两个斑驳病家系KIT基因突变研究

目的 对2个斑驳病家系进行致病基因突变分析,为患者及其家系成员提供遗传咨询和生育指导.方法 分别采集家系1两例患者(先证者及其父亲)、家系2先证者及3名表型正常家系成员的外周血,提取外周血DNA和RNA.应用PCR、逆转录PCR及测序等技术,从基因组水平和表达水平对此两家系先证者和患者进行KIT基因诊断,并初步探讨检测到的突变对KIT基因功能的影响.结果 家系l中两例患者KIT基因均存在IVS12+ 2_+7delinsACATCTTTA的杂合突变,该突变在cDNA水平导致KIT基因c.1765-1779del突变,在氨基酸水平导致p.Gly592Ala/del:E12突变,使得KIT基因剪切位点发生改变,即其中一条cDNA第12外显子被跨越、未转录.家系2中先证者KIT基因存在c.2401A＞C突变,3位表型正常的家系成员未见该突变.结论 确诊了两个斑驳病家系的致病原因.家系1患者KIT基因均存在IVS12+ 2_+ 7delinsACATCTTTA的杂合突变,该突变为人类基因突变数据库未记载的、新的剪切突变;家系2先证者KIT基因存在c.2401A＞C突变,结合3位表型正常的家系成员KIT基因未见c.2401A＞C突变,推测该突变为先证者患斑驳病的致病突变可能性大.为此两家系进行遗传咨询和产前诊断提供了理论依据.     

2型多发性内分泌腺瘤的分子遗传学研究进展

2型多发性内分泌腺瘤(multiple endocrine neoplasia type 2,MEN 2)是一种以甲状腺、肾上腺髓质和甲状旁腺内神经内分泌细胞发生增生或肿瘤为主要特征的肿瘤,一般呈常染色体显性遗传方式。MEN 2可分为3种亚型:2A型(MEN2A)、家族性甲状腺髓样癌型(FMTC)和2B型(MEN2B)。原癌基因RET是迄今发现的唯一与MEN2发病相关的基因,突变热点主要为第10、11、13～16外显子。98%的MEN2A患者,98%以上的MEN 2B患者,以及约95%的FMTC家系,均可检测到RET基因的致病突变。另外,约5%的MEN2A和50%的MEN2B先证者可能源自RET基因的种系自发突变。MEN2患者的子代遗传到RET突变基因的风险高达50%,故对先证者、家系和亲属进行RET基因突变的筛查,不仅可以早期预防和诊治本病,而且可以实施后续的产前诊断、植入前遗传学诊断,具有重要的医学遗传学和优生学意义。本文对MEN2的相关分子遗传学研究进展作一简单综述。     

1个中央轴空病家系RYR1基因的突变分析

目的 对一个常染色体显性遗传的中央轴空病(CCD)家系进行基因诊断,探讨家系中CCD患者可能的致病机制以及基因型与表现型的关系.方法 对先证者进行病史和家族史询问以及详细的临床检查.采集先证者及其家属的外周血样本,用PCR方法扩增理阿诺碱受体1(RYR1)基因C端突变热点区(外显子90-104)的编码序列,进行序列测定,与数据库中的参考序列进行比对分析.结果 先证者及其母亲、妹妹RYR1基因第102外显子均发生了第14690位碱基G到A的点突变,此突变会导致氨基酸改变,即G4897D,家系内正常成员以及家系外的50名正常对照均未发现该突变位点.结论 本实验所研究的家系中,RYR1基因第102外显子G14690A的杂合突变为致病基因,该基因突变可能导致不同的临床表现和病理改变.     

一个Wiskott-Aldrich综合征家系融S基因的突变分析CSCD

目的探讨1个汉族Wiskott-Aldrich综合征（Wiskott-Aldrich syndrome）家系WAS基因的突变情况。 方法PCR扩增WAS基因的外显子及外显子与内含子的连接区域,对PCR产物直接进行正、反向测序并与数据库进行比对,确定有无WAS基因突变以及突变的位点。测定家系成员B细胞活化因子（B-cell activating factor, BAFF）的水平。结果家系中2例患者均携带WAS基因第2外显子c.257G〉A的半合子突变,先证者的母亲为c.257G〉A的杂合突变携带者,其他表型正常家系成员均未检测到该突变,经查阅人类基因突变数据库证实该突变为已知致病突变。家系中患者血清BAFF水平明显高于表型正常的成员。结论WAS基因c.257G〉A的突变可能是该Wiskott-Aldrich综合征家系的致病原因。     

先天性眼外肌纤维化综合征Ⅰ型一家系KIF21A基因突变分析

目的 研究一个先天性眼外肌纤维化综合征Ⅰ型(congenital fibrosis of the extraocular muscles type 1,CFEOM1)家系KIF2lA基因第20、21外显子突变与疾病的关系.方法 收集CFEOM1 一家系共计8个成员,采用测序和等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)方法分别对先证者及家系成员KIF21A第20、21外显子热点突变c.2860C＞T进行分析.选择KIF21A基因两侧4个STR位点(D12S1668、D12S2194、D12S331和D12S1048)进行单倍型分析.结果 先证者和其他两例患者均存在KIF21A c.2860C＞T突变,家系中表型正常的成员均未检出该突变.单倍型分析结果显示该家系突变来源于母源性生殖腺嵌合体.结论 KIF21A基因突变c.2860 C＞T是该CFEOM1家系的致病突变.     

一个遗传性出血性毛细血管扩张症家系的临床和遗传学分析

目的 :对一个中国遗传性出血性毛细血管扩张症 (HereditaryHemorrhagicTelangiectasia ,HHT)家系的临床表现和遗传缺陷进行分析。方法 :对该HHT家系进行家系调查 ,并对所有成员进行临床检测。用PCR方法扩增ALK 1(Ac tivinReceptor LikeKinase 1)和Endoglin(ENG)基因的所有外显子、外显子 -内含子交界区和 5’、3’非翻译区 ,采用直接测序的方法查找基因突变。结果 :该家系的先证者有反复发作的鼻出血和皮肤粘膜的毛细血管扩张 ,并均有阳性家族史。各器官均未发现动静脉血管畸形。在家系的先证者及其他 4个成员中发现一个位于ALK 1基因第 8外显子G12 32A的错义突变 ,导致Arg 4 11Gln。结论 :HHT的临床表现多样。新错义突变G12 32A(Arg4 11Gln)可能导致HHT2的分子缺陷。该突变为国内首次报道。     

遗传性出血性毛细血管扩张症基因突变分析

目的 分析遗传性出血性毛细血管扩张症(hereditary hemorrhagic telangiectasia,HHT)家系ENG、ACVEL1和SMAD4基因突变.方法 收集4个HHT家系临床资料并分析其临床特点,应用直接测序和多重连接探针扩增技术对11例临床确诊及可疑患者的ENG、ACVRL1和SMAD4基因进行突变分析,将结果与HHT基因突变数据库进行对比.结果 家系2先证者及2个妹妹的ENG基因发生了第2外显子c.207G＞A(p.L69L)同义突变、第8外显子c.1004A＞T(p.Q335L)错义突变、ACVRL1基因第7外显子c.817C＞T(L273L)同义突变;家系3先证者及其母亲和弟的ENG基因发生了第8外显子c.1004A＞T(p.Q335L)突变;也检测到家系4先证者及其兄的ENG基因第8外显子c.1004A＞T(p.Q335L)突变.家系1先证者及其他HHT患者,未检测到基因突变.其中ENG基因第8外显子c.1004A＞ T(p.335Q＞L)为新突变,在200名正常对照中也未检测到该突变.结论 HHT具有遗传异质性,ENG基因第8外显子c.1004A＞T(p.Q335L)为HHT新的致病突变.     

伴声带麻痹的X连锁腓骨肌萎缩症GJB1基因新突变

目的 报告1个临床可疑的伴声带麻痹的X连锁显性遗传腓骨肌萎缩症(X-1inked Charcot-Marie-Tooth disease,CMTX)家系,并探讨与连接蛋白(gap jurction protein beta 1,GJB1)基因突变的关系.方法 对1个具有声音嘶哑、吞咽困难、致死性呼吸衰竭的临床可疑的CMTX家系进行临床、纤维喉镜、头部MRI及电生理检查,对先证者应用实时PCR排除PMP22基因大片段重复突变后,应用PCR直接测序法对先证者及其家系内其他4例患者、5名有血缘关系的正常家系成员以及50名无血缘关系的正常人进行GJB1基因突变检测.结果 该家系3代共8例患者,先证者临床表现为进行性双下肢胫前肌、腓骨肌严重萎缩、无力;该家系中共4例患者出现声音嘶哑,吞咽困难,经纤维喉镜检查证实为声带麻痹,其中2例双侧声带完全麻痹最终因吞咽困难,呼吸衰竭而死亡;先证者的头部MRI检查正常,神经电生理检查揭示周围神经运动和感觉神经传导速度明显减慢或动作电位消失;分子遗传学结果显示该家系GJB1基因第2外显子存在c.186 C＞G错义突变,该突变与疾病表型共分离.结论 c.186 C＞G突变为GJB1基因新突变,目前国内外尚无报道;因声带麻痹而呼吸衰竭是CMT罕见的严重的临床症状;CMTX具有明显的临床和遗传异质性.     

先天性甲状腺功能减低症一家系DUOXA2基因突变分析

目的对一个先天性甲状腺功能减低症家系进行二元氧化酶成熟因子2(DUOXA2)基因突变研究。方法对该家系中4名成员采样并提取DNA,用wafergen验证检测先证者甲状腺过氧化物酶(TPO)基因、二元氧化酶2(DUOX2)基因和二元氧化酶成熟因子2(DUOXA2)基因。PCR扩增先证者DUOXA2基因各外显子、外显子-内含子交界区以及3′端和5′端非翻译区,以DNA测序技术检测DUOXA2基因突变,并与该家系中其他成员进行对照分析。结果先证者为DUOXA2基因c.413_414ins A突变和c.537CA突变的复合杂合子,其父亲及胞姐均为c.537CA突变杂合子,其母亲为c.413_414ins A突变的杂合子。结论 DUOXA2基因突变是中国人群先天性甲状腺功能减低症发生的原因之一。     

一个异染性脑白质营养不良家系ARSA基因突变分析

目的分析并确定一个异染性脑白质营养不良（metachromatic leukodystrophy，MLD）家系芳基硫酸酯酶A（arylsulftase A，ARSA）的基因（ARSA）突变及遗传特征。方法收集先证者及其家系成员临床资料，采用聚合酶链反应和DNA直接测序方法进行ARSA突变检测，确定基因突变的位点，分析基因型与表型的关系。结果该家系先证者的ARSA基因同时存在第2外显子G251A（R84Q）与G296T（G99V）两个杂合突变，具有相似表型的胞弟与先证者的测序结果完全一致，先证者之父母分别携带ARSA基因第2外显子G251A（R84Q）与G296T（G99V）的杂合突变，表型正常的先证者之姐未发现这些突变。结论该家系中两位患儿均为ARSA基因复合杂合突变致病，其G251A（R84Q）突变来自父亲，G296T（G99V）突变来自母亲，其父母均为表型正常的基因突变携带者。