副干酪乳杆菌N1115发酵乳对小鼠便秘的改善作用

本研究基于盐酸咯哌丁胺建模制造小鼠便秘模型,考察副干酪乳杆菌 N1115发酵乳对治疗小鼠便秘的 作用。低、中、高剂量副干酪乳杆菌N1115发酵乳（活菌含量分别为1×107、1×108、1×109 CFU/mL）连续灌胃 15 d后,与对照组相比小鼠的排便量及粪便含水量均显著升高（P＜0.05）;肠道推进率分别为57.3%、67.3%和 71.3%,显著高于对照组（P＜0.05）。气相色谱仪分析小鼠粪便中的短链脂肪酸发现,灌胃副干酪乳杆菌N1115 发酵乳后,小鼠粪便中的乙酸、丙酸、丁酸、戊酸含量显著升高（P＜0.05）,且短链脂肪酸种类较模型组更为丰 富。对小鼠远端结肠的组织形态观察发现,灌胃副干酪乳杆菌N1115发酵乳的小鼠结肠黏膜完整,细胞排列整齐, 而对照组的肠黏膜厚度降低,凹窝变浅。通过c-kit抗体对小鼠结肠中的肠间质细胞（interstitial cells of Cajal,ICC）进 行免疫组化分析,结果显示,灌胃副干酪乳杆菌N1115发酵乳后小鼠的ICC含量显著增加,表明副干酪乳杆菌N1115发 酵乳通过提高ICC活性,促进肠道蠕动。综上,副干酪乳杆菌N1115发酵乳能够有效缓解小鼠的便秘症状。     

灭活型副干酪乳杆菌L9常温酸奶调节肠道菌群缓解便秘作用研究

为评价灭活型副干酪乳杆菌L9常温酸奶润肠通便和调节肠道菌群的作用,招募便秘受试者61人,随机分为两组,分别饮用普通常温酸奶和含L9的常温酸奶28 d,饮用结束后分析受试者便秘相关症状、粪便短链脂肪酸含量和肠道菌群的变化情况。结果显示:与常温酸奶组相比,灭活型副干酪乳杆菌L9常温酸奶组受试者排便次数显著增加(P0.05),排便状况和粪便性状评分极显著降低(P0.01);粪便中丁酸含量极显著增加(P0.01),丙酸和总酸含量显著增加(P0.05);并显著增加产短链脂肪酸的菌属,如Blautia、Ruminococcus_2和[Eubacterium]_hallii_group。研究结果表明,与普通常温酸奶相比,灭活副干酪乳杆菌L9常温酸奶具有更好的调节肠道菌群缓解便秘的作用。本研究旨在为开发含有灭活副干酪乳杆菌L9的相关功能食品提供理论依据。     

副干酪乳杆菌缓解由洛哌丁胺诱导的小鼠便秘的差异

该研究对4株副干酪乳杆菌LC2、LC3、LC38、FJSWX33-L2缓解便秘的效果进行了评价,并分析了其差异性效果的可能途径。将36只Balb/c雄性小鼠随机分成6组,空白组、模型组灌胃3%蔗糖溶液,其余各组灌胃副干酪乳杆菌,共14 d(10^9 CFU/(d·只))。第15天到第30天,除继续前14 d的操作外,在此之前先灌胃洛哌丁胺悬液进行便秘模型建立。实验期间及实验结束后测定小鼠粪便含水量、排首粒黑便时间及小肠推进率;测定血清中酪酪肽、胃动素水平;测定结肠中5-羟色胺、结肠中神经营养因子-3水平;测定结肠中Aqp4、c-kit基因转录水平;测定粪便中短链脂肪酸的含量。结果表明,4株副干酪乳杆菌均有缓解便秘的功能,但4株菌在缓解便秘的途径中存在着差异。其中LC2能通过改善胃肠调节肽、神经营养因子、神经递质、短链脂肪酸水平、Aqp4和c-kit基因的转录水平缓解便秘症状,而其余3株菌缓解便秘的途径各有侧重。副干酪乳杆菌具有缓解便秘的潜力,但其缓解便秘的效果以及途径可能存在显著的菌株差异。     

两歧双歧杆菌CCFM1167通过提升肠道中乙酸水平以抑制炎症从而缓解便秘

便秘(constipation)是一种临床常见疾病,发病率逐年上升。大量研究证明补充特定益生菌可以缓解便秘。因此该研究选取3株不同来源的双歧杆菌,研究其对便秘的缓解作用并进一步探究其可能的缓解途径。使用双歧杆菌干预小鼠4周,期间用盐酸洛哌丁胺处理3周构建便秘小鼠模型,通过对小鼠便秘相关指标的检测,确定两歧双歧杆菌CCFM1167对便秘具有较好的缓解作用,并进一步对小鼠便秘相关胃肠调节肽、炎症相关指标和短链脂肪酸进行检测以及相关性分析。结果表明两歧双歧杆菌CCFM1167提升便秘小鼠肠道中短链脂肪酸尤其是乙酸的含量,上调小鼠白细胞介素10及调节性T细胞含量,减轻肠道炎症。推测CCFM1167通过提高便秘小鼠肠道内乙酸的含量,缓解小鼠由洛哌丁胺导致的炎症,提高粪便含水量进而缓解便秘。     

副干酪乳杆菌K56调节肠道菌群及润肠通便功能研究

目的:参考保健食品检验与技术评价规范(2003版)中关于调节肠道菌群及通便功能动物实验评价方法评价副干酪乳杆菌调节肠道菌群及润肠通便功能。方法:分别以0.000867、0.00867、0.0867、0.867、8.67 mg/kg灌胃给予副干酪乳杆菌K56菌株(实验室检测菌株规格为1.5×1011 CFU/g),检测小鼠干预14 d前后双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌含量,并测定干预30 d后小肠墨汁推进率、首粒黑便时间、排黑便粒数及重量,评价副干酪乳杆菌对小鼠肠道菌群及排便的影响。结果:干预14 d前后比较,各组小鼠粪便双歧杆菌、乳杆菌、产气荚膜梭菌均显著增加(P<0.05),而肠杆菌和肠球菌无显著变化(P>0.05);与对照组比较,以0.00867、0.0867、0.867 mg/kg剂量的K56干预后,小鼠肠道内双歧杆菌及乳杆菌数量显著增加(P<0.05),0.000867、0.00867、0.867 mg/kg剂量的K56干预后产气荚膜梭菌含量显著降低(P<0.05);与模型组比较,0.00867、0.867、8.67 mg/kg剂量组干预小鼠墨汁推进率显著增高(P<0.05),0.0867、0.867 mg/kg剂量组小鼠排黑便粒数与重量显著增加(P<0.05),但各剂量组对小鼠首粒黑便时间与模型对照组无显著性差异(P>0.05)。结论:副干酪乳杆菌K56菌株具有调节肠道菌群和润肠通便的作用,调节肠道菌群最佳剂量为0.0867 mg/kg(对应人体剂量1.0×108 CFU/d),润肠通便最低有效剂量为0.867 mg/kg(对应人体剂量为1.0×109 CFU/d)。     

副干酪乳酪杆菌Glory LP16对调节小鼠肠道菌群功能的影响

为探究副干酪乳酪杆菌Glory LP16调节肠道菌群的功能,该实验3组小鼠分别灌胃1.6×10⁶、1.6×10⁷、1.6×10⁸CFU副干酪乳酪杆菌Glory LP16,测定干预14 d后小鼠体质量、肠道菌群、结肠组织病理学变化、肠道屏障、肠道通透性及短链脂肪酸含量。结果显示,干预14 d后,各组小鼠粪便中双歧杆菌、乳杆菌含量均显著增加(P<0.05),产气荚膜梭菌含量显著下降(P<0.05),而肠杆菌和肠球菌的含量无显著变化(P>0.05);高剂量组副干酪乳酪杆菌Glory LP16显著降低血清脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)含量和D-乳酸含量(P<0.05),显著上调黏蛋白1、黏蛋白2和紧密连接蛋白(Claudin-1、Occludin、ZO-1)基因的表达水平,粪便中乙酸、丙酸和丁酸含量显著增加,且小鼠肠道无明显水肿和炎症细胞浸润,对小鼠生长无不良影响。     

海参蒸煮液对慢性便秘小鼠的通便作用

目的:探究海参蒸煮液(SCCL)对小鼠慢性便秘的改善作用。方法:以盐酸洛哌丁胺构建小鼠慢性便秘模型,检测SCCL干预对慢性便秘小鼠排便、小肠推进率以及肠动力相关神经递质和受体基因表达的影响。结果:相较于模型对照组,SCCL高剂量组(500 mg/kg BW)小肠墨汁推进率显著增加(P<0.05),首次排便时间极显著缩短(P<0.01),SCCL低、高剂量组(250,500 mg/kg BW)6 h内排黑便粒数和质量均显著增加(P<0.05);小鼠结肠组织中杯状细胞数量、黏蛋白含量均显著增加(P<0.05);M2AChR、M3AChR、5-HT3R、5-HT4R以及Cajal间质细胞(ICC)干细胞因子C-KitmRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:SCCL通过调节与肠道蠕动的相关神经递质ACh和5-HT及其下游信号通路,增加ICC细胞数量,提高肠动力,促进肠道蠕动,从而达到改善便秘的效果。     

副干酪乳杆菌L9对小鼠肠道短链脂肪酸含量的影响

目的:评价副干酪乳杆菌L9对健康小鼠肠道内短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)含量的影响。方法:选取3周龄BALB/c雄性小鼠50只,随机分为副干酪乳杆菌L9高、中、低剂量组、阳性对照组(商业菌株Lactobacillus casei strain Shirota)、阴性对照(生理盐水)组共5组,以0.2 m L/d的剂量连续灌胃小鼠21 d并收集第0、21天小鼠粪便。第21天处死小鼠后搜集收集盲肠内容物,利用气相色谱仪观察内容物中SCFAs的变化,并且利用实时定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)分析肠道菌群数量的变化。结果:与第0天相比,第21天小鼠粪便中SCFAs中乙酸、丙酸含量极显著上升(P0.01),Bifidobaceterium spp.、Lactobacillus属数量和丁酰辅酶A转移酶(butyryl-Co A:acetate Co A-transferase,CoAT)基因的表达量显著升高(P0.05);盲肠内容物中,低剂量组和高剂量组中的Bifidobaceterium spp.数量和CoAT基因表达量分别与第0天和阴性对照组相比有显著差异(P0.05)。实验结果表明:副干酪乳杆菌L9可以调节肠道菌群,促进健康小鼠肠道中SCFAs的产生,并且与商业菌株Lactobacillus casei strain Shirota相比,副干酪乳杆菌L9对肠道内丙酸、丁酸的含量和肠道中Bifidobaceterium spp.的数量有更好的促进作用。     

干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393在鼠消化道内定植能力及分布规律的研究

研究了干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393在小鼠肠道中定植能力及分布规律。利用羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯分子探针对干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393进行标记,以每只1010mL-1的量,口服途径喂给BALB/c鼠,分别于口服后的第1,3,5,6 d取其十二指肠、空肠、回肠、结肠等肠段,通过流式细胞仪检测肠内的标记阳性菌。实验结果显示:经口服后第5 d,干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393开始在BALB/c鼠肠道中定植,在十二指肠、空肠、回肠、结肠的定植率分别为28.70%,29.77%,15.63%,26.17%,第6 d标记的阳性菌出现明显的生长趋势,阳性检出率分别为71.77%,57.31%,65.44%,53.13%。研究表明干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393具有良好的肠道定植能力。     

具有肠道动力及肠道菌群调节功能乳杆菌的筛选及功能评价

便秘作为常见的胃肠道疾病,常伴有肠道动力及肠道菌群的异常。本研究通过测定45 株乳杆菌的体外生理特性,并筛选出3 株进行体内功能性评价,探讨乳杆菌对肠道动力以及肠道菌群的调节能力。结果表明：干酪乳杆菌LC9、发酵乳杆菌LF37和鼠李糖乳杆菌LR45的耐酸耐胆盐存活率高于10%,均能利用低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖,且短链脂肪酸产量高于1.2 mmol/L。此外,3 株乳杆菌均能促进小鼠的小肠推进率,缩短首粒排黑便时间,增加粪便水分质量分数,加快肠道运动,同时能提高小鼠粪便菌群中有益菌的相对丰度,改善菌群结构。综上,这3 株菌对小鼠肠道功能有一定的调节作用,具有潜在的应用价值。     

Complex-oligosaccharide composed of galacto-oligosaccharide and lactulose ameliorates loperamide-induced constipation in rats

The purpose of this study was to compare the beneficial effects of galactooligosaccharide (GOS), lactulose, and a complex-oligosaccharide composed with GOS and lactulose (Com-oligo) on loperamide-induced constipation in SD rats. Rats were randomly divided into the following eight groups: the normal group (Nor); constipation control group (Con); and 6 constipation groups fed low and high doses of GOS, lactulose (Lac), and Com-oligo, respectively. Com-oligo increased intestinal transit ratio and relieved constipation in loperamide-treated rats. The group receiving a high dose of Com-oligo favorably regulated gastrointestinal functions such as pellet number, weight, moisture content, short chain fatty acid, intestinal transit ratio, and bifidobacterium number in constipated rats. In addition, Com-oligo restored peristalsis of the small intestine, morphology of colon, and increased interstitial cells of Cajal area. Thus, providing Com-oligo as an oligosaccharide ingredient in nutritional formulas could benefit the health of the gastrointestinal tract.     

Lactobacillus菌株的益生功能评价

本研究评价了分离自传统发酵乳制品中4株L．paracasei supsp．paracasei菌株在模拟胃、肠液中的存活性,在HT-29细胞上的粘附性,对致病菌的抑制能力,以及刺激外周血单核细胞（PBMCs）增殖的能力。其中菌株Lactobacillus paracasei supsp．paracasei M5AL、J23AL在模拟胃液存活率较高,而菌株Lactobacillus paracasei supsp．paracaseiGl5AL、T3AL在胃液中暴露3h即失去活性;4株菌在模拟肠液中存活率较高。菌株L．paracasei supsp．paracasei M5AL和G15AL在HT．29细胞上有较强粘附能力f〉40bacteria cells per 100HT-29cells）,并抑制病原微生物Ecoli ATCC25922、styphimurium ATCC14028、S.sonnei ATCC25931生长。4株菌活菌体刺激PBMCs增殖,具有潜在免疫调节功能。     

婴儿源鼠李糖乳杆菌的筛选及其促肠道类器官生长的研究

本研究以分离得到的5株来源于一月龄婴儿的鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）与2株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）作为实验菌,以鼠李糖乳杆菌GG（Lactobacillus rhamnosus GG,LGG）作为对照菌株,通过耐酸实验、耐胆盐实验、疏水性实验、自动聚集能力测定和细胞黏附等实验对这些菌株的消化道耐受性进行评价。进一步选择在耐受性实验中综合评价效果最好的鼠李糖乳杆菌SW-02与肠道类器官进行共培养,用倒置相差显微镜观察类器官形态、生长状况,计算出芽率,利用EdU染色评估类器官中细胞增殖情况,利用实时荧光定量PCR检测增殖标志基因Ki67、肠道干细胞标志物Lgr5和紧密连接蛋白Zo-1的mRNA水平,利用酶联免疫吸附试验测定粘蛋白MUC2含量。结果证实:与其他菌株相比,鼠李糖乳杆菌SW-02有较强的耐酸性;SW-02、SW-03和SW-X的耐胆盐能力相对较强;LGG、SW-01、SW-02、SW-04和TX-02对二甲苯的疏水性高;对于自动聚集能力,SW-01最强,SW-02次之;对HT-29细胞的黏附性实验显示,菌株SW-01、SW-02和SW-03具有较高的黏附能力;将SW-02与类器官共培养时,SW-02显著（P<0.05）提高了类器官的出芽率和出芽个数,促进类器官的生长;与对照组相比,SW-02组类器官的Ki67、Lgr5和Zo-1的mRNA水平均显著增加,MUC2分泌量显著增加（P<0.05）。综上,鼠李糖乳杆菌SW-02具有较好的消化道耐受性和促进肠道类器官生长的能力,可以作为今后开发具有益生性产品的潜在菌株。     

副干酪乳杆菌诱导Caco-2细胞凋亡及其发酵乳贮藏品质的研究

以新疆马奶酒中自行分离得到的副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）M5L为对象,研究该菌株对结肠癌Caco-2细胞的抑制作用并分析发酵乳贮藏品质变化。结果表明,副干酪乳杆菌M5L可以在一定的盐浓度、胆盐浓度及酸性环境中较好的生长。当菌体以100∶1的感染系数作用于Caco-2细胞72 h后抑制率最佳;显微镜下观察活菌处理后的细胞发生明显的凋亡现象;流式细胞仪检测到副干酪乳杆菌M5L可以诱导Caco-2细胞内活性氧显著增加,并将细胞周期阻滞在合成期,且通过增大Caspase-3和Bax基因表达量,降低Bcl-2基因表达量来促进肿瘤细胞的凋亡。其发酵酸乳贮藏5 d时品质较佳,长时间的贮存会导致酸乳品质的劣变。     

Synbiotic yogurt containing konjac mannan oligosaccharides and Bifidobacterium animalis ssp. lactis BB12 alleviates constipation in mice by modulating the stem cell factor (SCF)/c-Kit pathway and gut microbiota

Synbiotic dietary supplements, as an effective means of regulating the gut microbiota, may have a beneficial effect on constipation. This study evaluated the effects of synbiotic yogurt containing konjac mannan oligosaccharides (KMOS) and Bifidobacterium animalis ssp. lactis BB12 (BB12) on constipated Kunming mice (the model group). Following administration of yogurt containing 2.0% KMOS and BB12 (YBK2.0), black fecal weight and number and gastrointestinal transit rate increased by 97.5, 106.3, and 55.7%, respectively, compared with the model group. Serum levels of excitability neurotransmitters (motilin, substance P, and acetylcholine) in the YBK2.0 group were increased by 139.7, 120.4, and 91.8%, respectively, and serum levels of inhibitory neurotransmitters (vasoactive intestinal peptide, nitric oxide, and acetylcholine) were decreased. Moreover, synbiotic yogurt supplementation significantly downregulated the expression of vasoactive intestinal peptide receptor 1 (VIPR1) and upregulated the expression of serotonin receptor 4 (5-HT4) in the colon, and enhanced the expression of the stem cell factor (SCF)/c-Kit pathway. Additionally, YBK2.0 treatment significantly regulated the community composition and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathways of gut microbiota, which were positively correlated with physiological parameters of constipation. Thus, supplementation with synbiotic yogurt composed of KMOS and BB12 could facilitate fecal excretion by regulating related pathways and the gut microbiota. These findings demonstrated that the synbiotic yogurt can be considered a functional food for alleviating constipation.     

乳杆菌耐消化应激能力及消化应激对其肠道黏附能力的影响

首先通过体外模拟唾液-胃液-肠液应激实验研究乳杆菌的耐消化应激能力,然后研究其对肠道黏蛋白和Caco-2细胞的黏附及抑制肠道病原菌黏附的能力,最后探讨消化应激对乳杆菌黏附能力的影响。结果表明,副干酪乳杆菌W125、m111和发酵乳杆菌146在依次经过模拟唾液-胃液-肠液应激后存活率分别为2.70%、3.53%及11.15%,活菌数分别为7.46、7.24（lg（CFU/mL））及 8.35（lg（CFU/mL））,且对黏蛋白和Caco-2细胞的黏附率显著高于其他菌株（P＜0.05）,分别为15.67%、8.75%、8.38%和11.47%、21.34%、10.44%;3 株菌株均可通过排除、竞争和替代的方式抑制大肠杆菌CICC10899和沙门菌WX29对肠道的黏附,黏附抑制率均大于13.51%;消化应激显著降低了副干酪乳杆菌W125和发酵乳杆菌146对肠道的黏附能力（P＜0.05）,但显著增加了副干酪乳杆菌m111的黏附能力（P＜0.05）,黏附率由17.60%增加到30.45%,且主要黏附素由消化应激前的表层蛋白变为应激后的蛋白和多糖;消化应激前后副干酪乳杆菌m111均为长梭状、圆润的杆状,表层物质的厚度也没有发生显著变化（P＞0.05）。副干酪乳杆菌m111具有较强的耐消化应激以及对肠道黏附的能力,且消化应激可提高其黏附肠道的能力,是1 株潜在的具有良好应用价值的益生乳杆菌。     

Time-dependent persistence of enhanced immune response by a potential probiotic strain Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101

The possible time-dependent role of lactic acid bacteria (LAB) in immunomodulation was investigated in BALB/c mice fed daily with Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 (10(8) colony forming units) for 3, 6, and 9 weeks, and following feeding with Lactobacillus-free food for a further 7 days. We observed up-regulation of the antigen-presenting ability of dendritic cells, and expression of natural killer group-2 D (NKG2D) molecules capable of trigger natural killer cell-mediated cytotoxicity. Lymphocyte proliferation and antibody production were also significantly increased in mice after treatment. Innate and adaptive immunity remained constant even at the most protracted feeding time, indicative of the time dependence of the bacterial-mediated enhanced immunity. To better correlate intestinal microflora with immunity, the intestinal contents of probiotics and harmful microorganisms were determined. Results showed an altered intestinal microflora, with increases in bifidobacteria and lactobacilli and a decreased content of Clostridium perfringens after feeding with L. paracasei subsp. paracasei NTU 101. It is possible that persistent activation of immunity might be induced by intestinal probiotics.