Notch1信号通过TRAF6参与TLR4介导的NF-κB激活

目的观察Notch1和TLR4信号交叉调控NF-κB激活并探讨其可能的作用机制。方法体外培养RAW264.7细胞,LPS刺激RAW264.7细胞后检测Notch1信号激活以及Notch1信号抑制剂DAPT对TNF-α、IL-6和IL-1β表达的影响,Western blot检测DAPT对IKKα/β磷酸化以及NF-κB p65活化的影响,并检测DAPT对TLR4信号通路IKKα/β上游信号My D88和TRAF6表达的影响。结果 LPS刺激RAW264.7细胞后能显著提高Notch1信号蛋白NICD和目的蛋白Hes1表达,DAPT能明显抑制NICD和Hes1的表达。LPS诱导TNF-α、IL-6和IL-1β表达和释放能被DAPT抑制但被Notch1信号激动剂jagged1增强。DAPT能够抑制LPS介导的TRAF6表达和IKKα/β磷酸化,促进NF-κB p65核转位,但DAPT对LPS诱导My D88的表达没有明显的影响。结论 Notch1和TLR4信号存在交叉对话,Notch1通过TRAF6调控NF-κB活化参与TLR4介导的免疫应答。     

LRRK2/NF-κB信号对BCG诱导巨噬细胞RAW264.7炎症应答的调控

目的:探讨富亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)在巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用机制。方法:用结核分枝杆菌疫苗株卡介苗(BCG)感染巨噬细胞RAW264.7,菌落形成单位(CFU)计数检测结核分枝杆菌生存率;酶联免疫吸附法测定白细胞介素(IL)-1β、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)表达水平;q PCR和Western blot法分别检测相关m RNA和蛋白的表达。结果:BCG感染的巨噬细胞RAW264.7中LRRK2的m RNA和蛋白表达均显著上调,并刺激RAW264.7细胞释放大量细胞因子。此外,沉默LRRK2明显抑制BCG感染巨噬细胞的分枝杆菌存活率;同时,沉默LRRK2降低BCG刺激诱导分泌的促炎细胞因子IL-1β、IL-6和IFN-γ。更为重要的是,LRRK2可能通过正调控NF-κB通路调节BCG诱导的炎症应答进程。结论:LRRK2/NF-κB信号正调控BCG刺激诱导的巨噬细胞炎症应答进程。本研究结果为结核病在基因水平上的诊断和治疗提供了实验依据。     

miR-21通过NF-κB信号通路影响血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞炎症因子表达

目的探讨miR-21对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小球系膜细胞增殖和炎症因子的影响。方法以AngⅡ诱导体外培养人肾小球系膜细胞HMC,在AngⅡ诱导的HMC细胞中转染miR-21模拟物。采用实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,Western blot检测NF-κB信号通路核心分子IκBα和p65蛋白及磷酸化水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症相关因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。采用NF-κB信号通路激活剂PMA处理,检测对炎症因子表达的影响。结果 AngⅡ组HMC细胞中miR-21表达水平较Control组降低(P0.05),细胞增殖能力明显升高(P0.05),炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达升高(P0.05)。进一步在AngⅡ组过表达miR-21后,IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著降低(P0.05),细胞增殖能力明显降低(P0.05),IL-6、IL-1β和TNF-α的表达亦降低(P0.05)。NF-κB信号通路激活剂处理后,IL-6、IL-1β和TNF-α的含量较AngⅡ+miR-21组升高(P0.05)。结论过表达miR-21能够通过NF-κB信号通路调控AngⅡ诱导的HMC细胞增殖和炎症因子的表达。     

LXR-ABCA1/ABCG1通路对BCG感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的调控作用

目的 揭示LXR-ABCA1/ABCG1通路对BCG感染后巨噬细胞凋亡和炎性反应的调控作用。方法 采用T0901317预处理RAW264.7巨噬细胞2 h和BCG感染24 h,设置4个实验组：对照组、T0901317组、BCG感染组和T0901317+BCG感染组。采用Western blot方法检测凋亡相关蛋白cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase8、cleaved-Caspase9和TLR信号通路相关蛋白TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6、p-NF-κB p65、IRF3、TBK1的表达,采用ELISA方法检测细胞培养上清中促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的含量。结果 与对照组比较,BCG感染组凋亡相关蛋白cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase8、cleaved-Caspase9及依赖MyD88途径蛋白TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6、p-NF-κBp65的表达均上调（P<0.01）,促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平上升（P<0.01）;与BCG感染组相比,T09013...     

LLDT-8对类风湿关节炎滑膜细胞NF-kB信号通路的影响

研究新雷公藤衍生物雷藤舒[(5R)-5-hydroxytriptolide,LLDT-8]对TNF-α联合IL-17诱导的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)NF-κB信号通路及其下游IL-6、IL-8表达的影响。体外培养FLS,TNF-α联合IL-17体外诱导FLS,ELISA法检测FLS上清液中IL-6、IL-8的含量;RT-PCR法检测FLS中IL-6、IL-8mRNA的表达;Western blotting检测FLS p-p65、p-IκBα的表达;免疫荧光染色法检测FLS NF-κB p65的核转运。研究发现LLDT-8可抑制NF-κB信号通路下游炎性因子IL-6、IL-8的表达;LLDT-8可抑制FLS NF-κB信号通路的IκBα磷酸化、p65活性;LLDT-8可显著抑制TNF-α联合IL-17诱导的NF-κB p65向FLS核内移位。由此LLDT-8可能通过调控NF-κB信号通路的活化,抑制IL-6、IL-8表达最终达到抗炎作用,将为进一步的临床应用提供实验依据。     

miR-125b参与TRAF6影响的人胰腺导管上皮屏障作用

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)对人胰腺导管上皮细胞系HPDE6C7屏障的影响,以及miR-125b与TRAF6的靶向结合关系。方法用重组慢病毒感染上调HPDE6C7细胞的TRAF6表达。Western blot检测核因子κB(NF-κB)通路蛋白和紧密连接蛋白occludin和claudin-1的表达量;Transwell小室法检测单层HPDE6C7细胞的异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)透过率以评估上皮屏障功能;双荧光素酶报告基因实验检测miR-125b与TRAF6是否存在靶向结合关系。结果经重组慢病毒感染并上调TRAF6基因表达后,HPDE6C7细胞的NF-κB p65、TAK1和TAB1蛋白表达水平上升(P0.05),occludin和claudin-1蛋白表达水平下降(P0.05),单层细胞通透率明显上升(P0.05);双荧光素酶报告基因实验证实TRAF6与miR-125b靶向结合。结论 TRAF6通过调控NF-κB信号通路影响胰腺导管上皮屏障功能;miR-125b可能通过与TRAF6靶向结合抑制该作用。     

沉默NF-κB p65基因下调TNF-α诱导的肺泡上皮细胞的炎症反应

目的建立急性肺损伤体外细胞炎症模型,探讨NF-κB p65基因沉默减轻细胞炎症、保护肺结构细胞的可行性。方法以TNF-α(10 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549),运用RNA干扰技术沉默NF-κB p65基因,采用RT-PCR及Westernblotting法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β、IL-8、IL-10等炎症因子浓度。结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因水平上调NF-κB p65的表达,并增加NF-κB蛋白的核转位,上调细胞培养上清中IL-1β、IL-8、IL-10的浓度;预转染NF-κB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65表达,降低上述各炎症因子浓度(P<0.05)。结论急性肺损伤体外细胞炎症模型构建成功,RNA干扰技术能有效沉默该模型NF-κB p65基因,下调炎症反应水平,保护肺泡上皮细胞,为急性肺损伤免疫调控机制的研究和基因靶向治疗提供实验依据。     

不可分型流感嗜血杆菌通过p38 MAPK和NF-κB依赖的方式上调IL-8的表达

目的：探讨不可分型流感嗜血杆菌（NTHi）致肺泡上皮细胞炎症反应的分子机制。方法：A549肺泡上皮细胞株与NTHi（感染复数：10）共孵育15 min、30 min后收集细胞,用Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）的磷酸化;4 h后用流式细胞仪检测胞内NF-κB p65亚单位的表达。预先用p38 MAPK抑制剂（SB203580）和NF-κB抑制剂（PDTC）与A549细胞共孵育1 h,然后加入NTHi,24 h后收集上清,以酶联免疫吸附法检测白介素8（IL-8）的水平。结果： NTHi能迅速地诱导p38 MAPK通路的磷酸化。 NTHi刺激4 h后A549细胞胞内NF-κB p65的表达较与未加细菌组明显增加（P<0.05）。NTHi刺激A549细胞24 h后上清中的IL-8较未加细菌组显著增加,差异显著（P<0.05）。与细菌攻击组比较,阻断p38 MAPK或NF-κB通路,能显著地降低A549细胞生成IL-8（P<0.05）。结论：NTHi 以p38 MAPK和NF-κB依赖的方式诱导肺泡上皮细胞的炎症反应。     

人呼吸道合胞病毒北京地区A亚型ON1基因型地方株感染A549细胞转录组学分析

目的应用转录组测序方法, 分析北京地区人呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)A亚型优势流行基因型ON1地方株感染A549细胞后差异表达基因, 为RSV防治提供潜在靶点。方法选用已经过全基因组测序确定为RSV A亚型ON1基因型的地方株(61397-ON1)感染A549细胞, 提取总mRNA, 通过转录组测序筛选出与未感染的A549细胞为对照的差异表达基因, 对其进行GO分析、KEGG通路分析, 同时随机选择6个差异表达倍数大于2倍的基因进行qRT-PCR验证。结果以未感染的A549细胞为对照, 筛选出1 632个差异表达基因, 其中807个基因表达上调, 825个基因表达下调。差异基因主要参与细胞因子反应以及MAPK级联反应正向调控等免疫应答相关生物过程, 并在MAPK信号通路、NOD样受体信号通路、p53信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路及NF-κB信号通路发生了富集。选择的6个差异表达基因qRT-PCR验证结果与转录组数据趋势一致。结论 RSV A亚型ON1基因型毒株感染A549细胞后的差异表达基因主要参与细胞因子应答及免疫相...     

过表达SOX2对BCG诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞中TLR4/TBK-1/IRF3信号炎性反应的影响

目的探讨SOX2对肺泡Ⅱ型上皮细胞感染结核分枝杆菌后炎性反应的调控作用。方法利用过表达SOX2慢病毒感染肺泡上皮A549细胞系,嘌呤霉素筛选建立稳定过表达SOX2的A549细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测过表达SOX2细胞系的功能,Western blot和ELISA方法检测SOX2在肺泡Ⅱ型上皮细胞感染结核分枝杆菌后炎性相关蛋白及炎性因子的表达。结果成功构建过表达SOX2稳转细胞系,细胞中SOX2基因和蛋白均高表达(P0.01)。用Western blot检测TLR4信号通路相关蛋白表达情况,过表达SOX2组与对照组(NC)相比较,TLR4、TRAF3、TBK-1和IRF-3蛋白表达均上调且差异极显著(P0.01)。BCG刺激下,TLR4/TBK-1/IRF3相关蛋白均高表达,过表达SOX2减弱了BCG诱导的TLR4/TBK-1/IRF3相关蛋白的高表达,炎症因子IL-6和TNF-α亦表现出相同趋势。结论过表达SOX2能够减弱BCG诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症反应。     

IL-4诱导THP-1细胞表达DC-SIGN的信号通路调节研究

目的 研究IL-4诱导THP-1细胞表达DC-SIGN的信号调节通路,探索DC -SIGN表达的信号调控网络.方法 以佛波脂(PMA)刺激THP-1细胞24h后加入IL-4作用48 h诱导DC-SIGN的表达,并设ERK阻断剂、NF-κB阻断剂、JAK-STAT阻断剂和MAPK阻断剂处理组.用RT-PCR检测DC-SIGN的mRNA表达,Western blot检测胞质内DC-SIGN蛋白的表达,流式细胞术检测细胞表面DC-SIGN的表达.另外,提取IL-4诱导0、10、20、30、60和120 min的THP-1细胞胞质和胞核蛋白,Western blot检测不同信号通路的信号蛋白及其磷酸化蛋白的变化.结果 IL-4可以大幅提高DC-SIGN在THP-1细胞上的表达,包括mRNA和胞膜蛋白水平.在mRNA、胞质和细胞表面蛋白表达3个水平上,ERK通路阻断剂阻断效果最好,几乎完全阻断了IL-4的诱导效果,JAK-STAT和NF-κB通路阻断剂具有部分阻断效果,而p38通路阻断剂无阻断效果.信号蛋白检测结果显示,IL-4诱导0～120 min内,胞质磷酸化ERK1/2、磷酸化STAT6以及NF-κBp65、NF-κBp50、磷酸化IKB和磷酸化AKT随时间推移浓度逐渐升高,而p38MAPK及其磷酸化蛋白浓度无明显改变.胞核内胞质磷酸化ERK1/2、磷酸化STAT6以及NF-κBp65和NF-κBp50随时间推移浓度逐渐升高.结论 ERK、JAK-STAT和NF-κB通路参与了DC-SIGN启动子的活化,其中以ERK通路为主.     

IL-17通过NF-κB信号通路参与胃癌发生发展的免疫调控

目的探讨白介素-17(IL-17)通过NF-κB信号通路参与胃癌发生的分子机制。方法选取甘肃省武威肿瘤医院胃癌患者30例及同一时间在医院体检的健康人30名;酶联免疫吸附法检测胃癌患者及健康人血清中IL-17、IL-6和IL-8的表达;用HE染色法观察胃癌患者胃组织病理学变化;免疫组织化学法检测胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织及远离癌组织的胃组织中IL-17、NF-κB p65、IKK-β和IL-6的表达。Western blot检测胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织及远离癌组织的胃组织IL-17、NF-κBp65、pNF-κB p65、IKK-β和IL-6的表达。结果与对照组相比,IL-17、IL-6和IL-8与在胃癌患者血清中表达上调(P0.05);IL-17、NF-κB p65、IKK-β和IL-6在胃癌组织中的表达明显高于正常及癌旁组织(P0.05)。与正常胃组织相比,胃癌组织中IL-17、NF-κB p65、pNF-κB p65、IKK-β和IL-6表达增加(P0.05);癌旁组织中pNF-κB p65、IKK-β和IL-6表达增加(P0.05)。与癌旁组织相比,胃癌组织中IL-17、NF-κB p65、pNF-κB p65、IKK-β和IL-6表达增加(P0.05)。结论 IL-17可能通过NF-κB信号通路刺激IL-6参与胃癌的免疫调控以及促进胃癌的发生发展,为胃癌发病机制提供新的见解。IL-17可能作为胃癌的临床治疗潜在靶点。     

miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤北大核心CSCD

目的:探究miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:进行PC12细胞培养并分组:Normal组(正常PC12细胞)、NC组(缺血性处理的PC12细胞,转染阴性对照质粒)、Model组(缺血性处理的PC12细胞)、miR-410-3p mimic组(缺血性处理的PC12细胞,转染miR-410-3p过表达质粒)、HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,转染HMGB1过表达质粒)、miR-410-3p mimic+HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,共染miR-410-3p过表达和HMGB1过表达质粒)。双荧光素酶报告实验验证miR-410-3p和HMGB1靶向关系。Western blot检测各组细胞中HMGB1、NF-κB p65的蛋白表达情况,qRT-PCR检测miR-410-3p表达情况。CCK8和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。ELISA检测各组细胞炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量。结果:miR-410-3p与HMGB1存在靶向关系。与Normal组相比,其余组细胞中miR-410-3p表达显著降低,HMGB1表达显著升高(均P<0.05)。与Normal组对比,其余各组细胞的增殖率明显下降,细胞凋亡率,炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量,HMGB1、NF-κB p65水平均明显升高(均P<0.05)。miR-410-3p可促进细胞增殖,降低细胞凋亡率、炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量及NF-κB p65水平,且miR-410-3p可通过负向调控HMGB1的表达,从而影响HMGB1/NF-κB通路对缺血性神经元的调控。结论:miR-410-3p过表达后,可通过抑制HMGB1/NF-κB通路表达,从而影响脑缺血性神经元细胞增殖、凋亡以及炎症损伤。     

Brd3通过促进IL6基因启动子区乙酰基转移酶CBP的募集和组蛋白H3乙酰化修饰促进IL-6产生北大核心CSCD

目的探索巨噬细胞中含bromodomain蛋白3(Brd3)对脂多糖(LPS)诱导的白细胞介素6(IL-6)产生的调控作用。方法利用CRISPR-Cas9技术筛选出Brd3敲除的细胞,以Brd3敲除细胞为实验组,正常表达Brd3的细胞为对照组。100 ng/m L LPS刺激后ELISA检测细胞培养上清中IL-6的水平;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)和丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的表达活化情况;染色质免疫沉淀实验检测IL6基因启动子区乙酰基转移酶CREB结合蛋白(CBP)的募集和组蛋白H3乙酰化修饰水平。结果小鼠腹腔巨噬细胞中Brd3 mRNA和蛋白表达水平在LPS刺激后显著降低。与对照组相比,Brd3敲除细胞中LPS诱导产生的IL-6水平显著降低。NF-κB和MAPK信号通路相关分子的表达无差异;Brd3敲除细胞IL6启动子区乙酰基转移酶CBP的募集显著下降,组蛋白H3的乙酰化水平显著降低。结论 Brd3通过促进IL6启动子区乙酰基转移酶CBP的结合和组蛋白H3的乙酰化修饰,促进巨噬细胞中LPS触发的IL-6的产生。     

SIGIRR过表达抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞NF-κB的活化

目的: 研究单免疫球蛋白白介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对脂多糖(LPS)刺激的肺泡上皮细胞核因子-κB信号通路的调节作用。方法: 以LPS刺激人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549。将含有SIGIRR cDNA 全长的真核表达载体瞬时转染A549细胞,使SIGIRR在A549细胞过表达。用双萤光素酶报告系统检测LPS刺激后A549细胞NF-κB的转录活性,用ELISA法检测LPS刺激后细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)的水平,对比转染与否对上述因子在A549细胞中释放水平的影响。结果: 在A549细胞中,过表达SIGIRR可显著抑制NF-κB的转录活性,同时抑制LPS诱导的细胞因子IL-1β、TNF-α以及IL-6的表达。 结论: SIGIRR过表达可以抑制LPS触发的肺泡上皮细胞中TLR4信号的转导,从而发挥减轻炎症反应、保护肺泡上皮细胞的作用。     

Brd3通过促进IL6基因启动子区乙酰基转移酶CBP的募集和组蛋白H3乙酰化修饰促进IL-6产生

目的探索巨噬细胞中含bromodomain蛋白3(Brd3)对脂多糖(LPS)诱导的白细胞介素6(IL-6)产生的调控作用。方法利用CRISPR-Cas9技术筛选出Brd3敲除的细胞,以Brd3敲除细胞为实验组,正常表达Brd3的细胞为对照组。100 ng/m L LPS刺激后ELISA检测细胞培养上清中IL-6的水平;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)和丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的表达活化情况;染色质免疫沉淀实验检测IL6基因启动子区乙酰基转移酶CREB结合蛋白(CBP)的募集和组蛋白H3乙酰化修饰水平。结果小鼠腹腔巨噬细胞中Brd3 mRNA和蛋白表达水平在LPS刺激后显著降低。与对照组相比,Brd3敲除细胞中LPS诱导产生的IL-6水平显著降低。NF-κB和MAPK信号通路相关分子的表达无差异;Brd3敲除细胞IL6启动子区乙酰基转移酶CBP的募集显著下降,组蛋白H3的乙酰化水平显著降低。结论 Brd3通过促进IL6启动子区乙酰基转移酶CBP的结合和组蛋白H3的乙酰化修饰,促进巨噬细胞中LPS触发的IL-6的产生。     

TRAF3抑制NF-κB引起的肾囊腔形成作用

目的:研究肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)对多囊肾集合管上皮细胞中核因子κB(NF-κB)信号通路及其下游产物表达的影响;观察TRAF3基因过表达的多囊肾集合管上皮细胞形成管状分支结构的变化,探讨TRAF3在多囊肾囊腔形成的发生发展中可能产生的作用。方法:Western blot检测多囊肾集合管上皮细胞和TRAF3基因过表达多囊肾集合管上皮细胞中NF-κB信号通路的变化,同时检测下游凋亡因子Bax及Bid的表达及caspase-3活性变化;通过Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡情况;应用三维(3D)培养法观察多囊肾集合管上皮细胞形成管状分支结构变化的差异。结果:TRAF3的过表达能显著抑制多囊肾集合管上皮细胞中NF-κB信号通路的活性,使下游的Bax及Bid表达显著下调,细胞凋亡明显减少;TRAF3基因过表达多囊肾集合管上皮细胞管状分支结构较多囊肾集合管上皮细胞组明显增多。结论:TRAF3可能通过调节NF-κB信号通路降低Bax及Bid活性,抑制细胞凋亡,从而抑制多囊肾囊腔形成。     

模拟微重力环境下核因子κB信号通路调节MC3T3-E1细胞成骨分化的实验研究

本文旨在研究微重力环境对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响,并进一步探讨微重力环境下核因子κB(NF-κB)信号通路对成骨细胞零重力的响应机制。将MC3T3-E1细胞分别进行正常培养(CON)和模拟微重力培养(SMG),培养期满后观察成骨性相关分子表达变化以及NF-κB信号通路变化情况。结果显示,在微重力条件下,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、一型胶原(CoL-Ⅰ)的基因和蛋白水平表达下调;与此同时,NF-κB信号抑制子α(IκB-α)下调,p65表达显著上调,且二者磷酸化水平升高,细胞培养液中IL-6含量增多。研究表明,微重力环境下NF-κB信号通路可激活并调控成骨细胞分化。     

构架蛋白TRAF对CD154诱导转录因子NF-κB活化的影响

目的　研究构架蛋白TRAF1-6在CD154诱导NF-κB活化信号通路中的作用机制。方法通过流式细胞仪分析TRAF蛋白在Ramos B细胞中的基础表达,转染野生型或显性失活TRAF判断TRAF对NF-κB活化的影响,并研究CD154刺激可诱导哪些TRAF蛋白与CD40免疫共沉淀。结果TRAF1、2、3、5和TRAF6在Ramos B细胞中均有基础表达,转染野生型TRAF6较其他TRAF可更显著诱导NF-κB活化,而转染显性失活质粒对CD154诱导NF-κB活化的抑制作用TRAF6>TRAF5>TRAF2> TRAF3。CD154刺激诱导TRAF2、6与CD40共沉淀。结论TRAF6在CD154诱导NF-κB活化中作用最重要;CD154刺激诱导TRAF2、6与CD40形成免疫复合物。     

衰老细胞促进病毒感染诱导的炎症并抑制病毒复制

目的:探究衰老对病毒感染和病毒复制的影响及机制。方法:利用阿霉素(DOX)诱导人非小细胞肺癌细胞(A549)衰老(衰老组),常规培养的A549细胞为对照组。利用带绿色荧光蛋白标签的水疱性口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV)感染对照组和衰老组A549细胞。选取无特定病原体(SPF)级C57BL/6小鼠，8周龄为年轻组(n=3),15月龄以上为年老组(n=3),腹腔注射VSV病毒1×10⁷PFU/只，24h后采集肝、脾、肺组织。应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测干扰素-β(IFN-β)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)以及病毒复制；蛋白质印迹法(WB)检测核因子κB(NF-κB)信号通路关键蛋白核因子κB p65蛋白、磷酸化核因子κB p65(p-p65)蛋白表达量；荧光倒置显微镜观察VSV病毒和HSV病毒复制。结果:与对照组相比，衰老组细胞周期阻滞蛋白P16、P21显著升高；β-半乳糖苷酶染色阳性细胞也明显增多；两组细胞同时感染VSV病毒，衰老组细胞IFN-β显著降低，而IL-6、IL-1β显著升高；同时NF-κB通路关键蛋白p65、...