发光细菌JMU07的分离鉴定及其在生物毒性测定的初步研究

从乌贼表皮通过分离纯化得到一株发光细菌JMU07。该菌的菌落形态呈典型细菌菌落特征;显微镜下观察其为球杆状菌,革兰氏染色阴性。用荧光分光光度计测定其发光波长在420-650 nm之间,最大发光波长为477 nm。16S rDNA法测序,构建系统进化树,初步鉴定发光细菌JMU07为鳆发光杆菌(Photobacterium leiog-nathi)。生长发光曲线测定表明,发光细菌JMU07发光强度最高出现在对数中后期,相比明亮发光杆菌,JMU07具有发光强度高,持续发光时间长的特点。根据国标GB/T15441-1995研究HgCl2浓度与发光细菌JMU07发光强度抑制率的关系得到:HgCl2浓度与发光细菌JMU07发光强度抑制呈良好线性关系;JMU07 EC50为0.11 mg/L,略低于明亮发光杆菌的0.14 mg/L,表明JMU07对HgCl2的毒性更敏感。因此新分离得到的发光细菌JMU07有希望用于环境检测、食品卫生与安全等领域综合毒性的快速检测。     

发光细菌法测定环境中金属毒性的研究进展

在环境污染物的毒性评价和监测中,发光细菌法是一种具有快速、灵敏和廉价等优点的直接生物测试方法.本文简要回顾了发光细菌法的测定原理及其在水环境中的应用;总结了发光细菌法测定水环境中金属毒性的主要影响因素(如pH、有机无机配体和交互作用);重点评述了发光细菌法在土壤样品金属毒性测定方面的应用、不同提取方法的优缺点以及土壤金属毒性与形态之间的关系;提出今后应加强土壤中金属对发光细菌的毒害机理、土壤环境中发光细菌法标准化以及发光细菌法与其他测试方法的关系等研究.快速、廉价、标准化发光细菌法的建立对土壤环境中金属风险评价和监测具有重要的意义.     

海洋发光细菌的分离及其发光现象观察

利用海洋发光细菌常附着在动物体表的特征,从海洋动物体表分离发光细菌并进行纯化。将分离得到的海洋细菌用发光细菌培养基培养后在黑暗处进行观察,可以清楚地观察到细菌的发光现象。用此法分离海洋发光细菌简便易行,在简单的实验条件下即可取得良好的教学效果。     

发光细菌在水环境生物毒性检测中应用的研究进展

发光细菌是一类自身含发光基因且能够发出可见光的细菌,其分布非常广泛。由于具备了日常毒性检测所要求的快速灵敏以及再现性好的特点,发光细菌法愈来愈受到关注,且因其快速和低成本的特点常被用作早期预警系统。基因操作技术的介入更使得发光细菌试验具有了分辨各种毒性的功能。本文综述了发光细菌在环境毒性检测中的进展,重点介绍了基于发光细菌的毒性试验方法,以及在水质检测中的应用。     

硝化基质和产物对发光细菌的急性毒性

摘要：【目的】对硝化基质和产物对硝化过程的影响进行初步研究。【方法】采用发光细菌法,在pH=7.0的条件下,测定了氨、羟胺、亚硝酸和硝酸对发光细菌的急性毒性（15min-半抑制浓度（the half inhibitory concentration,IC50））。【结果】单一物质的毒性试验结果表明,硝化基质和产物对发光细菌的毒性随浓度的升高而增大,且具有较好的线性关系;氨、羟胺、亚硝酸和硝酸的IC50分别为2180.2 mg/L、6.2740 mg/L、1207.2 mg/L和3140.3 mg/L;其毒性大小顺序为：羟胺 >亚硝酸 >氨 >硝酸。按等效浓度混合法测定硝化基质和产物的联合毒性,结果表明：氨与羟胺、氨与亚硝酸、羟胺与亚硝酸对发光细菌的联合毒性呈相加作用;氨与硝酸、羟胺与硝酸、亚硝酸与硝酸对发光细菌的联合毒性呈独立作用;氨、羟胺、亚硝酸、硝酸四元混合物的联合毒性也呈相加作用。【结论】根据硝化基质和产物对发光细菌和硝化细菌抑制浓度的相关性,可用发光细菌发光强度的变化指示硝化基质和产物的抑制作用。     

发光细菌lux报告基因系统的评价及应用

细菌生物发光基因（ｌｕｘ）的成功分离和表达极大地促进了其在应用和基础研究上的进展,几乎所有的发光细菌可归于３个属（发光杆菌属（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）;弧菌属（Ｖｉｂｒｉｏ）;异短杆菌属（Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ））,ｌｕｘ基因是编码和调控发光细菌生物发光的操纵子,与其他报告基因相比,具有快速、简便、灵敏和对细胞无伤害的优点,在分子生物学、临床微生物、以及生化检测中呈现潜在应用价值。本文就ｌｕｘ报告基因系统的优缺点及其与常用的几个报告基因系统进行比较和评价,并就ｌｕｘ报告基因系统在基因表达、…     

细菌发光的分子生物学

早在古代,亚里士多德就曾发现腐烂的鱼在黑暗中会发出美丽的光。这一神奇的现象引起了许多人的惊异和探索,但对于细菌生物性发光(Bioluminescence)的正式描述却是一百多年前才有的事情。发光细菌最普遍的生活方式是作为自养菌生活在海洋中;或腐生于死鱼和烂肉中;或共生于海洋鱼类的肠道;或寄生于甲壳纲动物与昆虫的体内;或与真骨类鱼及鱿鱼共生形成发光共生体。发光细菌均为革氏阴性、能运动,棒状,兼性厌氧。几乎所有发光细菌都可划归到弧菌属(Vibrio)、     

漫谈生物的发光

发光生物的分布具有发光能力的生物,在大自然中分布很广,其中少数为一些细菌和真菌,大多数是存在于动物界的一些物种。细菌中的发光细菌(luminous bacteria),主要是海产的发光性水生微生物(plankton),目前已知的发光细菌,不下百十种之多,其中具有显著发光现象的有:磷光假单胞菌(photobacterium phosphoreum)、费氏无色菌(A chromobacter fisheri)、磷光弧菌(Vibrio phosphorescens)和发光杆菌(Bacillus photogenus)。这些发光细菌,除了常常引起夜间海面发光外,还由于它们的孳生繁殖,成为被污染的死鱼、水产加工品、尸肉在黑暗中发光的原因。在缺少冷藏设备的过去年代,     

细菌发光的分子生物学及发光基因的应用

本对发光细菌生物发光的分子生物学、发光基因在转染细胞中的表达、发光基因在分子生物这中的应用以及基因工程发光菌的应用进行了综述。     

首次用改造的生物发光细菌获取小鼠肿瘤精准三维图

爱尔兰科克大学MarkTangney领导的研究小组利用靶向肿瘤的生物发光细菌提供小鼠肿瘤的精准三维图片，从而进一步增加给送靶向肿瘤药物的潜力。这些专门设计的益生菌，就像在很多酸奶中发现的细菌一样，研究人员可以从被静脉注射进患有肿瘤的小鼠身上获得它们的全身生物发光图片。     

饲料原料中有毒有害物质的综合毒性测定法初探

目的建立发光细菌综合毒性测定法,对实验动物饲料原料中有毒有害物质进行初筛.方法用发光细菌作指示生物,测定金属离子Pb2+,Zn2+,Cr+,Hg2+和毒性物质苯酚,灭害灵;以Hg2+为毒性对照物,测定10种饲料原料和3种人用食品.结果发光菌对有毒有害物质和金属离子敏感.在所测定的范围内,其发光强度随浓度增加而减弱,即相对抑光率增强,呈负线性相关,其相关系数在0.92以上;以Hg2+为毒性对照物,对10种饲料原料和3种人用食品进行测定,其中脱水蔬菜相对抑光率最大,为39.74%,相当于1.85×10-5%Hg2+的表征毒性,提示该样品可能受到农药和化肥等较严重的污染.结论发光细菌综合毒性测定法,可用于饲料原料中有毒有害物质的初筛,是一种快速、经济、有效的方法.     

值得重视的新型酶试剂-萤光素酶

六十年代在研究萤火虫尾部发光机理中,发现了萤光素酶。之后人们又发现了许多结构上差异很大的多种萤光素酶。但研究最多的是萤火虫产生的萤光素酶和由海洋发光细菌产生的萤光素酶。它们所催化的底物——萤光素的结构非常不同,前者为6—羟基苯并噻唑,而后者为脂肪醛。     

发光细菌法快速监测和评价工业废水综合毒性

以汞、镉、铅、砷和六价铬的混合后对发光细菌的综合毒性为参照标准,对工业废水进行快速监测和毒性分级的研究,实验得出上述混合毒物与发光细菌的发光强度的相关关系是y＝40.9131-23.7200lnx,r-0.995。根据工业废水的相对发光强度,建议将工业废水划分为微毒,低毒、中等毒,高毒和剧毒五个毒性级别,并可根据上述线性关系,推算出有毒物质的浓度范围和相当于国家标准的倍数。应用此法对22份工业废水进行了实际测定与评价;还对四个企业工业废水处理前后的毒性进行了测定与毒性比较,结果表明处理后较处理前的毒性的毒性明显降低。     

基于分子系统学的鱼类种质鉴定技术

在生物学的探讨研究中,我们发现对物种进行准确的分类鉴定有益于其研究,并且可以改进对资源的保护手段和方法,鱼类种质鉴定技术已成为当前水产品贸易面临的一个新课题,它作为鉴定鱼类种质的依据,能最大程度地发挥鱼类的经济效应,为鱼类优良经济性状的保存、开发和利用提供一种科学的方法。现在分子生物学迅速发展,分子系统学研究技术在鱼类的种质鉴定中得到广泛应用。文章介绍了生物学分类方法的演变,列举了一些常见的鱼类系统分类和种质鉴定的分子技术。从分子水平上进行鱼类种质鉴定研究,弥补了传统形态学鉴定的某些局限,这对进出口口岸生物监测、非法贸易中的物种鉴定具有重要的理论意义和应用价值。     

应用5SrDNA间隔序列分析鉴定体细胞杂种

近年来,由于分子生物学的飞速发展,极大地推动了生命科学各分支学科在ＤＮＡ水平上的研究力度。就体细胞杂种的鉴定而言,仅形态、细胞学、生化方面的证据还远远不足,直接从ＤＮＡ水平上鉴定其杂种性质已成为必然。目前,从分子水平上鉴定体细胞杂种的方法有多种,如ＲＦＬＰ图谱分析、ＲＡＰＤ分析等。由于ＲＦＬＰ分析需要特异探针,ＲＡＰＤ分析的重复性较差,在一定程度上限制了两种方法在体细胞杂种鉴定方面的应用。据报道［１］,５ＳｒＤＮＡ（即５ＳｒＲＮＡ基因）在至今研究的所有真核生物中是以串联重复单位组成的,与卫星ＤＮ…     

应用基质辅助激光电离飞行时间质谱快速鉴定临床酵母菌

目的研究基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight MassSpectrometry,MALDI-TOF-MS)用于快速检测鉴定临床分离的酵母菌的可行性。方法应用Bruker MALDI-TOF-MS和VITEK 2-compact系统分别鉴定150株临床分离的酵母菌,结果不一致的菌株通过基因序列测定来鉴定。结果 MALDI-TOF-MS快速准确鉴定出了150株临床酵母菌,鉴定符合率在属水平上为100%,种水平上为94%。结论基于MALDI-TOF-MS鉴定方法具有很好的可重复性和准确性,并且其检测成本较低,实验准备时间很短,MALDI-TOF-MS可以用于临床分离的酵母菌的快速鉴定。     

DNA条形码技术应用于人参鉴定

人参(Panax ginsengC.A.Meyer),被人们称为“百草之王”,是国内外常用的珍稀名贵中草药和高级滋补品,濒临灭绝,是急需进行资源保护的珍贵物种.随着中草药市场的国际化,由于利益的驱动,市场上伪混品屡见不鲜,对其正确鉴定就成为进行资源保护的首要条件.国内外学者对人参等药用植物资源的鉴定和可持续利用进行了广泛研究.DNA条形码(DNA barcoding)技术是分子鉴定的最新发展,即通过比较一段或几段通用DNA片段,对物种进行快速、准确的识别和鉴定,是近年来生物分类和鉴定的研究热点,在物种鉴定方面显示了广阔的应用前景.在分析传统的鉴定方法在适用范围和局限性的基础上,着重介绍了新兴的DNA条形码技术及其分析方法在人参鉴定上的特点及应用.     

6硝酸纤维膜和丙酮沉淀尿蛋白质保存方法的比较

硝酸纤维膜法是一种简单、快速、经济的尿液蛋白质保存方法,但其与传统尿液蛋白质丙酮沉淀方法的差异有待进一步研究。相同尿液分别经硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法制备尿蛋白质,经液相串联质谱分析鉴定蛋白质,采用谱图数定量,研究两种不同方法的差别。结果显示硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法鉴定蛋白质数目几乎相同,鉴定蛋白质在谱图数的分布上几乎相同,鉴定蛋白质在蛋白质变异系数的分布上也几乎相同。因此,硝酸纤维膜法处理尿蛋白质与丙酮沉淀法基本一致,可以应用于大规模临床尿液样本的保存。     

光子计数方法探测明亮杆菌的发光图像

本文研制了用生物倒置显微镜和以微通道板为核心的超高灵敏度光电成像系统组成的光子计数显微成像系统,此系统具有高空间放大倍数（１６０×）和极高的光子放大倍数（１０７）,可探测到大小为μｍ量级,发光强度为１００光子／秒的发光图像。应用此系统拍摄到了单个明亮发光杆菌（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ）的发光图像,图像显示明亮发光杆菌的大小为２．４×０．６０（μｍ）２,单个细菌的发光强度在１００光子／秒量级。上述实验为明亮杆菌在环境保护中的应用提供了基本参数,也为进一步从细胞水平上研究发光细菌提供了可能。     

硝酸纤维膜和丙酮沉淀尿蛋白质保存方法的比较

硝酸纤维膜法是一种简单、快速、经济的尿液蛋白质保存方法,但其与传统尿液蛋白质丙酮沉淀方法的差异有待进一步研究。相同尿液分别经硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法制备尿蛋白质,经液相串联质谱分析鉴定蛋白质,采用谱图数定量,研究两种不同方法的差别。结果显示硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法鉴定蛋白质数目几乎相同,鉴定蛋白质在谱图数的分布上几乎相同,鉴定蛋白质在蛋白质变异系数的分布上也几乎相同。因此,硝酸纤维膜法处理尿蛋白质与丙酮沉淀法基本一致,可以应用于大规模临床尿液样本的保存。