大黄素抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭及对SDF1/CXCR4轴信号通路的影响

目的探讨大黄素对人肺癌A549细胞系增殖、侵袭和迁移能力以及SDF1/CXCR4轴信号通路的影响。方法采用MTT法检测不同浓度大黄素对肺癌A549细胞系的抑制率。通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测大黄素对A549细胞迁移及侵袭能力的影响。荧光定量PCR检测细胞中SDF1和CXCR4基因表达,Western blot法检测A549细胞内SDF1/CXCR4轴信号通路中SDF1和CXCR4等关键蛋白表达水平的变化情况。结果大黄素对肺癌A549细胞的增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性。大黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移。荧光定量PCR检测发现大黄素处理A549细胞中SDF1和CXCR4基因表达降低。Western blot结果提示大黄素可抑制SDF1/CXCR4轴信号通路的SDF1和CXCR4蛋白的表达。结论在一定浓度范围内,大黄素可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,下调分泌蛋白SDF1和CXCR4的表达,其机制可能与抑制SDF1/CXCR4轴信号通路中的SDF1和CXCR4蛋白有关。     

低氧微环境对非小细胞肺癌细胞系A549细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨低氧对肺癌细胞系A549增殖和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法将体外培养的非小细胞肺癌细胞系A549分别置于常氧和低氧环境下刺激24 h,采用CCK8法检测细胞的增殖能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;Real time-PCR和Western blot法检测细胞中Wnt/β-catenin mRNA和蛋白的表达水平;并进一步使用β-catenin特异性siRNA阻断其表达,并检测。结果体外低氧微环境可显著促进肺癌细胞系A549的增殖和侵袭,并可激活Wnt/β-catenin信号通路;而抑制Wnt/β-catenin信号通路则能有效抑制低氧介导的肺癌细胞增殖与侵袭。结论低氧微环境通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进非小细胞肺癌细胞系A549的增殖和侵袭转移。     

单核细胞趋化蛋白-1经细胞外信号调节激酶通路对肺癌A549细胞 增殖、侵袭转移的影响及机制*

目的：研究单核细胞趋化蛋白-1（ MCP-1）对非小细胞肺癌增殖、侵袭转移能力的影响及可能的作用 机制。方法：体外培养肺癌细胞株A549。细胞分为对照组,MCP-1 组（25、50、75、100 ng/mL）,MCP-1 （75 ng/mL）+PD98059 组（100 μmol/mL）,抑制剂PD98059 组（100 μmol/L）。MTT 法检测细胞增殖活力,细胞划痕、 Transwell 侵袭实验分析细胞迁移侵袭能力。免疫印迹检测细胞外信号调节激酶（ t-ERK）、磷酸化细胞外信号调 节激酶（ p-ERK）、基质金属蛋白酶-14（ MMP-14）、基质金属蛋白酶-2（ MMP-2）及N- 钙黏蛋白（ N-cadherin） 的表达。结果：与对照组相比,MCP-1 明显促进A549 细胞的增殖、侵袭与转移;免疫印迹结果显示,MCP-1 可 上调p-ERK、MMP-14、MMP-2 及N-cadherin 蛋白的表达;应用ERK抑制剂PD98059 可阻断上述作用。ERK总 蛋白表达量差异无统计学意义。结论：MCP-1 经ERK通路上调MMP-14、MMP-2 及N-cadherin 蛋白表达,促进 肺癌A549 细胞增殖、侵袭与转移。     

鞘氨醇激酶1通过ERK1/2信号通路促进非小细胞肺癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨鞘氨醇激酶1(SphK1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:选取31例外科手术切除并经常规组织学检查确诊为NSCLC的肿瘤组织标本和配对癌旁肺组织标本,应用免疫组织化学染色和RT-qPCR检测SphK1的表达。将pcDNA3. 1-SphK1载体(SphK1组)、空白pcDNA3. 1载体对照(NC组)、SphK1 siRNA(siSphK1组)和对照siRNA(siNC组)分别转染人肺腺癌A549细胞,Western blot法检测SphK1、E-cadherin、fibronectin和p-ERK1/2的表达;利用Transwell实验评估过表达SphK1和抑制ERK1/2对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果:SphK1在NSCLC组织中高表达,并与肿瘤分期相关。SphK1过表达可显著促进A549细胞的迁移和侵袭,提高p-ERK1/2和fibronectin蛋白水平,减少E-cadherin蛋白表达(P0. 05),而干扰SphK1则呈现相反的结果。ERK1/2抑制剂U0126可显著抑制SphK1过表达诱导的p-ERK1/2和fibronectin上调及E-cadherin下调,也抑制了SphK1过表达增强的A549细胞侵袭和迁移能力(P0. 05)。结论:SphK1可能通过ERK1/2通路降低E-cadherin蛋白水平、提高fibronectin蛋白水平,并促进NSCLC细胞的侵袭和迁移。     

土荆皮乙酸通过PI3K/AKT通路抑制肺腺癌细胞A549上皮-间质转化

目的:探讨土荆皮乙酸(PAB)对TGF-β1介导的人肺癌细胞A549上皮-间质转化(EMT)及侵袭能力的影响及作用机制.方法:采用Transwell小室实验检测PAB对A549细胞迁移、侵袭能力的影响.免疫荧光法检测上皮标志蛋白E-钙黏蛋白(E-Cad)表达.Western blot检测上皮相关标志物E-Cad、α-连...     

木犀草素逆转由TGF-β1诱导的人肺癌细胞上皮-间充质转化的实验研究

目的:探讨在肺癌A549细胞中木犀草素(luteolin)对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)诱导的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)及细胞侵袭的影响。方法:将不同浓度(5、10、20、40、80和160μmol/L)的luteolin作用于肺癌A549细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力;TGF-β1诱导肺癌A549细胞建立EMT模型,加入不同浓度luteolin处理;倒置显微镜观察细胞形态的变化;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化; Western blot法检测细胞中EMT标志蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的蛋白表达情况。结果:Luteolin抑制肺癌A549细胞的生长,并呈一定的时间-剂量依赖关系(P0.05),luteolin作用24 h的IC_(50)为68.79μmol/L,48 h的IC_(50)为47.86μmol/L。TGF-β1诱导的肺癌A549细胞发生EMT。Luteolin显著抑制TGF-β1诱导肺癌A549细胞的侵袭能力(P0.01)。Luteolin能逆转TGF-β1诱导的肺癌A549细胞EMT形态的改变,同时,Western blot法检测也显示luteolin可逆转TGF-β1诱导的肺癌A549细胞EMT标志蛋白E-cadherin表达的下调和vimentin表达的上调(P0.01)。结论:Luteolin逆转TGF-β1诱导肺癌A549细胞的EMT,同时对肺癌细胞的侵袭和转移有一定的抑制作用。     

MicroRNA-145通过丝裂原活化蛋白激酶和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶通路调控肺癌A549细胞系转移及侵袭

目的 探讨microRNA-145(miR-145)对非小细胞肺癌A549细胞转移、侵袭及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（PI3K/AKT）通路的作用。 方法 将非小细胞肺癌A549细胞分成miR-145模拟物（mimics）组和negative-mimics组（miR-NC）以及antago miR-145组（抑制剂组）和antago miR control 组（antago-NC）,采用Transwell迁移实验及基质胶侵袭实验等检测miR-145对人非小细胞肺癌A549迁移、侵袭能力的影响;Western blotting方法分析miR-145对MAPK和PI3K/AKT通路的影响。此外,采用细胞外调节蛋白激酶（ERK）及AKT的通路抑制剂分别作用于A549细胞系,检测A549细胞迁移、侵袭能力的改变。 结果 miR-145 mimics组穿过细胞数（90.67±10.33）明显少于miR-NC组（175.33±23.67）,miR-145 mimics组穿过基质胶的细胞数（153.33±22.33）少于miR-NC组 (77.33±13.67）,P<0.05;antago-NC组通过小室的细胞数量以及穿过基质胶的细胞数量明显少于antago miR-145组（P<0.05）,结果说明,miR-145具有抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移、侵袭的能力;miR-145 mimics转染可分别抑制A549细胞中90%、78%以及73%的ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,antago miR-145转染可促进A549细胞中ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,增加115%、125%以及129%,而当抑制MAPK通路及PI3K/AKT通路的激活后,A549细胞的转移及侵袭能力下降。 结论 miR-145通过MAPK和PI3K/AKT通路调控肺癌A549细胞转移及侵袭。     

低氧诱导的小窝蛋白-1上调参与人肺腺癌细胞A549迁移和侵袭

 目的:探讨低氧诱导剂二氯化钴（CoCl2）对小窝蛋白-1（Cav-1）生成的调节作用及后者对人肺腺癌A549细胞迁移、侵袭的影响。方法:检测肺癌患者伴恶性胸水（MPE）和结核性胸膜炎患者胸水（TBPE）中Cav-1和缺氧诱导因子(HIF)-1α浓度,比较两者相关性;以CoCl2和（或）HIF-1α抑制剂YC-1作用于A549细胞ELISA法检测细胞上清Cav-1和HIF-1α浓度;分别采用细胞划痕实验及Transwell小室侵袭实验研究CoCl2刺激表达的Cav-1对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果:MPE中Cav-1和HIF-1α浓度明显高于TBPE,两组患者胸水中Cav-1与HIF-1α均呈正相关。CoCl2浓度和时间依赖性诱导A549细胞Cav-1和HIF-1α生成,200 μmol/L或24 h达到峰值;浓度>200 μmol/L或作用时间超过24 h则呈现浓度或时间依赖性抑制。HIF-1α抑制剂YC-1浓度依赖性抑制HIF-1α和Cav-1生成。CoCl2浓度依赖性增强A549细胞迁移和侵袭,200 μmol/L作用最强;YC-1对上述过程产生抑制效应。结论: 肺癌患者胸腔积液中Cav-1浓度升高,低氧诱导Cav-1生成的变化可能参与了A549细胞迁移和侵袭,HIF-1α可能对Cav-1生成发挥影响。     

SM22α对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:探究平滑肌22α蛋白(SM22α)对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子机制。方法:通过慢病毒转染人结直肠癌细胞HCTL16构建SM22α过表达细胞,应用细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力的变化;使用RT-qPCR检测细胞SM22αmRNA表达的改变;通过Western blot法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和SM22α蛋白水平。结果:成功构建HCT116过表达SM22α细胞;SM22α过表达细胞的侵袭和迁移能力减弱(P0.05);SM22α过表达抑制p-ERK和MMP-9的蛋白水平(P0.05)。结论:SM22α通过抑制ERK/MMP-9信号通路调节结直肠癌细胞侵袭和迁移能力。     

葡萄糖转运蛋白1抑制剂BAY-876对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的影响

目的 探讨BAY-876对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的影响及可能机制。方法 利用CCK-8实验检测BAY-876对肺癌细胞增殖的影响,利用Transwell实验分析BAY-876对肺癌细胞迁移和侵袭的影响,利用荷瘤小鼠模型检测BAY-876对肿瘤生长的影响,免疫组织化学法检测各组移植瘤组织中ITGβ1蛋白的表达水平。结果 BAY-876抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,同时抑制裸鼠移植瘤的生长,明显缩小肿瘤体积;BAY-876处理后移植瘤组织中ITGβ1蛋白表达降低;过表达ITGβ1逆转了BAY-876对A549细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 BAY-876可能通过抑制ITGβ1蛋白的表达抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长。     

HDAC1调控Wnt/β-catenin信号通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平。在MDA-MB-231细胞中转染HDAC1 si RNA,RT-qPCR和Western blot测定HDAC1的表达水平,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定凋亡,Western blot测定细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved caspase-3的蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理下调HDAC1表达后的乳腺癌细胞,测定细胞活力和凋亡。结果:乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平均明显高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P 0. 01),并且MDA-MB-231细胞中的HDAC1水平最高。HDAC1 si RNA可以降低乳腺癌细胞中HDAC1的m RNA和蛋白水平。敲减HDAC1表达后的MDA-MB-231细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3水平升高,β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白水平降低(P 0. 05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转HDAC1下调诱导的MDA-MB-231细胞凋亡和细胞活力降低,减少cleaved caspase-3的水平(P 0. 05)。结论:敲减HDAC1的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导乳腺癌细胞凋亡。     

普鲁卡因抑制肺癌细胞生长和运动的机制研究

目的 探索普鲁卡因抑制ERK1/2和p38 MAPK的磷酸化对肺癌细胞A549生长和运动的影响.方法 将对数生长期细胞分为对照组、普鲁卡因组、阳性对照组、ERK1/2组、p38 MAPK组、普鲁卡因+ERK1/2组和普鲁卡因+p38 MAPK组.检测各组细胞生长、侵袭和迁移;Western印迹检测Caspase-3、E-cadherin和N-cadherin表达、ERK1/2和p38 MAPK的磷酸化水平.结果 与对照组比,普鲁卡因组和阳性对照组细胞克隆形成率、侵袭力和迁移力降低(P<0.05),Caspase-3和E-cadherin蛋白表达上升(P<0.05),N-cadherin蛋白表达、p38 MAPK和ERK1/2磷酸化水平下降(P<0.05),ERK1/2组和p38 MAPK组细胞克隆形成率和侵袭力升高(P<0.05);与ERK1/2组和p38 MAPK组相比,普鲁卡因+ERK1/2组和普鲁卡因+p38 MAPK组细胞克隆形成率和侵袭力下降(P<0.05).结论 普鲁卡因可以抑制ERK1/2和p38 MAPK的磷酸化,抑制肺癌细胞A549的生长和运动能力.     

AKT1负性调控乳腺癌细胞迁移的机制研究

目的:明确AKT1负性调控乳腺癌细胞迁移的分子机制,为乳腺癌转移的防治提供新思路和新靶点。方法:以乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞为研究对象,采用RNA干扰技术敲减AKT1的表达,Western blot检测AKT1总蛋白、β-连环蛋白(β-catenin)总蛋白和核蛋白的表达,免疫荧光检测β-catenin在乳腺癌细胞中的定位,Transwell迁移实验探究β-catenin的核转位是否参与AKT1负性调控乳腺癌细胞迁移的过程。结果:敲减AKT1表达后,β-catenin总蛋白与核蛋白的表达明显上调,乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的迁移能力也明显增强,使用XAV-939抑制β-catenin的核移位后,敲减AKT1表达引起的乳腺癌细胞迁移能力的增强也明显下降。结论:AKT1对乳腺癌细胞迁移的负性调控可能是由β-catenin核转位介导的。     

Raptor通过Wnt3a/β-catenin信号通路对乳腺癌侵袭与转移的作用

目的探讨Raptor是否可以通过Wnt3a/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。方法采用免疫印迹法(Western blotting)检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231(MDA231)中Raptor蛋白的表达情况;采用小RNA(RNAi)干扰技术将质粒转染MDA231,将过表达质粒转染MCF-7;趋化运动实验检测乳腺癌细胞的运动能力;Transwell侵袭实验检测乳腺癌细胞的侵袭能力;Western blotting检测上皮细胞-间充质转化(EMT)标志物的表达情况;核质分离实验检测β-联蛋白(β-catenin)的转核情况。结果 Western blotting法检测结果显示,Raptor在低转移细胞系MCF-7中低表达,而在高转移细胞系MDA231中高表达。转染后,SiRaptor/MDA231细胞组中Raptor蛋白的表达明显下降,MCF-7/Raptor细胞组中Raptor蛋白的表达明显升高,表明转染成功。用Wnt3a刺激处理后,趋化运动和Transwell侵袭实验结果显示,SiRaptor/MDA231细胞组运动和侵袭能力明显降低,MCF-7/Raptor细胞组运动和侵袭能力明显增强。Western blotting法检测结果显示,用Wnt3a和抑制剂Dkk1不同处理后,SiRaptor/MDA231细胞组中上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)上调,波形蛋白(vimentin)下调,细胞核中β-catenin的表达降低,而MCF-7/Raptor细胞组中E-cadherin蛋白下调,vimentin蛋白上调,β-catenin蛋白的表达升高。结论 Raptor能通过Wnt3a/β-catenin信号通路促进EMT的发生,进而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。     

Maspin在非小细胞肺癌A549细胞生物学行为中的作用

目的:探讨乳腺丝氨酸蛋白酶抑制物(maspin)对于非小细胞肺癌细胞生物学有何影响及其作用机制。方法:PCR扩增人类maspin编码区全长,并构建maspin过表达载体,转染A549细胞。药物筛选出稳定高表达maspin蛋白的细胞株,并通过real-time PCR和Western blot鉴定。通过x Celligence系统实时动态观测转染后A549细胞的生长、迁移和侵袭情况。利用Western blot和real-time PCR的方法对此细胞生物学变化的相关基因进行分析,探讨相应的作用机制。结果:成功构建过表达Maspin的载体MSCV-maspin,并获得稳定高表达maspin的A549细胞株(A549-maspin)。A549-control细胞和A549-maspin细胞生长曲线无差异,但是迁移和侵袭曲线有显著差异。在A549-maspin细胞中integrinβ1的表达水平低于A549-control细胞。结论:Maspin对于A549细胞的生长无影响,但是抑制了A549细胞的迁移和侵袭能力,并且此抑制作用与integrinβ1相关。     

骨髓基质细胞介导的微环境对人肺腺癌A549细胞的作用

目的:探讨肿瘤微环境中人骨髓基质细胞HS-5对人肺腺癌A549细胞的作用及机制。方法:采用HS-5细胞条件培养基(HS-5 cell-conditioned medium,HS-5-CM)处理A549细胞,分别通过MTT实验和划痕愈合实验观察A549细胞的活力和迁移能力,应用q PCR检测CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)的表达;加入丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinases,MAPK/ERK)通路抑制剂U0126后,应用Western blot法检测MAPK/ERK信号通路活化相关蛋白ERK及其磷酸化水平,划痕愈合实验检测抑制MAPK/ERK通路对HS-5-CM效果的影响,应用Western blot检测CX3CR1的表达情况。结果:HS-5-CM可以促进A549细胞的活力和迁移能力(P0.01),同时A549细胞中CX3CR1的表达升高(P0.05)。MAPK/ERK通路抑制剂U0126可以有效抑制HS-5-CM处理后MAPK/ERK通路的激活(P0.01),抑制HS-5-CM促进A549细胞迁移的能力(P0.01),同时下调CX3CR1的表达(P0.05)。结论:HS-5细胞介导的微环境可以促进A549细胞的活力和迁移,其机制可能涉及MAPK/ERK信号通路的活化和CX3CR1的表达。     

M3R激动剂通过激活PI3K/AKT信号途径促进肺癌细胞A549的上皮间质转化

目的:探讨毒蕈碱胆碱受体3(muscarinic receptor 3,M3R)激动剂卡巴胆碱促进人肺癌A549细胞上皮间质转化的可能信号通路。方法:用400μmol/L卡巴胆碱刺激人肺癌A549细胞,在倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化,应用划痕愈合实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力;应用q PCR技术检测上皮间质转化相关蛋白波形蛋白(vimentin)和E钙黏蛋白(E-cadherin)m RNA水平的变化;应用Western blot技术检测p-AKT、vimentin和E-cadherin蛋白水平的变化。结果:卡巴胆碱刺激人肺癌A549细胞后,细胞形态发生明显改变,由不规则多边形逐渐向梭形转化、细胞间紧密结合逐渐变得松散,细胞迁移和侵袭能力增强;vimentin的m RNA和蛋白表达量明显增加,E-cadherin的m RNA和蛋白水平降低,磷酸化的AKT蛋白水平增加,且这些变化均可被M3R特异性抑制剂4-DAMP所抑制(P0.05)。结论:卡巴胆碱可通过激活PI3K/AKT信号途径促进人肺癌A549细胞发生上皮间质转化。     

人雌激素β受体RNAi反转录病毒载体在人成骨样MG63细胞中的表达

背景：目前已有较多关于雌激素α受体基因如何参与骨代谢的研究,而对雌激素β受体基因如何参与骨代谢的研究则相对较少。 目的：构建人雌激素β受体RNAi反转录病毒表达载体,并通过病毒介导其在人成骨样MG63细胞中表达。 方法：根据GeneBank数据库提供的雌激素β受体基因核苷酸序列,选择设计3条针对人雌激素β受体干扰靶序列,并与pRNAT-H1.4/ Retro质粒定向连接,构建真核表达载体pRNAT-H1.4/Retro-雌激素β受体-shRNA,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。将pRNAT-H1.4/Retro-雌激素β受体-shRNA经脂质体转染至293细胞包装成反转录病毒。将包装好的反转录病毒,以空白及非特异性shRNA作为对照,感染人成骨样MG63细胞株。 结果与结论：3个连接了雌激素β受体-shRNA的重组质粒经酶切鉴定分析证实目的序列己插入到预计位点,符合设计要求,测序鉴定表明重组质粒中含有针对雌激素β受体基因目的序列,表明重组质粒构建成功。并经脂质体转染至293细胞后成功包装成反转录病毒。反转录病毒载体能高效、稳定的感染人成骨样MG63细胞株,感染效率为70%左右。包装后的3种雌激素β受体-shRNA反转录病毒均能高效、稳定的感染人成骨样MG63细胞,并显著抑制雌激素β受体的表达。其中以雌激素β受体-shRNA3为最佳的干扰序列。     

慢性缺氧应激可能通过EMT增强乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为

目的:探讨慢性缺氧应激对人乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的影响及可能机制。方法:将人乳腺癌MCF-7细胞分为缺氧组(1%O_2、5%CO_2和94%N_2)和正常对照组(常氧)进行培养。利用MTT法、CCK-8实验、细胞直接计数法及细胞侵袭和迁移实验对MCF-7细胞活力、增殖及侵袭和迁移能力进行检测;用软琼脂集落形成实验及Matrigel 3D培养技术检测MCF-7细胞非锚定生长能力及极性改变情况;利用MCF-7细胞构建裸鼠皮下种植瘤模型,检测慢性缺氧应激对体内肿瘤生长及肺转移的影响;利用倒置显微镜观察MCF-7细胞形态改变;Western blot检测低氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)和磷酸化的糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在缺氧环境下表达水平的改变,以及E-钙黏连蛋白(E-cadherin)、N-钙黏连蛋白(Ncadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、MMP-9等上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达水平。结果:与正常对照组相比较,慢性缺氧组MCF-7细胞活力、增殖能力及侵袭迁移能力增强,细胞非锚定生长能力提高且在3D培养系统更容易发生极性改变,呈现侵袭样生长,体内生长及转移能力增强;除了HIF-1被缺氧诱导表达升高外,GSK-3β呈现活化趋势,且上皮样标志物E-cadherin蛋白表达水平明显下降,而间充质样标志物N-cadherin、vimentin、MMP-3和MMP-9蛋白表达水平明显升高。结论:慢性缺氧应激促进了乳腺癌细胞恶性生物学行为,且其机制可能与EMT有关。