lncRNA SNHG1调控miR-5195-3p抑制IL-6诱导的胃癌细胞增殖和转移北大核心CSCD

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG1调控miR-5195-3p抑制IL-6诱导的胃癌细胞增殖和转移促进作用的机制。方法:以胃癌细胞HGC-27为研究对象,将细胞分为Control组(不做任何处理)、IL-6组(50 ng/ml的IL-6处理细胞)、IL-6+si-NC组(转染si-NC,用IL-6处理细胞)、IL-6+si-SNHG1组(转染si-SNHG1,用IL-6处理细胞)、IL-6+si-SNHG1+anti-miRNC组(共转染si-SNHG1和anti-miR-NC,用IL-6处理细胞)、IL-6+si-SNHG1+anti-miR-5195-3p组(共转染si-SNHG1和anti-miR-5195-3p,用IL-6处理细胞)。采用qRT-PCR法检测SNHG1、miR-5195-3p表达水平;MTT法检测细胞活性;Western blot法检测Ki-67、p21、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2蛋白表达;Transwell法检测迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测SNHG1和miR-5195-3p靶向关系。结果:IL-6组内SNHG1表达水平、细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki-67、N-cadherin、MMP-2蛋白表达明显高于Control组,p21、E-cadherin蛋白表达、miR-5195-3p表达水平明显低于Control组。IL-6+si-SNHG1表达水平、细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki-67、N-cadherin、MMP-2蛋白表达明显低于IL-6+si-NC组,p21、E-cadherin蛋白表达、miR-5195-3p表达水平明显高于IL-6+si-NC组。SNHG1靶向调控miR-5195-3p的表达,抑制miR-5195-3p可以逆转下调SNHG1对IL-6诱导胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。结论:SNHG1可能通过靶向负调控miR-5195-3p的表达抑制IL-6诱导的胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

沉默 HOXA11-AS 靶向 miR-766-3p 对 ox-LDL 诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨长链非编码 RNA (lncRNA) 同源异形盒基因 A11 反义 RNA (HOXA11-AS) 靶向微小 RNA-766-3p (miR-766-3p) 对氧化低密度脂蛋白 ( ox-LDL) 诱导的血管内皮细胞损伤的影响。 方法 以 100 μg / mL 的 ox-LDL 处理人脐静脉血管内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cell, HUVEC) 24 h 建立 细胞损伤模型。 将 HUVEC 分为对照 (con) 组、 ox-LDL 组、 ox-LDL + si-NC 组、 ox-LDL + si-HOXA11-AS 组、 ox-LDL + miR-NC 组、 ox-LDL + miR-766-3p 组、 ox-LDL + si-HOXA11-AS + anti-miR-NC 组、 ox-LDL + si-HOXA11-AS + anti-miR-766-3p 组。 RT-qPCR 检测 HOXA11-AS 和 miR-766-3p 表达。 流式细胞术分析细胞凋亡。 试剂盒检测 LDH 释放量、 胞内 SOD 活性。 ELISA 法检测培养液中 TNF-α、 IL-1β 水平。 双荧光素酶报告实 验确定 HOXA11-AS 和 miR-766-3p 的靶向关系。 结果 与 con 组比较, ox-LDL 组 HUVEC 细胞凋亡率、 LDH 释放量、 HOXA11-AS 表达量以及培养液中 TNF-α、 IL-1β 水平显著升高 (P< 0. 05), SOD 活性、 miR-766-3p 表达量显著降低 (P< 0. 05)。 与 ox-LDL + si-NC 组比较, ox-LDL + si-HOXA11-AS 组 HUVEC 细胞凋亡率、 LDH 释放量以及培养液中 TNF-α、 IL-1β 水平显著降低 (P< 0. 05), SOD 活性显著升高 (P< 0. 05)。 与 ox-LDL + miR-NC 组比较, ox-LDL + miR-766-3p 组 HUVEC 细胞凋亡率、 LDH 释放量以及培养液中 TNF-α、 IL-1β 水平显著降低 (P< 0. 05), SOD 活性显著升高 (P< 0. 05)。 miR-766-3p 是 HOXA11-AS 的直接靶点。 与 ox-LDL + si-HOXA11-AS + anti-miR-NC 组比较, ox-LDL + si-HOXA11-AS + anti-miR-766-3p 组 HUVEC 细胞凋亡 率、 LDH 释放量以及培养液中 TNF-α、 IL-1β 水平显著升高 (P< 0. 05), SOD 活性显著降低 (P< 0. 05)。 结论 沉默 HOXA11-AS 通过靶向上调 miR-766-3p 表达能够抑制 ox-LDL 诱导的血管内皮细胞凋亡、 氧化应 激和炎性反应。     

干扰SNHG7 对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究干扰小核仁RNA宿主基因7(SNHG7)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:分离培养人瘢痕疙瘩成纤维(KF)细胞,将si-NC、si-SNHG7、pcDNA3.1、pcDNA3.1-SNHG7、miR-NC、miR-122分别转染至KF细胞,记为si-NC组(SNHG7阴性对照组)、si-SNHG7组(SNHG7抑制表达组)、pcDNA3.1组(SNHG7阳性对照组)、pcDNA3.1-SNHG7组(SNHG7过表达组)、miR-NC组(miR-122阳性对照组)、miR-122组(miR-122过表达组)。将si-SNHG7分别与anti-miR-NC、anti-miR-122共转染至KF细胞中,记为si-SNHG7+anti-miR-NC组(miR-122阴性对照组)、si-SNHG7+anti-miR-122组(miR-122抑制剂组)。RT-qPCR检测SNHG7和miR-122表达水平;Western blot检测细胞周期素(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达水平;MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测SNHG7和miR-122的靶向关系。结果:与正常皮肤组织相比,瘢痕疙瘩组织SNHG7表达显著升高,miR-122表达显著降低(P0.05)。抑制SNHG7表达和过表达miR-122,CyclinD1、Bcl-2表达显著降低,P21、Bax表达显著升高,细胞增殖抑制率显著升高,细胞凋亡率显著升高(P0.05)。SNHG7靶向调控miR-122,抑制miR-122表达逆转SNHG7对KF增殖和凋亡的作用。结论:抑制SNHG7表达可抑制KF细胞增殖,促进其凋亡,具体机制可能与miR-122有关,为瘢痕疙瘩的治疗提供新思路和新靶点。     

lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的：探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法：采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型，随机分为：对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组；qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达；流式细胞术检测细胞凋亡率；ELISA检测TNF-α、IL-6水平；双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系；Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果：与对照组比较，模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高，miR-205-5p表达降低（P<0.05）；与si-NC...     

干扰LncRNA PVT1对LPS所致人支气管上皮细胞16HBE损伤的影响

目的探讨干扰LncRNA PVT1对脂多糖(LPS)所致人支气管上皮细胞16HBE炎症、氧化应激、凋亡的影响及其可能作用机制。方法采用LPS诱导16HBE细胞建立细胞损伤模型,将16HBE细胞分为对照组Control组、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-PVT1组、LPS+si-PVT1+anti-miR-NC组、LPS+si-PVT1+anti-miR-1301-3p组;采用qRT-PCR检测PVT1、miR-1301-3p的表达量;采用ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素13(IL-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测PVT1与miR-1301-3p的靶向关系。结果与Control组比较,LPS组PVT1的表达水平升高(P<0.05),miR-1301-3p的表达水平降低(P<0.05),IL-6、IL-13、TNF-α的水平与MDA、LDH的含量及凋亡率升高(P<0.05),SOD的含量降...     

lncRNA PCGEM1通过靶向miR-155-5p抑制LPS诱导的气管平滑肌细胞增殖及炎症反应北大核心CSCD

目的研究lncRNA PCGEM1/miR-155-5p轴对LPS诱导的气管平滑肌细胞增殖和凋亡及炎症反应的影响。方法采用100μg/ml LPS刺激支气管平滑肌细胞BSMC 12 h以诱导细胞损伤。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞lncRNA PCGEM1和miR-155-5p表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞CyclinD1、Cleaved-caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA PCGEM1和miR-155-5p靶向关系。结果与NC组比较,LPS组细胞lncRNA PCGEM1表达水平显著降低,miR-155-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与pcDNA+LPS组比较,pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组lncRNA PCGEM1表达水平显著升高,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著降低(P<0.05)。与anti-miR-NC+LPS组比较,antimiR-155-5p+LPS组miR-155-5p表达水平显著降低,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著降低(P<0.05)。与miR-NC+pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组比较,miR-155-5p+pcDNA-lncRNA PCGEM1+LPS组细胞miR-155-5p表达水平显著升高,吸光度值、CyclinD1蛋白表达显著升高,细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著降低,TNF-α、IL-6、IL-33水平显著升高(P<0.05)。结论lncRNA PCGEM1下调miR-155-5p降低LPS诱导的气管平滑肌细胞凋亡及炎症反应,抑制增殖。     

依托咪酯通过促进miR-142-3p表达减轻缺氧诱导的PC12细胞神经炎症反应和细胞凋亡的分子机制研究

目的：探究依托咪酯是否通过调控miR-142-3p影响缺氧诱导的PC12细胞炎症反应和细胞凋亡。方法：采用不同剂量（2、6、12μmol/L）的依托咪酯预处理PC12细胞后建立缺氧模型;转染miR-142-3p模拟物或抑制剂后,采用0或12μmol/L依托咪酯预处理建立缺氧模型。采用CCK-8法、流式细胞术、Western blot分别检测细胞活性、凋亡、蛋白（CyclinD1、Cleaved-caspase-3）表达,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平,RT-qPCR检测miR-142-3p表达。结果：依托咪酯提高缺氧诱导的PC12细胞活性、CyclinD1蛋白和miR-142-3p表达,降低细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平（P<0.05）。上调miR-142-3p可提高缺氧诱导的PC12细胞活性、CyclinD1蛋白表达,降低细胞凋亡率、Cleavedcaspase-3蛋白表达及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平（P<0.05）。下调miR-142-3p可逆转依托咪酯对...     

仙茅苷调控miR-1247-3p表达对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应的影响北大核心CSCD

目的:探讨仙茅苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应的影响及分子机制。方法:肾小管上皮细胞HK-2随机分为正常对照组(Con)、高糖组(HG)、HG+仙茅苷低、中、高剂量组、HG+miR-NC组、HG+miR-1247-3p组、HG+仙茅苷+antimiR-NC组、HG+仙茅苷+anti-miR-1247-3p组;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-1247-3p水平。结果:仙茅苷低、中、高剂量处理后,高糖诱导的肾小管上皮细胞培养液中IL-6、TNF-α水平随药物浓度的增加逐渐降低,细胞凋亡率逐渐降低,miR-1247-3p表达水平逐渐升高(P<0.05)。与HG+miR-NC组相比,miR-1247-3p过表达肾小管上皮细胞培养液中IL-6、TNF-α水平降低,细胞凋亡率降低(P<0.05)。下调miR-1247-3p表达可逆转仙茅苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应作用。结论:仙茅苷通过上调miR-1247-3p表达抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症损伤。     

lncRNA SNHG17 靶向 miR-525-5p 对人绒毛膜滋养层细胞增殖、 迁移和侵袭的影响

目的 探讨 lncRNA SNHG17 对人绒毛膜滋养层细胞生长及转移的影响及其可能作用机制。 方法 qRT-PCR 检测正常胎盘组织、 子痫前期胎盘组织中 lncRNA SNHG17 和 miR-525-5p 表达。 体外培养人绒 毛膜滋养层细胞 HTR-8 / SVneo, 分别转染 si-SNHG17、 anti-miR-525-5p 及其阴性对照; 采用平板克隆形成实 验、 划痕实验与 Transwell 实验分别检测细胞增殖、 迁移及侵袭能力; 双荧光素酶报告实验检测 miR-525-5p 与 SNHG17 的靶向关系。 结果 与正常胎盘组织比较, 子痫前期胎盘组织中 lncRNA SNHG17 表达升高, miR-525-5p 表达降低 (P< 0. 05)。 转染 si-SNHG17 后细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多, 划痕愈合率升高 (P< 0. 05)。 lncRNA SNHG17 靶向调控 miR-525-5p; 共转染 si-SNHG17 和 anti-miR-525-5p 后细胞克隆形成数 和侵袭细胞数减少, 划痕愈合率降低 (P< 0. 05)。 结论 沉默 lncRNA SNHG17 可通过促进 miR-525-5p 表 达而促进人绒毛膜滋养层细胞增殖、 迁移及侵袭。     

白果内酯调控LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴缓解肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的探讨白果内酯对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及其对lncRNA LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴的调控作用。方法用肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞建立细胞损伤模型(感染组);分别转染si-NC、si-LEF1-AS1后,用肺炎链球菌感染细胞(感染+si-NC组和感染+si-LEF1-AS1组);pcDNA、pcDNA-LEF1-AS1分别转染至肺泡上皮细胞后用白果内酯与肺炎链球菌共同处理细胞(感染+白果内酯+pcDNA组和感染+白果内酯+pcDNA-LEF1-AS1组)。ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;q RT-PCR法检测LEF1-AS1、miR-23b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测LEF1-AS1与miR-23b-3p的靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果白果内酯能够降低肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平和LEF1-AS1的表达量(P<0.05),并可降低凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05),还可促进miR-23b-...     

LncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过自噬对胃癌细胞活性及血管生成的影响

目的 探讨lncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过调节自噬对胃癌细胞活性及血管生成的机制研究。方法 将胃癌SCG-823细胞分为Control组、si-NC组、si-SNHG15组、miR-NC组、miR-123组、pcDNAPAK5组。RT-PCR检测细胞中SNHG15和miR-123表达；MTT法检测细胞增殖能力；Transwell小室法检测细胞侵袭能力；流式细胞仪检测细胞凋亡能力；Matrigel体外成管实验检测细胞血管生成能力；蛋白质印迹检测细胞中PAK5、VEGF、LC3、Beclin1、p62蛋白表达；双荧光素酶报告基因检验SNHG15和miR-123、miR-123和PAK5的靶向关系。结果 与人胃黏膜细胞系GES-1相比，人胃癌细胞系中ASG、MKN-45、SCG-823细胞中SNHG15表达明显升高，miR-123表达明显降低（P<0.05）；且SCG-823细胞中SNHG15表达明显高于ASG、MKN-45细胞，miR-123表达明显低于ASG、MKN-45细胞（P<0.05）。si-SNHG15组细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显低于...     

LINC00707靶向miR-374a-3p对LPS诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:研究长基因间非编码RNA 00707(LINC00707)靶向miR-374a-3p对脂多糖(LPS)诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响。方法:采用10μg/ml LPS处理肺上皮细胞BEAS-2B建立细胞损伤模型,并分为对照组(Con)、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-LINC00707组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-374a-3p组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-374a-3p组。RT-qPCR检测LINC00707和miR-374a-3p表达;ELISA试剂盒检测细胞培养液中IL-6和IL-1β水平;流式细胞仪检测BEAS-2B细胞凋亡率。双荧光素酶报告实验分析LINC00707和miR-374a-3p的靶向关系。结果:与Con组比较,LPS组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量、LINC00707表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-LINC00707组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。miR-374a-3p是LINC00707的靶基因,LINC00707负调控miR-374a-3p表达。与LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组比较,LPS+si-LINC00707+antimiR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著升高(P<0.05)。结论:干扰LINC00707通过靶向上调miR-374a-3p抑制LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和炎症因子释放。     

miR-495-3p通过调控HDAC9表达对缺氧/复氧诱导的神经细胞凋亡及炎症反应的影响

目的探讨微小RNA-495-3p(miR-495-3p)对缺氧/复氧(H/R)诱导的神经细胞凋亡及炎症反应的影响及机制。方法体外培养神经母细胞瘤细胞SK-N-SH,建立H/R损伤细胞模型。实验分组:Con组、H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-495-3p组、H/R+si-NC组、H/R+si-HDAC9组、H/R+miR-495-3p+pc DNA组、H/R+miR-495-3p+pc DNA-HDAC9组。采用q RT-PCR与Western blot分别检测细胞中miR-495-3p、组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)的表达;采用膜联蛋白V(AnnexinV)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;双荧光素酶报告基因检测miR-495-3p与HDAC9的靶向关系;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果与Con组比较,H/R组神经细胞中miR-495-3p的表达水平显著降低(P 0.05),HDAC9的表达水平显著升高(P 0.05);H/R处理后细胞凋亡率升高(P 0.05),细胞中Bax蛋白表达水平升高(P 0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平降低(P 0.05);miR-495-3p过表达或抑制HDAC9表达后细胞凋亡率降低(P0.05),Bax蛋白表达水平降低(P0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(P 0.05),而Bcl-2蛋白表达水平升高(P 0.05);miR-495-3p可靶向结合到HDAC9的3′UTR区,并下调HDAC9的表达;HDAC9过表达可逆转miR-495-3p过表达对H/R诱导的神经细胞凋亡及炎症因子表达水平的抑制作用。结论 miR-495-3p可通过靶向下调HDAC9的表达抑制H/R诱导的神经细胞凋亡及抑制炎性因子的产生进而对神经细胞发挥保护作用。     

miR-212通过靶向NRP1调节结肠癌SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答北大核心CSCD

目的:探讨miR-212在SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答中的调控作用,并初步分析其调控机制。方法:结肠癌SW480细胞分别转染mimic、miR-NC或miR-212-5p,RT-PCR检测神经纤毛蛋白1(NRP1)和miR-212-5p表达水平并进行相关性分析;TargetScan预测miR-212-5p潜在靶向基因NRP1,荧光素酶实验验证靶向关系;SW480细胞单独或联合转染miR-212-5p和pcDNA-NRP1,RT-PCR检测miR-212-5p和NRP1 mRNA表达水平,Western blot检测NRP1蛋白表达水平;流式细胞术分选干细胞阳性标记(CD44+)比例,Western blot检测性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(LGR5)蛋白表达;ELISA测定SW480细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL-4蛋白含量,RT-PCR检测IL-6和IL-4 mRNA表达水平。结果:与Control组相比,miR-212-5p显著上调SW480肿瘤干细胞miR-212-5p表达(P<0.05),下调NRP1表达(P<0.05),抑制CD44+、SOX2、LFR5表达(P<0.05),促进炎症反应和免疫应答(P<0.05);与NRP1组相比,miR-212-5p明显抑制因NRP1上调的CD44+、SOX2和LGR5表达(P<0.05),促进因NRP1下调的炎症因子表达(P<0.05)。结论:miR-212-5p靶向抑制NRP1表达,调节结肠癌SW480肿瘤干细胞样特性和免疫应答。     

miR-142-3p通过调控Hmgb1抑制雨蛙素诱导的大鼠胰腺外分泌细胞系AR42J凋亡

目的 探讨miR-142-3p调控Hmgb1对大鼠胰腺外分泌细胞系AR42J凋亡的影响。方法 将AR42J细胞分为空白组(blank)、急性胰腺炎模型组(AP,100 nmol/L雨蛙素作用24 h),再分别用miR-142-3p mimics、 mimics NC、miR-142-3p inhibitor和inhibitor NC转染模型组细胞,记为miR-142-3p mimics组、 mimics NC组、miR-142-3p inhibitor组和inhibitor NC组。用RT-qPCR检测细胞中miR-142-3p表达;Western blot检测HMGB1、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达;Hoechst染色测定细胞凋亡;流式细胞测量术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验明确miR-142-3p和Hmgb1的靶向关系。结果 与空白组相比,AP组中miR-142-3p表达水平显著下调(P<0.01),HMGB1、caspase-3蛋白表达量上调(P<0.05),Bax蛋白表达量显著上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达量显著降低(P&l...     

miR-142-5p 靶向 MCL-1 对胆管癌细胞上皮-间质转化及吉西他滨 化疗敏感性的影响

目的 探讨 miR-142-5p 靶向髓细胞白血病因子 1 (myeloid cell leukemin-1, MCL-1) 对人胆管癌 细胞 QBC939 上皮间质化 (epithelial-mesenchymal transition, EMT) 及吉西他滨 (Gemcitabine, GEM) 化疗 敏感性的影响。 方法 体外培养胆管癌细胞 QBC939 及人正常胆管上皮细胞 HIBEC, 随机分为对照组、 miR-142-5p 阴性对照 (NC) 组和 miR-142-5p 模拟物 (mimics) 组。 实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 法检 测各组 QBC939 细胞和 HIBEC 细胞中 miR-142-5p 和 MCL-1 mRNA 表达情况; 划痕实验和 Transwell 实验分别 检测各组 QBC939 细胞迁移和侵袭变化情况; 蛋白印迹分析法检测各组 QBC939 细胞上皮型钙黏蛋白 (E-cadherin)、 神经性钙黏附蛋白 (N-cadherin) 和波形蛋白 (Vimentin) 表达变化; 双荧光素酶报告实验验证 miR-142-5p 与 MCL-1 的靶向关系; 使用浓度为 0. 625 μg / mL GEM 处理转染 miR-142-5p 后的 QBC939 细胞, 同时设置对照组, MTT 检测细胞增殖, Annexin V-FITC/ PI 试剂盒检测细胞凋亡。 结果 与人正常胆管细胞 HIBEC 相比, 胆管癌细胞 QBC939 中 miR-142-5p 呈低表达, MCL-1 mRNA 呈高表达。 经 Targetscan Human 数据库预测显示, miR-142-5p 与 MCL-1 mRNA 3′UTR 区有结合位点。 与 MCL-1-3′UTR-WT + miR-142-5p NC 组比较, MCL-1-3′UTR-WT + miR-142-5p mimics 组荧光素酶活性降低 (P< 0. 05)。 与对照组和 miR-142-5p NC 组相比, miR-142-5p mimics 组 QBC939 细胞 miR-142-5p 表达水平、 E-cadherin 蛋白表达水平显著升高 (P< 0. 05), MCL-1 mRNA 和蛋白表达、 N-cadherin、 Vimentin 蛋白表达水平显著降低 (P< 0. 05), 细胞迁 移、 侵袭能力显著减弱 (P< 0. 05); 与 miR-142-5p NC + GEM 组相比, miR-142-5p mimics + GEM 组 QBC939 细胞存活率显著降低, 凋亡率增加 (P< 0. 05)。 结论 过表达 miR-142-5p 可通过靶向抑制 MCL-1 表达从而 抑制人胆管癌细胞的 EMT、 增加胆管癌细胞对 GEM 的化疗敏感性。     

circFADS2靶向miR-488-3p对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响

目的：探讨circFADS2对骨关节炎（OA）软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响及分子机制。方法：收集45例OA患者和33例健康体检者静脉血,RT-qPCR检测circFADS2和miR-488-3p表达水平;将软骨细胞分为control组、OA组（10μg/L IL-1β）、OA+si-circFADS2组、OA+si-NC组、OA+miR-488-3p mimic组、OA+miR-NC组、OA+si-circFADS2+miR-488-3p inhibitor组。MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测IL-6、IL-8水平;双荧光素酶报告实验检测circFADS2和miR-488-3p的靶向关系。结果：与健康体检者相比,OA患者血浆中circFADS2表达水平升高,miR-488-3p表达水平降低,且circFADS2和miR-488-3p的表达水平与患者年龄及OA分期显著相关（P<0.05）。抑制circFADS2表达或过表达miR-488-3p,OA细胞活性升高,细胞凋亡率降低,IL-6、IL-8水平降低（P<0.05）。circFADS2...     

miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤北大核心CSCD

目的:探究miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:进行PC12细胞培养并分组:Normal组(正常PC12细胞)、NC组(缺血性处理的PC12细胞,转染阴性对照质粒)、Model组(缺血性处理的PC12细胞)、miR-410-3p mimic组(缺血性处理的PC12细胞,转染miR-410-3p过表达质粒)、HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,转染HMGB1过表达质粒)、miR-410-3p mimic+HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,共染miR-410-3p过表达和HMGB1过表达质粒)。双荧光素酶报告实验验证miR-410-3p和HMGB1靶向关系。Western blot检测各组细胞中HMGB1、NF-κB p65的蛋白表达情况,qRT-PCR检测miR-410-3p表达情况。CCK8和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。ELISA检测各组细胞炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量。结果:miR-410-3p与HMGB1存在靶向关系。与Normal组相比,其余组细胞中miR-410-3p表达显著降低,HMGB1表达显著升高(均P<0.05)。与Normal组对比,其余各组细胞的增殖率明显下降,细胞凋亡率,炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量,HMGB1、NF-κB p65水平均明显升高(均P<0.05)。miR-410-3p可促进细胞增殖,降低细胞凋亡率、炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量及NF-κB p65水平,且miR-410-3p可通过负向调控HMGB1的表达,从而影响HMGB1/NF-κB通路对缺血性神经元的调控。结论:miR-410-3p过表达后,可通过抑制HMGB1/NF-κB通路表达,从而影响脑缺血性神经元细胞增殖、凋亡以及炎症损伤。     

抑制lncRNA LINC01503通过靶向调控miR-335-5p对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01503对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:将人肺癌H1299细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01503组(转染si-LINC01503)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LINC01503组(转染pcDNA-LINC01503)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-335-5p组(转染miR-335-5p mimics)、si-LINC01503+anti-miR-NC组(共转染si-LINC01503和anti-miR-NC)、si-LINC01503+anti-miR-335-5p组(共转染si-LINC01503和anti-miR-335-5p)、miR-NC+WT-LINC01503组(共转染miR-NC和WT-LINC01503)、miR-NC+MUT-LINC01503组(共转染miR-NC和MUT-LINC01503)、miR-335-5p+WT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和WT-LINC01503)和miR-335-5p+MUT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和MUT-LINC01503)。采用RT-qPCR检测miR-335-5p和LINC01503的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活力;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力的变化;双萤光素酶报告基因实验验证LINC01503与miR-335-5p的靶向关系。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中LINC01503表达水平显著升高,miR-335-5p表达水平显著降低(P<0.05);与Ⅰ/Ⅱ期阶段相比,Ⅲ/Ⅳ期肺癌组织中LINC01503表达水平显著升高,miR-335-5p表达水平显著降低(P<0.05);LINC01503高表达的患者短期生存率显著低于LINC01503低表达的患者(P<0.05)。与正常支气管上皮细胞系BEAS-2B相比,肺癌细胞系H1299、A549和SPC-A-1中miR-335-5p的表达水平显著降低,LINC01503的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-335-5p、抑制LINC01503表达均可抑制H1299细胞的活力、迁移和侵袭,抑制细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。LINC01503靶向调控miR-335-5p的表达,干扰miR-335-5p表达能逆转抑制LINC01503表达对H1299细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论:抑制lncRNA LINC01503表达可抑制肺癌细胞的活力、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控miR-335-5p有关。     

依托咪酯上调miR-290-5p减轻LPS诱导的大鼠心肌细胞系H9C2损伤

目的探讨依托咪酯(Eto)对脂多糖(LPS)所致大鼠心肌细胞系H9C2损伤的保护机制。方法将H9C2细胞分为对照(Co)组、LPS组(1μg/mL的LPS处理6 h)、Eto+LPS组、miR-con+LPS组、miR-290-5p+LPS组、Eto+anti-miR-con+LPS组和Eto+anti-miR-290-5p+LPS组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及流式细胞计量术分别检测细胞活力及细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-290-5p的表达水平。酶连免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量。结果与对照组比较,LPS组H9C2细胞miR-290-5p表达降低(P0.05),细胞存活率降低(P0.05),凋亡率升高(P0.05),TNF-α和IL-6的含量升高(P0.05);与LPS组比较,Eto+LPS组H9C2细胞miR-290-5p表达升高(P0.05),细胞存活率升高(P0.05),凋亡率降低(P0.05),细胞培养液中TNF-α和IL-6的含量降低(P0.05);与miR-con+LPS组比较,miR-290-5p+LPS组H9C2细胞存活率升高(P0.05),凋亡率降低(P0.05),细胞培养液中TNF-α和IL-6的含量降低(P0.05);与Eto+anti-miR-con+LPS组比较,Eto+anti-miR-290-5p+LPS组H9C2细胞存活率降低(P0.05),凋亡率升高(P0.05),细胞培养液中TNF-α和IL-6的含量升高(P0.05)。结论依托咪酯上调miR-290-5p可减轻LPS诱导的心肌细胞凋亡及炎性反应。