乙型肝炎病毒转基因小鼠

乙型肝炎病毒转基因小鼠对研究HBV基因结构和功能,基因表达的调控,HBV的复制和致肝细胞病变的关系,HBV感染和宿主免疫系统的应答以及HBV感染与肝细胞癌之间的相互关系等,都有极为重要的意义.本文对HBV转基因小鼠及其在研究HBV中的应用进用综述.     

乙型肝炎病毒转基因小鼠研究现状

由于HBV感染具有明显的种属特异性，只感染人及黑猩猩等灵长类动物，使乙型肝炎的研究一直缺乏理想的动物模型。转基因小鼠出生前就能在内源性HBV启动子的控制下，主要在肝脏内持续转基因表达，在肝细胞内没有HBsAg积累，也没有肝细胞病变，HBsAg以亚病毒颗粒的形式以9000mg/ml的浓度分泌入血。这些小鼠对高水平的循环抗原耐受，不产生抗HBs，可被用作HBV慢性携带状态模型。本文对HBV转基因小鼠转基因表达、免疫耐受及打破免疫耐受的机理等作一简要综述。     

乙型肝炎病毒转基因小鼠研究现状

由于HBV感染具有明显的种属特异性,只感染人及黑猩猩等灵长类动物,使乙型肝炎的研究一直缺乏理想的动物模型.转基因小鼠出生前就能在内源性HBV启动子的控制下,主要在肝脏内持续转基因表达,在肝细胞内没有HBsAg积累,也没有肝细胞病变,HBsAg以亚病毒颗粒的形式以9 000ng/ml的浓度分泌入血[1].这些小鼠对高水平的循环抗原耐受,不产生抗HBs,可被用作HBV慢性携带状态模型.本文对HBV转基因小鼠转基因表达、免疫耐受及打破免疫耐受的机理等作一简要综述.     

乙型肝炎病毒动物模型的研究现状

人乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染具有明显的种属特异性，HBV的易感宿主只局限于人及黑猩猩等灵长类动物。因此，建立适合于HBV研究简单、易得的小动物模型一直是研究者追求的目标。在过去的20年国内外学者相继发现了多种嗜肝DNA病毒，相应的动物模型也已陆续建立，但这些嗜肝DNA病毒都有其各自的特性，尚无一个理想的动物模型可准确地代表人HBV感染的所有特征，且多数动物不能利用。自从转基因技术出现以来，学者们开始研制HBV转基因小鼠使HBV的研究取得了较大的进展。最近，研究者们又将人原代肝细胞或肝组织移植于鼠进行HBV感染的研究。本文将系统讨论近些年来应用于HBV研究的各种动物模型。     

乙型肝炎病毒动物模型的研究现状

人乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染具有明显的种属特异性,HBV的易感宿主只局限于人及黑猩猩等灵长类动物。因此,建立适合于HBV研究简单、易得的小动物模型一直是研究者追求的目标。在过去的20年国内外学者相继发现了多种嗜肝DNA病毒,相应的动物模型也已陆续建立,但这些嗜肝DNA病毒都有其各自的特性,尚无一个理想的动物模型可准确地代表人HBV感染的所有特征,且多数动物不能利用。自从转基因技术出现以来,学者们开始研制HBV转基因小鼠使HBV的研究取得了较大的进展。最近,研究者们又将人原代肝细胞或肝组织移植于鼠进行HBV感染的研究。本文将系统讨论近些年来应用于HBV研究的各种动物模型。     

IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究

目的 探讨IL—2 preS DNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法 应用基因重组技术，构建人白细胞介素2(hIL-2)和前表面抗原(preS)的真核表达载体，将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB／c小鼠和HBV转基因小鼠，通过ELISA方法检测BALB／c小鼠和HBV转基因鼠的抗-preS2、HBsAg及抗-HBs抗体水平；荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBV DNA拷贝数，并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度，同时检测肝功能指标。结果 ①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后，100％小鼠能在第4、6周检测到抗preS1抗体，持续时间长达10周。②用IL-2 preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式，且所需质粒量(10μg／只)仅为后者(100μg／只)的1／10。③在第4周高峰期检测IgG亚类，是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应。④基因枪注射真核表达质粒(1μg／只)免疫转基因小鼠后，80％的小鼠产生了抗体，HBV DNA量下降，其中20％的小鼠HBsAg转阴。⑤HE肝组织染色显示：肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高。结论 IL-2 preS DNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫，可部分打破小鼠机体的免疫耐受，为新型乙肝疫苗和抗HBV持续性感染的特异性免疫治疗剂的设计和构建提供理论与实践依据。     

乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠的建立及其表型分析

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)x基因(HBx)是HBV复制和扩散所必需的基因，在乙肝慢性化和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的发生中具有重要作用。为了建立研究HBx基因功能的转基因小鼠模型并在体内研究X蛋白的功能，本研究采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和HBx基因开放阅读框的HBx基因表达载体pcDNA3-HBx，     

HBV转基因小鼠在肝炎发病机理研究中的应用

应用HBV转基因小鼠研究肝炎发病机理,发现CTL可触发肝细胞凋亡,介导非细胞毒性病毒的清除,在发病中具有重要作用.此外,对病毒生理、机体耐受性、肝癌的发生等也进行了探讨.     

HBV 小鼠模型与肝脏免疫学研究进展

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)严重威胁人类健康,免疫紊乱是主要病理学机制。由于HBV不能自然感染小鼠,研究者试图创建HBV小鼠模型,以模拟HBV的免疫病理学过程。本文将介绍各种HBV小鼠模型的构建方法,包括HBV转基因技术、HBV病毒活体肝脏靶向转染技术以及HBV自然感染人源化小鼠技术等,同时还分析了各HBV小鼠模型的优缺点、利用这些模型所解决的一系列免疫学问题,以及该领域的发展展望。     

HBV转基因小鼠脾脏DC的TLR2、TLR9和T细胞Elispot检测分析

目的:进一步研究HBV转基因小鼠免疫状态。方法:应用流式细胞仪和Elispot方法分别对转基因鼠脾脏树突状细胞(DC)的Toll样受体TLR2、TLR9和分泌γ干扰素T细胞功能进行检测。结果:与正常同种鼠比较,HBV转基因小鼠脾树突状细胞表达CD11c及TLR2、TLR9无明显差异,但分泌IFN γ的T细胞对HBsAg特异性刺激产生的斑点数存在显著差异(P<0 0 5 )。结论:提示HBV转基因小鼠的先天和后天免疫状态是正常的,仅对乙型肝炎病毒存在特异性免疫耐受     

高复制HBV转基因小鼠模型对抗乙型肝炎病毒药物的效应研究

 目的：研究高复制HBV转基因小鼠模型对抗乙肝病毒药物的效应评价。 方法： 选用抗乙肝药物拉咪呋啶、大剂量重组乙肝蛋白疫苗、α-1b型干扰素和RNA干扰在转基因小鼠进行药效及作用机制评价。 结果：拉咪呋啶、重组乙肝疫苗、α-1b型干扰素均可使HBV转基因小鼠血清中HBV DNA滴度显著降低。其中后两者还可提高机体脾细胞IL-2和IFN-γ的水平及使分泌IFN-γ脾细胞Elispot斑点数明显增加。将RNA干扰表达载体pU6-siHBV质粒尾静脉注入小鼠体内。注射后5 d血清HBsAg下降56.7%,抑制作用持续14 d。肝脏免疫组化显示HBcAg阳性细胞明显减少，但血清HBV DNA定量无明显降低。 结论： 本近交系高复制HBV转基因小鼠模型对抗乙肝药物药效学评估是可靠、可行的。     

反义锁核酸在转基因小鼠体内阻断乙肝病毒C基因表达

目的 探讨针对乙肝病毒C基因反义锁核酸在转基因小鼠体内阻断病毒基因表达的效果.方法 各实验组经尾静脉给药后,采用real-time PCR、时间分辨免疫荧光技术、免疫组织化学法等技术分别检测血清HBV DNA、HBeAg含量及肝细胞内HBcAg的表达情况.结果 注射锁核酸后,对乙肝病毒核酸的复制和乙肝病毒e抗原的合成均有较强的抑制作用,注射后1、3 和5 d,HBV DNA的平均抑制率分别19.24％、39.20％和44.47％;HBeAg的平均抑制分别为30.71％、51.14％和63.46％;小鼠肝细胞的HBcAg阳性细胞数也较对照组明显减少.结论 针对乙肝病毒C基因的反义锁核酸在转基因小鼠体内能有效抑制病毒基因的复制和表达,提示C基因可作核酸药物治疗的有效靶位.     

丙型肝炎病毒核心及E2蛋白在转基因鼠中的表达

［英］ＰａｓｑｕｉｎｅｌｉＣ，ｅｔａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．１９９７；２５：７１９～７２７本实验建立了能在肝内表达ＨＣＶ核蛋白的转基因小鼠动物模型，这种转基因小鼠在鼠的主要尿蛋白启动子（ＭＵＰ）的转录控制下于肝细胞浆中表达相当于自然感染患者同等水...     

研究揭示慢性乙型肝炎肝脏损伤新机制

据《中国科学报》报道，中科院上海巴斯德所蓝柯研究组发现了慢性乙型肝炎肝脏病理损伤新机制，相关研究日前在线发表于《病毒学杂志》。乙型肝炎由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起，其主要致死原因是失代偿性肝硬化和肝细胞癌，慢性炎症引起的持续性肝细胞损伤和再生是失代偿性肝硬化和肝细胞癌发生的最主要因素。早先的研究证明HBV对感染的肝细胞不具有直接的细胞毒性，然而在病理环境下，这个概念却需要被重新认识。     

乙型肝炎病毒前S1抗原的研究进展

慢性乙型肝炎是当前最严重的健康问题之一，乙型肝炎的广泛传播已经成为一个危害广大人民群众健康的社会公众性问题。乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染人肝细胞引起，已有研究表明，HBV具有严格的宿主易感性和肝细胞嗜性。乙型肝炎病毒前S1蛋白（pre-S1）是HBV外膜蛋白的重要组成部分，是HBV基因pre—S1区编码的产物。大量研究认为pre—S1在HBV附着、入侵肝细胞以及HBV复制过程中起着重要作用。本文就将对pre—S1进行综述。     

HBV转基因小鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞免疫抑制功能的研究

目的通过对HBV转基因小鼠CD4＋、CD4＋CD25＋调节性T细胞数量和免疫抑制功能的研究,探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在乙肝免疫耐受中的作用。方法用流式细胞术对12只HBV转基因小鼠和12只正常小鼠外周血CD4＋、CD4＋CD25＋调节性T细胞的频率进行检测;磁珠分选小鼠脾CD4＋CD25-T细胞和CD4＋CD25＋T细胞,分为HBsAg刺激组和ConA刺激组体外单独和共培养,ELISA方法检测诱生的细胞因子IL-2。结果与正常小鼠比较,HBV转基因小鼠外周血CD4＋、CD4＋CD25＋调节性T细胞数量差异无统计学意义（P〉0.05）。HBsAg刺激组,CD4＋CD25-T细胞单独或共培养,HBV转基因小鼠CD4＋CD25-T细胞诱生IL-2水平显著低于正常小鼠（P〈0.01）;ConA刺激组,HBV转基因小鼠CD4＋CD25-T细胞诱生IL-2水平与正常小鼠相比则差异无统计学意义（P〉0.05）;两组小鼠CD4＋CD25-T细胞单独培养时诱生IL-2水平均显著高于共培养（P〈0.01）。结论与正常小鼠比较,HBV转基因小鼠CD4＋、CD4＋CD25＋调节性T细胞数量和免疫抑制功能差异无统计学意义,但T细胞水平对乙肝病毒存在特异性免疫耐受。CD4＋CD25＋调节性T细胞可抑制CD4＋、CD8＋T细胞。     

HBV感染对趋化因子CCL20表达的影响及其意义

目的　研究HBV不同感染状态对CCL2 0表达水平的影响,探讨CCL2 0在乙肝病毒感染中的作用。方法　通过基因体外转染技术,建立HBV不同感染状态的肝细胞模型;以内对照定量RT PCR检测HBV不同感染状态下CCL2 0的表达水平。结果　HBV不同感染状态下CCL2 0的表达水平不同,HBV未感染肝细胞CCL2 0表达水平每10 6 细胞为(2 .6 5±0 .0 2 )pg 10 μl,HBV短暂感染肝细胞CCL2 0的表达水平每10 6 细胞为(3.4 3±0 .0 2 )pg 10 μl,而HBV持续感染肝细胞CCL2 0的表达水平每10 6 细胞为(1.2 2±0 .0 4 )pg 10 μl,上述三种不同感染状态下肝细胞表达CCL2 0的水平差异有统计学意义,表现为HBV短暂感染肝细胞>未感染肝细胞>HBV持续性感染肝细胞(P <0 .0 5 )。在HBV同一感染状态下,CCL2 0的表达水平与HBV感染时间、细胞的培养时间、病毒载量等因素未见显著性相关;上述细胞经乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)活化后,相应细胞CCL2 0表达均明显增加(P <0 .0 5 ) ,但并不改变CCL2 0在各细胞中的表达格局。结论　HBV的不同感染状态影响了CCL2 0的表达。     

乙型肝炎病毒受体的研究进展

乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，HBV）感染是当前严重的全球健康问题之一，对慢性乙型肝炎至今仍缺乏有效的控制手段和彻底的解决方案，HBV与肝细胞之间相互作用分子机制的研究进展相对滞后是严重影响新型治疗方法和药物研发的重要原因之一。 病毒与细胞受体的结合是病毒感染宿主细胞的第一步，它决定病毒能否成功感染细胞，具有特别重要的意义。病毒表面具有“细胞识别蛋白”，在宿主细胞表面则有相应的靶细胞受体。病毒侵入特定细胞的首要步骤是病毒颗粒与其宿主细胞表面受体特异性相互作用。已有的研究表明，HBV具有严格的宿主易感性和嗜肝细胞性，感染早期存在于HBV外膜的抗原特定肽段与肝细胞上特异受体识别并结合，介导病毒进入细胞，启动HBV的复制周期。因此病毒的受体是HBV进入肝细胞的门户，阻断HBV与其受体的结合是治疗乙型肝炎的重要途径之一。迄今为止，多数病毒与其细胞受体的关系得到了鉴定，对HBV虽然报道了很多可能起作用的受体，但至今仍无法确定到底是什么受体起关键作用。本文就HBV的受体研究进展作一综述。     

B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠HBsAg免疫效果影响的初步研究

目的:应用HBV转基因小鼠动物模型,研究B7-H1对HBsAg免疫效果的影响.方法:用重组人B7-H1与血源性HBsAg联合免疫HBV转基因小鼠,采用ELISA方法观察对转基因小鼠所诱生的HBsAg特异性Th1类细胞因子的影响,ELISPOT方法检测不同免疫方案对小鼠HBsAg特异性分泌IFN-γ T细胞数量的影响,同时检测对小鼠淋巴细胞增殖及血清HBsAb水平的影响.结果:HBsAg组及HBsAg+B7-H1组免疫后脾细胞产生的Th1类细胞因子(IFN-γ、IL-2)、HBsAg特异性分泌IFN-γ T细胞、T细胞增殖及血清HBsAb水平较对照组显著增加(P<0.05),但HBsAg组及HBsAg+B7-H1组之间无显著性差异.结论:HBsAg可以诱导乙肝转基因小鼠产生高水平Th1类细胞因子,并诱导小鼠产生特异性的体液免疫,打破免疫耐受.B7-H1对HBsAg在HBV转基因小鼠中的免疫效果无影响.     

肝脏炎症反应促进肝癌转化调控新机制

正肝细胞癌(HCC)是全球癌症相关死亡的第三大原因。慢性炎症与肝癌的发展有着直接的因果关系,是肝癌最重要的病理特征之一。多种病理因素,如HBV和HCV感染、饮酒、致癌基因、DNA损伤和肥胖,均能够诱导炎性肿瘤微环境,进而促进肝癌的发生发展。但是,肿瘤肝细胞与炎性肿瘤微环境的相互作用和调控机理尚不完全清楚。先前的研究证明转录因子NF-κB失活引起的肝细胞坏死促进炎性肿瘤微环境,进而刺激存活的肝细胞代偿性增殖,在化学性肝癌小鼠模型中促进肝癌的发展。可是,也有研究表明NF-κB失活引起的肝细胞凋亡在炎性介导的肝癌小鼠模型中却抑制肝癌的发生发展。有意思的是,虽然肝细胞NF-κB活性在HBV和HCV感染的肝癌病人中降低,但在近40%左右肝癌病人中反而增强。肝细胞NF-κB活性对肝癌的发生发展究竟是敌是友,至今尚无定论,影响了肝癌的有效治疗。