烧伤组织和热损伤成纤维细胞中miR-506-3p的表达下调;miR-506-3p和Beclin-1存在靶向调控作用关系,并且miR-506-3p可负调控Beclin-1表达;miR-506-3p模拟物转染以剂量依赖的方式抑制了热刺激的真皮成纤维细胞中的细胞增殖。结论:miR-506-3p通过靶向抑制Beclin-1表达来调节烧伤后皮肤成纤维细胞的自噬和增殖,有可能成为烧伤愈合后瘢痕治疗的潜在靶标。     

异泽兰黄素通过PDGFβ/ERK信号通路抑制增生性瘢痕生长的机制探讨

目的:探讨异泽兰黄素(Eupatilin)介导PDGFβ对增生性瘢痕成纤维细胞增殖抑制作用的分子机制。方法:应用组织贴壁法从增生性瘢痕和正常皮肤组织中分离增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞,Westernblot法检测PDGFβ在增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中的表达,通过脂质体转染pcDNA3.1-PDGFβ构建PDGFβ过表达增生性瘢痕成纤维细胞,CCK8法检测过表达PDGFβ对异泽兰黄素抑制增生性瘢痕成纤维细胞活力的影响,流式细胞仪检测过表达PDGFβ对异泽兰黄素促进增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响,Westernblot法检测过表达PDGFβ对异泽兰黄素调控细胞内p-ERK、Bcl2和Bax蛋白表达的影响。结果:免疫组化和Westernblot结果表明,与正常皮肤组织和成纤维细胞比较,增生性瘢痕组织和成纤维细胞中PDGFβ高表达;CCK8结果显示,与空载对照组(pcDNA31-control)比较,PDGFβ过表达组瘢痕成纤维细胞活力显著升高(P0.05);流式细胞术检测结果表明,与对照组pcDNA3.1-control+Eupatilin比较,pcDNA3.1-PDGFβ+Eupatilin组增生性瘢痕成纤维细胞凋亡率显著降低(P0.05);Westernblot结果显示,PDGFβ过表达能显著促进p-ERK和Bcl2的表达增加,抑制Bax蛋白表达(P0.05),与对照组相比具有显著统计学差异。结论:异泽兰黄素可抑制增生性瘢痕PDGFβ蛋白的表达,通过抑制PDGFβ/ERK通路诱导细胞凋亡。     

周围神经损伤后断端神经组织微小RNA-221和PTEN表达变化

目的研究大鼠坐骨神经损伤后近、远侧断端组织中微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)以及磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tension protein homologue,PTEN)的表达情况,及其与周围神经损伤修复的相关性,以期为临床诊治周围神经损伤提供新靶点。方法取SPF级雄性SD大鼠96只建立坐骨神经损伤模型,分别于术后0(术后即刻)、1、4、7 d处死24只大鼠,无菌条件下取坐骨神经近、远侧断端组织。实时荧光定量PCR检测miR-221表达,Western blot、免疫荧光染色检测PTEN蛋白表达,采用双荧光素酶报告基因验证miR-221与PTEN的调控关系;同时结合透射电镜观察神经组织超微结构。结果实时荧光定量PCR、Western blot及免疫荧光染色检测示,术后大鼠坐骨神经近、远侧断端组织中miR-221相对表达量均逐渐增加,PTEN蛋白相对表达量均逐渐减少,术后各时间点间比较差异均有统计学意义(P0.05)。术后1、4、7 d近侧断端miR-221相对表达量均显著高于远侧断端,PTEN蛋白相对表达量均显著低于远侧断端,差异均有统计学意义(P0.05)。双荧光素酶报告基因示PTEN为miR-221作用靶点。透射电镜观察示随术后时间延长,雪旺细胞增殖及轴突、髓鞘溃变逐渐增加;术后1 d近、远侧断端无明显差异,4、7 d时近侧断端雪旺细胞增殖较远侧断端增多,轴突、髓鞘溃变程度降低。结论大鼠坐骨神经损伤后,miR-221表达上调,靶向调控PTEN表达降低,进而产生近、远侧断端miR-221及PTEN表达差异,这一现象可能对促进周围神经损伤后修复发挥一定作用。     

重楼皂苷Ⅰ通过调控LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及促进细胞凋亡的初步研究

目的:探讨重楼皂苷Ⅰ (PPI)是否通过调控长链非编码RNA CEBPA-AS1 (LncRNA CEBPA-AS1)/微小RNA-19 5-5p(miR-195-5p)通路影响瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡。方法:原代培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,使用不同浓度的PPI处理细胞,s i-CEBPA-AS1、pcDNA-CEBPA-AS1分别转染至细胞;采用MTT检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测LncRNA CEBPA-AS1、miR-195-5p的表达量;双荧光素酶报告实验检测LncRNA CEBPA-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果:与Control组比较,PPⅠ可明显降低细胞存活率、S期细胞比例、Bc1-2蛋白水平、LncRNA CEBPA-AS1的表达水平,提高G_0/G_1期细胞比例、凋亡率、miR-195-5p的表达水平,差异均有统计学意义(p0.05)。与si-NC组比较,si-CEBPA-AS1组细胞存活率、S期细胞比例降低,G_0/G_1期细胞比例、凋亡率升高,差异均有统计学意义(p0.05)。双荧光素酶报告实验证实LncRNA CEBPA-AS1可靶向调控miR-195-5p;转染pcDNA-CEBPA-AS1可明显逆转PPⅠ对细胞增殖、细胞周期及凋亡的作用。结论:重楼皂苷Ⅰ可能通过下调LncRNA CEBPA-AS1的表达及上调miR-195-5p的表达从而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及促进细胞凋亡。     

miR-135a-5p抑制胆囊癌细胞增殖的研究

目的:探讨miR-135a-5p对胆囊癌的作用及其机制。方法:采用实时PCR检测miR-135a-5p和VLDLR在23对胆囊癌与癌旁组织的表达。采用miR-135a-5p模拟物转染胆囊癌细胞,通过细胞增殖(CCK-8)曲线、单克隆集落形成实验和细胞周期实验(流式细胞仪),检测miR-135a-5p对胆囊癌细胞增殖的影响。用Western印迹和Luciferase双荧光素酶报告系统验证和VLDLR受miR-135a-5p的调控。结果:在23对胆囊癌与癌旁组织中,癌组织的miR-135a-5p表达水平低于癌旁组织。体外实验证实miR-135a-5p通过G1期阻滞抑制胆囊癌细胞的增殖,且可通过作用于VLDLR mRNA降低其蛋白质水平。结论:miR-135a-5p抑制胆囊癌的增殖,可能是胆囊癌治疗靶点。     

miR-137通过PTN抑制瘢痕成纤维细胞生长

目的分析miR-137对瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法通过芯片分析技术筛选出增生性瘢痕差异性表达的miRNAs,并在增生性瘢痕组织中进行验证。通过miRDB软件预测miR-137能够打靶的蛋白质,采用荧光素酶报告基因实验分析miR-137对PTN的靶向作用。提取原代瘢痕成纤维细胞分别构建miR-137过表达或低表达的细胞系。采用western blot及real time PCR检测miR-137对细胞中PTN的影响,以及MTT方法检测miR-137对细胞增殖的作用;检测miR-137对细胞中Cyclin B1的影响。结果 miR-137在增生性瘢痕组织中呈低表达,可以与PTN的3′UTR区域直接结合来抑制其表达及活性,从而抑制瘢痕成纤维细胞的增殖。Western blot和real time PCR检测结果显示,miR-137能抑制Cyclin B1在瘢痕成纤维细胞中的表达。结论 miR-137可以抑制PTN的表达,而且可以通过抑制PTN来抑制瘢痕成纤维细胞的生长。     

PTEN和COX-2在病理性瘢痕中的表达及其相关性研究

目的研究抑癌基因PTEN和COX-2在病理性瘢痕中的表达及其相关性。方法应用免疫组化SP法检测正常皮肤24例、扁平瘢痕20例、增生性瘢痕32例和瘢痕疙瘩16例组织中PTEN、COX-2蛋白的表达。结果病理性瘢痕（瘢痕疙瘩、增生性瘢痕）组织中PTEN蛋白表达显著低于正常皮肤、扁平瘢痕（P〈0．05）,而COX-2蛋白表达显著高于正常皮肤、扁平瘢痕（P〈0．05）;4类组织中PTEN蛋白和COX-2蛋白呈负相关（P〈0．05）。结论COX-2及PTEN是病理性瘢痕发生发展中重要的调控因子,两者呈负相关。     

miR-21靶向PTEN调节PI3K/AKT通路对狼疮性肾炎患者肾小球系膜细胞增殖及炎性因子分泌的影响

目的:探讨miR-21靶向磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)调节磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对人肾小球系膜细胞(human mesangial cells, HMCs)增殖及炎性因子分泌的影响。方法:选取在我院经肾穿刺活检诊断为LN的30例患者的肾组织标本,qRT-PCR和western blot检测狼疮性肾炎肾组织中miR-21和PTEN的表达水平;HMCs随机分为5组:NC mimics组、miR-21 mimics组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-PTEN组和miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组;TargetScan预测miR-21与PTEN的结合位点;双荧光素酶报告基因验证miR-21与PTEN的靶向关系;细胞克隆形成实验检测miR-21靶向PTEN对HMCs增殖能力的影响;细胞流式术检测miR-21靶向PTEN对HMCs凋亡率的影响;ELISA检测miR-21靶向PTEN对HMCs炎性因子生成的影响;Western blot检测miR-21靶向PTEN调节PI3K/AKT通路相关蛋白的表达。结果:miR-21在狼疮性肾炎肾组织中高表达(P=0.043),PTEN在狼疮性肾炎肾组织中低表达(P=0.037);miR-21与PTEN存在靶向关系,且miR-21靶向下调PTEN的表达(P=0.003);与NC mimics组比较,miR-21 mimics组细胞集落数目增加(P=0.003),凋亡率下降(P=0.003),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加(均P=0.000),PTEN蛋白表达水平下调(P=0.003)、PI3K和AKT蛋白表达水平上调(P=0.025,P=0.004);与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目减少(P=0.032),凋亡率上升(P=0.035),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量减少(P=0.003,P=0.037,P=0.029),PTEN蛋白表达水平上调(P=0.002)、PI3K和AKT蛋白表达水平明显下调(均P=0.003);与miR-21 mimics组比较,miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目减少(P=0.003),凋亡率上升(P=0.000),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量减少(P=0.003,P=0.004,P=0.004),PTEN蛋白表达水平上调(P=0.003)、PI3K和AKT蛋白表达水平下调(P=0.031,P=0.039);与pcDNA3.1-PTEN组比较,miR-21 mimics+pcDNA3.1-PTEN组细胞集落数目增加(P=0.029),凋亡率下降(P=0.031),TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加(P=0.000,P=0.003,P=0.003),PTEN蛋白表达水平下调(P=0.003),PI3K和AKT蛋白表达水平上调(P=0.002,P=0.003)。结论:miR-21靶向PTEN对人肾小球系膜细胞的增殖、凋亡及炎性因子的分泌有一定影响,可能与PI3K/AKT通路有关。     

脂肪干细胞外泌体传递miR-145调控增生性瘢痕成纤维细胞生物学特性的实验研究

目的：探究脂肪干细胞（Adipose-derivedstemcells,ADSCs）来源的外泌体（Exosome,Exo）传递miR-145对增生性瘢痕成纤维细胞（hypertrophicscarfibroblasts,HSF）生物学功能的影响。方法：从增生性瘢痕组织中分离培养HSF细胞，从脂肪组织中分离培养ADSCs，流式细胞术检测其表面标记物表达情况；采用含miR-145过表达慢病毒及阴性对照miR-NC慢病毒感染ADSCs，实时荧光定量PCR测定转染效果，并提取各转染组ADSCs上清液中Exo，获得含miR-145过表达的ADSCs来源Exo，利用透射电镜观察其形态、纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径分布以及Westernblot检测表面标志性蛋白CD63、CD81、CD9和TSG101的表达情况对提取的外泌体进行鉴定；添加外泌体培养HSF细胞，具体分组包括对照组、Exo组、miR-NCExo组、miR-145-Exo组，PKH26荧光标记的ADSC来源的Exos与HSF细胞培养，共聚焦荧光显微镜观察外泌体能否被细胞摄取，EdU检测各组HSF细胞的增殖能力，AnnexinⅤ-FITC/P...     

miRNA在皮肤瘢痕组织中的表达研究

目的研究正常皮肤组织、非增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中miRNA的表达,筛选对瘢痕异常增生可能发挥作用的miRNA。方法使用miRNA芯片检测正常皮肤组织(C)、非增生性瘢痕(T_1)和瘢痕疙瘩(T2)中miRNA的表达谱,并对各组miRNA进行对比,筛选共同表达但表达有差异的miRNA部分,再选取其中表达差异较为明显的miRNA,对其进行Real-Time quantitative PCR验证实验。结果共计测得miRNA 2539条,差异表达结果为:T_1/C,上调2/下调17;T_2/C,上调3/下调94;T2/T_1,上调9/下调87。选取差异表达显著的miRNA,从C至T_2,miR-100、miR-29a表达呈现下调趋势,而miR-181a、miR-198表达呈现上调趋势。结论非增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的miRNA表达均有别于正常皮肤组织,而miR-100、miR-29a、miR-181a、miR-198对瘢痕组织内成纤维细胞增殖和胶原合成过程中发挥作用的重要信号通路均有影响。瘢痕增生是多基因复合性表达作用的结果 。     

miR-21在增生性瘢痕成纤维细胞增殖及青蒿琥酯等药物作用下表达情况的实验研究

目的:研究青蒿琥酯抑制人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs)增殖作用机制及miR-21所起的作用,为青蒿琥酯抑制皮肤瘢痕增生提供依据。方法:原代分离人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞,分别使用100、200、300、500μmol/L的青蒿琥酯处理24h,采用CCK8检测细胞的增值,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-21的表达情况。调控青蒿琥酯干预的HSFBs中的miR-21的表达,通过qRT-PCR和WB检测细胞中结缔组织生长因子(CTGF)以及机制金属蛋白酶1(MMP-1)的表达。结果:青蒿琥酯能抑制HSFBs的增值,并且抑制miR-21的表达。HSFBs细胞使用mimics处理,能显著降低青蒿琥酯对HSFBs的增值抑制作用,同时CTGF的表达升高,而MMP-1的表达降低。结论:青蒿琥酯可能通过调控miR-21的表达来抑制HSFBs的增值。     

山萘酚下调miR-21抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖

目的 探讨山萘酚通过调节miR-21的表达发挥抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用.方法 自2018年9月至2020年6月,北部战区总医院烧伤整形科从10例增生性瘢痕患者身上采集了增生性瘢痕组织样本和周围正常组织样本各10份,10例外伤术后患者身上采集了10份正常瘢痕样本.通过定量逆转录聚合酶链反应检测在正常组织、正常瘢...     

miR-483-5p通过下调CDK15促进肾上腺皮质癌增殖和侵袭

目的探讨miR-483-5p在肾上腺皮质癌中的作用及其可能的作用机制。方法荧光定量PCR法检测miR-483-5p和CDK15在肾上腺皮质癌组织和细胞系中的表达,CCK-8增殖试验测定miR-483-5p对细胞增殖的影响,Transwell法检测ACC细胞侵袭性的变化。荧光素酶试验和挽救实验验证miR-483-5p与CDK15相关的分子机制。结果miR-483-5p在肾上腺皮质癌组织中高表达(2.36±1.02 vs 1.09±0.43),CDK15在肾上腺皮质癌组织中低表达(0.57±0.26 vs 1.06±0.32)。荧光素酶检测证实CDK15是miR-483-5p的直接靶点。过表达miR-483-5p可通过下调CDK15的表达促进ACC细胞的增殖(24 h:0.26±0.03 vs 0.23±0.04,48 h:0.56±0.05 vs 0.41±0.03,72 h:0.73±0.04 vs 0.59±0.03)和侵袭能力(95.78±4.66 vs 23.89±2.52)。结论miR-483-5p可通过下调CDK15的表达促进肾上腺皮质癌的发生发展,其可作为肾上腺皮质癌的潜在生物标志物及治疗肾上腺皮质癌的新的作用靶点。     

微小核糖核酸miR-613通过下调E2F5的表达抑制前列腺癌细胞增殖

目的研究微小核糖核酸miR-613在前列腺癌组织及细胞系中的表达及其对前列腺癌细胞增殖的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测前列腺癌组织及细胞系中miR-613的表达情况,并检测各组细胞中E2F5mRNA的表达情况;蛋白质印迹法检测E2F5蛋白的表达;通过细胞增殖实验检测过表达miR-613后细胞的增殖能力;集落形成实验检测单个细胞克隆增殖情况;双荧光素酶报告实验验证miR-613和E2F5是否靶向结合。结果 qPCR结果显示,miR-613在前列腺癌组织和细胞系均显示低表达。与Control组相比,转染miR-613组PC3和LnCap细胞中E2F5蛋白表达水平降低,细胞增殖明显受抑制。而在过表达E2F5后,PC3和LnCap细胞增殖又明显回升,可逆转miR-613的调节作用。双荧光素酶报告实验结果表明,miR-613能够直接靶向E2F5 3′-UTR。结论 miR-613能够通过下调E2F5转录因子的表达而抑制前列腺癌细胞增殖。     

circ_0001658靶向miR-1231对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨circ_0001658是否靶向miR-1231影响肝癌Huh-7细胞的增殖和凋亡。方法:肝癌组织中circ_0001658和miR-1231表达采用qRT-PCR进行测定。利用CCK-8法检测si-circ_0001658组、miR-1231组、si-circ_0001658+anti-miR-1231组、si-NC组、miR-NC组、si-circ_0001658+anti-miR-NC组细胞活性,克隆形成、流式细胞术检测细胞克隆形成、凋亡,Western blotting检测cleaved-caspase 3和cleaved-caspase9表达。双荧光素酶报告实验检测circ_0001658和miR-1231的靶向结合。结果:与癌旁组织相比,肝癌组织中circ_0001658表达量升高,miR-1231表达量降低。干扰circ_0001658或过表达miR-1231降低Huh-7细胞活性、克隆形成数,增加凋亡率、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达量。circ_0001658靶向调控miR-1231的表达,下调miR-1231表达逆转了干扰circ_0001658表达对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的作用。结论:干扰circ_0001658表达通过靶向负调控肝癌Huh-7细胞的miR-1231,抑制细胞增殖和诱导凋亡。     

山药多糖通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌细胞凋亡的机制研究

目的探究山药多糖(CYPS)通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌(HCC)细胞凋亡的分子机制。方法qPCR检测miR-98-5p在不同HCC细胞系中的表达情况,使用不同浓度的CYPS处理Huh-7细胞,CCK-8检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测TGFβR1和细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2、Bax的表达,双荧光素酶报告基因系统验证miR-98-5p与TGFβR1的靶向关系。结果与人正常肝细胞HL-7702相比,miR-98-5p在HCC细胞系中表达升高(均P<0.05),且在Huh-7细胞中的表达高于其他HCC细胞(P<0.05);CYPS处理可明显抑制Huh-7细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡(均P<0.05),且10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力的抑制作用比其他浓度明显。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-98-5p靶向调控TGFβ1。与10-3 kg/L CYPS组相比,miR-98-5p mimics可下调10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力(P<0.05)的抑制作用和对细胞凋亡(P<0.01)的促进作用,CYPS+miR-98-5p mimics+pcDNA-TGFβR1组中细胞增殖活力与CYPS+miR-98-5p mimics组相比明显降低(P<0.05),细胞凋亡水平明显升高(P<0.01)。结论CYPS可下调miR-98-5p,促进TGFβR1的表达,抑制Huh-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

miR-124抑制结肠癌细胞增殖和侵袭与TET蛋白家族的关系

目的:探讨miR-124是否通过靶向调节TET蛋白家族的表达而抑制结肠癌细胞增殖与侵袭。方法:用双荧光素酶报告基因检测系统分别检测miR-124对TET家族(TET1、TET2、TET3)的3'UTR-荧光素酶活性的影响;用q RT-PCR与Western blot检测miR-124模拟物转染结肠癌HT29细胞后TET家族的m RNA与蛋白表达水平的变化;用MTS和Transwell实验观察HT29细胞转染miR-124模拟物及TET si RNA后增殖和侵袭能力的变化。结果:双荧光素酶报告基因检测结果显示,各TET m RNA的3'UTR均被miR-124特异性结合,其荧光素酶活性被明显抑制(均P0.05);转染miR-124模拟物后的HT29细胞TET的m RNA与蛋白表达水平明显减低(均P0.05);HT29细胞转染miR-124模拟物或TET si RNA后,增殖和侵袭能力均明显降低(均P0.05)。结论:miR-124可能通过直接靶向调控TET基因的表达,而抑制结肠癌细胞增殖和侵袭。