足细胞抗原在人类膜性肾病治疗中的研究进展

膜性肾病(membranous nephropathy,MN)是一种器官特异性自身免疫病,发病机制是自身抗体结合足细胞靶抗原后激活补体导致肾小球滤过屏障损伤和蛋白尿.近年研究已发现中性肽链内切酶、M型磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)、醛糖还原酶、超氧化物歧化酶2、α烯醇化酶、1型血小板反应蛋白7A域等足细胞靶抗原.抗PLA2R抗体和肾组织PLA2R抗原是诊断和治疗MN的新兴生物标志物.     

JO—1抗原的制备及其抗体的测定

用兔胸腺丙酮粉(Pel Freeze),通过离心和硫酸铵层析处理提取出一种能与多发性肌炎(PM)、皮肌炎(DM)患者血清中的抗体起反应的Jo 1抗原。用此抗原及抗Jo 1抗体的标准血清与正常人和各种自身免疫病患者进行免疫双扩散法检测,结果在多发性肌炎、皮肌炎患者血清中出现抗Jo 1抗体的沉淀线,并与标准血清完全吻合。说明抗Jo 1抗体的特异性很强。实验中出现其他非抗Jo 1抗体的沉淀线,经鉴定系由于此抗原中尚含Sm、RNP、SSA、SSB抗原所致。     

免疫印迹法在梅毒诊断中的应用

本文报道用免疫印迹法(Immunoblott Ib)检测技术检测梅毒患者血清中抗梅毒螺旋体45kD、15.5kD抗原成份的特异性抗体。实验结果证明这两种抗原成份是梅毒螺旋体的种特异性抗原,与其它螺旋体抗原不发生交叉反应。检测50例梅毒患者结果表明,血清中均含抗该两种抗原成份的抗体,阳性率为100％,40例健康献血员均为阴性,特异性为1.0。本方法简单、特异性强,并可用末梢血代替血清作为实验标本,是目前用于梅毒血清学诊确的一项先进技术。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒结构蛋白

用抗肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体(McAb)5H5与CNBr活化的Sepharose 4B偶联,制成免疫吸附柱,并使粗纯化HFRS病毒抗原(从HFRS病毒感染乳鼠脑中提取)遗过免疫吸附柱。用3M硫氰酸钾洗脱与McAb特异性结合的抗原,结果可见到一个高而窄的蛋白洗脱峰,用McAb-ELISA间接夹心法从与此峰相应的洗脱物中检出了较高的抗原滴     

抗多胺(polyamine)单克隆抗体的制备及临床应用的研究——Ⅰ.抗精脒(Spermidine)单克隆抗体的制备

用碳二亚胺作为接合剂,致精脒-牛血清白蛋白缩合剂制成人工抗原(Spd-BSA),以此复合抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫脾细胞与Sp2/0-Ag-14(Sp2)细胞进行融合实验。经酶联免疫测定法(ELISA)和14-G-精脒放射免疫分析法筛选,获得5个分泌抗SpD单     

IgE的纯化、抗IgE血清的制备及血清中IgE测定的临床应用

<正> 测定血清中 IgE 含量用的 IgE 抗血清,国外基本上是用 IgE 骨髓瘤患者血清中提取的 IgE 免疫动物而成。极少利用小儿高IgE 血清提取抗原。我们从1例皮肤瘙痒症高 IgE 患者血清中提取纯化了 IgE 抗原,并制成特异性兔抗 IgE 血清,建立测定血清中 IgE 方法,并初步应用于临床。     

抗人红细胞M型抗原单克隆抗体的研制及初步应用

应用杂交瘤枝术,用人M型RBC免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞系NS-1融合,筛选出抗M血型抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株13H_2;经过8个多月连续传代培养增殖良好,仍能稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体。细胞培养上清效价1∶512,亲和力11s。通过将此株单抗用于血型检测、标准红细胞谱细胞的鉴定和在法医上检测血痕,均证明此株单抗识别的只是红细胞上的M血型抗原,与其它血型抗原无关。较多克隆抗M型抗原血清特异性强,效价高,亲和力好,是检测MN血型的良好诊断试剂。     

TiO_2纳米管阵列负载盐酸米诺环素前后抗牙周致病菌性能的研究

目的:探讨二氧化钛(TiO_2)纳米管阵列负载盐酸米诺环素(MN)前后对牙龈卟啉单胞菌(Pg)、福塞坦氏菌(Tf)和伴放线放线杆菌(Aa)早期黏附行为的影响。方法:阳极氧化法制备TiO_2纳米管阵列并负载MN。微生物实验分成3组:单纯抛光钛片(Ti)组、TiO_2纳米管钛片(TiO_2)组和负载MN(120μg)TiO_2纳米管钛片(MN TiO_2)组;通过抑菌圈实验评估各组钛片的抗菌性能。结果:Ti组基本没有抗菌作用;TiO_2组的抗Aa、Pg及Tf活性较差,4 h后的抗菌率仅20%左右;负载MN后其抗菌性能增强,4 h后的抗菌率高达77%以上。结论:Ti组没有抗菌作用,若在其表面形成TiO_2纳米管阵列且负载MN则可形成较强的抗牙周致病菌作用。     

McAb亲和层析纯化HFRS病毒50K结构蛋白及其鉴定

先用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法从HFRS病毒感染乳鼠脑中提取出粗制病毒抗原。再选择一株的抗HFRS病毒的McAb(5H5)与CNBr活化Sepharose 4B相偶联,制成免疫吸附柱, 并以上述粗制病毒抗原通过免疫吸附柱。用3M KCNS洗脱与McAb特异性结合的抗原,结果可见到一个明显的蛋白洗脱峰,用ELISA从与此峰相应的洗脱物中检出了较高的抗原滴度。而用从正常乳鼠脑提取的对照抗原通过该免疫吸附柱,同样洗脱,结果洗脱物中未捡出抗原活     

Jo-1抗原的提取和纯化

目的改进从兔胸腺中纯化能用于斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体、Jo-1抗原的方法。方法用PBS提取兔胸腺匀浆中的ENA,经丙酮沉淀上清中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,再经以特异性抗-Jo-1抗血清中的IgG为配体制备的亲和色谱柱对Jo-1抗原纯化,得到高比活的制品。结果100g兔胸腺可制得5～7g丙酮粉,其中的蛋白质含量为19%～24%。经亲和色谱分离的洗脱峰组分约可富集Jo-1抗原1900倍,抗原活性回收率为2.5%,并只对抗-Jo-1抗血清有特异性反应。虽然在SDS-PAGE上洗脱峰组分并非单一条带,但免疫印迹只发现50ku处有阳性条带。在含有MgCl2的水溶液中,高纯度的Jo-1抗原能长时间保持高活性。结论亲和色谱法可从兔胸腺中纯化出满足斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体要求的抗原,并有可能成为大量获取高纯度Jo-1抗原的方法。     

密度梯度离心浓集小鼠新生红细胞在微核试验中的应用

近来研究表明,小鼠受断裂剂或抗有丝分裂剂作用后,外周血红细胞中的微核(MN)出现率可以作为骨髓成红血细胞染色体损伤的指标。急性处理后,计数胞浆含有能着色RNA的新生红细胞中的MN。成年小鼠血液中多色性红细胞(PCE)的出现率约为2%,并随动物的年龄波动。当动物接受化学物质的刺激引起MN大量增加时,其出现率也将减少。为了提高计数MN的效率,作者提出一种应用Percoll密度梯度溶液微     

日本血吸虫完整成虫盐水浸液抗原的化学及免疫学特性

本文报告日本血吸虫完整成虫盐水浸液抗原(ASE)的化学、免疫化学及免疫学性质。实验结果表明ASE中含有蛋白质、糖和类似核酸的物质。它与成虫抗原有相同的抗原成分与虫卵抗原也有共同的决定簇。PAGE结果显示ASE与新鲜成虫经Triton处理后的可溶性部份比较类似.以抗ASE与成虫冰冻切片进行IFA试验的结果证明ASE主要定位于虫的表膜,可以认为ASE主要含有成虫的表膜抗原。本实验中无论用ASE免疫家兔或用抗ASE-γ-G被动免疫小鼠都未能诱导动物产生对攻击感染的抵抗力;但抗ASE在有补体的参与下可在体外促使白细胞粘附在童虫的表面,产生对童虫的攻击作用。     

胃癌相关抗原MGel-Ag的纯化及分析

<正> 胃癌相关抗原的发现对于胃癌的研究及血清学诊断具有重要意义。随着单克隆抗体技术的进展,近年来已发现了一些肿瘤相关抗原,有的对消化道肿瘤的诊断具有一定价值,但对胃癌仍缺乏特异性和敏感性。本实验用一株鼠抗人胃癌单克隆抗体MGel从胃癌组织中纯化出一种胃癌相关抗原并命名为MGel-Ag。     

一组新的胃癌相关抗原MG_5-Ag,MG_7-Ag及MG_9-Ag的纯化及分析

本文应用本室制备的一组特异性强的鼠抗人胃癌单克隆抗体MG_5,MG_7及MG_9,分别与 溴化氢活化的Sepharose 4B交联,制成免疫亲和层析柱,测得交联率分别达93.05％,92.7％,98％。从胃癌组织及胃癌转移性腹水癌细胞中纯化出三种不同的胃癌相关抗原,分别命名为MG_5-Ag,MG_7-Ag及MG_9-Ag。经植物凝集素分析,三种抗原均能与Con-A结合,在100℃     

数学模型在反向火箭电泳中的应用

反向火箭电泳抗原板理论浓度表(表1)是根据贾万钧的抗原抗体反应数学模型,用电子计算机制成的。在反向火箭电泳中,抗原板的制备及抗体浓度的选择比较困难。靠经验法得到一个较理想的抗原板有时需花费较长时间,而且很盲目,也不便于质控。为克服上述缺点,本文以人白蛋白为例将反向火箭电泳抗原板     

细胞培养酶免疫法在检测和分析大肠癌细胞McAb中的应用

由于细胞表面抗原的提纯较难,检测抗细胞类抗原McAb常采用全细胞作抗原。一些学者多采用细胞悬液离心干燥法制备全细胞固相抗原,用免疫酶法进行McAb检测。由于细胞悬液包底,不均匀,以致影响结果的观察。本文报道在制备抗大肠癌HR_(8348)细胞McAb中,将HR_(8348)细胞直接培养于微板孔中,利用其贴壁单层生长的特性,制成包被均     

肝癌相关抗原HAg18的研究及其应用

用抗人肝癌单克隆抗体HAb18亲和层析纯化相应抗原,经SDS-PAGE及免疫印迹试验证实其分子量为61kD。抗原活性条带经高碘酸钠氧化及氯仿-甲醇-冰乙酸处理抗原无丢失,但经胰蛋白酶酶解后失活。PAS及苏丹Ⅲ染色均为阴性。用HAb18ELISA双抗体夹心法可检测肝癌病人血清中抗原水平,阳性率为65.1％(250/384)。HAb18配伍另一肝癌单克隆抗体,制成ELA快速诊断盒,肝癌检出率提高至70.6％(271/384)。免疫酶斑点测定HAg18与AFP、铁蛋白、C-EA无交叉。故认为HAb18是一新的肝癌蛋白性抗原。     

抗鼠肥大细胞单克隆抗体

本文论述了识别肥大细胞亚型及其前体细胞的一种实验手段。将纯度为95%～99%的大鼠腹膜肥大细胞裂解,制成细胞膜非颗粒性抗原,经腹膜免疫小鼠,同时把提纯的完整的肥大细胞注入免疫小鼠的腋淋巴结中。随后,将免疫小鼠的脾细胞与P_3ol 骨髓瘤细胞融合。通过间接免疫荧光法可检测出这种杂交瘤产生了一种抗体,即抗大鼠肥大细胞单克隆抗体(RMC-McAb)。该抗体所作用的靶细胞包括大鼠颗粒细胞、腹膜渗出的单核细胞、巨噬细胞、胸腺细胞和骨髓细     

双抗原夹心ELISA检测抗结核杆菌抗体及初步应用

双抗原夹心ＥＬＩＳＡ检测抗结核杆菌抗体及初步应用鲁严，彭晓红，盛裕芬目前用ＥＬＩＳＡ检测血清中的抗结核杆菌抗体（ＴＢＡｂ）大多为二步法，孵育时间较长，我们建立了双抗原夹心快速ＥＬＩＳＡ检测ＴＢＡｂ获得较好结果，并已制成试剂盒。材料和方法临床确诊的活动...     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病对50,000道尔顿结构蛋白

以HFRS病毒感染的乳小白鼠脑为原材料,用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法制备粗纯病毒抗原。将此粗纯抗原通过抗HFRS病毒McAb与Sepharose 4B偶联制成的免疫吸附柱,并用3M的KCNS洗脱,获得了SDS-PAGE单点纯的特异性病毒结构蛋白。该蛋白分子量为50,000道尔顿,具有较高的抗原滴度和良好的免疫原性。