人巨细胞肺癌裸鼠移植瘤中mts1和nm23-H1表达及其与肺癌淋巴结转移关系

目的 探讨肿瘤转移相关基因mts1和nm23-H1在人巨细胞肺癌裸鼠移植瘤中的表达及其与啼癌淋巴结转移的关系。方法 用高转移的人巨细胞肺癌瘤株PLA-801—D和低转移的人巨细胞肺癌瘤株PLA-801—C在裸鼠中建立转移模型,观察瘤细胞在裸鼠淋巴结及肺中的转移情况;原位杂交检测mts1和nm23-H1mRNA在移植瘤中的表达。结果 PLA-801—D在12只移植裸鼠中均有淋巴结转移,转移率100%,2只裸鼠中有肺转移,转移率17％;PLA-801—C在12只移植的裸鼠中均无淋巴结及肺转移。mts1mRNA在PLA-801—D、PLA-801-C裸鼠移植瘤中阳性表达分别为12例、2例;nm23-H1mRNA在PLA-801—D、PLA-801—C裸鼠移植瘤中阳性表达分别为12例、11例。结论 mts1 mRNA表达与人巨细胞啼癌裸鼠移植瘤淋巴结转移呈正相关,nm23-H1 mRNA表达与人巨细胞肺癌裸鼠移植瘤淋巴结转移不相关。     

nm23-H1基因对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的:研究转染nm23-H1基因对体外培养A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机理。方法:构建nm23-H1基因的真核表达载体,转染到体外培养的人肺腺癌细胞A549中,通过G418筛选出稳定表达克隆,RT-PCR及免疫组化检测nm23-H1在细胞内的表达情况。绘制细胞生长曲线检测nm23-H1基因对细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期,原子力显微镜观察细胞膜表面伪足的超微结构。结果:转染后的肿瘤细胞能稳定表达nm23-H1基因,抑制了肿瘤细胞的增殖。nm23-H1基因没有诱导细胞凋亡但使G1期细胞增加而S期细胞减少,停滞于G0期。转染nm23-H1基因后细胞边缘的伪足减少。结论:nm23-H1基因能抑制体外培养的A549肿瘤细胞的增殖,可能通过改变细胞表面结构减弱细胞的侵袭能力。     

B7-H4基因对SKOV3细胞生长功能的影响

目的： 初步探讨B7-H4基因对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长和致瘤性的影响。方法：RT-PCR法扩增编码基因, 构建真核表达载体PEGFP-N1/B7-H4,以脂质体为载体将重组质粒PEGFP-N1和PEGFP-N1/B7-H4分别导入SKOV3细胞中,筛选建立高表达的细胞株。MTT法绘制体外培养细胞生长曲线,将转染前后的肿瘤细胞分别接种于SCID小鼠的腹部皮下观察其致瘤性。结果：成功构建了人B7-H4真核表达载体,SKOV3/B7-H4细胞高表达B7-H4,转染后肿瘤细胞体外生长速度明显增快。SKOV3/B7-H4细胞在小鼠体内的致瘤性较SKOV3/neo细胞和野生型SKOV3细胞明显升高。结论： B7-H4基因导入细胞后在体外和体内具有明显加快肿瘤生长的作用,可作为肿瘤基因治疗的靶向基因。     

siRNA抑制nm23-H1基因表达对鼻咽癌6-10B细胞生物学行为的影响

目的：采用RNA干扰技术下调nm23-H1基因在鼻咽癌6-10B细胞中的表达,探讨nm23-H1表达下调对6-10B细胞生物学行为的影响。方法：采用脂质体法将nm23-H1基因siRNA(nm23-H1 siRNA)瞬间转染6-10B细胞,Western 印迹检测转染细胞中nm23-H1蛋白的表达水平,然后利用MTT法、流式细胞术和Transwell小室实验分别检测转染6-10B细胞的增殖、细胞周期和体外迁移侵袭等生物学行为的变化;测序检测6-10B细胞nm23-H1基因有无S120G 点突变。结果： nm23-H1 siRNA有效地下调nm23-H1基因的表达, nm23-H1 siRNA转染6-10B细胞的增殖能力增强,S期细胞增多,体外迁移和侵袭能力增强（P<0.05）。6-10B细胞nm23-H1 基因无S120G 点突变。结论：nm23-H1基因具有抑制人鼻咽癌细胞6-10B增殖和体外迁移侵袭的作用。     

TIMP-3基因转染抑制人肺癌细胞系侵袭与转移的研究

目的探讨金属蛋白酶组织抑制因子３（ＴＩＭＰ３）对高转移性人肺巨细胞癌细胞系（ＢＥ１）恶性表型的影响。方法构建含全长人ＴＩＭＰ３ｃＤＮＡ的真核表达载体,用脂质体法转入ＢＥ１细胞。检测转染后ＢＥ１细胞的体外侵袭及裸鼠体内成瘤性及转移能力的变化。结果ＢＥ１细胞在转入ＴＩＭＰ３ｃＤＮＡ后表达ＴＩＭＰ３ｍＲＮＡ,与母系及空载体对照相比,体外侵袭力降低,在裸鼠体内成瘤率降低（对照组６／６只,实验组９／１２只）,成瘤潜伏期延长,转移至肺和淋巴结的能力降低（对照组分别为５／６只和６／６只;实验组分别为１／１２只和５／１２只）。结论特异性上调ＴＩＭＰ３基因的表达可在一定程度上逆转ＢＥ１细胞的恶性表型     

次级淋巴组织趋化因子基因转染对小鼠黑色素瘤细胞生物学特性的影响

目的研究次级淋巴组织趋化因子（SLC）基因转染对小鼠恶性黑色素瘤细胞生物学特性的影响。方法采用脂质体法将小鼠SLC基因转染至小鼠恶性黑色素瘤细胞中,并通过G418筛选出转基因细胞克隆。体外检测SLC基因转染恶性黑色素瘤细胞的增殖,并通过趋化小室法检测细胞培养基上清液中SLC的趋化活性。检测野生型和基因转染的恶性黑色素瘤细胞在体内的致瘤性,并病理检测肿瘤组织中免疫细胞的浸润。结果SLC基因转染的恶性黑色素瘤细胞和野生型恶性黑色素瘤细胞在体外的增殖没有明显差别。分泌于细胞培养基上清液中的SLC表现出了趋化活性。SLC基因转染并没有降低细胞的致瘤性,但是移植瘤的生长明显慢于野生型恶性黑色素瘤细胞移植瘤的生长,并且病理证实SLC基因转染的肿瘤细胞移植瘤内呈现明显的淋巴细胞浸润。结论SLC基因转染在小鼠黑色素瘤能诱导抗肿瘤免疫,有可能被应用于恶性肿瘤的免疫治疗。     

nm23-HI基因对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的：研究转染nm23-H1基因对体外培养A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机理。方法：构建nm23-HI基因的真核表达载体。转染到体外培养的人肺腺癌细胞A549中，通过G418筛选出稳定表达克隆，RT—PCR及免疫组化检测nm23-HI在细胞内的表达情况。绘制细胞生长曲线检测nm23-HI基因对细胞生长的影响，流式细胞仪检测细胞周期，原子力显微镜观察细胞膜表面伪足的超微结构。结果：转染后的肿瘤细胞能稳定表达nm23-HI基因，抑制了肿瘤细胞的增殖。nm23-HI基因没有诱导细胞凋亡但使G1期细胞增加而S期细胞减少，停滞于G0期。转染nm23-HI基因后细胞边缘的伪足减少。结论：nm23-HI基因能抑制体外培养的A549肿瘤细胞的增殖，可能通过改变细胞表面结构减弱细胞的侵袭能力。     

IL-18基因转染对小鼠卵巢癌OVHM体外增殖及体内成瘤的影响

目的:分析转染IL-18基因后,对小鼠卵巢癌OVHM细胞体外增殖、凋亡及体内成瘤的影响,初步探讨IL-18基因转染治疗卵巢癌的应用价值.方法:将逆转录病毒携带的小鼠IL-18基因成功转染至OVHM(OVHM/IL-18),以空载体转染的OVHM(OVHM/LXSN)和野生型(OVHM)作为对照.分别采用MTT、FCM检测体外培养细胞的增殖、凋亡及周期分布.于裸鼠皮下分别接种细胞,观察各组种植瘤生长情况,计算成瘤率;RT-PCR检测瘤组织中IL-18 mRNA表达;FCM和电镜分析肿瘤细胞增殖、凋亡状况.结果:3组细胞的体外增殖未见明显差异,均无明显凋亡现象,增殖指数、细胞周期分布均无明显差异(均P>0.05).接种后,3组裸鼠的成瘤率相同,但OVHM/IL-18组成瘤时间较晚,随瘤龄增长肿瘤生长缓慢,瘤组织中IL-18 mRNA阳性表达.OVHM/IL-18组裸鼠种植瘤细胞可见典型的凋亡现象,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,增殖指数明显降低,凋亡指数明显增高(P<0.01).结论:IL-18基因成功转染后,虽对体外卵巢癌细胞无直接毒性,但可能在体内借助非直接杀伤的其他途径,通过阻断细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡等抑制体内成瘤.     

荧光标记肿瘤转移体内模型的建立

目的 建立一种带荧光标记的肿瘤转移模型并探讨其应用价值.方法 人胃癌MGC-803细胞和小鼠宫颈癌U14细胞进行体外传代培养,转染pEGFP-N1质粒,24h检测转染效率,用无限稀释法筛选稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的单克隆细胞株MGC-803-GFP和U14-GFP.分别体内移植于BALB/c-nn裸鼠和C57BL/6J小鼠,观察成瘤潜伏期,绘制体内生长曲线,利用活体荧光成像系统活体连续观察GFP在体内的表达,观察肺部和淋巴结的转移情况,计算转移率.免疫组织化学检测与转移相关的分子CD44和E-cadherin在移植瘤中的表达.结果 MGC-803细胞和U14细胞pEGFP-N1转染24 h后的转染效率分别为30%和60%.获得了GFP(+)的单克隆MGC-803-GFP细胞株和U14-GFP细胞株.MGC-803-GFP在BALB/c-nu裸鼠和U14-GFP在C57BL/6J小鼠移植成瘤的潜伏期分别是3～5 d和2～4 d,成瘤率均为100%.利用活体荧光成像系统连续观察,可以清楚直观地观察表达GFP的MGC-803-GFP移植瘤在体内的生长,接种后第60天处死全部荷瘤鼠,解剖后仅有1只可见同侧腋窝下淋巴结的转移.接种U14-GFP后,分别在第28、37和52天观察了荷瘤小鼠肿瘤转移的发展过程.在U14-GFP原发瘤体积达到≥5 cm3时,肺部和淋巴结转移率分别为67%和100%.在MGC-803-GFP和U14-GFP的移植瘤中都可以检测到CD44的表达,而无E-cadherin的表达.结论 成功建立了表达绿色荧光蛋白单克隆细胞株MGC-803-GFP和U14-GFP,体内移植建立了荧光标记的肿瘤转移模型.该模型可用于可视化肿瘤体内的研究.     

c-Met基因调控肺腺癌A549细胞放射敏感性

目的探讨上调和下调肺腺癌细胞株A549细胞中c-Met基因表达水平后,该细胞鼠移植瘤放射敏感性的变化情况。方法利用电穿孔法将c-Met siRNA和重组表达载体pc DNA3.1-c-Met分别转染入肺癌A549细胞后采用G418筛选得到稳定转染的肺癌细胞系。转染48 h后用RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中c-Met基因和蛋白表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖活性;克隆形成实验研究分别上调和下调c-Met基因表达水平对肺腺癌细胞株A549放射敏感性的影响;TUNEL法检测细胞凋亡影响,移植瘤实验检测基因沉默和激进c-Met基因表达水平并联合放射射线照射对肺腺癌细胞生长的抑制作用。结果 c-Met下调组中肺癌A549细胞内c-Met基因和蛋白表达水平明显降低,而上调组中的表达水平则得到了明显升高。c-Met下调组肺癌A549细胞放射敏感性升高,c-Met上调组肺癌A549细胞放射敏感性降低(P0.05)。下调组中肺癌A549细胞的增殖活性受到抑制而细胞凋亡率显著增加(P0.05),上调组肺癌细胞的增殖能力明显增强而细胞凋亡率明显降低(P0.05);下调组裸鼠移植瘤的平均体积明显小于对照组,而上调组裸鼠移植瘤的瘤体平均体积则显著大于对照组(P0.05)。结论基因沉默c-Met的基因表达水平能显著降低肺癌细胞的增殖活性,抑制人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长并明显提高移植瘤瘤体的放射敏感性。     

大肠癌中nm23－H_1表达的定量研究及临床意义

为研究肿瘤转移相关基因ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ在人大肠癌中的表达及其与临床病理的关系，应用ＲＴ－ＰＣＲ定量技术，对３６例大肠癌组织中ｎｍ２３－Ｈ１基因表达进行了定量研究。结果表明，大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１表达显著高于正常大肠粘腹；ＤｕｋａｓＤ期中其表达显著低于ＤｕｋｅｓＡ、Ｂ、Ｃ期；有远处转移者其表达亦显著低于无远处转移者，提示：ｎｍ２３－Ｈ１基因可能参与大肠癌的恶性进展，其表达程度与大肠癌远处或广泛转移呈负相关。     

4种癌基因mRNA在胃癌组织中的表达及意义

应用原位分子杂交（ＩＳＨ）技术，检测８８例胃癌组织中Ｋ－ｒａｓ、Ｈ－ｒａｓ、Ｃ－ｍｙｃ和肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３（Ｈ１）ｍＲＮＡ．其阳性结果分别为７８．４％、７０％、５８％和３８．６％，胃癌癌旁移行区正常粘膜和正常胃粘膜上皮的阳性率分别为１８．２％、１７％、１９．３％、２１．６％和０、０、０、３／５，与肿瘤区相比较，除ｎｍ２３外差异均非常显著（Ｐ＜０．０１）。Ｋ－ｒａｓ、Ｈ－ｒａｓｍＲＮＡ表达在在细胞膜内侧，Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ主要表达在细胞核内，ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ表达在胞浆内。４种癌基因表达与组织学类型无关，ｎｍ２３－Ｈ１的表达与胃癌病人有无淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０１）。     

Reduced nm 23-H1 messenger RNA expression in metastatic lymph nodes from patients with papillary carcinoma of the thyroid.

The nm 23 gene product, which possesses nucleoside diphosphate kinase activity, is a possible mediator of cancer cell invasion and metastasis. It has been divided into two distinct gene products, nm23-H1 and nm23-H2. We have developed a method for detecting nm 23-H1 and nm 23-H2 RNA using the polymerase chain reaction, based on the amplification of complementary DNA copies of nm 23-H1 and nm 23-H2 RNA. Using this method, the nm 23-H1 and nm 23-H2 messenger (m)RNA levels in 35 thyroid papillary carcinomas, 11 metastatic lymph nodes from patients with thyroid papillary carcinomas, five thyroid follicular adenomas, and three normal thyroid tissue samples were studied. Both nm 23-H1 and nm 23-H2 mRNA were expressed ubiquitously in normal and malignant thyroid tissues. However, in metastatic lymph nodes no (3 of 11) or weak expression (8 of 11) of nm 23-H1 mRNA was observed, the extent of which was inversely proportional to the degree of cancer cell occupancy, whereas nm 23-H2 mRNA was expressed and the levels were similar to those in other tissue tested. These results show that nm 23-H1 only may play a role in cancer cell invasion and metastasis although the exact mechanisms involved have yet to be elucidated.     

Increased activity of nm23-H1 gene in squamous cell carcinoma of the head and neck is associated with advanced disease and poor prognosis

The present study was undertaken to determine whether the nm23-H1 gene is expressed in squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN) and whether the level of nm23-H1 protein or mRNA in cells vary as they progress to a more malignant phenotype. Of the 120 SCCHN studied 54 (45%) stained positively for nm23-H1 protein. Protein expression was significantly higher in more advanced stages of disease. Expression of nm23-H1 was significantly higher in cancer tissues than in normal, adjacent tissue, dysplasia, or carcinoma in situ. The nm23-H1 rate increased with progression of synchronous lesions from dysplasia to carcinoma in situ and finally to carcinoma (P<0.05). Northern blot analyses of tissues with various clinicopathological characteristics also revealed differences in nm23-H1 mRNA expression. When levels of nm23-H1 mRNA were compared to tumor stage, intensity of expression was found to be higher in stages 3 and 4 than stages 1 and 2 (P<0.01). Malignant tumors had a higher level of mRNA nm23-H1 expression than normal or premalignant tissues. The nm23-H1 negative patients survived significantly longer than nm23-H1 positive ones (P<0.05). To study the possible relationship between nm23-H1 gene expression and cell growth rate in tumor cells, the mRNA level in each tumor was compared to proliferative activity. The nm23-H1 gene expression levels were directly related to the [3H]thymidine labeling index in tumor cells (R=0.6681). Our results strongly indicate that the nm23-H1 gene is involved in progression of SCCHN. Together with results obtained on lung cancer, our observations suggest that increased expression of nm23-H1 in cancers of the upper aerodigestive tract may have different implications than elsewhere in the body.     

乳腺癌组织中uPA、uPAR及nm23-H1的表达

目的　观察乳腺癌组织中uPA、uPAR、nm2 3 H1的表达并探讨与腋窝淋巴结转移的关系。方法　用免疫组化EnVi sion两步法检测 6 9例乳腺癌组织中uPA、uPAR和nm2 3 H1表达的分布情况 ,观察其与肿瘤的分化程度以及与腋窝淋巴结转移的关系。结果　 (1)uPA阳性表达定位于癌细胞胞质 ;uPAR和nm2 3 H1阳性表达定位于癌细胞胞膜及胞质 ,多数癌旁乳腺上皮细胞呈nm2 3 H1阳性表达 ;高分化乳腺癌 (Ⅰ级 )uPA和uPAR表达阳性率 (30 0 %和 2 5 0 %)低于中低分化乳腺癌 (Ⅱ、Ⅲ级 ) (分别为 6 8 1%、72 7%和 70 0 %、74 1%) (P <0 0 5 ) ;nm2 3 H1表达阳性率在乳腺癌组织不同分化程度间差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;(2 )腋窝淋巴结有转移者uPA和uPAR的表达阳性率 (73 2 %和 75 6 %)高于无淋巴结转移者 (35 7%和35 7%) (P <0 0 5 ) ;有腋窝淋巴结转移者nm2 3 H1的表达阳性率 (2 4 4 %)显著低于无淋巴结转移者 (5 0 0 %) (P <0 0 5 ) ;uPA、uPAR和nm2 3 H1的表达与淋巴结转移的个数均无关 ;(3)uPA阳性表达的癌组织其nm2 3 H1表达阳性率 (15 0 %)低于uPA阴性表达的癌组织 (6 2 1%) (P <0 0 5 )。结论　uPA和uPAR的高表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移密切相关 ;uPA、uPAR和nm2 3 H1可以作为乳腺癌侵袭与淋巴结转移的     

PCR-SSCP法检测人肝癌组织中nm23-H1基因突变的研究

目的观察nm23-H1基因在人原发性肝细胞癌中的突变情况，探讨nm23-H1基因突变与肝癌发生、发展度转移的关系。方法采用PCR-SSCP方法对16例肝癌组织、12例癌旁组织和4例正常肝组织的nm23-H1基因的第1、2、4外显子进行突变检测。结果共有5例发生nm23-H1基因突变。在1例癌旁组织中检测到nm23-H1基因第2外显子纯合缺失；在1例肝癌组织中第1外显子、1例第2外显子，癌旁组织中2例第2外显子检测到基因突变。结论nm23-H1基因突变在肝癌组织中发生率低，nm23-H1基因突变可能与肝癌进展度转移有关。     

影响肝细胞癌生物学行为及预后的相关因子分析

目的探讨影响肝癌生物学行为及预后的重要因素和寻求肝癌基因治疗的有效靶点。方法运用免疫组化方法检测Ki67、nm23H1、cMet及MT1MMP蛋白在93例肝细胞癌组织中的表达水平,并判断其与肝癌细胞恶性生物学行为及患者预后的关系。结果Ki67、nm23H1、cMet及MT1MMP蛋白表达水平与肝癌患者预后均具有显著相关性(P均<0.01);nm23H1的表达与肿瘤远处转移之间呈负相关关系(P=0.041);cMet、MT1MMP的表达与肝癌瘤旁浸润及远处转移之间均呈正相关关系(P<0.05)。结论nm23H1基因的失活或突变,伴随cMet以及MT1MMP蛋白的异常表达可能是导致肝癌浸润、转移的关键因素。     

nm23—H1过表达与乳腺癌和皮肤癌转移的相关性

目的：对比研究乳腺癌与皮肤癌转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１表达的意义。方法：用单克隆抗体免疫组织化学Ｓ－Ｐ法检测８１例乳腺癌及１００便皮肤癌。ｎｍ２３－Ｈ１阳性细胞数超过３０％的癌细胞定为过度表达。结果：乳腺癌中导管原位癌、无转移及有转移浸润性导管癌的过表达率分别为８２％、７７％和３３％。皮肤癌中基底细胞癌、无转移及有转移鳞状细胞癌的过表达率分别为７９％、６１％和２７％,判别有显著意义Ｐ〈０．００５％