星孢菌素对山羊颞下颌关节盘细胞 自组装基体收缩的影响

目的 探索不同浓度星孢菌素对山羊颞下颌关节盘细胞自组装基体收缩性及细胞外基质合成的影响。方法 单层培养山羊颞下颌关节盘细胞至P3代,将5.5×10 ⁶个细胞在不同浓度（0、0.1、1、10、100 nmol·L ^-1）星孢菌素的完全培养基中分别接种于三维柱状琼脂糖井;每天每井换液,培养1周后观察自组装基体的形态变化;冰冻切片染色显示自组装基体细胞外基质及α-平滑肌动蛋白（α-SMA）的分布;酶联免疫吸附测定（ELISA）和Blyscan试剂盒检测基体细胞外基质含量的变化。结果 山羊颞下颌关节盘细胞接种4 h后,星孢菌素组和对照组细胞均在琼脂糖井内自组装,形成一圆盘状基体,之后变成球形。各组自组装基体在1周时天狼星红染色可见基体内大量胶原纤维分布;番红染色显示基体内纤维软骨样细胞明显分泌糖胺多糖（GAGs）;Ⅰ型胶原（ColⅠ）在免疫组织化学染色中呈强阳性;α-SMA免疫组织化学染色为弱阳性。星孢菌素组自组装基体内ColⅠ和GAGs较高,其中10 nmol·L ^-1组最明显（P<0.01）。结论 星孢菌素对自组装基体的收缩有一定干预效果,但不是非常突出;它更有利于细胞外基质的合成。     

不同体积分数氧气对山羊颞下颌关节盘细胞骨架改建的影响

目的 探讨不同体积分数的氧气对山羊颞下颌关节盘细胞3种细胞骨架蛋白改建的影响。方法 体外分离、培养山羊颞下颌关节盘细胞,传代至第2代,分别于常氧21%O₂及低氧8%O₂、4%O₂、2%O₂下培养。甲苯胺蓝、天狼星红及Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色观察不同氧体积分数下细胞显型的变化。细胞免疫荧光染色和实时定量逆转录聚合酶链反应检测细胞骨架蛋白,包括肌动蛋白、微管蛋白和波形蛋白的表达情况。结果 不同氧体积分数下关节盘细胞仍然具有成纤维特性,3种细胞骨架蛋白有规律地排列。4%O₂时,肌动蛋白和波形蛋白荧光强度最低（P<0.05）;2%O₂时,微管蛋白荧光强度最高（P<0.05）,其他各组间差异无统计学意义（P>0.05）。检测肌动蛋白mRNA表达,21%O₂组最高,而2%O₂组和4%O₂组最低（P<0.05）;微管蛋白mRNA表达在2%O₂组最高,8%O₂组最低（P<0.05）;波形蛋白mRNA表达,在4%O₂组最低,21%O₂组最高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 在不同氧体积分数条件下,细胞骨架蛋白有不同程度的改建,2%O₂可能是适合颞下颌关节盘细胞扩增的最佳氧体积分数。     

细胞松弛素B对山羊颞下颌关节盘细胞及细胞骨架肌动蛋白的影响

目的:肌动蛋白作为细胞骨架的重要结构蛋白,其与细胞形态和功能有着密切关系。因此本实验通过肌动蛋白抑制剂-细胞松弛素B检测细胞骨架完整性与山羊颞下颌关节盘细胞功能变化的关系。方法:检测不同浓度的细胞松弛素B对关节盘细胞增殖及形态的影响并得出最适浓度;观察最适浓度作用后细胞凋亡、粘附及肌动蛋白形态和mRNA表达的变化。结果:2 μmol/L浓度的细胞松弛素B对关节盘细胞增殖活性具有明显抑制作用,但随培养时间延长抑制率明显降低,无促进凋亡作用;细胞粘附率明显下降;与对照组相比,处理组细胞突起结构逐渐消失,形态变圆,肌动蛋白纤维丝明显的断裂,荧光强度降低;肌动蛋白mRNA表达降低。结论:细胞松弛素B可能是通过破坏肌动蛋白的结构抑制了颞下颌关节盘细胞形态及功能。     

神经肽P物质及骨形态发生蛋白信号通路在ST2细胞成骨分化过程中的作用

目的 探讨神经肽P物质（SP）在ST2细胞（小鼠骨髓间充质干细胞）成骨分化过程中的作用及机制,以期为颞下颌关节骨关节炎的治疗提供依据。方法 对第3代ST2细胞分别用0、10^-10、10^-8 、10^-6、10^-5 mol·L^-1 SP培养,24、48、72 h后采用CCK-8实验检测细胞增殖情况。以10^-6 mol·L^-1 SP培养第3代ST2细胞1、3、5、7 d后,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液中碱性磷酸酶（ALP）、Ⅰ型胶原蛋白（CollaⅠ）和骨钙素（OCN）的表达,免疫荧光染色检测细胞ALP活性。分别用SP、Noggin（骨形态发生蛋白信号通路抑制剂）、SP+Noggin和2%胎牛血清培养ST2细胞,采用ELISA法检测上清液中ALP、CollaⅠ和OCN的表达。结果 CCK-8结果显示,24、48、72 h时均以10^-6 mol·L^-1 SP促进ST2细胞增殖活性最为明显（P<0.01）。ELISA结果显示,ALP表达在5 d时较对照组差异最为明显（P<0.01）,CollaⅠ和OCN的表达在7 d时较对照组差异最为明显（P<0.05）;免疫荧光结果显示,ALP活性在5 d时最强;加入抑制剂Noggin后,ALP、CollaⅠ和OCN表达量均降低。结论 SP可促进ST2细胞增殖和成骨分化,骨形态发生蛋白信号通路可能参与了此过程。     

自组装山羊颞下颌关节盘组织工程纤维软骨模型的构建

目的 构建山羊颞下颌关节盘纤维软骨自组装模型,观察自组装组织工程纤维软骨的生物学特征,为颞下颌关节盘及其他组织工程纤维软骨的进一步研究创造条件.方法 分离、培养山羊颞下颌关节盘细胞,按每井5.5×106个接种到预制的直径5 mm×深10 mm琼脂糖井内,每天换液,培养2周,观察和检测颞下颌关节盘形态和成分的变化.结果 ...     

髁突矢状骨折手术中关节盘复位的应用

目的 探讨髁突囊内骨折开放手术中关节盘复位及固定方法的选择及疗效评判。方法 选择因髁突骨折接受手术治疗,且随访期超过6个月的36例患者为研究对象,骨折类型以髁突矢状骨折为主;术中采用长螺钉内固定,依据关节盘移位及损伤程度分别对关节盘采用缝合法（22侧）及锚固法（14侧）进行复位。术后1、3、6个月及1年进行随访,选择手术前及手术后6个月为时间点详细记录Fricton颞下颌关节紊乱指数（CMI）相关的各项指标,从临床和颞下颌关节（TMJ）功能两方面评估术后恢复情况。结果 两组患者术后TMJ功能改善,CMI分别从治疗前的0.213±0.162和0.273±0.154下降到0.059±0.072和0.064±0.068（P<0.05）。两组不同关节盘复位及固定方法之间比较,CMI、肌肉压痛指数和TMJ功能障碍指数差异无统计学意义（P>0.05）。结论 2种方法处理关节盘均可以有效地改善创伤导致的TMJ功能障碍,关节盘复位及固定方法的选择以关节盘移位及损伤程度作为参考。     

髁突矢状骨折继发颞下颌关节强直31例临床分析

目的:探讨髁突矢状骨折继发创伤性颞下颌关节强直的临床特点。方法:回顾性分析2001～2010年武汉大学口腔医院口腔颌面外科收治的31例、48侧继发于髁突矢状骨折的颞下颌关节强直患者的相关临床资料。结果:31例颞下颌关节强直患者平均外伤年龄15.6岁,其中23例(74.2%)外伤年龄小于16岁。病程3月~20年,平均病程6.5年。42侧强直关节的关节盘发生移位,6侧强直关节的关节盘完全破坏。强直关节标本镜下观察:内侧髁突骨折块发生废用萎缩性改变,外侧骨球区见软骨细胞呈灶性增生成骨,关节盘纤维结构紊乱、玻璃样变性。结论:青少年髁突矢状骨折易发生颞下颌关节强直,关节盘的移位损伤是颞下颌关节强直发生的重要条件。创伤性颞下颌关节强直首先发生在关节外侧,融合骨赘的组织病理学表现为软骨化生、成骨。     

山羊颞下颌关节盘细胞体外培养研究

目的:研究山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞体外培养的生物学特性及其损伤修复的细胞学基础.方法:切取1 月龄山羊颞下颌关节盘, II型胶原酶消化获得关节盘纤维软骨细胞.逐日观察细胞的形态变化, 测定其生长曲线,甲苯胺蓝染色、I型胶原免疫组化染色鉴定.透射电镜观察细胞超微结构.结果:原代培养的关节盘纤维软骨细胞以长梭形为主, 部分多角形, 7 d即可传代.甲苯胺蓝染色阳性, I型胶原免疫组化染色胞质内可见棕黄色颗粒.超微结构显示细胞分为2 种,软骨细胞样细胞和成纤维细胞样细胞;线粒体、内质网发达.结论:体外分离培养的山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞具有较强的增殖能力,1～3代细胞可作为颞下颌关节盘组织工程的种子细胞.     

体外沉默异戊二烯化酶二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ对舌鳞状细胞癌增殖的影响

目的 研究异戊二烯化酶二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ（GGTase-Ⅰ）在舌鳞状细胞癌增殖中的作用。方法 登录Genebank确定人GGTase-Ⅰ基因序列,设计3条小干扰RNA（siRNA）,并将siRNA转染至舌癌细胞Cal-27（GGTase-ⅠsiRNA组）。设立空白对照组（只加入转染试剂,不加入siRNA）和阴性对照组（NC-siRNA）。采用实时定量聚合酶链反应和蛋白质免疫检测转染后各组细胞GGTase-Ⅰ、RhoA的mRNA和蛋白表达;蛋白质免疫检测转染48 h后Cyclin D1、p21的表达变化;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖活性和细胞周期变化。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,GGTase-Ⅰ siRNA 组细胞的GGTase-Ⅰ的mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）,RhoA的mRNA和蛋白表达无明显改变（P>0.05）;Cyclin D1的表达下降,p21表达升高,细胞的增殖活性下降,细胞周期发生改变（P<0.05）。结论 GGTase-Ⅰ siRNA能抑制舌鳞状细胞癌细胞中GGTase-Ⅰ的表达,抑制细胞增殖,提示GGTase-Ⅰ在舌鳞状细胞癌增殖中可能发挥重要作用。     

唑来膦酸对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的作用研究

目的 研究唑来膦酸对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖及成骨分化的作用。方法 取大鼠BMSCs体外原代培养,使用含不同浓度（1、5、10、20 μmol·L ^-1）唑来膦酸的成骨诱导培养基干预细胞作为实验组,不含唑来膦酸的培养基干预细胞作为对照组。CCK-8检测各组细胞增殖活性;茜素红和碱性磷酸酶染色检测各组细胞成骨分化能力;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞碱性磷酸酶（ALP）、骨形态发生蛋白2（BMP-2）、Ⅰ型胶原酶（COL-Ⅰ）、Runt相关转录因子2（Runx-2）、锌指结构转录因子（Osx）、骨钙蛋白（OCN）、骨桥蛋白（OPN）的mRNA表达量。结果 1 μmol·L ^-1唑来膦酸对BMSCs的增殖、成骨分化无影响,与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。浓度大于1 μmol·L ^-1唑来膦酸抑制BMSCs的增殖和成骨分化,且抑制作用呈浓度依赖性,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。当唑来膦酸浓度为5 μmol·L ^-1时,ALP、BMP-2、COL-Ⅰ等成骨相关基因的表达量高于对照组（P<0.05）,而当唑来膦酸浓度大于5 μmol·L ^-1时,成骨相关基因的表达量低于对照组（P<0.05）。结论 低浓度唑来膦酸对BMSCs增殖和成骨分化无影响,5 μmol·L ^-1唑来膦酸抑制BMSCs增殖但促进其成骨分化,高浓度唑来膦酸抑制BMSCs的增殖和成骨分化。     

唑来膦酸对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及 成骨分化的作用研究

目的 研究唑来膦酸对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖及成骨分化的作用。方法 取大鼠BMSCs体外原代培养,使用含不同浓度（1、5、10、20 μmol·L ^-1）唑来膦酸的成骨诱导培养基干预细胞作为实验组,不含唑来膦酸的培养基干预细胞作为对照组。CCK-8检测各组细胞增殖活性;茜素红和碱性磷酸酶染色检测各组细胞成骨分化能力;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞碱性磷酸酶（ALP）、骨形态发生蛋白2（BMP-2）、Ⅰ型胶原酶（COL-Ⅰ）、Runt相关转录因子2（Runx-2）、锌指结构转录因子（Osx）、骨钙蛋白（OCN）、骨桥蛋白（OPN）的mRNA表达量。结果 1 μmol·L ^-1唑来膦酸对BMSCs的增殖、成骨分化无影响,与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。浓度大于1 μmol·L ^-1唑来膦酸抑制BMSCs的增殖和成骨分化,且抑制作用呈浓度依赖性,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。当唑来膦酸浓度为5 μmol·L ^-1时,ALP、BMP-2、COL-Ⅰ等成骨相关基因的表达量高于对照组（P<0.05）,而当唑来膦酸浓度大于5 μmol·L ^-1时,成骨相关基因的表达量低于对照组（P<0.05）。结论 低浓度唑来膦酸对BMSCs增殖和成骨分化无影响,5 μmol·L ^-1唑来膦酸抑制BMSCs增殖但促进其成骨分化,高浓度唑来膦酸抑制BMSCs的增殖和成骨分化。     

恒牙列安氏Ⅰ、Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅲ类颞下颌关节骨性结构的锥形束CT比较

目的 研究不同性别和安氏Ⅰ、 Ⅱ¹、Ⅱ²、Ⅲ类之间颞下颌关节及其周围相关骨性结构的差异。方法 对123例不同安氏分类错畸形患者拍摄锥形束CT（CBCT）,使用Mimics19.0软件进行三维重建,在矢状面上对颞下颌关节的前间隙、上间隙、后间隙、关节窝宽度、关节窝深度、髁突高度、髁突水平角、髁突半径、髁突前后径以及髁突长轴径进行测量分析,对髁突在关节窝的位置采用Pullinger法进行分析。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学处理。结果 安氏Ⅰ类、Ⅱ¹类、Ⅱ²类及Ⅲ类患者中,男性双侧髁突相关骨性结构均显著大于女性,Ⅱ¹ 类患者髁突长轴径、前后径相对其他类型较小,Ⅲ类骨性患者的关节窝具有宽和浅的特征。安氏Ⅰ类、Ⅱ¹类及Ⅲ类患者髁突在关节窝的位置主要为前位或居中,而Ⅱ²类主要为居中或后移位。不同安氏分类法的左右侧髁突相关结构无显著差异（P>0.05）。结论 不同安氏分类法中,错畸形患者的颞下颌关节在髁突形态与结构、关节间隙、关节窝形态及髁突位置等方面存在显著差异。     

两种生长因子对颞下颌关节盘细胞自组装基体合成影响的动物实验

目的研究转化生长因子β1( transforming growth factor,TGF-β1)及胰岛素样生长因子Ⅰ（insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ）对颞下颌关节(TMJ)盘细胞自组装基体细胞外基质合成的影响。方法采用10、100 μg/L的IGF-Ⅰ（Ⅰ10、Ⅰ100组）及5、50μg/L的TGF-β1（T5、T50组）分别作用于TMJ盘细胞自组装基体,3、6周时观察自组装基体的大小、形态并测重;冰冻切片、天狼猩红（picro-sirius red）及免疫组化染色观察Ⅰ型胶原的分布,番红-O-固绿染色观察Ⅰ型胶原及糖胺聚糖分布。定量检测Ⅰ型胶原、糖胺聚糖含量、测定细胞数量。结果3周时T5、Ⅰ10组上调糖胺聚糖的分泌、细胞的增殖以及Ⅰ型胶原的合成,3周时Ⅰ10组Ⅰ型胶原（109.16±5.12 μg）的表达约是空白对照组（69.13±5.94 μg）的近2倍;空白对照组和Ⅰ10、Ⅰ100、T5、T5o组于第6周时分泌的基质含量及细胞的增殖数量均比第3周增多。结论IGF-Ⅰ、TGF-β1作用时间的延长对基体的生化合成具有上调作用,10μg/L的IGF-Ⅰ更适用于组织工程化TMJ盘细胞自组装基体的应用。     

臭氧治疗颞下颌关节炎的临床研究

目的:观察颞下颌关节腔注射臭氧治疗颞下颌关节炎的临床疗效。方法:选取2014年6月~2015年6月于我院就诊并被确诊为颞下颌关节炎的患者60例,按照随机原则将所有入选患者分为治疗组30例,对照组30例。治疗组采取颞下颌关节腔注射臭氧治疗,对照组采取颞下颌关节腔注射曲安奈德治疗,治疗之后进行疗效的对比。结果:进行治疗后,治疗组各时点VAS评分及最大张口度与对照组无明显差别。两组情况比较差异无统计学意义。结论:颞下颌关节腔注射臭氧疗效显著,与颞下颌关节腔注射曲安奈德疗效无明显区别,而且并发症少、安全性高。     

降钙素基因相关肽对成骨细胞OPN表达的影响

目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide, CGRP)对大鼠成骨细胞中骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)表达的影响。方法:胶原酶消化法培养大鼠原代成骨细胞,碱性磷酸酶染色及茜素红染色对成骨细胞进行鉴定。CCK-8细胞增殖实验筛选CGRP最适作用浓度。将合适浓度的CGRP作用于成骨细胞,qPCR和Western Blot检测OPNmRNA及蛋白的表达。结果:CGRP浓度为10^-9 mol/L时,大鼠成骨细胞的增殖活性最强。使用10^-9 mol/L浓度的CGRP作用于成骨细胞,成骨细胞中OPN mRNA及蛋白的表达在第3天明显上调(P<0.05)。结论:CGRP可以促进成骨细胞中OPN的表达。     

sortase A与变异链球菌致龋性关系的代谢组学研究

目的 探索srtA基因编码的转肽酶sortase A（SrtA）影响变异链球菌致龋性的机制。方法 采用基于¹H核磁共振波谱（NMR）的代谢组学方法,比较野生型变异链球菌UA159与srtA基因缺陷型变异链球菌UA159的胞外代谢产物;联合使用主成分分析和正交偏最小二乘法—判别分析鉴定不同菌株之间代谢产物的差异。结果 大多数有差异性的代谢产物是未知的,可识别的差异性代谢产物有亮氨酸和缬氨酸（δ 0.92×10^-6~1.20×10^-6）、乳酸（δ 1.28×10^-6）、酮戊二酸（δ 3.00×10^-6）、甘氨酸（δ 3.60×10^-6）。结论 在进一步完善微生物代谢产物数据库的基础上,¹H NMR代谢组学可用于龋病病因的研究。