组蛋白乙酰化及其与肿瘤的关系

真核细胞中染色质的基本单位核小体 ,由核心组蛋白(Ｈ2Ａ、Ｈ2Ｂ、Ｈ3和Ｈ4 )、Ｈ1及ＤＮＡ组成。核小体组装过程中 ,(Ｈ3/Ｈ4 ) 2 四聚体首先与ＤＮＡ结合 ,随后两个Ｈ2Ａ/Ｈ2Ｂ异二聚体 ,结合到 (Ｈ3/Ｈ4 ) 2 结合处的 5′和 3′ＤＮＡ上形成核小体。核小体结构修饰是ＤＮＡ复制、转录、修复过程中的关键步骤。早在 30多年前 ,Ａｌｌｆｒｅｙ等已发现核心组蛋白Ｎ 端乙酰化能调节多种反式作用因子与核小体结合 ,从而影响基因转录。此后研究不断深入 ,发现组蛋白可有多种修饰方式 :泛素化、磷酸化[1] 、乙酰化[2 ] 、甲基化等 ,它们单独 (…     

HBVx基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋？…

目的：研究乙型为病毒Ｘ基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响。方法：用分子生物学的构建ＨＢＶｘ真核表达载体ｐ＾ＣＤＮＡ３．１．ＨＢＸ,用脂质体将真核表达载体Ｐ＾ＣＤＮＡ３．１－ＨＢＸ转染入肝癌细胞ＨＣＣ９２０４,Ｇ４１８ ５００ｍｇ·Ｌ＾－１筛选,获得稳定表达ＨＢｘ蛋白的细胞,阿霉素２０μｍｏｌ·Ｌ＾－１诱导细胞凋亡。电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：２０μｍｏｌ·Ｌ＾－     

HBVx蛋白的生物学功能特点

由ＨＢＶｘ基因编码的ＨＢＶｘ蛋白是一种多功能蛋白,不仅具有广泛的转式激活功能,而且可以通过许多复杂途径参与细胞的凋亡、ＤＮＡ修复的调控,与Ｐ５３的相互作用以及促进细胞周期的进程等,因此ＨＢｘ与病毒本身的复制以及宿主细胞的转录,增生,转化和凋亡有着密切的关系。     

PDGF-B链基因上游序列中与HMGI结合 A-T丰富区的初步分离和鉴定

一些动脉粥样硬化相关致病因素可诱导内皮细胞和单核细胞中血小板源生长因子 -Ｂ链 (ＰＤＧＦ -Ｂ)基因表达 ,这一过程涉及众多反式作用因子和基因上游调控序列之间的相互作用。染色体结合蛋白———高迁移率蛋白Ⅰ (ＨＭＧＩ)可通过与ＤＮＡ上的Ａ -Ｔ丰富区结合 ,影响多种基因的转录。目的 :分离和鉴定ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游序列中与ＨＭＧＩ结合的Ａ -Ｔ丰富区 ,并初步分析其功能。方法 :ＤＮＡ重组技术和凝胶迁移率改变法 (ＥＭＳＡ)。结果 :重组人ＨＭＧＩ蛋白 (ｒＨＭＧＩ)可与ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游序列结合。在 - 1 758/ 4 3ｂ…     

Hoxa-10基因在生殖过程中的作用

Ｈｏｍｅｏｂｏｘ（ＨＯＸ）基因,即同源异型基因,是研究果蝇发育时被发现的。这类基因都含有１８０ ｂｐ的同形异位框,编码６０个氨基酸的多肽,称为同源域,含这一功能域的蛋白称为同源域蛋白［１］,许多真核生物都含有这类蛋白,大多是转录调控因子。同源域具有ＤＮＡ结合功能,结合于靶ＤＮＡ位点,调控靶基因的表达。 ＨＯＸ基因在进化上相当保守［２］,在染色体上排列成簇,排列顺序与它们所控制的胚胎发育密切相关,称之为共线性规则。即在基因组中越靠近３－端的ＨＯＸ基因,在胚胎发育过程中越早表达［３］。在脊椎动物中,Ｈ…     

HMGI高表达促进单核细胞PDGF-B链基因转录

血管内皮细胞与循环血细胞 ,如单核细胞之间的相互作用 ,在动脉粥样硬化等重要心血管疾病发生和发展过程中具有极其重要的意义。众多的动脉粥样硬化相关因素也同时作用于这些细胞。我们曾发现高迁移率蛋白Ⅰ (ＨＭＧⅠ )能促进ＥＣＶ30 4细胞核转录因子ＮＦ -κＢ与ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游切应力反应元件 (ＳＳＲＥ)的结合。目的 :观察在整体细胞水平 ,ＨＭＧＩ对单核细胞系Ｕ937细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因转录的影响及蛋白激酶Ｃ磷酸化的调节作用。方法 :( 1 )利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ重组技术构建正义和反义ＨＭＧＩ表达载体 ;( 2 )脂质体法将…     

117 浆细胞的分化需要转录因子XBP-1

有关Ｂ淋巴细胞早期分化的转录因子的研究已取得较大进展 ,但对参与成熟和活化的Ｂ细胞终末分化为浆细胞的转录因子却知之甚少。该文作者研究发现 ,Ｘ盒结合蛋白 1(Ｘ ｂｏｘ ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ 1,ＸＢＰ 1)是Ｂ细胞分化为浆细胞所必需的转录因子。ＸＢＰ 1为ＣＲＥＢ ＡＴＦ(ｃｙｃｌｉｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ)转录因子家族的碱性亮氨酸拉链蛋白 ,广泛表达于成人的正常组织 ,在胎儿外分泌腺体、成骨细胞、成软骨细胞…     

构建HBV同源启动子断裂X基因质粒

由乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）引起的重症肝炎、肝硬化或肝癌而死亡者高达１００～２００万例／年。在自然宿主中仅有少数几种病毒与场症有关，ＨＢＸ蛋白致癌性较强。ＨＢＶＸ基因是ＨＢＶ４个开架阅读框中最小的一个，对应于１３７４～１８３８位核苷酸之间，编码１５４个氨基酸。该基因表达的ＨＢＸ蛋白为一种反式激活子。ＨＣＣ病人的肿瘤和肿瘤周围组织常可发现断裂Ｘ基因和完整长度Ｘ基因。本文报道利用含有同源启动子质粒ｐ４ａｌｘ和含有断裂ｘ基因质粒ｐＭＴ９Ｔ４１Ａ均建含有同源启动子的中间质粒ｐＸＰ再加上断裂Ｘ基因构建含有同源启动和断裂Ｘ基因的质粒ｐＸＰ９Ｔ４１Ａ，约４．１ｋｂ。并用该质粒与ＳＶ４０Ｌｕｃ共同转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，表明构建的质粒ｐＸＰ９Ｔ４１Ａ能表达ＨＢＸ蛋白，并与含异源启动子和断裂Ｘ基因的质粒ｐＭＴ９Ｔ４１Ａ的反式激活作用相类似。含有同源启动子更类似于ＨＢＶ感染者体内状况。进一步研究该质粒转基因动物中可能的病理变化与肿瘤抑制因子Ｐ５３蛋白的相互关系，与宿主细胞的整合以及细胞转化能力等，可望为ＨＣＣ的发病机理的研究提供一种有用的工具。     

土拨鼠肝炎病毒野毒及前C人工变异株的体外表达

１８９６和１８９８的Ｇ→Ａ变异是乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ变异的热点，１８９６变异导致ＨＢｅＡｇ翻译中断。这种变异被认为改变了ＨＢＶ的生物学特性，因而与慢性肝炎和重症肝炎相关。我们以人工变异的方法分别使野毒株土拨鼠肝炎病毒ＷＨＶ－８相当于ＨＢＶ１８９６及１８９６和１８９８位点产生Ｇ→Ａ变异，并构建了首尾相连的双体质粒。分别用这些质粒转染ＨｅｐＧ２细胞，结果其ＤＮＡ复制水平和转录水平未见明显差异。说明这种前Ｃ热点变异不影响ＷＨＶ复制。     

HBVx基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的：研究乙型肝炎病毒 Ｘ 基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响。方法：用分子生物学的方法构建 Ｈ Ｂ Ｖｘ 基因真核表达载体ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３１ Ｈ Ｂ Ｘ，用脂质体将真核表达载体ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３１ Ｈ Ｂ Ｘ转染入肝癌细胞 Ｈ Ｃ Ｃ９２０４ ， Ｇ４１８ ５００ ｍｇ· Ｌ－ １ 筛选，获得稳定表达 Ｈ Ｂｘ 蛋白的细胞，阿霉素２０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 诱导细胞凋亡。电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：２０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 阿霉素可诱导肝癌细胞凋亡，稳定表达 Ｈ Ｂｘ 蛋白的肝癌细胞凋亡率比未进行基因转染的肝癌细胞凋亡率低。结论： Ｈ Ｂｘ 蛋白可抑制阿霉素诱导的肝癌细胞调亡。     

HBsAg S与GM—CSF融合基因在L929细胞中的表达

将乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）主蛋白的编码基因Ｓ与人ＧＭ－ＣＳＦ基因融蛤 后,插入真核表达质粒ｐｃＤＮＡ１中,经质粒酶切鉴定及ＤＮＡ序列分析证明,目的基因插入ｐｃＤＮＡ１的ＣＭＶ启动子下降。以获得的重组质粒ｐＳＧＭ转染Ｌ９２９细胞,经ＲＴ－ＰＣＲ及细胞原位杂交证实目的基因的转录。     

肝炎患者外周血单个核细胞IL-18 mRNA和蛋白水平与HBV感染的关系

检测了慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(ＰＢＭＣ )ＩＬ 18基因及蛋白表达水平 ,以探讨ＩＬ 18在乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ )感染中的作用。1　材料与方法1 1　病例　慢性乙型肝炎 30例 ,排除合并感染其他病毒性肝炎 ,近 6月无应用影响免疫功能的药物。所有病例均检测血清ＨＢＶＤＮＡ水平 (斑点杂交法 )。1 2　方法　分别以逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ )技术 ,流式细胞术检测ＩＬ 18基因的转录及表达水平。方法见文献[1]。ＰＢＭＣ内ＨＢＶＤＮＡ检测 ,抽提细胞内ＤＮＡ后采用ＰＣＲ法扩增。所得实验结果采用ＳＰＳＳ 8 0软件进…     

肝癌的分子遗传学研究

肝癌为一种常见肿瘤,其发生与ＨＢＶ ＤＮＡ整合,癌基因及细胞凋亡基因的表达有关。肝癌细胞中有ＨＢＶ 的Ｘ及ｐｒｅＳ２／Ｓ基因的整合;癌基因ｃ－ｍｙｃ和突变型Ｔｐ５３基因等表达增强,Ｔｐ５３的第２４９密码子第三个碱基Ｇ→Ｔ颠换;促细胞凋亡基因ｂａｘ和细胞凋亡抑制基因ｂａｌ－２表达水平的增强。     

表达HBsAg和HBeAg小鼠成纤维胞膜型的建立

目的：建立表达乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）主要基因产物的细胞克隆，为研究ＨＢＶ的生物学性状及其致病机制提供细胞模型；方法：应用磷酸钙沉淀技术将环化的３．２ｋｂ ＨＢＶＤＡＮ和携带新霉素抗药基因的真核细胞表达载体ｐＣＮＣＸ，导入体外培养的小鼠成纤维ＮＩＨ３Ｔ３细胞；结果：成功地获得表达ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的小鼠成纤维ＮＩＨ３Ｔ３细胞克隆；结论：将ＨＢＶ基因组ＤＮＡ导入体外培养的非肝细胞，ＨＢＶ病毒的ＨＢ     

外周血单个核细包中乙型肝炎病毒感染的研究进展

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染乙肝（ＨＢ）患者外用血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ），ＨＢＶ－ＤＮＡ以游离和整合型两种形式存在于ＰＭＢＣｓ内。在ＰＢＭＣｓ内复制与表达。研究ＰＢＭＣｓ内ＨＢＶ感染对于探讨ＨＢ的临床进程、治愈和指导治疗等均具有重要的意义。最近提出了一种与上述相反的观点，ＰＢＭＣｓ内有关的ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＲＮＡ是吸附的结果，而非病毒的复制。     

外周血单个核细胞中乙型肝炎病毒感染的研究进展

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染乙肝（ＨＢ）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ），ＨＢＶ－ＤＮＡ以游离和整合型两种形式存在于ＰＢＭＣｓ内。在ＰＢＭＣｓ内复制与表达。研究ＰＢＭＣｓ内ＨＢＶ感染对于探讨ＨＢ的临床进程、治愈和指导治疗等均具有重要的意义。最近提出了一种与上述相反的观点，ＰＢＭＣｓ内有关的ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＲＮＡ是吸附的结果，而非病毒的复制。     

套式PCR和原位杂交技术检测肝病患者单个核细胞？…

目的 了解慢性乙型肝炎（中度）和原发性肝癌（ＨＢｓＡｇ阳性）患者ＰＢＭＣ内ＴＴＶ ＤＮＡ存在情况。方法 采用套式ＰＣＲ以及原位杂交技术检测外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）内ＴＴＶ ＤＮＡ。结果 套式ＰＣＲＳＷＩＭ２６例慢性乙型肝炎（中度）患者ＰＢＭＣ内ＴＴＶ ＤＮＡ阳性７例。阳性率２６．９％,非常显著高于健康对照（Ｘ＾１２＝１４．３,Ｐ〈０．００１）;２１例原发性肝癌（ＨＢｓＡｇ阳性）虱ＰＢＭＣ内ＴＴ     

p53基因结构与功能研究的新进展

ｐ５３蛋白的信号区有１个ＳＨ－３区结合部位,非专一ＤＮＡ结合区可促进顺序专一的ＤＮＡ结合区与ＤＮＡ损伤部位结合。ｐ５３蛋白可整合细胞对各种危急情况的反应,其信息传递途径上游是各种危急状况,有ＡＴＭ类的基因起作用。ｐ５３蛋白通过靶基因ｐ２１ＷＡＦ－１及ＧＡＤＤ４５调控Ｇ１关卡,也参加了Ｇ２／Ｍ关卡的调控;通过上调靶基因Ｂａｘ、ＩＧＦ－ＢＰ－３,抑制ＢｃＬ－２基因表达,调控凋亡;维持基因组的遗传学稳定性,行使抑瘤基因功能。     

乙肝病毒X基因与p53基因,转化生长因子的关系

Ｘ基因和Ｘ蛋白结构和功能上的特点表明其在ＨＢＶ复制和ＰＨＣ的发生发展有重要的作用，并因此而成为近期研究的热点。Ｘ蛋白通过与ｐ５３蛋白结合阻遏了后者作为肿瘤抑制基因的作用，阻断了ｐ５３诱导的细胞凋亡。在病变肝细胞中，Ｘ基因的表达与ＴＧＦ的表达相一致。在ＴＧＦ－β１量增加的情况下，Ｘ蛋白可能主要通过减少细胞表面的ＴＧＦ－β１Ⅱ型受体的量来降低ＴＧＦ－β１对细胞生长的抑制作用。     

肝细胞性肝癌患者乙肝病毒感染与p53基因变异的关系

慢性乙型肝炎与人类肝细胞性肝癌(ＨＣＣ)的发生密切相关,但其致癌机制尚不明了。我们以ＰＣＲ法检测ＨＣＣ标本中的ＨＢＶＤＮＡ,以免疫组化法检测ＨＣＣ标本中的Ｐ53蛋白,旨在了解ＨＢＶ感染与ｐ53基因变异之间的关系。58名病人的肝癌组织蜡块取材于1990～1995年在湖北医科大学附属二院及湖北省肿瘤医院住院的肝癌手术患者,其中男性36名,女性22名,平均年龄515岁。3例正常肝组细胞作为对照。用ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ,模板ＤＮＡ的提取参照有关文献适当改进。ＰＣＲ扩增及产物的检测均按试剂盒说明进行。用免疫组化法检测Ｐ53蛋白,5μｍ…