南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变筛选研究*

通过链霉素对南昌霉素 (Nanchangmycin)产生菌NS 41 80菌株孢子的致死浓度测定基础上 ,采用诱变剂甲基磺酸乙酯 (EMS)的不同诱变剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素 ( 1 0 μg/mL)致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。然后从 3,0 0 0株链霉素抗性基因 (str)突变株中通过初筛获得比诱变出发菌株产素能力提高 2 0 %以上的菌株 2 0 2株。再进一步通过摇瓶复筛 ,获得比出发菌株产素能力分别提高 1     

UV与NTG复合诱变选育咪唑立宾高产菌

为选育咪唑立宾的高产菌株,对咪唑立宾产生菌Eupenicillum sp.E-0509-2的孢子分别进行了紫外线照射(UV)、亚硝基胍(NTG)和UV+NTG复合诱变处理筛选突变株。结果表明试验所确定的咪唑立宾产生菌的孢子诱变适宜条件为:将孢子悬液在电磁搅拌下,经紫外线照射处理60s后,以3.0g/L NTG处理20min。经发酵筛选试验,获得了一株遗传性状稳定、高产咪唑立宾的诱变菌株Eupenicillum sp.E-UN41,其咪唑立宾产量较出发菌株提高13倍。     

通过获得链霉素抗性基因突变株筛选小诺霉素高产菌株

通过链霉素对小诺霉素产生菌 (Micromonospora purpura) 49 1 2 #菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 3种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的改良高氏平板上 ,获得大量的链霉素抗性基因突变株 ,然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选小诺霉素高产菌株 ,获得小诺霉素菌株 49 1 2 3菌株。在摇瓶条件下 ,其产小诺霉素生物活性单位比出发菌株 49 1 2 #的摇瓶发酵单位提高了 40 %以上。小诺霉素的组分比由出发菌株的C2b∶C1a的 5∶5提高到 8∶2。C2b有效组分提高了 30 %;链霉素抗性基因突变与小诺霉素发酵单位突变之间 ,小诺霉素正突变率达到 40 %,负突变率达 2 6%,正突变大于负突变     

替考游动放线菌发酵生产替考拉宁的动力学模型

根据丝状菌的生长机理和替考拉宁的发酵动力学特征提出了一个简化的形态学结构模型,并用于描述替考拉宁的发酵过程．模型将菌丝分为三种类型：具有生长活性的菌丝(G)、具有代谢活性的菌丝(N)和失活的菌丝(D)．菌丝G可因失去生长活性而转化为菌丝N,菌丝N可因失去代谢活性而转化为菌丝D．菌丝G与菌丝生长有关,而菌丝N则与替考拉宁的合成有关．该模型能较好地描述替考拉宁发酵过程、     

南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变筛选研究

通过对链霉素对南昌霉素（Nanchangmycin)产生菌NS－41－80菌株孢子的致死浓度测定基础上,采用诱变剂甲基磺酸乙酯（EMS）的不同诱发剂量对菌株孢子进行诱变处理,诱变处理的孢子涂布在含链霉素（10ug/mL)致死浓度的高氏平板上,获得了大量的链霉素抗性基因（str)突变株。然后从3,000株链霉素抗性基因（str)突变株中通过初筛获得比诱变出发菌株产素能力提高20％以上的菌株202株,再进一步通过摇瓶复筛,获得比出发菌株产素能力分别提高100％,200％,300％高产菌株为48株,7株和1株,分别为复筛菌和初筛菌株的23．76％和1．60％,3．46％和0．23％,0．5％和0．03％,将产素能力提高240％以上5个菌株连同出发菌株连续3批次进行摇瓶发酵结果,5个突变株的产素能力均比出发菌株的产素能力提高57％－96．4％,其中突变株80－5．3－165菌株摇瓶发酵单位达6,000ug/mL以上,3批次摇瓶平均发酵单位达5,855ug/mL,建立了南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变快速高效的筛选方法。     

万古霉素耐药肠球菌基因分型及耐药性分析

目的了解本地区万古霉素耐药肠球菌(Vancomycin resistant Enterococci,VRE)耐药基因型别及耐药性,为临床治疗提供依据。方法用PCR方法检测56株VRE的耐药基因vanA、vanB、vanC、vanD、vanE和vanG;用K-B法检测其对临床常用14种抗菌药物的药敏,并用肉汤稀释法检测万古霉素和替考拉宁的药敏。结果 56株VRE中,vanA阳性的43株;vanB、vanC、vanD、vanE和vanG阳性0株;未检测到万古霉素耐药相关基因的13株。2011-2014年万古霉素和替考拉宁的MIC值呈逐年向左漂移趋势,与同期替考拉宁的使用有关。结论本研究所收集VRE对万古霉素的耐药大部分为高水平耐药,所携带的耐药基因类型主要为vanA,另有其他未知基因型以及少数vanA阳性但是表现为万古霉素敏感菌株。     

链霉素抗性突变--纳他霉素高产菌株的选育研究

应用链霉素抗性筛选法,将经过紫外线诱变处理的纳他霉素生产菌——褐黄孢链霉菌(Streptomyces gilvosporeus)ATC13326的孢子涂布在含有链霉素最小抑制浓度(0．6μg／mL)的培养基平板上,获得了122株链霉素抗性突变株。其中纳他霉素产量高于出发菌株的有13株,产量阳性效率达到10．6％,同时获得了产抗生素能力为出发菌株1．46倍的突变株SG-56。     

紫外诱变选育恩拉霉素高产菌株

本研究采用紫外诱变育种技术对一株产恩拉霉素抗真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus)F110进行了诱变处理,经链霉素抗性、利福霉素B抗性以及双重抗性筛选,共获得了132株抗生素抗性突变株,其中26株突变菌株的恩拉霉素产量与出发菌株相比均有明显提高。摇瓶发酵条件下,突变株SR93的恩拉霉素产量最高可达2 400μg/m L,与出发菌株相比提高了38%。传代结果表明:该突变株产素水平稳定,因此具备较好的开发及工业应用价值。     

替考拉宁与万古霉素治疗MRSA下呼吸道感染的临床疗效和安全性分析

目的对替考拉宁与万古霉素治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)下呼吸道感染的临床疗效和安全性进行分析。方法回顾性分析2013年6月至2014年12月我院收治的53例MRSA下呼吸道感染患者的临床资料,其中22例应用替考拉宁治疗(替考拉宁组),31例应用万古霉素治疗(万古霉素组);分别对其治疗前后的临床症状、体征、临床疗效、细菌清除情况以及不良反应进行分析,并将临床分离菌分别进行替考拉宁和万古霉素的体外药敏试验。结果替考拉宁组治疗时间平均(9.2±3.1)d,显著性低于万古霉素组的(14.9±3.3)d(P0.01)。替考拉宁组总有效率为77.3%,万古霉素组为77.4%,两组比较差异无统计学意义(χ2=0.000,P0.05)。替考拉宁组细菌清除率为72.7%,万古霉素组为83.9%,两组比较差异无统计学意义(χ2=0.972,P0.05)。药敏试验结果显示替考拉宁和万古霉素对痰液MRSA分离菌均有极强的抗菌活性。替考拉宁组出现与药物很可能和可能有关的不良反发生率为9.1%,万古霉素组为16.1%,两组比较差异无统计学意义(χ2=0.062,P0.05)。结论替考拉宁和万古霉素治疗MRSA下呼吸道感染疗效均较好,安全性高,但替考拉宁较之万古霉素使用时间更短。     

链霉素抗性突变——纳他霉素高产菌株的选育研究*

应用链霉素抗性筛选法 ,将经过紫外线诱变处理的纳他霉素生产菌———褐黄孢链霉菌 (StreptomycesgilvosporeusATCC1 332 6的孢子涂布在含有链霉素最小抑制浓度 (0 6μg mL)的培养基平板上 ,获得了 1 2 2株链霉素抗性突变株。其中纳他霉素产量高于出发菌株的有1 3株 ,产量阳性效率达到 1 0 6 % ,同时获得了产抗生素能力为出发菌株 1 46倍的突变株SG 56。     

ENHANCED β-GALACTOSIDASE PRODUCTION OF Aspergillus oryzae MUTATED BY UV AND LiCl

In order to breed a high-yield β-galactosidase-producing strain, Aspergillus oryzae was used as the parent strain and mutagenized with ultraviolet (UV) and UV plus lithium chloride (LiCl), respectively. After being mutagenized by UV, the β-galactosidase activity of mutant UV-15-20 reached 114.08 U/mL, which revealed a 49.22% increase compared with the original strain. A mutant UV-LiCl-38 with high β-galactosidase activity (121.42U/mL) was obtained after compound mutagenesis of UV and LiCl; the β-galactosidase activity of this mutant was 58.82% higher than that of the parent strain. Subculture testing indicated that UV-15-20 and UV-LiCl-38 had good hereditary stability and may be ideal strains for the production of β-galactosidase. Additionally, it was demonstrated that compound mutagenesis with UV and LiCl is an effective mutation method for breeding industrially interesting strains.     

曲酸生产菌的诱变选育

Aspergillusoryzae2336经两次紫外诱变后筛选出突变菌株UV21012-1。该菌株曲酸产量比出发菌株提高了1．68倍;遗传性状稳定,传代5次曲酸产量基本不下降,而且发酵周期也比出发菌株明显缩短。     

激光复合诱变选育叶酸高产菌

利用高效液相色谱测定发酵液中叶酸含量,比较产朊假丝酵母(Candida utilis)、异常汉逊酵母(ftan-senula anomala)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产叶酸能力的高低,从而确定生产叶酸的最佳菌种.出发菌株经紫外照射诱变后,再采用激光复合诱变方式进行进一步的筛选,并对其传代稳定性进行研究,以期进一步获得稳产高产叶酸产生菌突变株.结果表明产朊假丝酵母产叶酸量最高.紫外照射3 min得到的Y1.4菌株产叶酸量与原始菌株相比,产量提高了33.8%.激光一紫外复合诱变后筛选出4株产量较高的菌株,其中以Y2.12产量最高.Y2.12产叶酸量与原始菌株相比,提高了65.8%.经传代培养分析,Y2.12诱变株的产量稳定.该结果表明,激光复合诱变是获得高产叶酸的有效途径.     

高产番茄红素链霉菌选育及摇瓶发酵研究

番茄红素的抗氧化能力目前在类胡萝卜素中最强,是近年来国际上功能食品成分研究的热点。在国内首次利用龟裂链霉菌（Streptomyces rimosus）发酵生产番茄红素,建立了分光光度计法和HPLC法等番茄红素测定方法;以一株龟裂链霉菌Fc作为出发菌株,进行紫外诱变,筛选到一株突变高产菌株Fc’,其番茄红素产量较出发菌株提高2.5倍;通过摇瓶发酵实验优化培养条件,使菌株Fc’的番茄红素产量达到230 mg/L,并且在不添加任何阻断剂的情况下,利用链霉菌发酵可获得纯度较高的番茄红素。该结果为今后利用链霉菌工业化生产番茄红素奠定了良好基础。     

阿维链霉菌的诱变育种

以阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)76-12为出发菌株,采用亚硝基胍、吖啶橙、紫外线和氯化锂分别对其孢子和原生质体进行诱变,经抗代谢物理性筛选,获得一系列高产突变株,其中N-1-2高产突变株的发酵单位是出发菌株的2.47倍。实验中同时获得了只产阿维菌素a组分的突变株G-32、Bla组分含量高的Ave8菌株和产蓝绿色孢子的突变株UA-G等。     

高产耐热脂肪酶嗜热脂肪地芽孢杆菌的选育

采用氮离子注入技术对耐热脂肪酶产生菌嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）L4进行诱变,筛选获得酶活力有较大提高且传代稳定的正突变菌株L4-3;再对L4-3进行紫外线诱变,得到脂肪酶活力提高的正突变菌株L4-3-2,其脂肪酶活力达25．71U／mL,较原始菌株M提高511．9％。高产突变株L4-3-2所产脂肪酶的最适作用温度为50℃,70℃保温60min的剩余酶活为82％,最适作用pH为7．0～8．0,为一种耐热碱性脂肪酶。     

亚硝酸与紫外线复合诱变原生质体选育产酶菌株

目的：筛选出一株稳定、高产的产中性蛋白酶菌株。方法：以突变株UV_(11)(原生质体紫外诱变得到)为出发菌株,在原生质体形成与再生最佳条件下制备原生质体并进行亚硝酸与紫外线复合诱变。结果：得到突变株Bacillus subtilis UN_(19),产酶活力从最初的378．97U/ml提高到3965．84U/ml。结论：亚硝酸与紫外线复合诱变原生质体是一种很好的诱变方式。     

N+注入诱变选育菜粕硫苷降解菌的研究

为选育能够高效降解菜粕硫苷( Glucosinolates,Gls)的菌株,利用能降解硫苷的益生菌黑曲霉CICC-2238进行N+注入诱变.经过两次N+注入诱变,在诱变能量为20 keV,剂量为60 ×2.5×1013ions/cm2时,筛选到一株高效降解Gls的菌株H-109.与出发菌相比较,其Gls的降解率由28....     

低能离子注入L-乳酸生产菌种选育与发酵条件初步优化

通过20keV氮离子注入L-乳酸生产菌(Bacillus coagulans)筛选到一株产量比出发菌株提高10％的高产菌株RS12-6C,经多次传代实验表明该菌遗传稳定性较好。并对其发酵条件如接种量、装液量、摇床转速、温度等进行初步优化,在含糖150g/L的摇瓶中发酵,其L-乳酸产量达到117g/L。