三个不同种源的铁皮石斛多糖比较及其初步的药理活性评价

本文通过对云南、丹霞、浙江三个不同种源的铁皮石斛多糖进行了同样的提取、分离、纯化,分别对其分子量、单糖组成、红外光谱进行比较,以及初步的药理活性评价,来讨论不同产地的铁皮石斛差异。采用高效凝胶渗透色谱法（High Performance Gel Permeation Chromatography,HPGPC）对纯化的多糖片段进行分子量测定、利用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）测定单糖组成、红外光谱（Infrared Spectroscopy, IR）测定多糖结构,应用MTT法观察多糖片段对两种肿瘤细胞（Hela细胞和HT-29细胞）增殖作用的影响。结果表明,云南种铁皮石斛多糖片段分子量为757623 u;浙江种铁皮石斛多糖片段分子量为605958 u;丹霞种铁皮石斛多糖片段分子量为663240 u。铁皮石斛多糖的单糖组成主要为甘露糖和葡萄糖,其中甘露糖与葡萄糖比值大小为云南种>丹霞种>浙江种,且多糖进行纯化后比值会进一步升高。红外光谱吸收及特征峰提示,铁皮石斛多糖主要含有甘露糖和葡萄糖,且所含糖为β型。铁皮石斛多糖纯化可以改变单糖组成比例,提高甘露糖含量,不同种源的铁皮石斛多糖在分子量、单糖组成及红外光谱吸收存在一定差异,且对HT-29肿瘤细胞具有一定的抑制作用,其中丹霞种的铁皮石斛多糖片段对两种肿瘤细胞均有较好的抑制增殖作用（48 h）,具体关联性有待进一步研究。     

铁皮石斛多糖分子量测定及其影响因素分析

目的:研究了铁皮石斛多糖的分子量及其主要的影响因素。方法:对铁皮石斛多糖进行了三次重复的提取分离,经过纤维素凝胶树脂DEAE-52和葡聚糖凝胶Sephacryl S-300柱进行纯化,得到一个多糖片段WDOPA并采用高效凝胶渗透色谱法进行多次的分子量测定。采用单因素比较的方法,分别用加热和超声的手段处理铁皮石斛多糖,考察不同的加热温度、时间及不同的超声功率、时间对铁皮石斛多糖分子量的影响。结果:该WDOPA的分子量为776054 u,RSD在10%以内,加热的温度及时间对多糖分子量的影响不明显,而超声功率、超声时间的不同对铁皮石斛多糖分子量影响较大,随着超声功率的加大及时间的延长,分子量逐渐变小。结论:该实验方法可用于测定多糖,且超声可用于改变铁皮石斛多糖的分子量,应用于筛选不同分子量的多糖片段。     

铁皮石斛多糖的药理活性研究进展

铁皮石斛是我国传统名贵中药材,多糖是其主要活性成分。近年来,随着铁皮石斛人工栽培及组织繁育技术的进步,铁皮石斛的市场供应量逐渐增加,同时关于铁皮石斛多糖活性及药理作用的研究也逐渐增多,本文对铁皮石斛多糖的药理作用进行综述,为铁皮石斛多糖的进一步开发利用提供参考。     

铁皮石斛多糖的低共熔溶剂提取工艺优化

为提高铁皮石斛的综合利用率,建立一种绿色高效的铁皮石斛多糖提取方法。本研究以铁皮石斛多糖提取率为指标,通过单因素考察了低共熔溶剂浓度、提取温度及液料比对铁皮石斛多糖提取率的影响,采用响应面设计优化铁皮石斛多糖的提取工艺,并对纯化后的多糖进行结构分析。结果表明：响应面优化后得到最佳工艺为低共熔溶剂（deep eutectic solvent,DES）浓度40%、提取温度80℃、液料比110:1(mL/g),在此条件下实际提取率为33.2%±0.28%,与预测值33.5%接近,多糖的纯度为56.95%±1.2%。多糖经阴离子交换柱及葡聚糖凝胶柱纯化后,纯度可达90.8%,其单糖主要由葡萄糖和甘露糖构成,质量比约为43:37,此外还含有少量的木糖、鼠李糖、核糖等,结构中同时含有α糖苷键和β糖苷键。本研究提供了一种低共熔溶剂提取铁皮石斛多糖的高效绿色提取方案,具有多糖提取率高及绿色的特点,为后续铁皮石斛多糖的开发提供了借鉴。     

铁皮石斛多糖提取及抗氧化活性研究

从铁皮石斛中提取多糖。以铁皮石斛多糖提取得率为评价指标,在单因素试验的基础上通过正交试验优化提取条件,得到最佳提取条件:提取时间2h,料液比1∶80,提取温度80℃,提取次数3次。此条件下铁皮石斛多糖提取得率为19.01%±0.49%。通过测定铁皮石斛多糖对1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)、超氧阴离子自由基(O~(2-))和羟基自由基(-OH)的清除能力及铁皮石斛多糖对三价铁的还原能力,对铁皮石斛多糖进行抗氧化活性研究。结果表明,铁皮石斛多糖对三种自由基均有较高的清除能力,且清除能力随多糖浓度的增加而增大,在多糖浓度为3mg/mL时,自由基清除率分别达到38.83%、56.25%、56.58%。同时铁皮石斛多糖具有较高的还原能力。铁皮石斛多糖具有较强的抗氧化活性。     

铁皮石斛低温干燥抑制其水溶性多糖的聚合反应

本研究旨在探明干燥温度对铁皮石斛中多糖分子结构和抗氧化活性的影响。分别以新鲜铁皮石斛、以及60、100和140℃热风干燥铁皮石斛为实验材料,通过提取和纯化制备水溶性石斛多糖FDOP、60 DOP、100 DOP和140 DOP,然后对石斛多糖进行分子结构分析和抗氧化活性测定。FDOP和60 DOP的还原端含量分别为1.82%、1.70%。然而,100 DOP和140 DOP的还原端含量分别降低至1.42%、1.10%。各铁皮石斛多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成,单糖摩尔比与干燥温度之间无明显的关联。随着干燥温度的升高,石斛多糖的分子量分布曲线向大分子量方向偏移。FDOP、60 DOP、100 DOP和140 DOP中分子量103～106 u的多糖组分质量比分别为70.68%、67.70%、62.24%和58.11%。在UV光谱的280 nm处,FDOP、60 DOP、100 DOP没有吸收峰,而140 DOP有吸收峰。分子量103～106 u的多糖组分、还原端较多的铁皮石斛多糖具有较大的自由基清除能力和还原力。在铁皮石斛干燥中,60℃的温度有利于抑制多糖的聚合反应,保持多糖的抗氧化活性。本研究为石斛功能食品的生产及利用提供了技术数据和理论依据。     

国内近10年铁皮石斛多糖研究进展

铁皮石斛多糖(Dendrobium officinale polysaccharides,DOP)是铁皮石斛主要功效成分之一,因其广泛的生物活性,成为当前研究的热点。文章系统地阐述国内近10年来有关DOP的提取、含量测定、分离纯化、结构组成及生物活性的研究进展,分析目前DOP研究中存在的不足,并展望今后DOP的研究方向,以期为DOP的深度研发及合理应用提供理论依据。     

干燥温度对铁皮石斛颗粒中多糖溶出特性的影响

本研究旨在探明干燥温度对铁皮石斛颗粒多糖溶出率和溶出速度的影响及其机理。以新鲜铁皮石斛颗粒(直径5 mm×长5 mm)为原料,通过60～140℃热风干燥制备干燥铁皮石斛颗粒,于60℃水浴锅上进行铁皮石斛颗粒的多糖浸提,同时比较新鲜和干燥铁皮石斛颗粒的组织结构。新鲜铁皮石斛颗粒的多糖溶出率和多糖扩散系数分别为(46.65±0.86)%、1.02×10-2 mm2/h。在60～100℃的干燥温度范围内,干燥促进了铁皮石斛颗粒中多糖的溶出,干燥温度越低,对多糖溶出的促进作用越大。60℃干燥铁皮石斛颗粒的多糖溶出率和多糖扩散系数分别高达(64.54±1.27)%和1.94×10-2mm2/h。较低的干燥温度有利于铁皮石斛颗粒保持组织结构,减少材料收缩,减轻美拉德反应和焦糖化反应,同时产生一定的内部空隙,从而促进其多糖的溶出。本研究为铁皮石斛的干燥加工和利用提供了技术数据和理论依据。     

铁皮石斛多糖化学修饰及其对免疫活性的影响

采用水提醇沉法结合冻融制备高纯度铁皮石斛多糖,并利用硫酸化、脱乙酰化及羧甲基化修饰方法对铁皮石斛多糖进行化学修饰,探讨不同方法修饰的铁皮石斛多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫活性影响。结果表明,铁皮石斛纯多糖(purified polysaccharides of Dendrobium officinale,DOP)的中性糖含量较高,而糖醛酸及蛋白质含量则较低,分别为87.37%、3.19%和0.51%,羧甲基化及硫酸化显著降低了铁皮石斛多糖的中性糖含量。红外分析结果显示硫酸化、脱乙酰化及羧甲基化修饰衍生物均已成功制备。高性能凝胶渗透色谱法测定铁皮石斛多糖分子质量为960 k D,硫酸化及羧甲基化修饰显著增加了其分子质量。体外实验研究发现,硫酸化和脱乙酰化修饰的铁皮石斛多糖能够增强RAW264.7巨噬细胞的免疫活性,而羧甲基化修饰则表现为显著的抑制作用,表明不是所有的官能团接枝改性都可以改善铁皮石斛多糖对免疫活性的影响。     

铁皮石斛不同部位多糖含量及其抗氧化活性研究

目的测定铁皮石斛茎、叶、花中多糖含量,并对多糖的体外抗氧化活性进行比较,为更充分地开发利用铁皮石斛资源提供实验依据。方法采用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛不同部位多糖含量,分别采用DPPH自由基清除法、羟基自由基清除法和超氧阴离子清除法测定铁皮石斛不同部位多糖的体外抗氧化活性。结果铁皮石斛茎、叶、花中多糖含量分别为34.61%,23.51%,13.47%。茎多糖对DPPH自由基的清除率最高,达87.41%;叶中多糖对羟基自由基的清除率最高,达85.39%;茎、叶、花中多糖对超氧阴离子的清除率均不高。结论铁皮石斛茎、叶、花多糖含量丰富,其多糖有良好的抗氧化活性,具有一定的开发价值。     

响应面法优化铁皮石斛多糖纯化工艺

目的:用响应面法优化铁皮石斛粗多糖的双水相萃取纯化工艺。方法:通过单因素实验考察了(NH₄)₂SO₄质量分数、C₂H₅OH质量分数和萃取温度对多糖萃取率和除蛋白率的影响,进而进行响应面试验,以多糖萃取率和除蛋白率为响应值进行统计分析。结果:各因素对多糖萃取率和除蛋白率的影响程度由大到小依次为萃取温度 > (NH₄)₂SO₄质量分数 > C₂H₅OH质量分数。以双水相体系的总质量为基准,实验最佳萃取条件为: (NH₄)₂SO₄质量分数为18.80%、C₂H₅OH质量分数为25.00%、萃取温度为25.00 ℃,铁皮石斛多糖萃取率和除蛋白率分别为94.39%和91.36%。结论:此方法能够有效对铁皮石斛粗多糖进行纯化,为铁皮石斛多糖的开发利用提供理论依据。     

石斛多糖的构效关系研究进展

基于石斛中多糖含量较高,近年来国内外学者对石斛多糖的结构以及活性的研究逐渐深入,本综述对石斛多糖的单糖组成、糖苷键、乙酰基与分支度等结构进行了整理,对石斛多糖在抗氧化、免疫调节、抗糖尿病等活性方面的作用机制进行了总结。本文计算了具有抗氧化活性的石斛多糖清除DDPH自由基的EC_(50)值,从具有抗氧化活性的石斛多糖单糖组成与相对丰度的角度出发,建立了随机森林模型。该模型预测了石斛多糖抗氧化活性的高低,模型预测准确度为70.00%。研究表明,对石斛多糖有无抗氧化活性影响最大的单糖为葡萄糖,石斛多糖抗氧化活性的高低与甘露糖和半乳糖的线性关系以及甘露糖与阿拉伯糖的线性关系具有相关性。本文对探究不同结构石斛多糖活性的定性与定量关系提供一定了的参考。     

铁皮石斛多糖水解工艺优化及甘露糖含量的测定

优化高温高压辅助硫酸水解铁皮石斛多糖工艺,测定了不同栽培方式的铁皮石斛不同部位多糖及甘露糖含量。利用苯酚-硫酸法测定3种栽培方式的铁皮石斛茎、叶、花多糖的含量;以单因素实验为依据,固定料液比、硫酸浓度,根据中心组合试验设计（Central Composite Design,CCD）原理建立两因素五水平响应面法优化硫酸水解铁皮石斛多糖的温度及时间,采用柱前衍生化-高效液相色谱法测定甘露糖含量。结果表明,以1 mol/L的硫酸溶液为催化剂,料液比1:1.5、水解温度112 ℃（压强0.15 MPa）,水解44 min,甘露糖含量达64.35%±0.76%;同一栽培方式的铁皮石斛茎、叶、花多糖、甘露糖含量表现出极显著差异（P<0.01,茎>叶>花）,茎的多糖及甘露糖含量分别在29.32%~33.78%、18.17%~21.05%;叶分别在15.91%~17.31%、10.28%~11.11%,花分别在8.37%~8.68%、5.30%~5.75%之间。高温高压辅助硫酸水解铁皮石斛多糖工艺高效可行,铁皮石斛茎、叶、花是制备甘露糖的优质天然资源。     

不同生长年限铁皮石斛多糖含量与特性分析

采用凝胶渗透色谱方法测定多糖分子质量,柱前衍生化高效液相色谱法测定多糖的单糖组成,研究不同种植年限铁皮石斛多糖结构组成的差异及抗氧化能力。结果表明,5?a生铁皮石斛多糖含量最高,为238.60?mg/g,3?a生次之,为232.74?mg/g;4?a生铁皮石斛主要多糖分子质量高达1?383?kDa,3?a生次之,为1?046?kDa;1?a生铁皮石斛多糖的甘露糖比例最大,3?a生次之;3?a生铁皮石斛多糖的Fe3＋还原能力、羟自由基清除能力和总抗氧化能力最高。综合多糖含量和抗氧化活性测定结果得出,3?a生铁皮石斛品质最佳。     

霍山石斛多糖的制备、功能和产品开发的研究进展

霍山石斛是我国传统医药中的一种名贵中药材,具有悠久的药用历史和良好的药用价值,现已成为现代医疗、保健食品等领域的研究热点。石斛多糖为石斛功效发挥的主要物质基础,生物学活性丰富,产业化开发利用前景广阔。本文综述了霍山石斛多糖的提取纯化、理化性质、结构特征及功能作用等研究进展,并对霍山石斛类保健食品的开发现状和深度开发的前景进行分析和展望,以期为霍山石斛的综合开发利用提供科学依据。     

不同人工栽培模式下铁皮石斛活性成分及抗氧化活性比较

目的 比较活树附生栽培、大棚盆栽、贴板附生栽培3种不同人工栽培模式下铁皮石斛活性成分及抗氧化活性。方法 对3种人工不同栽培模式下铁皮石斛样品主要活性成分多糖、甘露糖、游离氨基酸、醇浸出物、多酚、黄酮含量及抗氧化活性进行测定并分析比较。结果 大棚盆栽模式铁皮石斛多糖、甘露糖含量最高;而活树附生栽培铁皮石斛多酚、黄酮、游离氨基酸及醇浸出物含量相对较高。活树附生栽培铁皮石斛醇提液对DPPH自由基及ABTS自由基清除能力最强,表现出较高的抗氧化活性。 结论 不同栽培模式下铁皮石斛多糖、甘露糖、多酚等主要活性成分存在较大差异,测定结果可为铁皮石斛的栽培和应用提供参考。     

霍山铁皮石斛多糖的脱蛋白工艺及结构分析

优选霍山铁皮石斛多糖脱蛋白工艺,并对其进行分离纯化及结构分析。以蛋白脱除率和多糖损失率为评价指标,比较Sevag法、酶法及酶-Sevag法3种脱蛋白方法。结果表明,酶-Sevag法脱蛋白效果最佳,蛋白脱除率为81.58%,多糖损失率为15.63%。采用DEAE-52纤维素柱、Sephadex G-100凝胶柱分离纯化石斛多糖,得活性组分DOPA-1;采用紫外扫描光谱、高效液相色谱鉴定DOPA-1为均一多糖;采用气相色谱分析表明组分单糖由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成(各单糖的物质的量比为1∶0.42∶0.27);采用红外光谱和刚果红实验分析糖链结构表明,DOPA-1有典型的糖类特征吸收峰,存在β-D-甘露吡喃糖苷,且具有三股螺旋构象。     

体外模拟3 种消化液对铁皮石斛多糖的消化作用

本实验采用人体胃肠道模拟系统,体外模拟3 种消化液对铁皮石斛多糖的消化行为。通过高效凝胶液相色谱、铁氰化钾法和高效离子交换色谱分别测定消化后多糖分子质量变化、还原糖含量和单糖组成的情况。结果表明：唾液不能改变铁皮石斛多糖的分子质量;模拟胃液和模拟胃肠液可以降低多糖的分子质量,同时提高多糖溶液中的还原糖含量,但没有检测到单糖。结论：在体外模拟胃肠道的消化体系中,铁皮石斛多糖的分子质量减小,糖苷键发生断裂,但没有游离单糖的释放。