莴苣组织传感器的研究

选用莴苣组织切片作为生物催化材料,与二氧化碳气敏电极组合,研制成对L-组氨酸有选择性响应的新型组织传感器.传感器的线性范围为1.0×10~(-4)～1.0×10~(-3)mol·dm~(-3),检测下限为3.2×10~(-5)mol·dm~(-3),斜率为54.2mV/dec.初步探讨了组织膜中酶促反应的动力学机理.测定了L-组氨酸脱羧酶的动力学参数K_m和V_m.     

卷柏中挥发性组分的酶提取及气相色谱-质谱分析

用酶提取卷柏中挥发性组分，考察pH值、酶用量、样品粒度等因素对提取率的影响。测得其挥发油的含量为w＝5.85%。采用气相色谱-质谱法(GC/MS)分离确认出31种化学成分,其中主要成分为雪松醇,占总挥发油的45.07%。并将酶提取法(CE)与水蒸汽蒸馏-萃取法(DSE) 法进行了对比。     

两种蜘蛛多肽毒素的电喷雾电离质谱法序列分析

虎纹捕鸟蛛毒素-(HWTX-)和敬钊缨毛蛛毒素-(JZTX-)是两种蜘蛛多肽类神经毒素。它们的大部分氨基酸序列已由Edman降解法测出,但仍有部分序列由于某些原因未能确定。为了鉴定未知部分的序列,利用电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Qq-TOF-MS)对两种蜘蛛毒素的酶解产物进行分析,获得其酶解片段的一级(MS)和二级(MS/MS)图谱,在用软件和手工的方式对含有未知序列的肽段进行解析后,得到未知部分确切氨基酸序列。研究表明:利用质谱的从头测序(denovosequencing)方法获得HWTX-和JZTX-完整的氨基酸序列。该方法在蛋白质和多肽的结构分析和鉴定与传统方法相比具有高灵敏度和快速的优势,是对传统Edman化学降解法的一个很好的补充。     

MALDI-TOF质谱技术分析加州海兔口腔神经节中超微量 Leu-Leu多肽酶

利用丙酮 -水 -酸 (4 8∶ 5 0∶ 2 V/ V)萃取系统 ,从加州海兔 (Aplysia California,AC)口腔神经节中提取 L eu- L eu多肽酶 ,并用反相 HPL C进行纯化。选用具有三对 L eu- L eu结构的酸性多肽 (acidic peptide,AP)作为探针 ,以基质辅助激光解吸电离飞行时间 (MAL DI- TOF)质谱技术研究了海兔口腔神经节中的超微量 L eu- L eu多肽酶。对 L eu- L eu多肽酶的活性与类型及温度处理效果进行讨论。本技术也适用于分析其他组织与细胞中存在的各种超微量多肽酶     

糖基转移酶反应的基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法监测

以wabD(大肠杆菌O77中O抗原基因簇内)编码的α-1,3-甘露糖转移酶、wfgD(大肠杆菌O152中O抗原基因簇内)编码的β-1,3-葡萄糖转移酶和ωfeD(志贺氏菌鲍氏O14中O抗原基因簇内)编码的β-1,4-半乳糖基转移酶酶促反应产物为研究对象,尝试应用碰撞诱导解离(CID)负离子模式基质辅助激光解吸电离-飞行...     

早衰因子及其突变对BACE1活性调控的研究

阿尔兹海默症(Alzheimer's Disease,AD)是一种以记忆力减退、认知功能障碍为特征的中枢神经系统退行性疾病,其典型病理特征为神经元胞外沉积的大量β淀粉样蛋(Amyloidβpeptide,Aβ)而形成的老年斑。Aβ是由β-淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein,APP)通过β-分泌酶(beta-site amyloidβprecursor protein cleaving enzyme1,BACE1)和γ-分泌酶有序切割产生的。而γ-分泌酶的活性中心早衰因子(Presenilin1,PS1)对BACE1的调控作用,可能对Aβ的产生发挥重要的作用。通过Western Blot和Real Time PCR的方法探讨了PS1缺失情况下,BACE1的表达水平以及活性,结果显示在MEF PS1敲除细胞中,BACE1的表达水平会显著下降,对APP的水解切割能力也会显著下调,当瞬时转染PS1后,这种现象会被翻转,BACE1的表达水平和mRNA水平均会显著上调。同时还发现在加入γ-分泌酶抑制剂L-685,458后,也可以很好的翻转MEF PS1~(-/-)PS2~(-/-)细胞中瞬时过表达PS1后所产生的影响。PS1突变L166P和Q223R可以显著性的增加APP的水解切割过程以及BACE1的表达水平以及活性,当加入γ-分泌酶抑制剂L-685,458后,能显著性的抑制PS1突变对BACE1的表达水平,活性以及mRNA水平。以上结果表明,PS1能够调控BACE1的表达水平,进而影响Aβ的产生。     

环丙沙星快捷的ELISA检测方法

1材料与仪器1.1材料环丙沙星标准品(9 9.7%)中国兽医药品监察所;H T(50×)、HAT(50×)、50%PEG Sigma原装;联苯二胺(OPD)、抗体亚型鉴定试剂盒Sigma原装;羊抗鼠Ig G F(ab’)2、鼠Ig G标准品Sigma原装;HRP酶标羊抗小鼠Ig G北京中山试剂;96孔酶标板JET。1.2仪器设备     

基于多孔铂纳米球的白细胞介素-8超灵敏检测电化学免疫传感方法研究

超灵敏检测白细胞介素-8(IL-8)有助于口腔癌的早期诊断。本实验采用多孔铂取代天然的辣根过氧化物酶,催化双氧水(H2O2)实现信号转化与放大,构建了一种超灵敏的IL-8无酶电化学免疫传感器。采用透射电镜(TEM)和紫外可见吸收光谱(UV-Vis)对合成的多孔铂纳米酶进行形态和性能验证,利用交流阻抗法(EIS)、循环伏安法(CV)和方波伏安法(SWV)进行电化学性能表征。在最优的条件下,该方法的检测范围是100~5000fg/mL,检出限为85fg/mL(S/N=3)。将IL-8标准加入唾液中进行检测仍得到很好的结果,该方法对辅助口腔癌的早期诊断和治疗有潜在的应用价值。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法分析核糖核酸酶

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALD I-TOF-MS)成功地对核糖核酸酶相对分子量进行测定。探讨三种不同基质对其分析结果的影响,实验中发现α-氰基-4-羟基肉桂酸是适宜的基质,该方法是传统生物方法无法比拟的。     

血清MMP——3与膝骨关节炎活动性的相关性研究

[目的]探讨基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)血清水平与膝骨关节炎活动性的相关性.[方法]采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),检测20例健康人及20例膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者血清MMP-3水平,以分析其与OA活动性的关系.[结果]OA病人血清中MMP3水平(119±94 ng/ml)明显高于正常对照组(101±72 ng/ml),P＜0.05.[结论]MMP-3是反应OA病情活动的指标,在膝骨关节炎患者血清中高水平存在提示已有关节软骨的破坏.     

不同方法提取侧柏叶中挥发性成分的气相色谱-质谱分析

采用气相色谱-质谱法(GC/MS)分析酶提取法(CE)、同时蒸馏萃取法(SDE)和水蒸气蒸馏-萃取法(DSE)三种方法提取侧柏叶挥发性成分。结果表明:三种方法提取侧柏叶挥发油的化学成分均有差异。酶提取法提取侧柏叶挥发油鉴定出32种化合物，主要成分为雪松烯，占挥发油总量的41.25%；同时蒸馏-萃取法提取侧柏叶挥发油鉴定出29种化合物，主要成分为雪松醇，占挥发油总量的39.06%；水蒸气蒸馏 萃取法提取侧柏叶挥发油鉴定出32种化合物，主要成分为雪松醇，占挥发油总量的31.43%。     

重组C-反应蛋白的纯化与肽标记的同位素稀释质谱测定

本文依次采用Immobilized p-Aminophenyl Phosphoryl Choline Gel亲和层析柱和Superdex 75 10/300 GL分子筛层析柱分离纯化HEK293细胞重组C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP),对其进行了凝胶电泳、酶切、MALDI-TOF-MS鉴定,并利用蛋白质酶解-同位素稀释质谱法对其进行准确定量。结果表明,重组得到的样品符合CRP结构特征,液相纯度为96.527%,蛋白质酶解-同位素稀释质谱法定量的结果为3.32mg/g,扩展不确定度为0.19mg/g(k=2)。本文建立的蛋白质酶解-同位素稀释质谱法不受样品中肽类/蛋白类杂质的影响,提高了C-反应蛋白含量测定的准确度和精密度,定量结果可溯源至SI单位,为C-反应蛋白标准物质的研制奠定了基础。     

柿单宁-还原型氧化石墨烯-Pt-Pd无酶血糖传感器研究

以柿单宁(PT)为原料,利用抗坏血酸还原法制备了柿单宁-还原型氧化石墨烯-铂-钯合金(PT-RGO-Pt-Pd)纳米复合材料。然后用滴涂法将PT-RGO-Pt-Pd修饰到金电极表面,构建了基于PT-RGO-Pt-Pd纳米复合材料的新型无酶血糖传感器。该传感器对葡萄糖氧化有出色的催化能力,具有0.01～0.40 mol/L(R=0.998 73)的宽线性范围,其检测限(S/N=3)为1.43μmol以及具有稳定性高、快速响应时间(3 s)以及抗干扰能力强等优点。构建的新型无酶葡萄糖传感器有用于临床血糖检测的潜力,可为糖尿病中的血糖检测提供高灵敏度、高选择性的快速检测方法。     

高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱检测芥子气染毒动物血浆中烷基化白蛋白加合物

建立高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(HPLC/Q-TOFMS)分析动物血液样品中芥子气(HD)染毒烷基化白蛋白加合物(半胱氨酸-34加合物)的方法。在采用不同样品处理和仪器条件优化的基础上,确定最佳实验条件。HD染毒全血首先离心分离成血细胞和血浆,然后取50μL血浆加入50μL的10mg/mL链霉蛋白酶NH_4HCO_3(50mmol/L)水溶液,于37℃孵化酶解2.5h,酶解后的样品用0.5mL10KD超滤管超滤,在滤液中成功检测到S-[2-[(巯乙基)硫]乙基]半胱氨酸-脯氨酸[(S-HETE)Cys-Pro]二肽加合物。结果表明该方法简单、快速、准确、灵敏。     

dTDP-L-鼠李糖生物合成路径的电喷雾多级串联质谱法表征

本研究以2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-L-鼠李糖（dTDP-L-Rha）生物合成路径涉及的系列酶促反应产物为研究对象,建立了电喷雾碰撞诱导解离串联质谱（CID-ESI-MSⁿ）对罕见单糖生物合成路径的表征方法。该方法首先通过ESI-MS技术分析2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-D-葡萄糖-4,6-脱氢酶（RmlB）、2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-4-酮-6-脱氧-葡萄糖-3,5异构酶（RmlC）和2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-4-酮-鼠李糖还原酶（RmlD）酶活产物的形成,随后应用CID-ESI-MSⁿ技术对酶促反应终产物L-鼠李糖（dTDP-L-Rha）的结构进行表征。结果表明：dTDP-L-Rha 的生物合成始于2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-D-葡萄糖（dTDP-D-Glc）,依次涉及RmlB、RmlC 和RmlD 三个酶的参与。这与传统的高效液相色谱法（HPLC）监测、纯化制备,核磁共振（NMR）及ESI-MS结构表征的分析结果一致。该方法简单、灵敏、快速,适用于重要罕见单糖生物合成路径的表征。     

基于光电倍增管的管式发光检测仪的设计与开发

基于生命科学研究中常用的生物发光和化学发光方法,开发了一种基于光电倍增管的管式发光检测系统。在生物发光检测中,荧光素酶与ATP发生反应而生产生物光,在化学发光检测中Ecl底物中的H_2O_2和鲁米诺,在辣根过氧化物酶(HRP)的作用下,发生反应产出化学光,这些微弱光都可通过光电倍增管进行捕捉进而转化为电信号,再经过电路转换为数字信号,即发光值,从而确定ATP或辣根过氧化物酶(HRP)的含量。实验表明,ATP含量在(1.0×10~(-16)～1.0×10~(-13)) mol/μL范围内具有良好的线性关系。该仪器具有试剂损耗低,灵敏度高,检测速度快等特点。     

含二硫键的蛋白质/多肽的MALDI-TOF MS源内裂解研究

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法研究含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解(ISD)。比较了不同基质种类及不同结晶状态对含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解的影响。结果表明,含二硫键的蛋白质的ISD发生受激光点照射位置的影响,在不同基质与结晶形态的条件下,含二硫键的蛋白质的ISD碎片信息不同。通过分析比较,含二硫键的蛋白质的ISD较容易控制,并且其基质的种类及结晶状态作用很关键。需要获得大量碎片时,使激光照射在样品和阿魏酸(FA)基质形成的大结晶处;不希望出现碎片时,可使用2,4,6-三羟基苯乙酮(THAP)为基质,或使激光照射在样品和其他基质形成的细小均匀结晶处。     

巯基丁二酸镍(Ⅱ)自组装单分子层修饰金电极的制备及H2O2传感器的研制

制备了巯基丁二酸镍(Ⅱ)(NiL-SH)自组装单分子层修饰金电极,制做了测定H2O2 的电流型生物传感器.NiL-SH在电极表面有一个不可逆的还原峰,传感器对H2O2的还原具有快速电催化响应(＜10s).采用电子扫描电镜(SEM)对电极表面进行了表征,探讨了电极的电化学反应性质.研究了各种因素,如pH、工作电位等,对传感器响应电流的影响.用循环伏安法测定H2O2,线性范围为5.0×10-6～3.0×10-3mol /L (R = 0.999),检出限为2.0×10-6mol/L.该电极具有模拟酶特性,米氏常数KappM＝2.78mmol/L.实验表明,传感器的稳定性、灵敏度和选择性都比较好,可以用于现场测定.     

生物传感器商品化发展趋势

1 概述 生物传感器是能够用于测定生物分子(如生物量、激素)和生物活性物质(如酶、抗原、抗体)或者用生物活性物质(通常是酶)作为传感器功能一部分的分析装置。前者称为生物感受器(biolosical receptor),后者叫做生物催化传感器(biocatalyst sensor)。自1962年Clark等人提出酶电极设计原理以来,已有     

固相萃取-高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱法检测芥子气染毒血样中的三肽加合物

三肽加合物,(S-2-羟乙基硫代乙基)-半胱氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸[(S-HETE)-Cys-Pro-Phe]是芥子气染毒后体内重要生物标志物之一。本文首先合成并纯化(S-HETE)-Cys-Pro-Phe,应用固相萃取-高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱法对其进行定性定量分析。将芥子气染毒血样经Hitrap Blue亲和柱提取白蛋白,选择链霉蛋白酶进行酶解,应用固相萃取柱进行富集净化,采用四级杆飞行时间质谱进行检测。