siRNA沉默Annexin Ⅱ对淋巴瘤细胞系Jurkat细胞增殖和趋化能力的影响

目的 观察沉默Annexin Ⅱ(AnxA2)基因对淋巴瘤细胞系Jurkat细胞增殖、趋化能力的影响.方法 应用实时荧光定量RT-PCR和流式细胞术鉴定小干扰RNA(siRNA)对人淋巴瘤细胞系Jurkat细胞的转染效果,应用MTT法检测AnxA2 siRNA对Jurkat细胞增殖的作用,应用Transwell检测对细胞趋化能力的影响.结果 AnxA2 siRNA干扰组在24、48、72 h细胞生长抑制率分别为(17.4±2.3)%、(22.4±3.8)%和(37.6±1.5)%,与阴性对照组[分别为(-1.3±5.1)%、(-5.5±4.4)%和(-10.8±5.5)%]比较差异有统计学意义(P<0.05),AnxA2 siRNA干扰对Jurkat细胞增殖起抑制作用;AnxA2 siRNA干扰组细胞趋化能力(11.3±4.2)显著低于阴性对照组(54.3±8.7,P<0.01),AnxA2 siRNA干扰可显著降低细胞趋化能力.结论 siRNA沉默AnxA2基因可抑制Jurkat细胞增殖、趋化能力.     

载脂蛋白M对肾癌细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用

目的:研究人载脂蛋白M(apolipoprotein M,Apo M)对肾透明细胞癌细胞株(ACHN、769-P和786-O)增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:采用装载人Apo M基因的慢病毒和阴性对照组慢病毒分别感染肾癌细胞株,建立Apo M过表达组(Apo M-OE组)和阴性对照组(NC组)细胞模型。应用CCK-8增殖实验和克隆形成实验观察细胞增殖能力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:Apo M过表达后,ACHN和769-P过表达组细胞在72h增殖能力显著降低(分别P0.01,P0.05);786-O细胞在48 h表现出明显差异(P0.001)。克隆形成实验表明Apo M过表达后,3株细胞克隆形成能力明显减弱(分别P0.001,P0.01,P0.01)。细胞划痕实验证实ACHN和769-P过表达组细胞在12 h时出现明显差异(分别P0.05,P0.001);786-O细胞在24h时迁移能力明显受抑(P0.01)。细胞侵袭实验发现3株细胞过表达A po M后侵袭能力下降(分别P0.001,P0.001,P0.01)。结论:Apo M过表达后,肾癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著减弱。     

抑制胞浆型磷脂酶A2γ的表达对乳腺癌细胞迁移侵袭作用的研究

目的探讨胞浆型磷脂酶A2γ(cPLA2γ)的表达在乳腺癌细胞迁移和侵袭能力变化中的潜在作用。方法 (1)采用免疫组织化学的方法检测cPLA2γ在乳腺癌组织中的表达。(2)应用StealthTM-RNAi技术,瞬时转染乳腺癌MDA-MB-231细胞而抑制cPLA2γ的表达,分别采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting技术检测cPLA2γ的信使RNA(mRNA)和蛋白的表达水平;通过划痕实验观察细胞迁移能力的变化;观察抑制cPLA2γ表达的MDA-MB-231细胞侵袭能力变化。(3)应用Western blot技术检测抑制cPLA2γ表达后,MDA-MB-231细胞在EGF刺激不同时间后Akt(Ser473和Thr308)、cofilin和PKCζ磷酸化水平变化。(4)稳定转染MDA-MB-231细胞而获得抑制cPLA2γ表达的克隆细胞。采用鼠尾静脉注射的方式将抑制cPLA2γ表达的稳定克隆MDA-MB-231细胞注入免疫缺陷的SCID小鼠体内,观察在不同的时间肿瘤细胞的被动转移情况。结果 (1)cPLA2γ在乳腺癌组织中表达与淋巴结转移相关。(2)瞬时转染MDA-MB-231细胞,和对照组相比cPLA2γ的mRNA和蛋白表达水平降低;迁移能力降低;同时MDA-MB-231细胞的侵袭能力降低。(3)与对照组相比,抑制cPLA2γ表达后的MDA-MB-231细胞Akt(Ser473和Thr308)、cofilin和PKCζ磷酸化表达水平均降低。(4)稳定转染MDA-MB-231细胞而获得抑制cPLA2γ表达的克隆,与对照组相比mRNA和蛋白表达水平明显降低;抑制cPLA2γ表达的乳腺癌MDA-MB-231细胞注入SCID小鼠的尾静脉,乳腺肿瘤细胞被动转移能力降低。结论 cPLA2γ参与EGF诱导的乳腺癌细胞的迁移和侵袭,其调控与Akt通路有关。     

PPARγ配体曲格列酮对绒癌JEG-3细胞浸润能力的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)及配体曲格列酮(Troglitazone,TGZ)对绒癌JEG-3细胞浸润能力的影响.方法 通过免疫荧光细胞化学方法检测JEG-3细胞系中PPARγ的表达,采用Transwell侵入系统检测PPARγ的激动配体TGZ对绒癌细胞浸润能力的影响.结果 在绒癌JEG-3细胞系中有PPARγ蛋白表达,PPARγ激动配体TGZ处理后浸润人工基底膜细胞数明显减少,与对照相比差异有统计学意义(P＜0.01),且具有剂量依赖关系.结论 PPARγ被配体TGZ激活后抑制绒癌JEG-3细胞浸润能力,这为PPARγ配体在绒癌治疗中可能的临床应用提供理论和实验基础.     

槲皮素对宫颈癌细胞侵袭能力的作用机制

目的 探讨槲皮素对宫颈癌侵袭和转移的作用机制及其与乙酰肝素酶(heparanase,HPA)的相关性.方法 构建宫颈癌Hela细胞组、Hela+槲皮素组、HPA-SiRNA-Hela组、HPA SiRNA-Hela+槲皮素组4组细胞模型,应用Transwell小室基质划痕损伤实验方法,测定不同时间点各组宫颈癌Hela细胞侵袭能力的变化.结果 在6,12,24 h时,Hela+槲皮素组及HPA-SiRNA-Hela组与Hela细胞组比较,宫颈癌Hela细胞迁移能力明显下降(P＜0.01);HPA-SiRNA-Hela组与Hela+槲皮素组比较差异无统计学意义(P＞0.05);HPA-SiRNA-Hela+槲皮素组与其他3组比较,宫颈癌Hela细胞迁移能力均下降(P均＜0.01).结论 槲皮素对宫颈癌Hela细胞的侵袭能力有明显抑制作用,HPA与宫颈癌Hela细胞的侵袭过程相关,而槲皮素对宫颈癌Hela细胞的侵袭能力的抑制作用可能与HPA相关.     

转录因子LYL1在白血病患者中的表达及作用研究

目的 探讨转录因子LYL1在不同白血病患者中的表达及在白血病发病中的作用.方法 应用荧光实时定量聚合酶链反应检测LYL1在不同类型自血病患者中的表达情况;应用特异性小干扰(si)RNA抑制LYL1的表达,观察LYL1表达下调对于白血病细胞系K562细胞增殖和分化能力的影响.结果 与正常骨髓CDM+细胞相比,LYL1在多数急性髓系白血病(AML)(急性早幼粒细胞白血病除外)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中都有异常高表达,AML完全缓解患者表达水平(1.400)较AML未缓解患者(9.985)明显下降(P<0.01);部分慢性粒细胞白血病(CML)患者的检测结果显示LYL1在CML急变期的表达(7.831)高于慢性期(1.672)(P<0.01).联合使用三种特异性siRNA可使K562细胞LYL1表达水平明显下调且对细胞生长和集落形成能力有一定抑制作用.结论 在AML、ALL患者中均有LYL1异常表达.通过siRNA干扰抑制特定癌基因表达对于抑制白血病细胞的增殖有一定效果,在治疗恶性血液病方面具有临床应用潜力.     

BRAF突变对结直肠癌细胞甲基化、细胞活力、凋亡和迁移的影响

目的探究BRAFV600E突变对结直肠癌细胞甲基化水平、细胞活力、凋亡能力和迁移能力的影响。方法应用BRAF野生型状态的结直肠癌细胞系SW480作为实验样本,构建BRAFV600E突变质粒和空质粒,脂质体转染进入SW480细胞,将样本分为BRAFV600E突变组、空质粒对照组和空白对照组,采用qPCR法验证转染效果;采用qPCR检测甲基化转移酶DNMT1和DNMT3A的变化;应用Methylight法检测CIMP的变化;应用CCK8实验检测细胞活力;应用TUNEL凋亡实验检测细胞凋亡能力;采用Transwell实验检测细胞迁移能力;应用均值±标准差和t检验进行统计描述和统计推断。结果处理组过表达BRAFV600E的SW480细胞DNMT1的mRNA的相对表达量显著低于空质粒对照组(P=0.016)和空白对照组(P=0.010),DNMT3A的mRNA的相对表达量显著高于空质粒对照组(P=0.038)和空白对照组(P=0.034),CACNA1G、NEUROG1和CRABP1的甲基化相对表达量显著高于两对照组(P0.05),CCK8实验处理组细胞吸光值显著高于空质粒对照组(P=0.000)和空白对照组(P=0.000),TUNEL实验处理组细胞凋亡率显著低于空质粒对照组(P=0.000)和空白对照组(P=0.000),Transwell实验各组细胞穿越数无显著差异(P0.05)。结论 BRAFV600E突变能够使DNMT1表达量减少,使DNMT3A表达量增高;使CACNA1G、NEUROG1和CRABP1的甲基化水平显著增高,但不足以影响CIMP分型;使结直肠癌细胞活力增强、凋亡能力减弱,但不影响结直肠癌细胞的迁移能力。     

荧光染色技术检测细胞杀伤能力

目的:用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)及碘化丙锭(propidium iodide,PI)两种荧光染料标记方法检测小鼠脾细胞杀伤能力,并探讨其应用价值。方法:采用CFSE标记靶细胞,PI标记被杀伤细胞,并通过直接杀伤实验和双向杀伤实验验证方法可行性。分离各组C57BL/6小鼠脾细胞作为攻击细胞,Balb/c小鼠脾细胞经5μmol/LCFSE染色后作为靶细胞。将攻击细胞与靶细胞按20∶1的比例混合,培养6h后用PI染色10min,经流式细胞术分析。比较Balb/c小鼠脾细胞致敏C57BL/6小鼠组(免疫组)和地塞米松处理组的脾细胞杀伤能力。结果:CFSE及PI两种荧光染色细胞可以在流式细胞仪上明显区分。CFSE和PI双阳性细胞是被杀伤的靶细胞。免疫组与地塞米松处理组的杀伤能力差异存在显著性(P<0.05)。结论:CFSE与PI两种荧光染料染色的杀伤实验方法操作简单、方便,有良好的应用价值。     

高尔基体内Connexin32蛋白对肝癌细胞Li-7的运动和侵袭能力的影响

目的 探讨肝癌细胞中间隙连接蛋白Connexin32 对肝癌细胞运动和侵袭能力的影响及可能 的分子机制.方法 利用逆病毒感染的方法在肝癌细胞系Li-7 中建立Connexin32 蛋白表达可通过doxycyc- line 调控的Li-7 Tet-off Connexin32 稳定克隆,应用高尔基体染色确定Connexin32 蛋白亚细胞定位,应用刮擦 负荷-染料转移实验(SL-DT)方法评价间隙连接介导的细胞间通讯(GJIC)水平,运用体外跨室细胞运动及侵 袭方法验证Connexin32 表达与肝癌细胞运动和侵袭能力的相关性.结果 利用逆病毒感染方法建立了稳定 整合了Connexin32 cDNA 和调控序列Tet-off 的肝癌细胞Li-7 Tet-off Connexin32 亚克隆,Western-blot 结果显 示外源性Connexin32 蛋白表达于细胞质中且受细胞培养液中多西环素(Dox)调控,当从细胞培养液中去除 Dox 时,Connexin32 表达量增加到基础表达量的4 倍;高尔基体染色显示Connexin32 蛋白定位于高尔基复合 体内,SL-DT 实验证实外源性高尔基体内表达的Connexin32 蛋白使相邻肝癌细胞间不能形成有效的GJIC,跨 室细胞运动和侵袭实验表明次高尔基体内异常蓄积的Connexin32 蛋白过表达显著增强肝癌细胞的体外运动 和侵袭能力(P 均<0.05).结论 高尔基体内异位表达的Connexin32 蛋白GJIC 非依赖性发挥促进肝癌细 胞运动和侵袭能力的作用.     

Reh细胞系在扩散盒中的生长—沿着T-和B-细胞方向分化的证据

已知不同类型和不同来源的白血病原始细胞在适宜的实验条件下可沿着正常方向分化,但对来源于淋巴系统的恶性细胞分化能力所知甚少。作者用小鼠腹腔扩散盒培养方法观察了急性淋巴细胞白血病患者的非T—,非B—型Reh细胞系的分化能力,用直接免疫萤光法测定培养细胞的AcALLG(抗一般急性淋巴细胞白血病抗原)、ATCG(抗T—细胞球蛋白)、AIg(抗免疫球蛋白)以及SRFC(羊红细胞玫瑰花形成细胞)、M-RFC(小鼠玫瑰花形成细胞)等。     

E1A激活基因阻遏子蛋白过表达可抑制人血管平滑肌细胞的迁移

背景:成熟动脉中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化稳态的丧失是血管老化的一个重要原因.目的:观察E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)抑制人血管平滑肌细胞迁移的分子机制.方法:应用已建立的稳定转染CREG过表达细胞hVSMCs-CREG和CREG表达沉默的hVSMCs-siCREG细胞株通过刮伤实验和Transwell小室细胞移行实验检测细胞迁移能力,通过Western blot检测转染前后细胞中CREG蛋白、基质金属蛋白酶和JNK表达及活化情况,应用JNK和基质金属蛋白酶9抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞迁移中的作用.结果与结论:Western blot结果证实,CREG蛋白表达在hVSMCs-CREG组中增加(P < 0.05),而在hVSMCs-siCREG组中减少(P < 0.05).刮伤实验和Transwell实验分析结果证实hVSMCs-CREG组细胞较正常对照组细胞迁移能力受抑.相反,hVSMCs-siCREG组细胞迁移能力显著增加(P < 0.05).Western blot和明胶酶谱分析证实hVSMCs-siCREG组细胞中MMP9活性明显增加(P < 0.05),同时JNK蛋白活化.进一步应用JNK抑制剂阻断研究证实,CREG蛋白表达抑制引起的血管平滑肌细胞迁移能力增加与细胞中基质金属蛋白酶9活性均受到剂量依赖性抑制.结果证实,CREG蛋白表达可抑制JNK-基质金属蛋白酶9信号通路的活化,以此抑制体外培养的人血管平滑肌细胞迁移.     

rhG-CSF动员对供者T细胞增殖和细胞毒的影响

为了解rhG-CSF动员对供者T细胞增殖和细胞毒的影响,在rhG-CSF动员前和动员后第5天抽取供者外周血分离单个核细胞(PBMNC),在PBMNC中加入CD3单克隆抗体和rhIL-2以激活T细胞,培养96小时后检测T细胞增殖率和细胞毒性,并进一步对动员前后激活的T细胞用流式细胞术检测Fas表达率,用RT-PCR检测穿孔素(perforin)和Fas配体(FasL)mRNA表达情况,应用放射免疫分析方法检测细胞的γ干扰素(IFN-γ)分泌情况。结果发现,供者外周血T细胞增殖能力在应用rhG-CSF后下降(68.5±15.1)%(P<0.05);动员后CD3单克隆抗体和rhIL-2激活后T细胞对K562细胞的细胞毒性均比动员前细胞有显著减弱(P<0.05);动员前后T细胞在激活后的Fas表达率无明显差异(P>0.10);动员前后T细胞在激活后均表达perforinmRNA,不表达FasLmRNA;动员前T细胞激活后分泌IFN-γ的能力明显高于动员后(P<0.01)。结论:rhG-CSF动员致使供者T细胞在CD3单克隆抗体与rhIL-2激活后的增殖率和细胞毒性下降。     

人外周血树突状细胞的体外扩增、鉴定及内吞能力的测定

目的在体外从人外周血中诱导、扩增树突状细胞(DCs).方法从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMNCs),在rhGM-CSF、IL-4和TNF-α的诱导下培养扩增树突状细胞.光学显微镜观察其体外培养过程中的形态特征,流式细胞仪(FACS)分析其表型特征,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其功能,辣根过氧化酶(HRP)内吞实验检测其群体内吞能力.结果 PBMNCs经过rhGM-CSF、IL-4和TNF-α诱导培养12d后,具典型的DCs形态,细胞表型为MHCⅡ类分子(HLA-DR)93.5%、CD80 96%、CD86 92.6%、CD1a 60.4%、CD83 82.6%和CD14 10.5%,具有极强的激发MLR的能力,显示成熟DCs的特征.DCs群体的内吞能力约在培养第6d达高峰,之后有明显下降.结论该方法是一种可靠的诱导、扩增DCs的方法,为DCs的深入研究和临床应用奠定了基础.     

免疫磁珠正负筛选在分离外周血CD8+和 CD4+T细胞亚群中的应用

为了探讨免疫磁珠分离技术及其正、负筛选策略在人外周血T淋巴细胞亚群分离提纯中的应用,应用补 体细胞毒法和正负筛选策略相结合的免疫磁珠法分离健康人外周血中CD4 T细胞、CD8 T细胞;用流式细胞术法 比较两种分离方法分离的靶细胞纯度;台盼蓝染色染色法和细胞培养后平板计数法检测免疫磁珠法分离的CD4 T 细胞、CD8 T细胞的活力和生长情况。结果表明:补体细胞毒法分离后CD4 T细胞纯度、CD8 T细胞纯度分别为 (76.0±2.8)％和(77.0±3.0)％,明显高于分离前的(34.6±3.7)％和(32.0±3.7)％(P<0.05);免疫磁殊法 分离后CD4 T细胞和CD8 T细胞纯度为(94.2±1.4)％和(93.8±3.0)％,显著高于补体细胞毒法(P<0.05)。 磁珠分离法获得的CD4 T细胞、CD8 T细胞细胞活力分别为(96.0±2.4)％和(95.0±3.6)％;细胞计数法表明 磁珠分离法获得的CD4 T细胞、CD8 T细胞对植物血凝素(PHA)的刺激保持了良好的增殖能力。结论:免疫磁珠 法较补体细胞毒法分离效率高,不影响细胞的活力和增殖能力;正负筛选策略相结合的免疫磁珠法在同时获取高 纯度的CD4 T细胞、CD8 T细胞时可获得满意效果,尤其适应于只有较少量血标本的情况,为进一步研究CD4 T 细胞、CD8 T细胞的生物学特性创造了条件。     

以阳离子脂质体为载体增强反义寡脱氧核苷酸作用的研究

反义核酸作为基因治疗的新方法,在近年来得到了迅速发展,其中反义寡脱氧核苷酸(ASODN)因制备客易而得到广泛的应用。然而,它的作用效率因细胞的低摄入及核酸酶的降解而受到影响。实验中采用以阳离子脂质体为载体的bcr-abl mRNA ASODN作用于K562细胞(CML细胞系)的方法,研究了阳离子脂质体所起的作用。结果表明,以阳离子脂质体介导转染ASODN增加了细胞对ASODN摄入量和抗核酸酶降解的能力。结论提示该方法为ASODN临床应用提供一条新的途径。     

MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

PDGF-D稳定沉默后对乳腺癌细胞SK-BR-3生物学功能的影响

目的通过慢病毒载体沉默乳腺癌细胞系SK-BR-3中血小板衍生生长因子D(PDGF-D)基因的表达,探讨PDGF-D基因沉默后对乳腺癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用。方法应用RT-PCR及蛋白质印迹方法检测5种乳腺癌细胞系中PDGF-D的表达状况;设计人PDGF-D基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染PDGF-D高表达的乳腺癌细胞系,运用蛋白质免疫印迹的方法鉴定其对PDGF-D基因的沉默效果;PDGF-D基因沉默后通过细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞技术检测细胞凋亡;运用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力。结果 PDGF-D在5种细胞系中存在差异性表达,其中具有低转移潜能的HT-29和SK-BR-3细胞与具有高转移潜能的LOVO、RKO和SW620细胞相比,具有更高的PDGFD表达水平(t=3.880,P0.05)。选取低转移细胞株中PDGF-D表达相对较高的SK-BR-3作为研究对象,构建PDGF-D shRNA慢病毒载体沉默SK-BR-3细胞中PDGF-D的表达,蛋白质免疫印迹结果提示,PDGF-D稳定沉默的SK-BR-3细胞系构建成功;在稳定沉默PDGF-D基因后,MTT细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验表明SK-BR-3细胞增殖能力增强(F=75.23,P0.001);流式细胞技术检测显示PDGF-D基因沉默后可抑制SK-BR-3细胞凋亡(F=84.44,P0.001);细胞小室实验结果显示,PDGF-D沉默后SK-BR-3迁移能力增强(F=155.9,P0.001)。结论 PDGF-D基因可能与乳腺癌的细胞增殖、凋亡与转移有关,进而参与了乳腺癌的发生、发展。     

雷帕霉素联合顺铂诱导肝癌细胞凋亡和自噬及对细胞侵袭力的影响

目的研究雷帕霉素联合顺铂诱导肝癌细胞凋亡、自噬及其对细胞侵袭转移能力的影响。方法将雷帕霉素以及顺铂分别或联合作用于HepG-2细胞,采用MTT法检测HepG-2细胞增殖抑制情况,采用透射电镜、流式细胞仪检测HepG-2细胞凋亡,采用MDC染色、转染pGFP-LC3检测细胞自噬,用Transwell小室测定HepG-2细胞对细胞外基质的侵袭力。结果与对照组相比,单独应用雷帕霉素组未出现明显的细胞凋亡情况;单独应用顺铂组细胞凋亡情况较明显,凋亡率达到(21.27±3.65)%;顺铂联合应用雷帕霉素组细胞凋亡率最高,达到(43.33±5.64)%。雷帕霉素组、顺铂组和顺铂联合应用雷帕霉素组HepG-2细胞均出现点状的自噬泡,顺铂联合应用雷帕霉素组自噬泡数量显著高于雷帕霉素组和顺铂组。雷帕霉素组、顺铂组和顺铂联合应用雷帕霉素组对HepG-2细胞侵袭抑制率分别为(19.2±5.1)%、(47.8±4.1)%和(78.0±2.4)%。结论顺铂可直接诱导HepG-2细胞凋亡,雷帕霉素本身不诱导HepG-2细胞凋亡,但其可显著促进顺铂诱导的HepG-2细胞凋亡;同时顺铂和雷帕霉素均可直接诱导HepG-2细胞自噬,但两者联合应用促进HepG-2细胞自噬情况非常明显。体外侵袭实验结果表明顺铂联合应用雷帕霉素可显著降低HepG-2细胞的体外侵袭能力。     

吉非替尼和NS398对前列腺癌PC-3M细胞增殖和侵袭力影响的研究

目的应用表皮生长因子受体(EGFR)特异性阻断剂吉非替尼(Gefitinib)和环氧化酶2(COX-2)特异性阻断剂NS398单独或联合作用于前列腺癌PC-3M细胞,观察对细胞增殖和侵袭能力的影响及可能机制研究。方法采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)和Transwell检测Gefitinib和NS398应用对细胞增殖和侵袭能力的影响,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测药物应用前后基质金属蛋白酶9(MMP-9)、表皮生长因子(VEGF)基因和蛋白表达水平的变化。结果 MTT结果显示Gefitinib或NS398都可抑制PC-3M细胞增殖(P<0.05),两者联合应用作用更明显(P<0.01),Transwell结果表明两种阻断剂都能在一定程度上抑制细胞侵袭能力(P<0.05),联合应用后抑制作用更显著(P<0.01),qRT-PCR和Western blot结果提示,联合应用Gefitinib和NS398对MMP-9、VEGF的抑制作用明显高于单独应用(P<0.01)。结论 Gefitinib和NS398联合应用可显著抑制PC-3M增殖和侵袭转移,可能与抑制VEGF和MMP-9表达有关。     

干扰DHRS9表达对三阴乳腺癌恶性生物学行为的调控作用研究

目的探究脱氢酶/还原酶家族9(DHRS9)对三阴乳腺癌细胞干性相关基因的调控作用,并进一步分析其对癌细胞诸多恶性生物学行为的影响。方法应用Lipofectamine 2000转染试剂将sh DHRS9质粒及绿色荧光蛋白分别转染至三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞中(分别设为实验组和对照组),应用划痕实验、Transwell实验检测细胞迁徙能力,运用免疫印迹法及实时荧光定量多聚酶链式反应(PCR),分别在蛋白及基因水平测定MDA-MB-231细胞中DHRS9表达量的变化;同时应用实时荧光定量PCR实验、划痕实验、Transwell实验及成球实验,观察下调DHRS9表达后对两组细胞干性相关基因及侵袭转移等恶性生物学行为的影响。结果实验组下调DHRS9表达后,CD133、ABCG2、CD44干性相关基因表达量升高(P0.05),乳腺癌细胞侵袭迁移能力下降(P0.05),复发转移能力及自我更新能力明显增强(P0.05)。结论 DHRS9作为抑癌基因可能通过抑制三阴乳腺癌细胞干性相关基因表型,干预癌细胞恶性生物学行为,其可作为三阴乳腺癌的潜在抑癌分子标志物。