μ阿片受体通过调控Smad2抑制乳腺癌细胞迁移侵袭

目的:研究μ阿片受体(MOR)对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响及其机制。方法:Western blot(WB)及RT-q PCR检测乳腺癌细胞系MCF-7、BT-549、SKBR3、MDA-MB-231、BT-474、T47D中MOR的表达水平。在MDA-MB-231细胞中,慢病毒转染过表达MOR。用划痕实验、transwell实验以及WB实验来研究MOR表达量改变对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移的影响及可能的机制。结果:WB及RT-q PCR结果示,MOR在MDA-MB-231中的表达量明显低于MCF-7、BT-549、SKBR3、BT-474、T47D。划痕实验及transwell实验示,过表达MOR后MDA-MB-231细胞愈合、迁移及侵袭能力明显减弱。WB结果示,与对照组相比,过表达组的Smad2、p Smad2、MMP9、MMP2、N-cadherin表达量下调。结论:与MCF-7等低转移潜能细胞相比,MOR在高转移潜能乳腺癌细胞系MDA-MB-231中表达量低。过表达MOR后,MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力减弱。WB结果提示MOR对MDA-MB-231细胞迁移侵袭的影响可能与Smad2及其下游蛋白的表达下调有关。     

SARI过表达对CBFL细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨SARI基因过表达对核结合因子白血病(CBFL)细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:通过17号外显子测序验证CBFL细胞模型Kasumi-1细胞负载c-KIT N822K突变。构建SARI基因过表达慢病毒载体,并转染Kasuimi-1细胞。采用荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞转染后SARI基因过表达效果。设置空白对照(CON)、空载体对照(NC)和SARI过表达(OE) 3组。MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyto C、Caspase 9、Caspase 3、cleaved-Caspase 3、PARP、cleavedPARP,以及PI3K/Akt通路蛋白PI3K(p85)、p-PI3K(p85)、Akt、p-Akt的表达变化。结果:Kasumi-1细胞具有c-KIT N822K突变。成功构建稳定过表达SARI基因的Kasumi-1细胞。与NC组细胞相比,OE组细胞增殖减缓,凋亡增加;抗凋亡蛋白BCL-2表达降低,促凋亡蛋白BAX表达增高;出现Cyto C蛋白的表达; Caspase 9、Caspase 3表达降低,cleaved-Caspase3表达增高; PARP表达降低,活性剪切体cleaved-PARP表达增高,PI3K/Akt通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt磷酸化水平下调(P 0. 05)。结论:SARI基因过表达可通过线粒体途径诱导CBFL细胞凋亡,机制可能与PI3K/Akt信号通路失活有关。     

IncRNA MT1JP抑制乳腺癌细胞增殖并促进乳腺癌凋亡研究

目的探讨长链非编码RNA金属硫蛋白1J(IncRNA MT1JP)对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响。方法收集人乳腺癌组织及对应的癌旁组织,体外培养乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、HCC1569和人乳腺正常的上皮细胞MCF10A,RT-PCR检测组织和细胞中MT1JP水平。乳腺癌细胞转染MT1JP过表达载体和空载体分别命名为MT1JP组和NC组,同时以只加入转染试剂的细胞为对照组,RT-PCR检测细胞中MT1JP表达水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达水平。结果 MT1JP在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.05)。MT1JP表达水平由高到低为:MCF10A、HCC1569、MDA-MB-231、MCF-7,后续选用MCF-7细胞继续研究。MT1JP组细胞存活率及p-Akt水平明显低于对照组,而凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于对照组(P0.05)。结论 MT1JP在乳腺癌中表达下调,MT1JP能够抑制乳腺癌细胞增殖,促进乳腺癌细胞凋亡,作用机制可能与Akt信号通路有关。     

抑制胞浆型磷脂酶A2γ的表达对乳腺癌细胞迁移侵袭作用的研究

目的探讨胞浆型磷脂酶A2γ(cPLA2γ)的表达在乳腺癌细胞迁移和侵袭能力变化中的潜在作用。方法 (1)采用免疫组织化学的方法检测cPLA2γ在乳腺癌组织中的表达。(2)应用StealthTM-RNAi技术,瞬时转染乳腺癌MDA-MB-231细胞而抑制cPLA2γ的表达,分别采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting技术检测cPLA2γ的信使RNA(mRNA)和蛋白的表达水平;通过划痕实验观察细胞迁移能力的变化;观察抑制cPLA2γ表达的MDA-MB-231细胞侵袭能力变化。(3)应用Western blot技术检测抑制cPLA2γ表达后,MDA-MB-231细胞在EGF刺激不同时间后Akt(Ser473和Thr308)、cofilin和PKCζ磷酸化水平变化。(4)稳定转染MDA-MB-231细胞而获得抑制cPLA2γ表达的克隆细胞。采用鼠尾静脉注射的方式将抑制cPLA2γ表达的稳定克隆MDA-MB-231细胞注入免疫缺陷的SCID小鼠体内,观察在不同的时间肿瘤细胞的被动转移情况。结果 (1)cPLA2γ在乳腺癌组织中表达与淋巴结转移相关。(2)瞬时转染MDA-MB-231细胞,和对照组相比cPLA2γ的mRNA和蛋白表达水平降低;迁移能力降低;同时MDA-MB-231细胞的侵袭能力降低。(3)与对照组相比,抑制cPLA2γ表达后的MDA-MB-231细胞Akt(Ser473和Thr308)、cofilin和PKCζ磷酸化表达水平均降低。(4)稳定转染MDA-MB-231细胞而获得抑制cPLA2γ表达的克隆,与对照组相比mRNA和蛋白表达水平明显降低;抑制cPLA2γ表达的乳腺癌MDA-MB-231细胞注入SCID小鼠的尾静脉,乳腺肿瘤细胞被动转移能力降低。结论 cPLA2γ参与EGF诱导的乳腺癌细胞的迁移和侵袭,其调控与Akt通路有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对乳腺癌细胞生长及迁移的影响

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响及对乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的影响。方法：MCF-7细胞培养贴壁之后,加入EGCG处理,2d后收集蛋白,采用Western Blot检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（phospho-p38MAPK）的表达;同样处理后收集活细胞,用细胞计数法检测细胞的存活;取对数生长期的MDA-MB-231细胞,分至6孔板培养,使用EGCG处理后,采用细胞划线法探测乳腺癌细胞的迁移。结果：使用EGCG处理乳腺癌细胞后,phospho-p38MAPK的表达降低,EGCG处理乳腺癌细胞4d后其增殖率降低50%,迁移活性降低。结论：EGCG处理乳腺癌细胞能抑制肿瘤细胞的生长以及迁移,这与p38 MAPK信号通路相关。     

青蒿素对MCF-7乳腺癌细胞Akt及survivin蛋白表达影响的研究

目的研究青蒿素对MCF-7乳腺癌细胞Akt及survivin蛋白表达的影响。方法体外培养人乳腺癌细胞系MCF-7细胞株,采用MTT法检测青蒿素对细胞的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡的影响,Western blot分析Akt与survivin蛋白表达的改变,多组均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较用LSD检验。结果青蒿素对MCF-7乳腺癌细胞体外生长具有明显的抑制作用,并呈时间和剂量依赖性;青蒿素对MCF-7细胞出现G0/G1期阻滞;与对照组比较,青蒿素明显抑制Akt与survivin蛋白的表达。结论青蒿素可以通过抑制Akt与survivin蛋白表达及对细胞周期的影响而诱导乳腺癌细胞的凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。     

miR-34a在人H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用及机制

目的探讨miR-34a对缺氧复氧损伤人H9C2心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法对数生长期人H9C2心肌细胞,随机分为正常对照组、缺氧复氧组、miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组。缺氧复氧组、miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组缺氧培养3 h、复氧培养4 h制备缺氧复氧模型;在缺氧培养前48 h,miR-34a激动剂组于培养基中加入摩尔浓度为50 nmol/L的miR-34a激动剂agomir,PI3K通道阻滞组在培养基中加入摩尔浓度为50 nmol/L的agomir和摩尔浓度为10μmol/L的PI3K特异性阻断剂LY294002,缺氧复氧组不作处理。正常对照组不制备模型,不进行药物干预。复氧培养4 h,4组采用TUNEL法检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR法检测miR-34a mRNA、p-PI3K mRNA相对表达量;Western blot法检测心肌细胞caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)蛋白、p-PI3K、p-Akt相对表达量。结果复氧培养4 h,正常对照组、miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组、缺氧复氧组人H9C2心肌细胞凋亡率[(20.00±2.14)%、(34.26±3.82)%、(58.58±5.69)%、(80.25±7.76)%]依次升高(P0.05);miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组、正常对照组、缺氧复氧组人H9C2心肌细胞miR-34a mRNA(3.214±0.321、2.165±0.224、1.000±0.002、0.496±0.051)、p-PI3K mRNA(2.161±0.232、1.446±0.153、1.000±0.006、0.501±0.052)、p-PI3K(0.316±0.031、0.204±0.021、0.189±0.024、0.095±0.086)、p-Akt(0.586±0.062、0.306±0.032、0.182±0.021、0.071±0.008)蛋白相对表达量依次降低(P0.05);miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组、缺氧复氧组人H9C2心肌细胞Bcl-2蛋白相对表达量(0.385±0.042、0.381±0.045、0.179±0.018)均低于正常对照组(0.832±0.062),caspase-3蛋白相对表达量(0.526±0.061、0.544±0.059、0.854±0.094)均高于正常对照组(0.518±0.021)(P0.05);缺氧复氧组人H9C2心肌细胞Bcl-2蛋白相对表达量低于miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组,caspase-3蛋白相对表达量高于miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组(P0.05);miR-34a激动剂组与PI3K通道阻滞组人H9C2心肌细胞Bcl-2、caspase-3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 miR-34a可抑制缺氧复氧损伤的人H9C2心肌细胞凋亡,其机制可能与促进PI3K磷酸化,活化PI3K/Akt信号通路,抑制细胞凋亡蛋白表达有关。     

慢病毒介导的IGF-1R基因沉默对肝细胞癌的增殖和迁移的影响

目的探讨慢病毒介导的胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因沉默对肝细胞癌的增殖和迁移的影响。方法设计并筛选高效特异性胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因的小干扰RNA,构建稳定遗传的慢病毒载体质粒,观察其转染沉默IGF-1R基因的肝癌细胞株Huh7细胞增殖、迁移以及侵袭能力,进一步观察其对PI3K/Akt及Bax/Bcl-2通路的影响。结果采用倒置相差荧光显微镜观察转染效果,镜下可见较多细胞特异性表达GFP绿色荧光,转染率超过80%。scrambled阴性对照组以及空白对照组IGF-1R mRNA及蛋白的相对表达量显著高于LV-IGF-1R-RNAi转染组(P0.01)。成功转染后,培养细胞72 h、96 h,LV-IGF-1R-RNAi转染组增值率显著低于scrambled阴性对照组以及空白对照组(P0.05或P0.01)。侵袭实验和迁移实验均证实细胞明显受到抑制(P0.01)。蛋白免疫印迹法显示,LV-IGF-1R-RNAi转染组p-PI3K、p-Akt及Bcl-2相对表达量显著低于scrambled阴性对照组以及空白对照组(P0.05);而Bax显著高于scrambled阴性对照组以及空白对照组(P0.05)。结论RNAi技术沉默IGF-1R基因表达能显著抑制肝癌细胞株Huh7细胞的增殖、侵袭作用,而这一作用可能与抑制PI3K/Akt通路蛋白磷酸化及调节Bax/Bcl-2通路蛋白表达有关。     

PI3KI/Akt1在辐射诱导的乳腺癌细胞自噬发生中表达调控及作用机制

目的研究不同剂量X线诱导乳腺癌细胞株MCF-7自噬发生过程中Akt表达的变化以及探讨小分子干扰RNA沉默Akt基因后对自噬的影响及可能的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR方法检测MCF-7中Akt基因表达,Western blot方法检测Akt蛋白表达;实时荧光定量PCR方法检测Akt过表达和沉默模型中MAP1LC3B基因表达。结果正常照射组MCF-7细胞量效研究表明,在4、8、16 h Akt1表达分别在24、、8Gy区间内呈剂量依赖下降变化,照射后Akt1总体表达均低于假照组(P0.01);32 h量效结果表明,Akt1表达明显呈剂量依赖下降变化,4、8、12Gy有显著性差异(P0.05)。时间效应研究表明,48、、12Gy时程研究Akt1表达量均于8 h降至最低,差异显著(P0.05),照射后Akt1基因总体变化均低于假照组。正常照射组MCF-7细胞Akt1蛋白表达情况为,照射后2 h Akt1蛋白表达即有明显下降趋势,24 h达至最低值;4Gy时效研究表明,照射后0.5 h Akt1蛋白表达明显下降,8 h达至最低值;8 Gy时效研究表明,照射后Akt1蛋白表达在0.5-4 h区间内呈时间依赖下降趋势,4 h达至最低值。Akt1 siRNA模型照射组量效研究表明,MAP1LC3B表达在8、163、2 h均有不同程度升高变化,12 Gy达至最大值(P0.05);时间效应关系表明,2、48、Gy MAP1LC3B表达在16 h3、2 h上升变化显著(P0.05),12 Gy时效表明,8、163、2 h MAP1LC3B表达呈剂量依赖上升变化,于32 h达至最大值(P0.05)。结论 X线可能通过抑制PI3KI/AKT转导通路活性来促进乳腺癌细胞株MCF-7发生自噬。     

miR-21对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响

目的探讨miR-21对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响。方法采用不同浓度的miR-21慢病毒转染乳腺癌MCF-7细胞,通过MTT实验检测乳腺癌MCF-7细胞增殖情况,采用免疫印迹与双荧光素酶实验检测miR-21与PDCD4蛋白的调控关系,使用划痕愈合实验及Transwell侵袭实验检测miR-21对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响。结果对照组与使用浓度为0、20、40 nmol/L的miR-21-inhibitor慢病毒转染后的乳腺癌MCF-7细胞增殖速度分别为(81.24±4.65)×10`4、(72.15±6.19)×10~4、(70.25±5.59)×10~4、(52.92±7.08)×10~4,差异均统计学意义(P0.05)。抑制miR-21表达后,PDCD4蛋白的表达水平相应下调,且转染miR-21-inhibitor后,野生型PDCD4-3'非翻译区的表达活性受到一定程度抑制。抑制miR-21表达后,乳腺癌MCF-7细胞的侵袭、迁移能力均受到抑制,miR-21-inhibitor组与对照组细胞侵袭数量及细胞迁移率比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-21通过调控PDCD4蛋白的表达以影响乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭行为。     

二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌细胞生长停滞和细胞凋亡作用及对PARP-1/p53信号通路的影响

目的探究二甲双胍(DMBG)联合紫杉醇(PTX)对乳腺癌细胞MCF-7生长停滞和细胞凋亡的作用及对聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)/p53信号通路的影响,以期为疾病的临床治疗提供新思路。方法在细胞培养基(不添加药物处理,空白组)、含有DMBG的细胞培养基(培养基中添加16. 56 mg/ml DMBG,DMBG组)、含有PTX细胞培养基(培养基中添加10μg/ml PTX,PTX组)、含有PTX、DMBG的培养基(培养基中添加16. 56 mg/ml DMBG和10μg/ml PTX,联合组)中分别培养乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆实验检测菌落形成情况; Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测PARP-1、p53、Cyclin D1、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,MCF-7细胞PARP-1PARP-1、p53蛋白表达明显增加(P 0. 05)。空白组细胞形态、大小均正常,DMBG组、PTX组细胞体积明显变小,细胞核荧光强度增高,部分出现碎片化,联合组细胞核固缩现象更加明显。与空白组相比,DMBG组、PTX组细胞抑制率、凋亡率、G1期DNA量、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高;细胞菌落数、PARP-1、p53、Cyclin D1蛋白表达降低(P 0. 05)。与DMBG组、PTX组相比,联合组细胞抑制率、凋亡率、G1期DNA量、Cleaved Caspase-3蛋白表达升高;细胞菌落数、PARP-1、p53、Cyclin D1蛋白表达降低(P 0. 05)。结论 DMBG联合PTX可能通过抑制PARP-1和p53的表达,引起细胞周期G1期阻滞,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,促进其凋亡,发挥抗肿瘤作用。     

基因FoxM1介导DFOG抑制人乳腺癌细胞生长和诱导凋亡的研究

目的探讨7-二氟甲氧基-5,4′-二-正辛烷氧基金雀异黄素(DFOG)对人乳腺癌细胞生长、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞。平皿集落形成法测定DFOG对乳腺癌细胞集落形成率的影响;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及分析细胞周期分布;Western blotting分析转录因子FoxM1及其下游蛋白CDK1、cyclin B、survivin、p27kip1表达。结果 DFOG以浓度依赖的方式抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞生长和诱导凋亡,并且伴随G2/M期细胞周期阻滞。DFOG能下调FoxM1及其下游蛋白CDK1、cyclin B、survivin表达,上调p27kip1蛋白表达。通过siRNA干扰技术下调FoxM1表达能增强DFOG对乳腺癌细胞的诱导凋亡作用。结论 DFOG显著抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞生长和诱导凋亡,下调FoxM1表达可能是其作用机制之一。     

MicroRNA-197调控上皮-间充质转化对乳腺癌侵袭和迁移的影响

目的:探讨微小RNA-197(miR-197)抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的能力,以及阻断上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的机制。方法:构建miR-197过表达载体(miR-197mimics),分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,并设对照组;Real-timePCR分别检测以上各组细胞miR-197的表达水平变化;利用Transwell实验和划痕实验对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力进行检测;Western印迹法检测过表达miR-197后对EMT相关标志物E-cadherin,snail和vimentin表达的影响。结果:MiR-197可以抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的迁移和侵袭能力;转染miR-197mimics后,E-cadherin表达降低,snail和vimentin表达增加。结论:MiR-197有可能作为乳腺癌临床治疗的新靶点。     

乳腺癌细胞放疗后LncRNA RP3-340B19.3的表达以及干预对其生物学特性的影响

目的 检测乳腺癌细胞放疗后LncRNA RP3-340B19.3的表达水平变化，探讨干预RP3-340B19.3后对乳腺癌细胞生物学特性的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测经辐照后乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中RP3-340B19.3的表达水平；利用小干扰RNA技术抑制两株细胞系中RP3-340B19.3的表达，qRT-PCR检测其转染效率；克隆形成试验检测RP3-340B19.3对乳腺癌细胞存活率的改变，并计算细胞放疗增敏比(SER);流式细胞术检测RP3-340B19.3对乳腺癌细胞的细胞凋亡与细胞周期的影响。结果 qRT-PCR结果显示，经辐照后MCF-7和MDA-MB-231细胞中RP3-340B19.3的表达水平明显上调。转染siRNA后，MCF-7和MDA-MB-231细胞中RP3-340B19.3的相对表达量分别为0.236 3±0.153 8和0.363 3±0.037 1,均显著低于si-NC组(P<0.01)。经辐照后，RP3-340B19.3敲减组细胞克隆形成率和细胞存活分数明显下降(P<0.05),MCF-7和M...     

高糖对RF/6A细胞内PI3K-Akt信号通路的影响

目的 探讨高糖对视网膜血管内皮细胞内血管新生关键信号通路PI3K-Akt信号通路的影响.方法 以猴视网膜血管内皮细胞RF/6A细胞为研究对象,分为空白对照组、甘露醇对照组、高糖组和PI3K-Akt信号通路特异性阻断剂LY294002组,分别采用MTs法检测RF/6A细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移以及Mmrigel法检测细胞管腔形成能力,Western blot法检测PI3K-Akt信号通路中关键蛋白Akt的表达以及磷酸化.结果 与空白对照组相比,甘露醇对照组细胞增殖率、迁移率、管腔形成数以及细胞内Akt及P-Akt的表达无统计学差异(P>0.05);高糖组细胞增殖增加15.12%(P<0.05),细胞迁移增加39.24%(P<0.01),管腔形成数增加59 10%(P<0.01),细胞内Akt及p-Akt的表达分别增加27.34%(P<0.05)、25.23%(P<0.05);LY294002组细胞增殖减少17.56%(P<0.05),细胞迁移减少45 71%(P<0.01),管腔形成减少39.08%(P<0.01),Akt及p-Akt的表达量分别减少37.78%(P<0.01)、42.08%(P<0.01);与高糖组相比,LY294002组细胞增殖减少29.06%(P<0.05),细胞迁移减少61.01%(P<0.01),管腔形成减少62.14%(P<0.01);Akt及p-Akt的表达分别减少51.15%(P<0.01)、53.75%(P<0.01).结论 高糖可经上调RF/6A细胞内PI3K-Akt信号通路促进血管新生,PI3K-Akt信号通路阻断剂可拮抗高糖的促RF/6A细胞血管新生的作用.     

沉默环磷腺苷效应元件结合蛋白1对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的：探究环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein, CREB1）基因沉默对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法：针对人CREB1的基因序列设计并构建2条短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA），采用慢病毒转染shRNA至人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞系抑制其CREB1的表达。将实验组分为shCREB1#1组和shCREB1#2组，同时将shSCR空载质粒转染至上述细胞系作为阴性对照组。采用实时定量PCR和Western-blot法检测转染效率；CCK-8法检测细胞的增殖能力；集落形成实验检测细胞的集落形成能力；流式细胞术检测细胞周期和凋亡率；细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力；Western-blot法检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达。结果： 在MCF-7和MDA-MB-231细胞中，相较于shSCR组，shCREB1#1和shCREB1#2组中CREB1基因的mRNA和蛋白表达水平均下降（P＜0.001）。沉默CREB1后，MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力减弱且细胞的凋亡率升高（P＜0.05）。此外，沉默CREB1可使细胞周期蛋白CDK2、CDK4、CDK6、Cyclin D1以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达水平下调而促凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达水平上调。 结论：沉默CREB1可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并诱导细胞凋亡。     

Stathmin表达水平与乳腺癌细胞侵袭能力相关性研究

目的 探讨乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中Stathmin基因表达水平与细胞生长、黏附、侵袭等生物学行为之间的关系,为进一步研究乳腺癌转移机制奠定实验基础。方法 应用RT-PCR和Western Blot方法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞中Stathmin基因的表达水平,同时利用细胞增殖试验、细胞黏附试验和细胞侵袭试验检测MDA-MB-231和MCF-7细胞的生长、黏附、侵袭能力,分析Stathmin表达与细胞的生长、黏附、侵袭能力之间的关系。结果 RT-PCR和Western Blot检测结果显示,Stathmin基因在MDA-MB-231和MCF-7细胞中表达均高于正常对照细胞(F=10.173,P<0.05),且MDA-MB-231细胞中的表达水平明显高于MCF-7细胞中的表达水平(t=4.562,P<0.05)。而MDA-MB-231细胞在生长、黏附和侵袭能力方面均强于MCF-7细胞(P<0.05)。结论 Stathmin表达水平高的乳腺癌细胞相应的生长、黏附、侵袭能力较强,Stathmin表达水平与细胞侵袭能力密切相关。     

印记基因SLC22A18的表达与乳腺癌侵袭能力的关系

目的:研究印记基因SLC22A18(solute carrier family 22,member 18)在乳腺癌中的表达情况及其与乳腺癌侵袭能力的关系。方法:采用Transwell方法评估2种不同恶性程度的乳腺癌细胞株MDA-MB-231(恶性程度高)和MCF-7(恶性程度低)的侵袭转移能力。分别采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测SLC22A18的mRNA和蛋白在这2种乳腺癌细胞株中的表达情况。结果:MDA-MB-231细胞株恶性程度高,穿过膜的细胞多,侵袭能力强;MCF-7细胞株恶性程度低,穿过膜的细胞少,侵袭能力弱;SLC22A18在MCF-7中的mRNA和蛋白表达水平高于MDA-MB-231;差异有统计学意义(P0.01)。结论:印记基因SLC22A18的表达与乳腺癌细胞的侵袭能力相关,该基因有望作为一个抑癌基因抑制乳腺癌的转移。     

竹节香附素A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察竹节香附素A（RDA）对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 分别使用0、5、10、20及40μmol/L的RDA干预HeLa细胞48 h,CCK-8实验测定细胞增殖率,计算半抑制浓度（IC₅₀）,确定药物浓度。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测细胞中B细胞淋巴瘤2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化胱天蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的蛋白表达水平。将HeLa细胞分为4组,即空白对照组、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组、RDA组和联合用药组,检测及比较各组细胞增殖率、凋亡率和p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量。结果 随着RDA浓度的增加,HeLa细胞的增殖率降低、凋亡率升高（P均< 0.05）,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量升高（P均< 0.05）,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量降低（P均< 0.05）;IGF-1激活PI3K/Akt/mTOR信号通路后,RDA仍然能抑制HeLa细胞增殖（P均< 0.05）,降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量（P均< 0.05）。结论 RDA可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞产生抑制增殖与促进凋亡的效果。     

SIAH2在乳腺癌发生、发展过程中的作用

目的 探讨SIAH2对乳腺癌细胞生长、侵袭和迁移等生物学行为的影响,揭示乳腺癌发生的分子机制.方法:检测乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MDA-MB-435s,MDA-MB-468,MCF-7中SIAH2的表达情况,将SIAH2高表达的MDA-MB-435s细胞通过RNA干扰的方法敲除SIAH2基因,通过MTT试验、划痕试验、Transwell小室侵袭试验检测细胞生物学行为的变化.结果:SIA H2被敲除后MDA-MB-435s细胞的增殖、侵袭和迁移运动能力下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:SIAH2参与调控乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移运动,可能是乳腺癌分子诊断和靶向治疗的有效靶点.