调节性T细胞平衡相关因子在儿童紫癜性肾炎中的表达及其与血清中期因子的相关性

目的探讨调节性T细胞平衡相关因子在儿童紫癜性肾炎(HSPN)中的表达及其与血清中期因子(MK)的相关性。方法抽取本院2015年1月至2017年12月收治的HSPN患者75例(急性期35例,缓解期40例),通过流式细胞仪测定调节性T细胞、Th17细胞比例,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清白介素-6(IL-6)、白介素-17(IL-17)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及MK水平,且经由逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测特异性转录因子叉状头转录因子(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体转录因子(RORγt)mRNA表达,另Pearson相关性分析血清MK与相关指标的关系。结果与对照组比较,观察组急性期、缓解期患儿调节性T细胞比例、Foxp3 m RNA表达均显著低,Th17细胞比例、血清IL-6、IL-17、TGF-β1、MK水平、RORγt mRNA表达均显著高,差异有统计学意义(P<0.05);观察组急性期患儿调节性T细胞比例显著低于缓解期患儿,而Th17细胞比例、血清IL-6、IL-17、TGF-β1、MK水平均显著高于缓解期患儿(P<0.05);观察组患儿血清MK水平与L-6、IL-17、TGF-β1均显著正相关(P<0.05),而与Foxp3、RORγt mRNA表达不相关(P>0.05)。结论 HSPN患儿调节性T细胞降低,Th17细胞及其相关因子、MK水平上升,血清MK与IL-6、IL-17相关,而与Foxp3、RORγt不相关;MK水平上升、Th17细胞与调节性T细胞失衡可能共同参与HSPN发病过程。     

小檗碱调节睡眠剥夺大鼠的肠道菌群结构以及Th17/Treg细胞平衡

目的研究小檗碱对睡眠剥夺大鼠肠道菌群以及辅助性T细胞17(Th17)和调解性T细胞(Treg)细胞的影响。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、低和高剂量小檗碱组(BBR1和BBR2,100和200 mg/kg,灌胃10 d干预)。小站台水环境法建立睡眠剥夺模型。检测大鼠直肠内容物中细菌数量,流式细胞计量技术分析大鼠肠道Th17/Treg细胞比值,并检测肠道白介素17(IL-17)、RAR相关孤儿受体(ROR)C和叉头框蛋白P3(Foxp3)表达。结果模型组大鼠肠道内产气荚膜梭菌数量增加(P0.05),而其他检测菌群数量降低(P0.05);Th17/Treg细胞比值升高(P0.05);IL-17和RORC表达升高(P0.05),Foxp3表达降低(P0.05)。小檗碱处理降低产气荚膜梭菌数量(P0.05),增加其他检测菌群的数量(P0.05);降低Th17/Treg细胞比值(P0.05);下调IL-17和RORC表达(P0.05),上调Foxp3表达(P0.05)。结论小檗碱能够拮抗睡眠剥夺诱导的大鼠肠道菌群结构和Th17/Treg细胞失衡。     

白介素38在变应性鼻炎发病机制中作用的初步研究

目的探讨白介素38(IL-38)与变应性鼻炎(AR)发病的关系及其机制。方法选取35例AR伴鼻中隔偏曲的患者和20例单纯鼻中隔偏曲的患者作为AR组和对照组,采集其鼻甲黏膜及外周血液,实时定量PCR法检测局部组织中IL-38mRNA的表达、免疫组化法检测局部组织内IL-38的表达;酶联免疫法(ELISA法)检测外周血中IL-38及Th17相关因子IL-17、IL-6的表达,同时以流式细胞术检测外周血中Th17细胞的表达,分析IL-38的表达与Th17相关指标水平的相关性;最后以重组IL-38干预AR患者外周血单个核细胞(PBMC)后检测Th17细胞的百分比率。结果 AR组局部组织及外周血中的IL-38表达水平较对照组显著降低,Th17细胞水平、IL-17及IL-6表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。AR组IL-38表达与Th17细胞水平、IL-17及IL-6呈显著负相关(P0.05);重组IL-38干预后AR组PBMC中Th17细胞百分比率显著下降(P0.05)。结论 IL-38在AR的发生发展中有重要作用,在AR中的低表达引起其对Th17细胞的抑制作用减弱与AR的发病密切相关。     

KD 患儿Th17 / Treg 细胞失衡和单核细胞趋化蛋白1 的关系研究

目的:探讨川崎病(KD)患儿外周血CD4+ CD25+调节T 细胞(Treg) / 辅助性T 细胞17(Th17)与单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的关系及其在KD 发病中的作用机制。方法:2014 年6 月至2015 年6 月选取本院收治的48 例KD 患儿(恢复期28 例,急性期20 例)为研究对象,另选取40 例健康体检儿童为对照组,采用ELISA 法测定两组血清中白细胞介素-15,17,23(IL-15,17,23)及MCP-1 水平,采用流式细胞术测定两组外周血Treg/ Th17 细胞比例。结果:KD 组患儿血清IL-15、IL-17、IL-23 及MCP-1 水平显著高于对照组(P<0.05),且急性期KD 患儿血清IL-15、IL-17、IL-23 及MCP-1 水平高于稳定期组。KD 组患儿Treg 细胞、Treg/ Th17、Th17 显著高于对照组(P<0.05),急性期KD 患儿Treg 细胞、Treg/ Th17 水平、Th17 高于稳定期(P<0.05)。经Pearson 单因素分析,IL-15、IL-17、IL-23 及MCP-1 与Treg/ Th17 呈负相关(P<0.05)。结论:Treg 与Th17 细胞间的失衡及MCP-1 水平在KD 患儿体内持续升高可能与KD 病情发病及进展有密切的关系,通过测定KD 患儿Treg/ Th17 细胞比例及MCP-1 对评估患儿病情及预后具有一定的指导意义。     

支气管哮喘患者血清CCR5、eotaxin水平变化及其对免疫Th17、Treg细胞平衡的影响

目的观察支气管哮喘患者血清细胞趋化因子受体5(cell chemokine receptor 5,CCR5)、嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin水平变化,并分析其对免疫Th17、Treg细胞平衡的影响。方法选取我院2019年5月至2020年4月收治的120例支气管哮喘患者作为研究对象。根据疾病严重程度分为轻中度支气管哮喘组(n=72)、重度支气管哮喘组(n=48),选取50例健康人群作为对照组。采用ELISA法检测血清中CCR5、eotaxin含量,并通过流式细胞术测定患者外周血Th17/Treg等T细胞亚群分布。同时检测血清中白介素-17(interleukin-17,IL-17)白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平及肺功能用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、第1秒用力呼气量(forced expiratory volume in 1s,FEV_1)及FEV_1/FVC比值(FEV_1/FVC%)。Pearson相关性分析评估CCR5、eotaxin水平与Th17/Treg比值的关系。结果重度及轻中度哮喘组患者血清CCR5、eotaxin、IL-6及IL-17含量均明显高于对照组,且重度哮喘组患者高于轻中度组,两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。重度及轻中度哮喘组患者外周血Th17细胞、Treg细胞百分比及Th17/Treg比值均显著高于对照组,而Treg细胞百分比较对照组明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);但重度哮喘组上述指标和轻中度哮喘组患者差异无统计学意义(P0.05)。重度及轻中度哮喘患者肺功能水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。Pearson相关性分析结果显示,哮喘患者CCR5及eotaxin水平与Th17细胞百分比及Th17/Treg比值呈明显正相关性,而与Treg细胞百分比呈显著负相关性。结论随着哮喘严重程度增加,患者肺功能下降,且CCR5水平及eotaxin水平增加,促进Th17细胞百分比增加,Treg细胞百分比下降,Th17/Treg比值失衡,免疫功能紊乱,哮喘病情加重。     

血浆细胞因子表达紊乱与儿童克罗恩(Crohn′s)病的关系研究

目的探讨血浆细胞因子表达紊乱与儿童克罗恩病发病的关系。方法选取2014年6月~2016年9月间于我院收治的CD患儿35例及体检健康正常儿童30例为研究对象,按照CD活动程度差异分为轻度活动组和中重度活动组;检测CD组和对照组血浆IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-17A、IL-23、TNF-α、TGF-β、IL-10、IFN-γ蛋白表达水平及转录因子T-bet、GATA-3、RORγt m RNA表达水平差异。结果 CD组患者血浆IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-17A、IL-23、TNF-α、TGF-β、IFN-γ表达水平均较对照组显著升高,IL-10表达水平均较对照组显著降低(P0.05);中、重度期活动组患者血浆IL-2、IL-12、IL-17A、IL-23、TNF-α、TGF-β表达水平均较轻度活动组显著升高(P0.05)。CD组患者T-bet、RORγt表达水平较对照组显著升高(P0.05);中、重度期活动组患者T-bet、RORγt表达水平均较轻度活动组显著升高(P0.05)。CD组患者T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3、RORγt/T-bet比值较对照组显著升高(P0.05);中、重度期活动组患者T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3、RORγt/T-bet比值均较轻度活动组显著升高(P0.05)。结论 Th1、Th2、Th17型细胞失衡导致的血清细胞因子表达紊乱与儿童型CD的发生有关,Th17型细胞数量增加在CD发病机制中起主导作用。     

中西医结合疗法治疗小儿过敏性紫癜的血清免疫学研究

目的探讨中西医结合疗法对小儿过敏性紫癜患者外周血免疫学指标的影响。方法选取本院收治的过敏性紫癜患儿76例,随机分为对照组和观察组各38例,对照组采用常规西药疗法,观察组在对照组的基础上口服自制化瘀降浊汤;分别于治疗前后抽取患儿空腹静脉血,以全自动生化分析仪测定血清免疫球蛋白及补体水平,并采用ELISA试剂盒对Th1辅助细胞分泌因子、Th2辅助细胞分泌因子及Th17辅助细胞分泌因子做定量分析。结果观察组的临床有效率显著高于对照组(P0.05)。治疗前2组患者在血清免疫球蛋白、补体及细胞分泌因子水平等方面均无显著性差异(P0.05)。治疗后2组患者免疫球蛋白IgA、IgE,补体C3,Th1辅助细胞分泌因子TNF-α,Th2辅助细胞分泌因子IL-4、IL-6、IL-10及Th17辅助细胞分泌因子IL-17A、IL-17F水平均显著降低,且观察组患者水平显著低于对照组(P0.05);Th1辅助细胞分泌因子IL-12显著升高,且观察组患者水平显著高于对照组(P0.05);而免疫球蛋白IgG、IgM,补体C4及Th1辅助细胞分泌因子IFN-γ在治疗前后及各组之间均无显著性差异。结论中西医结合疗法可发挥多靶点、低毒副损伤的优势,通过对多种炎性因子的调整平衡小儿过敏性紫癜患者的体液免疫和细胞免疫功能,有效清除患者血液系统炎性反应和微小血栓,为目前治疗小儿过敏性紫癜的理想策略。     

阿胶、黄明胶对被动吸烟小鼠肺脏Th17/Treg细胞亚群分化及相关细胞因子表达的影响差异

目的:探讨阿胶、黄明胶对被动吸烟小鼠肺脏Th17/Treg细胞亚群分化的影响及对肺脏的保护作用。方法:利用香烟烟雾暴露法建立小鼠被动吸烟模型,阿胶组和黄明胶组小鼠在烟熏同时分别给予阿胶和黄明胶干预。造模24周后,制作小鼠肺脏HE染色切片观察病理变化,利用流式细胞术检测肺脏Th17、Treg细胞亚群比例,利用ELISA试剂盒检测血清IL-6、IL-17A因子表达,利用RT-PCR法检测肺组织中RORγt、Foxp3因子转录水平。结果:模型组小鼠肺间质有大量炎性细胞浸润伴有肺实质损伤,肺脏Th17细胞亚群比例及RORγt因子转录水平显著升高(P均0. 05),Treg细胞亚群比例及Foxp3因子转录水平显著升高(P均0. 05),IL-17A、IL-6及TGF-β因子表达均显著升高(P均0. 05);阿胶组和黄明胶组炎性细胞浸润程度降低,肺实质损伤明显改善,阿胶组Th17亚群比例显著降低(P0. 05),Treg亚群比例及Foxp3因子转录水平均显著降低(P均0. 05),IL-17A、IL-6、TGF-β及RORγt因子转录水平均显著降低(P均0. 05);黄明胶组Th17亚群比例及RORγt、IL-17A及IL-6因子表达均无显著变化(P0. 05),Treg亚群细胞比例及Foxp3因子转录水平升高但差异无显著性(P0. 05)。结论:长期低剂量的香烟暴露会导致肺脏Th17细胞介导的炎症反应,阿胶通过下调Th17应答减轻肺脏局部炎症,且对肺脏的保护作用较黄明胶更为显著,黄明胶未表现出对Th17、Treg细胞亚群分化及相关细胞因子表达的显著影响,其抗炎机制有待进一步研究。     

雷帕霉素对高脂血症小鼠的治疗效果及作用机理探讨

目的探究雷帕霉素(RAPA)对高脂血症小鼠的治疗效果及其作用机制。方法 60只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和RAPA组,每组20只。对照组给予基础饲料喂养,模型组和RAPA组则给予高脂饲料喂养以建立高脂血症小鼠模型。连续喂养6周后,RAPA组小鼠以1 mg·kg~(-1)·d~(-1)的剂量腹腔注射RAPA,对照组和模型组小鼠腹腔注射等体积的生理盐水,连续给药4周。采用全自动生化分析仪测定小鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C血脂含量;采用Western blot检测小鼠血管内皮细胞mTORC1活性及自噬水平;采用流式细胞仪检测小鼠外周血Th17和Treg细胞表达水平;采用ELISA法检测小鼠血清IL-17、IL-6、IL-10和TGF-β含量。结果与对照组相比,模型组小鼠TC、TG及LDL-C血清含量显著升高(P0.05)。RAPA组小鼠TC、TG、LDL-C血清含量较模型组显著下降(P0.05)。模型组小鼠Phospho-S6K1和P62表达水平较对照组明显升高,RAPA组小鼠的Phospho-S6K1和P62表达水平较模型组显著下调(P0.05)。与对照组相比,模型组小鼠外周血Th17细胞比例及其分泌的IL-17、IL-6血清浓度明显上升,Treg细胞比例及其分泌的IL-10、TGF-β血清浓度明显下降,Th17/Treg细胞比率上升(P0.05)。与模型组小鼠相比,RAPA组小鼠外周血Th17细胞比例及IL-17、IL-6血清浓度明显下降,Treg细胞比例及IL-10、TGF-β血清浓度显著上升,Th17/Treg细胞比率下降(P0.05)。结论 RAPA可能通过抑制m TORC1的活化,增强小鼠体内的自噬水平,改善Th17/Treg细胞的免疫失衡,从而调节小鼠体内的血脂代谢。     

原发性肾病综合征患儿外周血Th17与CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的水平

目的:观察原发性肾病综合征(PNS)患儿外周血Th17细胞和CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)及其相关因子的水平和功能,初步探讨其在儿童PNS发病中的作用。方法:PNS患儿分为单纯型肾病(SNS)20例、肾炎性肾病(NNS)15例;同时以20例健康体检儿童作为对照组。采用流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞和Treg细胞比例;Real-time PCR法检测PBMC中RORC、IL-23p19和Foxp3 mRNA的表达;ELISA分别检测血清中IL-1β、IL-6、TGF-β1的水平。结果:SNS、NNS组患儿Th17细胞及RORC、IL-23p19 mRNA、IL-1β、IL-6的水平均明显高于正常组(P0.05),且NNS组患儿以上指标明显高于SNS组(P0.05);SNS、NNS组患儿Treg细胞、Foxp3 mRNA和TGF-β1水平的表达明显低于正常组(P0.05),其中两组疾病患儿血清TGF-β1的水平无统计学意义(P0.05),其余指标NNS患儿均明显低于SNS组(P0.05)。结论:Th17/Treg细胞功能失衡可能在儿童PNS的发病中起到重要作用,其失调程度可能与PNS的临床表现、对激素的敏感性、病理类型、及预后有关。     

血清25-羟基维生素D、Th17/Treg细胞失衡与新生儿缺氧缺血性脑病预后的相关性研究

目的:探究缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清25-羟基维生素D[25(OH)D]及Th17/Treg细胞水平的变化及其与患儿预后的关系。方法:选取2019-01-2021-01本院收治的79例HIE患儿(HIE组),根据临床分度分为中度组(46例)和重度组(33例);根据HIE组患儿神经发育随访情况将其分为神经发育正常组(52例)和不良神经发育组(27例)。选取同时期本院健康新生儿79例为对照组。利用流式细胞术检测外周血中Treg细胞比率、Th17细胞比率并计算Th1/Th17细胞比率;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中25(OH)D、白细胞介素(IL)-17、IL-23及IL-10和转化生长因子-β(TGF-β)水平。Cox风险比例回归模型评估HIE患儿预后不良的影响因素;采用Pearson法分析Th17/Treg与25(OH)D之间的相关性。结果:与对照组相比,HIE组血清中IL-17、IL-23水平、Th17细胞比率及Th17/Treg细胞比率较高(P<0.05),25(OH)D、IL-10、TGF-β水平、Treg细胞比率较低(P<0.05);与中度组相比,重...     

1型糖尿病患儿CD4~+T细胞亚群变化初探

目的 探讨CD4~+细胞亚群[Th1、Th2、CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Tr)及Th17细胞]在1型糖尿病(TIDM)患儿免疫发病机制中的作用.方法 新诊断TIDM患儿20例,同年龄对照组(Ctrl组)20例.用流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Tr及Th17细胞比例.荧光定量PCR(real-time PCR)检测Th1、Th2、Tr、Th17细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3、ROR-γt、IFN-、IL-4、IL-10、IL-17A、CTLA-4、GITR等细胞因子和负性调节因子mRNA表达;应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4、TGF-β、IL-6血浆水平.结果 (1)与正常对照组相比,TIDM患儿Th1细胞比例明显增高(P<0.01),Th2细胞比例明显降低(P<0.01),Tr和Th17细胞比例与正常对照组相比无明显差别(P>0.05).(2)Th1细胞转录因子及细胞因子T-bet、IFN-γ较正常对照组明显升高(P<0.01);Th2细胞转录因子及细胞因子GATA-3、IL-4明显降低(P<0.01);Tr细胞转录因子Foxp3表达与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),Tr细胞相关细胞因子及负性调节因子IL-10、CTLA-4及GITR基因表达明显低于对照组(P<0.01);Th17细胞转录因子ROR-γt及细胞因子IL-17A基因表达与对照组相比无明显差异(P>0.05);(3)TIDM患儿外周血IFN-γ浓度明显增高,IL-4明显降低,TGF-β、IL-6浓度无明显改变(P>0.05).结论 TIDM患儿Th1/Th2失衡,加上Tr细胞抑制功能缺陷,可能导致TIDM严重细胞免疫功能紊乱.     

急性期川崎病Th17细胞变化初探

目的 探讨Th17细胞在川崎病(Kawasaki disease,KD)免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿60例,正常同年龄对照组32例,KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后直接取血备检.采用荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4+T细胞IL-17A/F、转录因子ROR-γt、Foxp3及PBMC IL-6、TGF-β、IL-23p19、IL-27p28、IL-27EBI3、IFN-γ等mRNA表达;酶联免疫吸附试验检测血浆中IL-6、TGF-β、IL-23、IL-27、IFN-γ的蛋白浓度;流式细胞术检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)的比例.结果 急性期KD患儿CD4+T细胞高表达IL-17A及IL-17F(P<0.01),IVIG治疗后明显降低(P<0.01);急性期KD患儿IL-17A/IL-17F与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、白细胞数目(WBC)呈正相关(IL-17A:0.70,0.85,0.80,P<0.01;IL-17F:0.63,0.65,0.69,P<0.01);急性期KD患儿Th17细胞转录因子ROR-γt及前炎症细胞因子IL-6转录水平明显高于对照组(P<0.01),IVIG治疗后显著降低(P<0.01);TGF-β、IL-23p19、IL-27p28、IL-27EBI3 mRNA水平及血浆蛋白浓度与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);血浆IFN-γ浓度显著升高,mRNA水平无变化;急性期KD患儿CD4+ CD25+ Tr细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),其转录因子Foxp3表达亦明显降低(P<0.01).结论 急性期KD患儿Th17细胞过度活化可能参与了KD免疫发病机制.     

结直肠癌患者肿瘤浸润Th17细胞与临床病理特征相关性分析

目的探讨结直肠癌患者肿瘤浸润Th17细胞占淋巴细胞比例与临床病理特征相关性。方法采用流式细胞术检测28例结直肠癌患者正常黏膜组织和肿瘤组织中Th17细胞占淋巴细胞比例;用ELISA检测患者正常黏膜组织和肿瘤组织培养上清液中IL-17A水平,收集患者临床病理资料分析肿瘤组织中Th17细胞和IL-17A水平与临床病理特征的关系。结果结直肠癌患者肿瘤组织中Th17细胞占淋巴细胞比例为(2.47±0.34)%,正常黏膜组中为(2.24±0.24)%,二者之间无统计学差异(P0.05)。肿瘤组织培养上清液中IL-17A水平为(257.74±31.36)pg/mL,高于正常黏膜组(163.53±12.62)pg/mL(P0.05)。结直肠癌患者肿瘤组织中Th17细胞及IL-17A水平与患者年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小及肿瘤生长方式无关(P0.05),而与肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及TNM分期相关(P0.05)。正常黏膜组织中Th17细胞及IL-17A水平与各项临床病理参数无相关性。结论 Th17细胞可能参与了结直肠癌发生发展的免疫病理过程。     

过敏性紫癜患儿Th17、Treg 细胞及IL-17、IL-23 水平的测定

目的:观察过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)患儿急性期及恢复期Th17、Treg 细胞及IL-17、IL-23水平变化,以便更好地认识HSP 的免疫学发病机制,为HSP 的治疗提供帮助。方法:采用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测HSP 患儿65 例和健康对照组儿童30 例外周血中Th17 细胞和Treg 细胞比例;采用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定其血浆中IL-17、IL-23 水平。结果:HSP 急性期组Th17、Th17/ Treg 细胞及IL-17、IL-23 水平高于正常对照组(P<0.05),恢复期组较急性期组降低(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05)。HSP 急性期组Treg 水平低于正常对照组(P<0.01),恢复期组较急性期组升高(P<0.01),但是仍低于正常对照组(P<0.01)。单纯型、腹型和其他类型HSP 患儿Th17、Treg、Th17/ Treg 及IL-17、IL-23 水平相同(P>0.05)。HSP 急性期患儿Th17 细胞比例与IL-17 水平呈正相关(r =0.880,P<0.01);HSP 急性期患儿IL-23 水平与Th17 细胞比例、IL-17 水平呈正相关(r =0.838 或r =0.877,P<0.01)。结论:Th17、Treg、Th17/ Treg、IL-17 和IL-23 共同参与HSP 的发病,但在单纯型、腹型和其他类型中的水平无明显差异,值得深入研究。     

分子佐剂IL-17与IL-2对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprI免疫效果的影响

目的探讨分子佐剂IL-17、IL-2对铜绿假单胞菌(Pa)外膜蛋白OprI免疫效果的影响。方法分别以IL-17、IL-2作为分子佐剂用Pa外膜蛋白OprI于第0、2、4周免疫雌性C57BL/6小鼠,同时设立单独的佐剂与蛋白对照组。末次免疫2周后,ELISA检测各组小鼠血清IgG、IgA以及IgG亚类水平;ELISA法检测小鼠脾细胞上清中Th1/Th17型细胞因子INF-γ、IL-2、IL-17以及Th2型细胞因子IL-4、IL-6水平;MTT法检测IL-17、IL-2分子佐剂对小鼠脾细胞增殖情况的影响,并以ConA作为阳性对照;末次免疫2周后Pa鼻内感染小鼠,感染后10 d计算各组小鼠死亡率并取小鼠肺组织检测菌体载量。结果 ELISA结果显示,OprI-IL-17、OprI-IL-2组小鼠血清中IgG、Ig A以及IgG亚类水平均显著高于各对照组(P0.05),且其中各实验组IgG2a/IgG1的比值均大于1;IL-17、IL-2佐剂能够显著提高小鼠脾细胞上清中Th1/Th17型细胞因子INF-γ、IL-2、IL-17水平(P0.05),而Th2型细胞因子IL-4、IL-6水平则无显著差异(P0.05);此外,OprI-IL-17、OprI-IL-2组的淋巴细胞增殖最为显著(P0.05);相较于各对照组,OprI-IL-17、OprI-IL-2组能够显著降低小鼠肺组织菌体载量以及小鼠死亡率(P0.05),保护效果显著提高。结论 IL-17、IL-2佐剂均能有效增强Pa外膜蛋白OprI的体液、细胞免疫水平以及抗感染保护作用。     

川崎病急性期患者Th17细胞检测及意义

目的:探讨川崎病患者急性期Th17细胞的水平及意义。方法:急性期川崎病(KD)患儿43例,正常同年龄对照41例,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞占CD4+细胞的比例。荧光定量PCR(Real-time-PCR)检测RORγt和IL-23p19mRNA的表达。双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-6水平。结果:急性期KD患儿外周血Th17细胞比例及其特异性转录因子RORγt的mRNA表达分别为:(1.285±0.625)%、(M:5.62,Q:7.16),显著高于同龄对照组(0.584±0.407)%、(M:1.79,Q:2.55),(P0.01)。KD患儿血清IL-6水平显著增高[病人:(M:36.42,Q:129.77)、对照:(M:2.39,Q:1.15)](P0.01),且与Th17细胞比例成正相关(r=0.88,P0.01)。IL-23p19的mRNA表达与正常对照比较无显著差异[病人:(M:2.12,Q:3.05)、对照:(M:1.73,Q:2.79)](P0.05)。结论:急性期川崎病患者Th17细胞数量、血清IL-6水平升高;Th17可能作为急性炎症的启动因素,参与川崎病免疫发病过程。     

γδT17/Th17/Tc17细胞在H1N1重症感染小鼠肺脏中的分布及其与肺脏免疫损伤的关系

目的:探讨γδT17/Th17/Tc17细胞在H1N1重症感染小鼠肺脏中的分布及其与肺组织炎性损伤的关系。方法:通过滴鼻感染建立H1N1重症感染小鼠模型;采用流式细胞术检测小鼠肺组织中γδT17/Th17/Tc17细胞的比例和数目;采用ELISA和Luminex多因子试剂盒检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-17A、IL-1β、IL-23的浓度和血清中IL-17A的浓度。结果:(1)建立了H1N1重症感染小鼠模型;(2)感染后第3天小鼠肺脏中γδT细胞占总淋巴细胞的比例较对照组显著升高(P0.01),而Th和Tc细胞的比例较对照组无明显差异;(3)感染后第1天肺脏中γδT17细胞占总γδT细胞的比例和数目较对照组显著升高(P0.05);Th17和Tc17细胞占Th和Tc细胞的比例和数目较对照组也升高;其中γδT17细胞的数目显著高于Th17和Tc17细胞(P0.05);(4)感染后小鼠BALF中IL-17A的浓度逐渐升高,与对照组相比有显著性差异(P0.05);感染后第3天血清中IL-17A也显著升高(P0.05);BALF中可能参与γδT17细胞活化的IL-1β和IL-23的浓度较对照组显著升高。结论:γδT17细胞有可能以γδTCR非依赖的作用方式活化,并通过释放IL-17A参与H1N1重症感染小鼠早期肺组织炎性损伤过程。     

IL-12单克隆抗体通过调节肠黏膜免疫缓解克罗恩病模型小鼠肠道炎症

目的观察白细胞介素12单克隆抗体(IL-12 mAb)对IL-10敲除(IL-10 KO)的克罗恩病(CD)小鼠模型肠道炎症的治疗作用并分析可能的机制。方法选取15周龄雄性IL-10 KO小鼠16只,随机分为对照组及IL-12 mAb处理组。IL-12 mAb处理组小鼠给予腹腔注射IL-12 mAb(25 mg/kg,每周1次),对照组给予0. 2 m L生理盐水腹腔注射。处理4周后,采用炎症性肠病疾病活动度指数(DAI)及HE染色结合Spencer结肠炎组织学评分评估两组小鼠肠道炎症程度及组织学改变;采用活体肠黏膜异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)通透性实验评估两组小鼠肠黏膜屏障功能,并采用Western blot法检测肠黏膜密封蛋白1(claudin-1)的蛋白水平;采用流式细胞术检测肠黏膜CD3、CD4、γ干扰素(IFN-γ)和IL-4,评估Th1细胞/Th2细胞平衡。采用ELISA检测两组小鼠肠黏膜IL-13及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot法检测肠黏膜磷酸化的信号转导子与转录激活子6(p-STAT6)的蛋白水平。结果 IL-12 mAb治疗后第3周及第4周,IL-12 mAb处理组小鼠DAI及肠道炎症评分均显著低于对照组。同时,IL-12 mAb处理组小鼠肠黏膜通透性显著低于对照组,且肠黏膜claudin-1表达显著高于对照组。同时,IL-12 mAb治疗抑制肠黏膜Th1细胞比例,上调Th2细胞比例。信号通路分析中发现,IL-12 mAb治疗提高肠黏膜p-STAT6及IL-13水平,而抑制TNF-α水平。结论 IL-12 mAb可有效缓解CD小鼠模型的肠道炎症并保护肠黏膜屏障,可能与抑制肠黏膜Th1细胞免疫反应及上调STAT6信号有关。     

大鼠肝损伤模型中Th17/Treg失衡的研究

目的探究Th17细胞和调节性T细胞(Treg)失衡在急、慢性大鼠免疫性肝损伤模型中的意义和作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分为3组。尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)分别建立急性肝损伤模型组(AC)和慢性肝损伤模型组(CC),尾静脉注射PBS作为健康对照组(HC)。流式细胞分析术(FCM)检测Th17细胞和Treg细胞频率变化,并计算Th17/Treg比值;免疫组织化学方法检测Foxp3、RORγt蛋白表达情况;ELISA法检测外周血IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β等相关细胞因子的含量。结果与HC组比较,AC组Th17细胞频率及其相关因子(Foxp3、IL-17、IL-6等)水平显著升高(P0.05),Treg细胞频率及其相关因子(RORγt、IL-10等)水平亦升高(P0.05),但Th17/Treg比值较正常组上升(P0.05);与AC组相比较,CC组Th17细胞水平显著降低,Treg细胞显著升高,Th17/Treg比值较正常组下降(P0.05)。结论 Th17/Treg比值在急性免疫性肝损伤模型中明显上升,在慢性肝损伤模型中明显下降,Th17/Treg的失衡可能与肝损伤的发生和发展密切相关。