HER2/neu抗体对SKBR3乳腺癌细胞株酪氨酸磷酸化及细胞增殖的影响

目的研究抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ胞外区的特异性抗体对ＳＫＢＲ３乳腺癌细胞株酪氨酸磷酸化及细胞增殖的影响。方法Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法及抗体介导的特异性细胞增殖试验；筛选乳腺癌病人抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体阳性血清ＩｇＧ的ＥＬＩＳＡ方法。结果试验发现单抗ｃ－ｎｅｕ－５对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化有明显促进作用，但对细胞增殖的影响不明显；而单抗ｃ－ｎｅｕ－２对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化及细胞增殖均有明显作用。在此基础上，收集乳腺癌病人血清１４份，分离纯化其血清ＩｇＧ，并经ＥＬＩＳＡ方法筛选出５份乳腺癌病人抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体阳性血清ＩｇＧ。细胞增殖试验发现该５份标本中有３份对ＳＫＢＲ３细胞增殖有明显抑制作用。选其中１份抑制增殖的阳性血清ＩｇＧ进一步研究其对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化的影响，结果发现该病人血清ＩｇＧ对细胞酪氨酸磷酸化也有抑制作用。结论抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ的特异性抗体可能通过抑制细胞的信号传递系统而抑制肿瘤生长。     

原癌基因HER2／neu表达产物p185蛋白免疫原性研究

用表达ｐ１８５蛋白ＨＥＲ２／ｎｅｕ转基因３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞裂解物免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经３次免疫后，免疫小鼠脾细胞对表达ｐ１８５蛋白的３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞呈现较强的增殖反应（平均刺激指数分别为ＳＩ＝３．１５±１．８８），而对未转染ＨＥＲ２／ｎｅｕ基因的３Ｔ３细胞的应答较弱（ＳＩ＝１．１４±０．９７）。并检测到１号免疫鼠脾细胞对３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞有特异杀伤作用。免疫鼠血清中出现高水平的抗ｐ１８５抗体（ＯＤ均值＝１．０２±０．１６），较正常对照组（ＯＤ均值＝０．３６±０．１０）有显著差异（Ｐ＜０．００１），表明ＨＥＲ２／ｎｅｕ表达产物ｐ１８５蛋白具有免疫原性，用于免疫小鼠可诱导出对ｐ１８５蛋白的特异免疫应答反应。     

c-erbB-2基因工程抗体的构建及在哺乳动物细胞中的表达

原癌基因ＨＥＲ－２／ｎｅｕ／ｅｒｂＢ－２编码的１８５－ｋＤａ跨膜磷酸糖蛋白为受体酪氨酸激酶家族中的成员。已报道ｃ－ｅｒｂＢ－２在多种腺癌中过表达，其中包括１５％～４０％的早期及转移性乳腺癌和卵巢癌［１］。亦有人报道，约７３％的转移性乳腺癌和卵巢癌过表达 ＨＥＲ－２／ｎｅｕ［２］，表明其为乳腺癌靶向性免疫治疗的理想靶分子。我们采用基因工程技术，构建了ｃ－ｅｒｂＢ－２ ＳｃＦｖ基因，并获得了其在ＣＯＳ７细胞中的表达。ｌ 材料和方法１．ｌ材料ＣＯＳ７细胞为本室保存。载体ｐｃＤＮＡ３．ｌ购自Ｉｎ－ｖｉｔｒ…     

乳腺癌病人抗HER2／neu阳性血清的筛选

ＨＥＲ2 /ｎｅｕ是一种原癌基因 ,编码的ｐ185跨膜糖蛋白具有受体酪氨酸激酶活性 ,属于表皮生长因子 (ＥＧＦ)受体家族中的成员。ＨＥＲ2 /ｎｅｕ基因的扩增和 /或ｐ185蛋白的过度表达可见于 2 0 %～ 4 0 %的乳腺癌病人[1] 。抗ＨＥＲ2 /ｎｅｕ胞外区的抗体可抑制肿瘤细胞的生长 ,而用于临床乳腺癌的治疗[2 ,3] 。本文旨在探索乳腺癌病人体内对ＨＥＲ2 /ｎｅｕ蛋白的体液免疫应答 ,分析其对细胞增殖的影响。1　材料与方法1 1　细胞株　见参考文献 [2 ]。1 2　研究对象　住院手术确诊为乳腺癌患者 14例 ,均为女性 ,其中 12例为浸润性导管癌 ,…     

男性乳腺癌中的分子标示物

男性乳腺癌中的分子标示物对比女性乳腺癌，男性乳腺癌中新的分子标示物给预后方面的信息是有限的。这项研究的目的是分析男性乳腺癌患者中雌激素受体（ＥＲ）、孕激素受体（ＰＲ）、雄激素受体（ＡＲ）、ｂｃｌ－２、Ｐ５３、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ｃｙｃｌｉｎ　Ｄ１和Ｍ...     

抗p185单克隆抗体的制备及初步应用

抗ｐ１８５单克隆抗体的制备及初步应用许金华杜红杨蔚孙素莲（北京市肿瘤防治研究所，北京１０００３４）ｐ１８５是癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２（或称ＨＥＲ－２／ｎｅｕ）的表达产物，其分子量为１８５ｋＤ，故称ｐ１８５。已知ｐ１８５在腺癌类如乳腺癌、卵巢癌、胃癌及...     

基因工程产品中CHO细胞蛋白残余量测定方法的建立

目的： 建立简便、快速、高灵敏度的基因工程产品中ＣＨＯＤＨＦＲ－ 细胞蛋白的检测方法。方法： 以基因工程用宿主细胞ＣＨＯＤＨＦＲ－ 的全细胞蛋白和该细胞培养上清浓缩蛋白的混合物, 免疫家兔制备抗血清, 并用间接ＥＬＩＳＡ 测定其效价; 用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析该抗体的特异性; 用该抗体建立直接、间接ＥＬＩＳＡ, 分别测定两种检测方法的动力学曲线、检测范围及灵敏度。结果： 抗ＣＨＯＤＨＦＲ－ 细胞蛋白的抗血清效价为２×１０－ ７ , 该抗体只与ＣＨＯＤＨＦＲ－ 细胞蛋白起反应, 不与基因工程产品ＥＰＯ 起反应; 用该抗体建立的直接、间接ＥＬＩＳＡ 法检测范围较宽, 灵敏度小于１μｇ／Ｌ。结论： 建立了高灵敏度、高特异性、操作简单、快速, 可检测基因工程产品中ＣＨＯ 细胞蛋白残余量的两种ＥＬＩＳＡ 法。     

肿瘤抗原p185蛋白的纯化及其鉴定

目的：从转染ＨＥＲ２／ｎｅｕ 基因的３Ｔ３／ｎｅｕ细胞中纯化ｐ１８５蛋白,研究其免疫原性和作为肿瘤疫苗的可能性。方法：采用溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ为基质,通过交联５２０Ｃ９单克隆抗体（杂交瘤腹水中沉淀的γ－球蛋白）,用亲和层析的技术纯化ｐ１８５蛋白。经梯度盐溶液解离与抗体结合的ｐ１８５蛋白,收集到蛋白洗脱峰,用ＥＬＩＳＡ检测ｐ１８５的免疫反应性,并经ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏ     

丙型肝炎病毒（HCV）E2／NS1相对保守区多肽抗原在检？…

目的 研究（ＨＣＶ）Ｅ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原在检测抗－ＨＣＶ中的意义。方法 利用ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因编码的膜区糖蛋白合成Ｅ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原,建立酶免疫试验（ＥＩＡ）,对９６例ＨＣＶ感染者及４０例正常献血员进行ＨＣＶＥ２／ＮＳ１抗体的检测,同时平行检测ＨＣＶＲＮＡ肝炎为１３．５５％,慢性丙型肝炎为２５．０４％,无症状感染者为２．０８％;正常献血员中发现３例抗ＨＣＶＥ２／ＮＳ１抗体     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以亲和层析技术纯化的肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）结构蛋白（５５０００，６７０００）为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ），然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞（Ｋ６Ｈ６／Ｂ５）融合，经ＥＬＩＳＡ间接法筛选出２株（２Ｄ５，１Ｂ７）分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体（Ｈ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。对２Ｄ５株初步鉴定表明，其抗体类型为ＩｇＧ１；培养上清中抗体浓度为２０～３０μｇ／ｍｌ；特异性免疫荧光反应证明２Ｄ５株Ｈ－ＭｃＡｂ是ＨＦＲＳＶ特异性；中和效价为１∶１６０；体外连续传代６个月仍稳定分泌抗体。     

荧光原位杂交技术检测乳腺癌Her－2／neu基因

荧光原位杂交技术检测乳腺癌Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ基因邓永江，皋岚湘，丁华野，田玉旺，吴霞，黄晓南，谈敏我们应用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙ－ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）技术检测了乳腺癌组织中Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ基因表达情况，...     

sIL－2R与SLE的临床表现和自身抗体的相关性

用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测６６例ＳＩＥ病人血清叽ｓＩＬ－２Ｒ水平，ＳＬＥ病人显著高于正常人，疾病活动期高于非活动期。血清ｓＩＬ－２Ｒ水平与ＡＮＡ、抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体、抗Ｓｍ、ＳＳ－Ａ、ＳＳ－Ｂ抗体无关，而与ＳＬＥ患者的发热、贫血、白细胞减少、关节受累及肾脏损害相关，且与ＳＬＥ疾病活动性和ＥＳＲ成正相关，与补体Ｃ＿３、Ｃ＿４和ＣＨ＿（５０）成负相关。提示血清ｓＩＬ－２Ｒ水平是监测ＳＬＥ疾病活动性的一个良好指标。     

乳癌组织HER－2／neu原位杂交与c－erbB－2蛋白表达

乳癌组织ＨＥＲ－２／ｎｅｕ原位杂交与ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达皋岚湘，丁华野，邓永江，吴霞研究发现乳癌组织存在ｎｅｕ原癌基因，且与患者预后差有关￣［１～７］。国内用ｃ－ｅｒｂＢ－２单克隆抗体检测乳癌ｎｅｕ基因已陆续见报道，但尚未见到有关分子方面的研究。...     

抗人纤维蛋白单链抗体重链可变区的人源化

目的人源化抗人纤维蛋白单链抗体的重链,降低人抗鼠抗体反应。方法从基因文库中挑选到与鼠源抗人纤维蛋白单链抗体重链（ＶＨ－８Ｅ５）同源性７１．８％的人源免疫球蛋白ＨＵＭＨＣＨ１０９重链（ＶＨ）序列,作为人源化改造ＶＨ－８Ｅ５的框架。人工合成人源化ＶＨ－８Ｅ５片段,用连接酶连接成完整的人源化ＶＨ－８Ｅ５,构建表达载体ｐＯＰＥ１０１－ＶＨ－８Ｅ５。转化ＪＭ１０９后用异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷诱导表达。结果经聚丙烯酰胺电泳和ＥＬＩＳＡ证明表达产物相对分子质量３０×１０３左右,有特异性识别和结合人纤维蛋白能力,是亲本抗体ＳｃＦｖ－８Ｅ５活性的４／５左右。人源化ＳｃＦｖ－８Ｅ５表达产量为转化菌总蛋白的１１．２％。结论人源化ＶＨ－８Ｅ５仍具有特异性识别人纤维蛋白的活性,ＳｃＦｖ－８Ｅ５重链的人源化基本获得成功     

巨细胞病毒感染与可溶性白细胞介素2受体的关系

应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对１０４例育龄妇女的血清进行了巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体的检测，同时用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法测定了不同感染状态下血清中可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）的水平，并将ｓＩＬ－２Ｒ水平与未感染ＨＣＭＶ的正常育龄妇女进行了比较。结果，育龄妇女中抗－ＨＣＭＶＩｇＧ的阳性率为８９．４％，ＩｇＭ的阳性率为９．６％，感染ＨＣＭＶ的妇女血清中ｓＩＬ－２Ｒ水平均大于未感染的对照组（１７８．１±５７．３Ｕ／ｍｌ），Ｐ＜０．０５，其中ＩｇＭ阳性者和ＩｇＭ、ＩｇＧ同时阳性者血清中ｓＩＬ－２Ｒ水平最高，分别为９１０±４６５．６Ｕ／ｍｌ和９０５±３４７．８Ｕ／ｍｌ，两者间的差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５），但均大于仅抗－ＨＣＭＶＩｇＧ阳性者（４４６．８±１５８．９Ｕ／ｍｌ），Ｐ均＜０．０５。表明，ＨＣＭＶ感染可致ｓＩＬ－２Ｒ水平升高，并且活动性感染者上升明显。提示：ｓＩＬ－２Ｒ可能参与了ＨＣＭＶ的免疫致病机制。     

检测肾综合征出血热循环免疫复合物酶联免疫测定（…

以肾综合征出血热患者血清中提取的γ球蛋白与ＨＦＲＳ病毒抗原形成的免疫复俣物为模型，抗人μ链和γ链单克隆抗体为包被抗体，辣根过氧化物酶标记的抗－ＨＦＲＳ病毒持异性ＭＡｂ为批示抗体，建立了检测ＨＦＲＳ特异性循环ＩＣ的ＥＬＩＳＡ捕促法，并初步用于ＨＦＲＳ急性期患者血清标本的检测。     

鼻咽癌抗独特型抗体诱导的体液和细胞免疫应答

目的 探讨抗独特抗体２Ｈ４和５Ｄ３模拟抗原诱导免疫应答的能力。方法 用Ａｂ２免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠获得抗血清,以ＥＬＩＳＡ检测其Ａｂ３,Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ分析其识别抗原的分子质量。用迟发型超敏反应（ＤＴＨ）和淋巴细胞增殖试验,检测Ａｂ２诱发细胞免疫反应的能力。结果 ２Ｈ４,５Ｄ３免疫同系动物产生的含有抗抗蚀特型抗体（Ａｂ３）的抗血清,可特异性地与靶细胞结合。ＦＣ２（Ａｂｌ）和经２Ｈ４免疫的Ａｂ     

中国流行株HIV—1gag和hIL—2／hIL—6核酸疫苗构建与实验免疫研究

目的 探讨中国流行株ＨＩＶ－１ｇａｇ与ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６共表达重组核酸疫苗闰的免疫效果。方法 以核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ为表达载体,构建重组核酸疫苗质料ｐＩＲＥＳ１－ｇａｇ、ｐＩＲＥＳ１－ｇａｇ－ｈＩＬ－２、ｐＩＲＥＳ１－ｇａｇ－ｈＩＬ－６,通过间接免疫荧光试验、Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测ｇａｇ／ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,进行淋巴细胞转化试验、ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋Ｔ淋巴细胞数量测定、细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）特异性杀伤作用检测及血清抗体检测,结果 构建的重组质粒转染ＢＨＫ细胞后可表达目的基因,免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖、诱导特异性ＣＴＬ反应,当和ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６共表达时免疫效果更加显著。讨论 与Ｇａｇ蛋白共表达的ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－     

检测肾综合征出血热循环免疫复合物的酶联免疫测定（ELISA）捕捉法的建立及初步应用

以肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者血清中提取的γ球蛋白与ＨＦＲＳ病毒抗原形成的免疫复合物（ＩＣ）为模型，抗人μ链和γ链单克隆抗体（ＭＡｂ）为包被抗体，辣根过氧化物酶标记的抗－ＨＦＲＳ病毒组特异性ＭＡｂ为指示抗体，建立了检测ＨＦＲＳ特异性循环ＩＣ（包括ＩｇＭ型和ＩｇＧ型）的ＥＬＩＳＡ捕捉法，并初步用于ＨＦＲＳ急性期患者血清标本的检测。结果表明该法特异，敏感，简便，可用于ＨＦＲＳ发病机理及免疫功能的研究。     

用重组结构区抗原检测抗丙型肝炎病毒IgM抗体方法的建立

目的检测抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区蛋白ＩｇＭ抗体。方法采用丙型肝炎病毒Ｃ，Ｅ１，Ｅ２区重组抗原混合包被和分别包被酶标板；用兔抗人γ链血清处理人血清标本，再用固相包被羊抗兔抗体吸附兔抗人γ链－人ＩｇＧ复合物，建立了抗－ＨＣＶＩｇＭ检测方法。结果对７６例丙型肝炎病人血清进行抗－ＨＣＶＩｇＭ检测，同时与逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测结果进行比较，两者具有相关性（Ｐ＜０００５）；ＩｇＭ抗体组成分析结果表明采用全片段Ｃ、Ｃ＋Ｅ２区抗原血清标本中的抗－ＨＣＶＩｇＭ检出率分别可达９６６％和１００％。结论ＨＣＶ的Ｃ、Ｅ２重组抗原用于抗－ＨＣＶＩｇＭ检测具有较高的敏感度和特异性。