流式细胞术的临床应用

流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。它以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术。其主要临床应用现综述如下:1血液淋巴细胞免疫表型分析血液经荧光素标记单克隆抗体(McAb)免疫荧光染色后,FCM分析淋巴细胞膜上白细胞分化抗原(CD分子)的表达,加入的荧光微球(Beads)可作为定量参数而进…     

流式细胞术在红细胞免疫学中的应用

流式细胞术(flow cytometry．FCM)是以激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，对其定性或定量检测的一种现代细胞分析和分选技术。既可测量细胞大小、内部结构，又可检测细胞表面抗原抗体、细胞内部DNA、RNA含量等，对单个细胞和群体细胞均可区分．已广泛应用于医学基础、临床及科学研究中。荷兰红十字会的研究人员首先报道将FCM应用于血液免疫学研究。     

流式细胞术细胞周期分析小鼠肺组织样本制备方法的优化研究

目的 寻找细胞周期分析更好的样本处理方法.方法 以小鼠肺组织作为标本,采用四种方法(剪碎法、研磨法、剪碎结合酶消化法、研磨结合酶消化法)制备单细胞悬液,胎盘蓝染色检测细胞的存活率,经不同时间固定后的样本利用流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 剪碎法结合酶消化法制备的单细胞悬液效果最佳;单细胞固定后两周内细胞各个时期所占比例基本相同.结论 小鼠肺组织单细胞制备采用剪碎法联合酶消化法优于其他三种方法,样本经固定处理后可以进行流式批量检测.     

流式细胞术在临床诊断中的应用

流式细胞术（flow cytometry,FCM）是20世纪70年代发展起来的一种单细胞快速定量分析技术,主要包括标本的液流技术、细胞的分选和计数技术,以及数据的采集和分析技术等。目前,FCM已成为检测细胞各种成分的重要生物学工具,它不但可以定量检测细胞膜、细胞质和细胞核中的各种细胞成分以及血清中的各种可溶性生物分子成分,而且可以研究细胞的各种功能状态,如细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化、酶活性、细胞膜通透性、氧化还原状态、吞噬性等。     

流式细胞术对血液病诊断的价值

流式细胞术(flow cytometry，FCM)是以荧光染料为探针利用流式细胞仪(flow cytometer)对血液、体液、骨髓穿刺或活检组织的单细胞悬液、石蜡包埋组织中的有形成分包括细胞、血小板、细胞器、精子、微生物以及人工合成微球等的多种生物和物理特性进行定量分析．并能对特定细胞群体加以分选的细胞参量分析技术。是血液病包括白血病免疫分型、血小板疾病和淋巴瘤等诊断的重要手段之一。     

作者对读者来信的回复

我们用于临床检测HLA-B27流式细胞术表型分析的检测系统是Becton Dickinson Facs Calibur(美国)流式细胞仪及BD Bioscienees HLA-B27定量双色荧光法测试盒(美国)。该系统采用自动分析软件获得HLA-B27流式细胞术表型分析结果。我们在临床检测时会遇到本该得到阳性结果的标本由于自动分析软件的原因而得不到正确的结果,表现为无结果判断或错误的阴性判断。我们研究的目的是如何     

流式细胞术新鲜实体瘤检测样本的制作

目的 旨在建立一种流式细胞术新鲜实体瘤单细胞悬液检测样本的制作方法.方法 采用剪碎法将新鲜实体瘤组织剪至匀浆状,用自制过滤装置过滤,白细胞计数板显微镜下计数并调单细胞浓度在106以上;取该单细胞悬液做免疫荧光染色,上流式细胞仪检测.结果 流式细胞术检测结果与常规免疫组化检测结果经统计学处理,无显著性差异(P＞0.05).结论 剪碎法处理新鲜实体瘤标本能获取满足流式细胞术检测要求的单细胞悬液,可应用于临床病理研究.     

流式细胞术在临床应用中的影响因素

生产流式细胞仪 (ＦＣＭ )的有关公司已推出多种质控试剂盒用于光路与流路校正、线性度测试、荧光强度标准化及颜色补偿等 ,以使某一实验室的批间数据具重复性并与其他实验室的数据具可比性。此外 ,样品细胞的分离与固定、抗体标记、上机测试及数据分析是流式检测的一个连贯过程 ,此过程的准确性与可靠性将直接影响检测结果 ,现就其中的影响因素讨论如下。1　标本的采集及处理1 1　标本采集后放置时间的影响　流式细胞检测是以某一群细胞为研究对象 ,因而在分离标本时 ,应将所需的细胞从组织或血液中充分分离出来 ,及时固定或深低温保存 ,以…     

一项深化和优化实验医学内涵的先进技术——流式细胞术

上世纪70年代,得益于自然科学各分支学科技术的飞速发展,一种集流体喷射技术、激光技术、空气计数、γ射线能谱技术、电子计算机技术和显微荧光光度计于一体的流式细胞术(flow cy-tometry,FCM)问世了,其是一种对液流中的细胞、其他生物微粒(微生物、染色体等)或人工合成的微粒进行多参数定量分析和分选的技术。上世纪80年代初,根据FCM原理设计的荧光激活细胞分检仪(fluorescence activited cell sorting,FACS)即流式细胞仪开始引入我国。早期FACS仅在研究院所和高等院校应用,近年来已进入临床实验部门,上海地区不少二级以上综合性医院…     

一种细胞免疫学新技术--酶联免疫斑点技术

酶联免疫斑点技术(ELISPOT)是利用ELISA技术的基本原理从单细胞水平检测分泌抗体的细胞或分泌细胞因子的细胞的一种细胞免疫学检测技术,可从单细胞水平评价机体的细胞免疫或体液免疫功能。近年来ELISPOT技术以其简便、特异、敏感的优点,被广泛用于肿瘤疫苗评价试验、免疫监测和结核杆菌感染的诊断等方面。现综述ELISPOT技术的原理、基本操作步骤、优缺点和应用等。     

流式细胞分析检测细胞凋亡的研究进展

流式细胞术是对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行高参数的定量分析和分选技术。在基础医学研究领域，流式细胞术测定凋亡过程中细胞所发生的变化，已广泛用于细胞凋亡的定性与定量分析。本文介绍了流式细胞分析检测细胞凋亡的基本原理及最新进展。     

异常免疫表型模式在急性髓系白血病微小残留检测中的应用

目的用多参数流式细胞术区分急性髓性白血病细胞与正常骨髓原始细胞免疫表型,建立急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和流式细胞术检测急性白血病微小残留病的方法。方法选择正常骨髓标本和急性髓性白血病患者骨髓标本,用流式细胞术分析髓系原始细胞免疫表型特征。并将标记抗原用于分析初发白血病细胞免疫表型,以寻找急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和确定用于微小残留病检测的抗体组合,更好地提示患者复发情况。并将流式细胞术结果、骨髓细胞形态学结果和PCR融合基因检测结果进行比较。结果分析20例非恶性血液系统恶性疾病患者的骨髓标本中髓系原始细胞的免疫表型,CD117阳性髓系原始细胞占2.51%±0.84%,CD34阳性髓系原始细胞占1.21%±0.83%,均有特定免疫表型特征。检测346例非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病患者免疫表型特征,异常免疫表型有314例,占90.80%,其中跨系表达抗原主要包括CD7(31.21%)、CD56(23.70%)、CD19(13.87%),跨阶段共表达的抗原包括CD34/CD64(2.89%)、CD14/CD117(1.16%),抗原表达强度变化或抗原缺失主要包括原始粒细胞不表达HLA-DR(4.62%)、CD13(7.51%)或CD33(12.14%),以及单核细胞不表达CD14(5.20%)。早幼粒细胞白血病患者31例,有异常免疫表型的仅占16.7%,低于非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病。根据白血病异常免疫表型模式,与PCR结果符合度高,能很好地提示白血病进展。结论急性髓性白血病细胞具有明显不同于正常来源原始细胞的异常免疫表型特征,适合采用流式细胞术进行微小残留病检测,并能反映体内白血病细胞负荷和病情变化。     

流式细胞术新鲜实体瘤检测样本的制作

目的 旨在建立一种流式细胞术新鲜实体瘤单细胞悬液检测样本的制作方法。方法 采用剪碎法将新鲜实体瘤组织剪至匀浆状，用自制过滤装置过滤，白细胞计数板显微镜下计数并词单细胞浓度在106以上；取该单细胞悬液做免疫荧光染色，上流式细胞仪检测。结果 流式细胞术检测结果与常规免疫组化检测结果经统计学处理，无显著性差异（P〉0．05）。结论 剪碎法处理新鲜实体瘤标本能获取满足流式细胞术检测要求的单细胞悬液．可应用于临床病理研究。     

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术分析

目的 根据白血病细胞的异常免疫表达,建立流式细胞术检测儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)微小残留病(minimal residual disease,MRD)的方法 ,探讨流式细胞术检测MRD在儿童ALL个体化治疗中的意义.方法 用流式细胞术以多种四色荧光抗体组合对健康儿童骨髓进行检测,建立健康儿童骨髓细胞双参数点图分析模板.对75例ALL初诊患儿的骨髓细胞进行MRD筛选,找出在双参数点图上的位置明显区别于正常骨髓细胞的免疫表型组合作为MRD监测的有效免疫表型组合,对其中60例患儿诱导治疗结束及后续治疗中的骨髓标本用这些有效免疫表型组合进行MRD监测.同步进行细胞形态学检测和PCR检测29种融合基因、IgH/T淋巴细胞受体(TCR)基因重排.结果流式细胞术检出69例(92.0%)可用于MRD监测的有效免疫表型组合,PCR检出21例(28.0%)可用于MRD监测的融合基因或IgH/TCR基因重排;诱导治疗结束后及后续治疗中有25份骨髓标本细胞形态学未检出白血病残留细胞,流式细胞术检测仍有0.021%～4.130%的白血病残留细胞.结论 流式细胞术检测儿童ALL MRD能较好地评估临床缓解期间ALL患儿体内残留白血病细胞的数量,其覆盖面和速度优于PCR检测方法 ,敏感性高于形态学检测方法 .     

流式细胞仪在白血病中的应用

流式细胞仪(Flow Cytometry,FCM)是一种利用光学和电学方法对溶液中细胞或微粒进行理化分析的一种仪器。该仪器具有高度的精密性、测定数据准确可靠,既可分析单个细胞,也可区别群体细胞。检测细胞敏感快速(每秒可检测5000～10000个细胞),并可测定细胞的大小、内部结构、表面标记。通过FCM内的计算机进行多参数数据处理,为临床诊治提供细胞或分子水平的实验依据。本文就FCM在白血病中的应用作一简要概述。     

外周血CD34+细胞绝对计数可靠预示自体外周血干细胞采集效果

目的　为确定外周血CD34+细胞绝对计数能否可靠预示自体外周血干细胞的采集效果。方法　用流式细胞仪ProCOUNT方法对采集的 2 5份次移植物和采集当天外周血行CD34+细胞绝对计数 ,同时做外周血常规检查和移植物集落形成单位 (CFU)计数 ,每份次移植物以CD34+/kg ,单个核细胞 (MNC) /kg,粒 巨噬细胞集落形成单位 (CFU GM) /kg ,红细胞集落形成单位 (CFU E) /kg等为指标 ,与患者采集当天的外周血CD34+细胞绝对计数、CD34+细胞百分比、WBC ,MNC ,中性粒细胞(NEU)或血小板 (PLT)等各项指标进行相关分析和逐步回归分析。结果　 ( 1)Spearman相关分析结果 :外周血CD34+细胞绝对计数与移植物CD34+/kg高度相关 (r=0 790 ,P <0 0 0 1) ,外周血CD34+细胞百分比与移植物CD34+/kg相关 (r=0 6 17,P <0 0 5 )。外周血WBC、MNC、NEU、PLT或RBC与移植物CD34+/kg无关。外周血CD34+细胞绝对计数与移植物CFU E相关 ,而与CFU GM无关。外周血MNC与移植物MNC/kg相关。 ( 2 )逐步回归分析结果 :移植物CD34+/kg只与外周血CD34+细胞绝对计数高度相关 (P <0 0 0 1) ,而与外周血CD34+细胞百分比无关。结论　移植物CD34+/kg只与外周血CD34+细胞绝对计数高度相关 ,外周血CD34+细胞绝对计数能够可靠预示自体外周血干细胞的采集效果     

流式细胞仪及其临床应用

流式细胞仪(Flow Cytometer)是采用流式细胞技术对细胞或颗粒悬液进行快速分析的自动化分析仪器.流式细胞术(Flow Cytometry,简称FCM)是上世纪70年代发展起来的一项新技术,它通过对流动液体中排成单列的细胞或颗粒进行逐个分析、测定细胞或颗粒的光散射和荧光情况,以获得其大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征.     

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术分析

目的 根据白血病细胞的异常免疫表达,建立流式细胞术检测儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)微小残留病(minimal residual disease,MRD)的方法 ,探讨流式细胞术检测MRD在儿童ALL个体化治疗中的意义.方法 用流式细胞术以多种四色荧光抗体组合对健康儿童骨髓进行检测,建立健康儿童骨髓细胞双参数点图分析模板.对75例ALL初诊患儿的骨髓细胞进行MRD筛选,找出在双参数点图上的位置明显区别于正常骨髓细胞的免疫表型组合作为MRD监测的有效免疫表型组合,对其中60例患儿诱导治疗结束及后续治疗中的骨髓标本用这些有效免疫表型组合进行MRD监测.同步进行细胞形态学检测和PCR检测29种融合基因、IgH/T淋巴细胞受体(TCR)基因重排.结果流式细胞术检出69例(92.0%)可用于MRD监测的有效免疫表型组合,PCR检出21例(28.0%)可用于MRD监测的融合基因或IgH/TCR基因重排;诱导治疗结束后及后续治疗中有25份骨髓标本细胞形态学未检出白血病残留细胞,流式细胞术检测仍有0.021%～4.130%的白血病残留细胞.结论 流式细胞术检测儿童ALL MRD能较好地评估临床缓解期间ALL患儿体内残留白血病细胞的数量,其覆盖面和速度优于PCR检测方法 ,敏感性高于形态学检测方法 .     

流式细胞术在临床医学领域的应用进展

流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子、抗原物质进行快速检测分析和/或分选的技术。在医学研究领域中,FCM能够快速分析单个细胞的多种特性,其既可以定性也可以定量,适于大量样品的检测。随着流式细胞分析技术与方法的日臻完善和临床应用范围不断拓宽,几乎临床医学各学科都涉及到流式细胞分析技术的应用,FCM已逐渐成为推动临床医学发展的重要手段[1~3]。一、流式细胞仪的基本结构和工作原理流式细胞仪主要由流动室及液流驱动系统、激光光源及光束形成系统、光学系统、信号检测存储与显示分析系统、…     

淋巴结细针穿刺标本的流式细胞术分析

目的 评价淋巴结细针穿刺标本流式细胞术分析方法在诊断淋巴结病变,以及在恶性淋巴瘤和淋巴结反应性增生鉴别诊断中的应用价值.方法 对99份疑为淋巴结病变的淋巴结针吸标本涂片进行常规细胞学分析,并结合病理活组织检查确诊分型.使用三色标记的流式细胞术方法分析针吸标本中各细胞免疫表型(CD3、CD3、CD4、CD5、CD10、CD19、CD20、CD23、CD45、K、λ、FMC7、 CD34),确定标本中各细胞组成及有无异常表型细胞.对于淋巴瘤病例,则按照WHO分型标准,根据免疫表型进一步确定其亚型,并对各类病例流式细胞术分型结果和细胞学结果进行比较.结果 99份标本中,细胞涂片检出淋巴瘤40例,转移癌29例,反应性增生、坏死、结核30例,有2例非霍奇金淋巴瘤(NHL)被误诊为反应性增生;对其中18例NHL进行了病理活组织检查,其中包括B淋巴细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)16例,T淋巴细胞非霍奇金淋巴瘤2例.流式细胞术分析结果显示,99份标本中检出淋巴瘤35例(淋巴母细胞淋巴瘤4例,T淋巴细胞病变1例,其余30例为B-NHL);有28份B-NHL检测到K或λ轻链限制性表达,其K:λ或λ:K大于3:1,B淋巴细胞所占比例为(73.2±27.2)%,其中26份能根据免疫标志物的表达确定其亚型.经病理活组织检查确定为B-NHL的16份标本中,仅2例滤泡淋巴瘤与流式细胞术分型结果不一致.对于反应性增生及转移癌等标本,流式细胞术分析未查见异常淋巴细胞,其k:λ或λ:k均小于3:1.结论 淋巴结细针穿刺标本的流式细胞术分析有助于淋巴结病变的诊断和鉴别诊断,并可确定NHL的亚型.