MicroRNA靶位点单核苷酸多态性与肿瘤及其药物敏感性的研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类内源性非编码小RNA。MiRNA通过与蛋白编码基因mRNA的3’非编码区互补配对,影响mRNA的稳定和抑制蛋白质的合成,从而发挥转录后调控作用。研究表明miRNA靶位点单核苷酸多态性可能会通过影响miRNA对靶基因的负调控,参与肿瘤的发生、发展及其耐药。     

消化系统恶性肿瘤miRNA研究的新进展

microRNA(miRNA)是一类存在于真核生物中长度约22 bp的非编码小RNA分子.miRNA通过与靶基因mRNA的3'端非编码区(3'UTR)结合,在转录后水平调控基因表达,来参与机体不同时期不同组织生长发育的重要过程.已知有一些miRNA基因定位在染色体脆性位点,还有部分miRNA基因存在于一些与肿瘤相关的基因组序列中,而且人们发现在肿瘤组织中多种miRNA的表达谱发生变化,进一步的研究证实miRNA与肿瘤细胞的生长分化迁移、肿瘤血管的生成及肿瘤耐药机制的形成等诸多方面都有着千丝万缕的联系.     

MicroRNA与癌症的相关性研究进展(文献综述)

MicroRNAs（miRNAs）是一类长约22 nt的非编码单链RNA分子,在转录后水平调控基因的表达。miRNA能特异性诱导靶基因mRNA降解及抑制靶基因mRNA的翻译,同时在细胞的发生、发展、增殖、分化和凋亡过程中发挥重要的调节作用[1]。目前,人类基因组中已确认的miRNAs约500个,     

miR-155调控T细胞分化与功能的研究进展

<正>miRNA是在真核生物中发现的一类内源性具有免疫调控功能的非编码小分子RNA,长约19~24个核苷酸,由具有发夹结构的约70~90个碱基大小的单链RNA前体经Dicer酶加工而成,在转录后水平调控基因表达。miRNA主要通过与特定的靶信使RNA(mRNA)的3'非编码区直接结合,降解靶RNA或抑制其翻译,进而影响目的基因的表达[1-3]。     

微小RNA在肿瘤侵袭转移中的作用

微小RNA(miRNA)是一类长度为19-25个核苷酸对的非编码小分子RNA,通过与靶 mRNA互补配对而在转录水平上对基因的表达进行负调控.实验表明miRNA可通过调控其靶基因参与的信号通路,影响肿瘤的发生、发展和转移,发挥着类似原癌基因或抑癌基因的功能.因此研究miRNA在肿瘤侵袭转移调控中的作用有着重要意义.     

MicroRNA参与喉癌相关基因表达的调控

MicroRNA(miRNA)是一类广泛分布于动植物的非编码小RNA,通过与mRNA互补结合转录后抑制靶基因的表达。研究表明一些miRNAs通过调控肿瘤相关基因表达参与肿瘤的发生、发展,具有癌基因或抑癌基因的相关功能。miRNA在喉癌中存在差异表达,参与喉癌的分子发病机制。     

恶性肿瘤中HOTAIRM1的调控作用及机制

HOTAIRM1是一种新近发现的长链非编码RNA(lncRNA),其在多种恶性肿瘤中呈现异常表达,并通过特定的信号传导途径调控mRNA、miRNA以及相应靶基因和靶蛋白,从而在肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭中起到重要作用。同时,HOTAIRM1与临床病理学和分子病理学密切相关,在患者的治疗和预后评估中也显现出巨大的潜力。     

MicroRNA与甲状腺癌发生、发展关系的研究进展

人微小RNA(microRNA, miRNA)是一类进化上高度保守、细胞内源性表达的单链非编码小分子 RNA,其通过“种子序列”与靶基因mRNA碱基互补配对,从而在转录后水平调控靶基因的表达。大量报道发现, miRNA参与早期胚胎发育及细胞的增殖、分化、凋亡等多种生物学过程,其异常表达可能与多种疾病的发生、发展密切相关。近年研究证实,甲状腺癌组织中存在miRNA的表达紊乱,该文现就miR-NA在甲状腺癌中的表达、调控及其在甲状腺癌发生、发展、转移过程中的作用及其机制进行综述。     

长链非编码RNA与胃癌的关系研究新进展

长链非编码RNA（10ngnon—codingRNA,LncRNA）是调节性非编码RNA之一,转录本长度〉200nt,表达具有时空特异性,无明显可读框,不编码蛋白质。在细胞质,会影响RNA稳定性和miRNA活性;在细胞核,主要调控基因转录和mRNA剪接。根据与最近编码蛋白质基因的关系,LncRNA可分为五类：     

基于生物学信息分析及推测PCGEM1在前列腺癌中的表达分子调控网络

非编码 RNA,包括以 miRNA、siRNA 和 piRNA 等为代表的短小 RNA 和长链非编码 RNA（long non-coding RNA,lncRNA）。长链非编码 RNA,有别于其他小分子非编码 RNA,是目前非编码 RNA 研究的热点。随着研究的不断推进,人们发现 lncRNA 与物种进化、胚胎发育、物质代谢以及肿瘤发生等都有着密切的联系[1]。miRNA 是一类长度为21~25个核苷酸（nt）的单链 RNA,属于非编码蛋白 RNA,广泛存在于生物界,miRNA 调节人类1/3基因的表达,miRNA 是一类新发现的基因调节剂,可以在转录水平或转录后水平调节基因的表达,在肿瘤的发生与发展中扮演着“癌基因”与“抑癌基因”的角色[2]。前列腺癌基因表达标记1（prostate cancer gene expression marker 1, PCGEM1）全长1643 nt,在前列腺组织及前列腺癌组织中呈特异表达的长链非编码 RNA,但其表达调控网络目前未知[3],本文旨在运用生物学软件对其进行生物学信息分析,为下一步实验验证其表达分子调控网络机制提供线索。     

川芎嗪与环孢菌素A联合应用对转基因多药耐药细胞K562/MDR的逆转作用

目的研究中药川芎嗪(TMP)与环孢菌素A(CsA)联合应用对转基因多药耐药细胞K562/MDR的耐药性逆转作用及可能机制。方法应用非细胞毒性剂量的TMP和CsA单独及联合作用于K562/S和K562/MDR细胞,MTT法检测细胞对阿霉素(ADM)的药敏性,计算耐药倍数及逆转倍数。利用罗丹明123(Rh123)进行蓄积与排出试验,免疫组化检测P-gp的表达,RT-PCR方法检测MDR1基因的表达。结果与K562/S细胞相比,K562/MDR细胞的耐药倍数为19.2倍;TMP及CsA可显著降低ADM对K562/MDR细胞的IC50(P0.01),逆转倍数分别为4.9倍及9.2倍,两者联合应用,逆转倍数为15.4倍。TMP及CsA单独应用均能降低K562/MDR细胞P-gp的表达,联合应用使K562/MDR细胞P-gp的表达率明显低于单独应用(P0.01);TMP和CsA单独及联合应用,MDR1基因表达均有不同程度的下调。结论 TMP和CsA联合逆转K562/MDR细胞的多药耐药性具有协同作用,其机制可能与下调MDR1基因表达和降低P-gp水平有关     

MiR-145-5p在大肠癌中的表达及与多药耐药的关系

目的 探讨大肠癌中miR-145-5p和多药耐药基因(MDR1)蛋白P-糖蛋白（P-gp）的表达及两者的关系。方法 分别在组织、细胞水平采用SP法、Real-time PCR法、Western blotting法检测50例大肠癌 (CRC)患者组织及30例癌旁正常组织患者中P-gp的表达,miR-145-5p的表达变化对MDR1 mRNA及P-gp的影响及两者与临床病理特征之间的相关性。结果 大肠癌组织中miR-145-5p表达量明显低于癌旁正常组织,MDR1 mRNA及P-gp的表达量明显高于癌旁正常组织(r=-0.403,P<0.01)。大肠癌细胞(HCT-15)中miR-145-5p 能够抑制MDR1 mRNA及P-gp的表达(P<0.05)。结论 MiR-145-5p对大肠癌多药耐药基因及蛋白的表达具有调控作用,参与了大肠癌的发生、发展及多药耐药。     

SFRP5基因甲基化通过激活Wnt/β-catenin通路调节白血病细胞MDR1/P-gp的表达

 目的:研究分泌型卷曲相关蛋白5（SFRP5）基因甲基化对耐药白血病细胞多药耐药蛋白1/P-糖蛋白（MDR1/P-gp）表达的调节及其可能的信号通路。方法:采用甲基化特异性PCR（MSP）检测白血病患者及白血病细胞系中SFRP5基因启动子区甲基化状态。采用Western blotting检测非磷酸化β-catenin（NP-β-catenin）在SFRP5基因甲基化白血病患者及细胞系中表达。使用去甲基化试剂5-氮杂-2′-脱氧胞嘧啶（DAC）恢复SFRP5表达,采用RT-PCR和real-time PCR检测处理前后MDR1 mRNA表达,采用Western blotting检测P-gp表达。结果:5/12例白血病患者标本及4种白血病细胞系存在SFRP5基因完全甲基化。在5例患者标本中,有3例（L2、L7和L8）NP-β-catenin水平高于其它标本,在4种白血病细胞系中,KG1a中NP-β-catenin水平高于另外3个细胞系。存在NP-β-catenin高水平表达的3例患者（L2、L7和L8）中检出MDR1 mRNA及P-gp表达。在4种细胞系中,KG1a存在MDR1 mRNA及P-gp表达。使用去甲基化试剂DAC处理L2、L7、L8患者标本和KG1a细胞,恢复SFRP5表达,L2、L7、L8和KG1a中MDR1 mRNA水平均显著下降（P<0.01）,P-gp表达水平亦被下调。结论: SFRP5基因甲基化可导致Wnt/β-catenin信号通路被激活,活化的β-catenin激活下游靶基因MDR1转录,编码的药物外排泵P-gp表达增加,促进白血病多药耐药的形成。     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞内地塞米松浓度与细胞膜表面P-糖蛋白170表达的相关性研究

目的分析对糖皮质激素（GC）敏感（SS）和耐药（SR）的原发性。肾病综合征（NS）患儿的外周血单个核细胞（PBMC）内地塞米松浓度和P-糖蛋白170（P—gp170）表达与GC耐药的关系,探讨P—gp170在GC耐药Ns患儿中的作用及介导耐药的可能机制。方法收集2006年1至10月在中南大学湘雅二医院儿科诊断为原发性NS的初治患儿为研究对象,依据对GC的反应分为SSNS亚组和SRNS亚组,并设同期行查体的健康儿童为对照组。应用地塞米松刺激SSNS和SRSS亚组患儿的PBMC并进行培养,以高效液相色谱法测定培养前（0 h）及培养后12、24和36h时PBMC内地塞米松浓度;蛋白质免疫印迹检测培养各时间点PBMC膜表面P—gp170的表达量;分别对不同培养时间点PBMC内地塞米松浓度与P—gp170的表达量行相关性分析。结果研究期间SSNS亚组纳入16例,SRNS亚组纳入8例,对照组纳入10例。①PRMC内地塞米松浓度随培养时间延长SSNS亚组呈增高趋势（P〈0．05）,SRNS亚组变化不显著（P〉0．05）;各培养时间点PBMC内地塞米松浓度SSNS亚组和SRNS亚组均高于对照组（P〈0．05）。②SSNS亚组P—gp170表达随培养时间的延长而逐渐降低,各培养时间点差异有统计学意义（P〈0．05）,且均高于对照组（P〈0．05）。SRNS亚组各培养时间点P—gp170表达差异无统计学意义（P〉0．05）,但高于SSRN亚组（P〈0．05）。③对照组不同培养时间点PBMC内地塞米松浓度与P—gp170表达呈显著负相关（12h：r=-0．852,24h：r=-0．794,36h：r=-0．847;尸均〈0．05）;SSNS亚组也呈显著负相关（12h：r=-0．728,24h：r=-0．785,36h：r=-0．842;P均〈0．05）;SRNS亚组无显著相关性。结论①PBMC膜表面P—gp170表达增高与Ns患儿GC耐药有关,P—gp170表达增高介导了部分Ns患儿的GC耐药;②应用GC可诱导NS患儿PBMC膜表面P—gp170的表达增高,部分Gc耐药患儿与GC应用所致P—gp170增高有关;⑧NS患儿PBMC膜表面P—gp170的表达增高为GC耐药标志之一.     

沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响

目的:观察沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响.方法:以Lipofectamine 2000介导miR-21抑制剂转染Ishikawa/DDP细胞株,同时设置阴性组和耐药组.采用反转录PCR检测miR-21、多药耐药基因MDR1、促凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2的表达.采用蛋白印迹法检测多药耐药蛋白P-gp、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.采用噻唑蓝比色法检测细胞对顺铂的敏感性.采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果:与耐药组和阴性组比较,抑制剂组miR-21,MDR1和Bcl-2 mRNA表达显著下调(P＜0.0l),而Bax mRAN表达显著上调(P＜0.00l);抑制剂组P-gp和Bcl-2蛋白表达显著低下调(p＜0.05),而Bax蛋白表达显著上调(P＜0.001).与耐药组和阴性组比较,顺铂对抑制剂组的IC50值显著(P＜0.001);顺铂对抑制剂组细胞的诱导凋亡率显著增加(P＜0.00l).结论:沉默miR-21可显著提高Ishikawa/DDP细胞株对顺铂的敏感性,并促进细胞凋亡,其具体机制可能与下调MDR1,P-gp和Bcl-2表达,以及上调Bax表达有关.     

RNA干扰技术抑制耐药细胞MDR1基因表达的研究

目的： 探讨载体表达的小干扰RNA (siRNA)抑制MDR1基因的表达，并逆转卵巢癌耐药细胞多药耐药的可行性。 方法： 浓度梯度诱导法和人MDR1基因载体转染法建立阿霉素耐药细胞株OVCAR/AR和多药耐药亚株OVCAR/MDR细胞。脂质体介导将MDR1特异性siRNA的表达载体(pSN/mdr1a和pSN/mdr1b)转染耐药细胞，实时定量RT-PCR方法检测MDRl mRNA的表达，流式细胞术检测P-gp的表达，MTT法检测耐药细胞对化疗药的抵抗性。 结果： 耐药细胞OVCAR/MDR细胞MDR1 mRNA的表达高于OVCAR/AR细胞，两者均高于其亲代细胞OVCAR-3；转染pSN/mdr1a和pSN/mdr1b可显著抑制两株耐药细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达，OVCAR/MDR和OVCAR/AR细胞对阿霉素抗药性的逆转率分别为79.5%和93.9%。 结论： 载体表达的MDR1特异性siRNA可抑制卵巢癌耐药细胞亚株MDR1基因的表达，因而增加耐药细胞对化疗药物的敏感性。     

High expression of MDR-1 gene and P-glycoprotein in initial and re-biopsy specimens of relapsed B-cell lymphoma

AIMS: Multidrug resistance (MDR) is a major obstacle in the treatment of lymphoma. The expression of MDR-1 mRNA and P-glycoprotein (MDR-1/P-gp) has been linked to MDR. We aimed to investigate the expression of MDR-1/P-gp in B-cell lymphoma. METHODS AND RESULTS: Samples at diagnosis and relapse from 10 patients with B-cell lymphoma were obtained. We also obtained 14 unselected control cases of B-cell lymphoma at diagnosis. The expression of mRNA and protein were determined semiquantitatively by RT-PCR and immunohistochemistry. High MDR-1 and P-gp expressions were found in seven and seven of 10 samples obtained at diagnosis, eight and eight of 10 samples obtained at relapse, and three and four of 14 control cases at diagnosis, respectively. The results of RT-PCR paralleled those of immunohistochemistry. Concordance of high MDR-1/P-gp expression was noted in 27 of 34 samples (r = 0.73, P = 0.001). There were no significant changes in MDR-1/P-gp expression in all cases at relapse and during the clinical course following chemotherapy. In the 14 control cases, the average survival time was 12.7 months in MDR-1/P-gp positive cases and 29.0 months in the MDR-1/P-gp negative cases (P = 0.20). CONCLUSIONS: Our results showed that at least some B-cell lymphomas express MDR-1/P-gp, which could be detected by different methods, and suggested that high MDR-1/P-gp expression in tumour cells may be associated with a high probability of relapse and poor prognosis.     

Restoration of chemosensitivity by multifunctional micelles mediated by P-gp siRNA to reverse MDR

One of the main obstacles in tumor therapy is multiple drug resistance (MDR) and an underlying mechanism of MDR is up-regulation of the transmembrane ATP-binding cassette (ABC) transporter proteins, especially P-glycoprotein (P-gp). In the synergistic treatment of siRNA and anti-cancer drug doxorubicin, it is crucial that both the siRNA and doxorubicin are simultaneously delivered to the tumor cells and the siRNA can fleetly down-regulate P-g before doxorubicin inactivates the P-gp and is pumped out. Herein, a type of micelles comprising a polycationic PEI-CyD shell to condense the siRNA and hydrophobic core to package doxorubicin is reported. The structure of the polymer is determined by ¹H NMR, FT-IR, DSC, and XRD and the micelles are characterized by DLS, 2D-NOESY NMR, and TEM to study the self-assembly of the micelles with siRNA and drugs. In vitro studies demonstrate controlled release and temporal enhancement of the therapeutic efficacy of P-gp siRNA and doxorubicin. Release of siRNA down-regulates the mRNA and protein levels of P-gp in the MCF-7/ADR cell lines effectively and the accumulated doxorubicin facilitates apoptosis of the cells to reverse MDR. Moreover, in vivo research reveals that the siRNA and doxorubicin loaded micelles induce tumor cell apoptosis and inhibit the growth of MDR tumor. The western blotting and RT-PCR results illustrate that the synergistic treatment of siRNA and doxorubicin leads to efficient reduction of the P-gp expression as well as cell apoptotic induction in MDR tumors at a small dosage of 0.5 mg/kg. The micelles have large clinical potential in drug/RNAi synergistic treatment via restoration of the chemosensitivity in MDR cancer therapy.     

Increased expression of P-glycoprotein and doxorubicin chemoresistance of metastatic breast cancer is regulated by miR-298

MicroRNAs (miRNAs) are short, noncoding RNA molecules that regulate the expression of a number of genes involved in cancer; therefore, they offer great diagnostic and therapeutic targets. We have developed doxorubicin-resistant and -sensitive metastatic human breast cancer cell lines (MDA-MB-231) to study the chemoresistant mechanisms regulated by miRNAs. We found that doxorubicin localized exclusively to the cytoplasm and was unable to reach the nuclei of resistant tumor cells because of the increased nuclear expression of MDR1/P-glycoprotein (P-gp). An miRNA array between doxorubicin-sensitive and -resistant breast cancer cells showed that reduced expression of miR-298 in doxorubicin-resistant human breast cancer cells was associated with increased expression of P-gp. In a transient transfection experiment, miR-298 directly bound to the MDR1 3' untranslated region and regulated the expression of firefly luciferase reporter in a dose-dependent manner. Overexpression of miR-298 down-regulated P-gp expression, increasing nuclear accumulation of doxorubicin and cytotoxicity in doxorubicin-resistant breast cancer cells. Furthermore, down-regulation of miR-298 increased P-gp expression and induced doxorubicin resistance in sensitive breast cancer cells. In summary, these results suggest that miR-298 directly modulates P-gp expression and is associated with the chemoresistant mechanisms of metastatic human breast cancer. Therefore, miR-298 has diagnostic and therapeutic potential for predicting doxorubicin chemoresistance in human breast cancer.