罗非鱼源肠道益生菌的分离鉴定及其体外益生特性分析

为了筛选出优良的鱼源益生菌，作者以吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)为实验材料，进行肠道芽孢杆菌和乳酸菌的分离、鉴定，并对分离得到的菌株进行抑菌活性、耐酸性、耐胆盐、人工胃肠液耐受、溶血活性和抗生素敏感性等体外益生特性分析。结果表明，从罗非鱼肠道中共分离得到109株菌，其中包括79株乳酸菌和30株芽孢杆菌，经过一系列的实验最终筛选出3株乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）。生物学特性研究表明，3株菌均无溶血活性，对抗生素具有一定的敏感性，对强酸、胆盐和人工胃肠液具有一定的耐受性，对水产病原菌具有不同的抑菌活性。筛选得到的3株菌丰富了鱼源益生菌资源，它们均可作为优良的鱼源益生菌候选菌株。其中，菌株R1对强酸和人工胃肠液耐受性最强，菌株R29耐胆盐能力最强，可进行进一步的益生特性研究，挖掘其作为食品源益生菌的益生效果。     

高胆盐水解酶活性乳酸菌的筛选及其酶活性影响因素研究

为了筛选出具有高胆盐水解酶活性的乳酸菌,以生鲜牛奶为样品,利用传统分离技术分离乳酸菌,并通过牛津杯法选出具有高胆盐水解酶活性的乳酸菌,进而采用16S r DNA测序技术对筛选菌株进行鉴定。同时,研究p H、紫外照射时间、温度、培养基盐浓度和培养基糖浓度对所筛选菌株胆盐水解酶活性的影响。实验中分离出2株具有高胆盐水解酶活性的植物乳杆菌,为菌株N1和N12,胆盐水解酶高活性的最适p H为7、最适温度为59℃。菌株N1最适糖质量分数与最适盐质量分数分别为10%和7%,菌株N12最适糖质量分数与最适盐质量分数分别为5%和4%。植物乳杆菌N1和N12具有高胆盐水解酶活性,具有降解人体血清胆固醇的潜力,可应用于降胆固醇产品的开发。     

一株源自长寿老人的嗜酸乳杆菌PBIL2-003的分离鉴定及特性与功能评价

分离筛选性能优良菌株并进行系统分析评价，以期为健康产品开发提供高性能、安全的功能性菌株。从健康长寿老人粪便中分离筛选乳酸菌菌株，应用生理生化特性和DNA序列分析进行菌株鉴定，并通过耐酸、耐胆盐、耐人工胃液、耐人工肠液的耐受性、药敏试验，研究菌株的抗逆性和安全性；以环磷酰胺作为免疫抑制剂对小鼠进行造模，研究菌株体内免疫功能及对肠道菌群的影响。从健康长寿老人粪便中分离鉴定获得一株乳酸杆菌，鉴定为嗜酸乳杆菌，命名为嗜酸乳杆菌PBIL2-003(Lactobacillus acidophilus PBIL2-003)(简称L2-003);L2-003具有较好的耐酸耐胆盐特性，在人工胃液中2 h的存活率达到50%,能够在人工肠液中有效增殖；L2-003菌株仅对复方新诺明和阿米卡星有抗性，对庆大霉素中度敏感，对其余抗生素均敏感；小鼠体内评价结果显示：与模型组相比，中剂量和高剂量的L2-003可显著增强免疫器官指数(P<0.05)、促进脾淋巴细胞增殖(P<0.05)、促进机体抗体分泌、增强小鼠NK细胞杀伤活性；碳廓清实验显示，高剂量L2-003可显著增强小鼠单核吞噬细胞活性(P<0...     

荔枝玫瑰酒的营养成分分析与皮肤抗氧化功效研究

该研究检测了荔枝玫瑰酒的营养成分及其对D-半乳糖诱导的衰老小鼠皮肤抗氧化作用。60只小鼠随机分为正常组、D-半乳糖处理组、维生素C对照组及低剂量、中剂量和高剂量荔枝玫瑰酒组，饲喂12周后采样分析。结果表明，荔枝玫瑰酒含有丰富的多酚、黄酮、单宁及维生素C，分别为0.43 g/L、0.25 g/L、0.12 g/L和3.15 mg/100 mL；小鼠饲喂12周后，各组体质量无显著差异（P＞0.05）；高剂量荔枝玫瑰酒（45.00 mL/kg体质量）饲喂可显著提高衰老小鼠皮肤含水率、羟脯胺酸和胶原蛋白含量，降低丙二醛含量、谷胱甘肽过氧化物酶活性，提高谷胱甘肽含量、超氧化歧化酶和过氧化氢酶活性（P＜0.05），维持皮肤较好的氧化还原稳态；同时通过恢复衰老小鼠皮肤抗氧化和胶原蛋白代谢相关基因表达，抑制了皮肤氧化损伤和胶原分解。     

发酵肉制品中潜在改善高脂血症乳酸菌的筛选及鉴定

采用溶钙圈法从传统发酵肉制品中分离乳酸菌菌株，通过清除胆固醇、甘油三酯能力及胆盐水解酶活性测定筛选潜在改善高脂血症乳酸菌菌株。基于此，结合体外益生特性研究，利用主成分分析（PCA）筛选综合益生活性较好的菌株，并通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定，最后评价该菌株对HepG2细胞高脂模型中胆固醇和甘油三酯含量的影响。结果表明，从传统发酵肉制品中共分离得到125株乳酸菌，最终筛选得到1株具有潜在改善高脂血症能力且综合益生活性最好的菌株LC4，被鉴定为戊糖片球菌（Pediococcus pentosus），其体外胆固醇及甘油三酯清除率分别为74.73%和91.65%，具有胆盐水解酶活性；模拟胃液及肠液的耐受力分别为87.57%和72.70%，在0.3%胆盐条件下处理24 h活菌数为9.79 lg CFU/m L，在pH 2.5酸条件下处理4 h，活菌数为7.67 lg CFU/m L;24 h后的自聚集能力为52.77%；对二甲苯、乙酸乙酯及氯仿的疏水性分别为78.13%、34.07%和10.30%。HepG2细胞高脂模型经菌株LC4处理后，降低了胆固醇和甘油三酯含量。     

泡菜源乳酸菌的分离筛选及其对小鼠氧化应激水平的改善作用

为筛选具有较好体外抗性以及体内抗氧化效果的乳酸菌,本研究从重庆农家自然发酵泡菜中分离得到12株菌株,经16S rDNA种属分析表明,其中植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum） 4株,发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum） 7株,短乳杆菌（Lactobacillus brevis） 1株。采用pH 3.0人工胃液和0.3%胆盐对乳酸菌进行体外抗性筛选,发现12株乳酸杆菌具有较好的体外抗性,其中10株乳酸杆菌在pH 3.0人工胃液中处理3 h后的存活率超过80%;2株乳酸杆菌在0.3%胆盐中的存活率超过60%。选取体外抗性好且为食品可用菌种的Lactobacillus fermentum CQPC-11（L. fermentum CQPC-11）为实验菌株,评价其对活性炭冰水诱导氧化应激损伤小鼠的改善作用,结果表明H-LF CQPC11组小鼠血清中总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）的酶活力分别为67.73 U/mL、2742.35酶活力单位、136.59 U/mL,显著高于模型组（p<0.05）,而丙二醛（MDA）的含量为1.99 nmol/L,显著低于模型组（p<0.05）。综上所述,L. fermentum CQPC-11不仅具备良好的耐胃酸和耐胆盐能力,还能降低氧化应激模型小鼠的氧化应激反应,可通过后续进一步的实验探讨该菌株抗氧化作用的具体机理,为新型微生态制剂以及功能性乳酸菌食品的开发提供理论依据和可用菌株。     

凝结魏茨曼氏菌BC66的筛选、鉴定及特性研究

本研究旨在分离和筛选一株用于微生态制剂的益生菌。根据耐高温和产乳酸特性，从仔猪粪便中筛选到一株芽孢杆菌。通过形态学、生理生化试验和16S rDNA序列分析，该菌株鉴定为凝结魏茨曼氏菌，代号为BC66。在此基础上，通过体外实验考察了凝结魏茨曼氏菌BC66菌株的益生菌潜力，包括对胃肠道条件的耐受性（低pH，胆盐耐受性）、对病原菌的抑菌能力和抗生素敏感性。实验结果表明，BC66菌株在pH3.0酸性条件下处理2 h，菌株存活率达98%,0.3%胆盐浓度下处理2 h，菌株存活率达79%，在90℃水浴中处理10 min菌株芽孢存活率可达92%。而且，BC66菌株对大肠杆菌和沙门氏菌的生长具有较强的抑制能力。对所有测试的抗生素都表现出很好的敏感性，且没有观察到溶血活性。上述结果表明，本研究分离筛选的凝结魏茨曼氏菌BC66具有较强的抗逆性且益生性能良好。该菌株有可能作为饲料添加剂中潜在的候选益生菌，为应用于微生态制剂的研发奠定了基础。     

高产γ-氨基丁酸的双歧杆菌的筛选及对抑郁细胞模型的改善作用

为了筛选出具有缓解抑郁作用的菌株,本研究以94株双歧杆菌为研究对象,以胆盐水解酶活性、抗生素耐性、抗逆性、粘附性作为益生菌评价的基本指标;以高产γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)作为潜在抗抑郁症菌株的筛选指标;最后通过体外抑郁细胞模型试验,研究菌株对抑郁细胞模型的改善作用,进而评价菌株改善抑郁的潜力。结果显示:13株双歧杆菌的胆盐水解酶活性较高,且都不具有种属特异性耐性之外的抗生素耐性。耐酸耐胆盐实验证明:双歧杆菌ZT3、84和95都具有较高的抗逆性能;粘附结果表明:双歧杆菌91、92、95和98具有较强的粘附能力,粘附能力分别为:19.34、33.77、23.23、20.46 CFU/Cell。13株双歧杆菌产GABA能力检测结果显示,双歧杆菌98和95的GABA的产量较高,分别为285.0和232.8 mg/L。抑郁细胞模型试验结果显示:高、中、低剂量高产GABA的双歧杆菌98都具有缓解CORT诱导的细胞损伤的能力,而只有高剂量的双岐杆菌95可以缓解CORT诱导的细胞损伤。由于双歧杆菌98、95具有安全的抗生素耐受范围,较高的酸、胆盐耐受性和粘附能力以及高产GABA和缓解细胞模型损伤的能力,因此,其可以作为潜在的改善抑郁症状的菌株。     

不同来源植物乳杆菌的益生特性研究

通过测定耐受模拟胃肠液能力、胆盐水解酶活性及蛋白水解酶活性、抑菌活性、体外安全性评价、聚集能力、疏水性、对Caco-2细胞的黏附性来考察植物乳杆菌的益生特性,研究结果表明不同来源的7株植物乳杆菌模拟胃肠液耐受存活率均高于75%;均具有胆盐水解酶及蛋白水解酶活性;对大肠杆菌和单增李斯特菌具有一定抑制能力;体外安全性评价为安全;其中D12具有最佳黏附能力。因此,这7株植物乳杆菌可作为潜在益生菌菌株应用于食品中。     

一株乳酸乳球菌的降胆固醇特性及其作用机制

探讨了乳酸乳球菌乳亚种HUCM 201的降胆固醇特性及其体外去除胆固醇的机制。乳酸乳球菌乳亚种HUCM 201菌株可从培养基中去除33.1%的胆固醇,其中14.3%的胆固醇发生共沉淀并重新溶解在洗涤液中,18.1%的胆固醇被吸收到菌体细胞内。HUCM 201菌株对5种结合型胆酸盐分别表现出了不同的胆盐水解酶活性,其中对甘氨胆酸钠的水解能力最强,总酶活为0.279 U/mL,比酶活为0.076 U/mg。     

酸汤中乳酸菌的鉴定及其耐酸、耐胆盐和抗氧化活性

采用16S rDNA基因序列对从酸汤中分离出的6株乳酸菌进行鉴定,并研究6株菌的耐酸和耐胆盐能力;同时以清除1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟基自由基为指标,探究其体外抗氧化活性。结果表明,6株菌均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),可耐受pH2.5和0.3%质量分数的胆盐,且活菌数保持在107 CFU/mL以上,存活率大于87%;菌体浓度为108 CFU/mL时,6株菌对DPPH自由基的清除率在23%~35%之间,对羟基自由基的清除率在6%~16%之间。6株植物乳杆菌中,JMST-1兼具良好的耐酸、耐胆盐和一定的抗氧化能力,在耐酸、耐胆盐试验中存活率达到91%,对DPPH自由基和羟基自由基的清除率分别达到28.60%和15.44%。     

青藏高原牦牛酸奶中具有抗氧化活性乳酸菌的体内外益生特性

目的:筛选出性状优良的具有抗氧化性的益生乳酸菌并研究其对D-半乳糖致衰老模型大鼠的抗氧化作用。方法:以从青藏高原牦牛酸奶中初步筛选的3株具高抗氧化活性乳酸菌为研究对象,通过耐受模拟胃肠道、耐胆盐和疏水能力实验评价3株乳酸菌的体外益生特性,并将体外益生特性优良的菌株饲喂D-半乳糖致衰老模型大鼠。通过检测各处理组大鼠的脏器指数,肝脏、脑组织和血清中的谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase,GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SoD)活力、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AoC)以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量来评价乳酸菌的体内抗氧化益生特性。结果:植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)XM5具有较强的耐模拟胃肠液和耐胆盐能力,同时具有较强的疏水能力。植物乳杆菌XM5的摄入能有效缓解D-半乳糖对大鼠脑组织的氧化损伤;使衰老模型大鼠肝脏中的GSH-Px活力,血清中的GSHPx、T-SoD活力和T-AoC显著提高(P0.05);同时使肝脏、脑组织和血清中的MDA含量显著降低(P0.05)。结论:植物乳杆菌XM5是一株性能优良的抗氧化益生乳酸菌,具有潜在的应用价值。     

植物乳杆菌Sc52益生特性评价及其在降血糖产品中的应用

目的：考察植物乳杆菌Sc52的体外益生特性以及其在辅助降糖产品中的应用和产品开发,并分析产品的降糖作用。方法：通过酸和胆盐耐受、表面疏水性、自凝聚能力和抗生素最低抑菌浓度的方法评价植物乳杆菌Sc52的体外益生特性。植物乳杆菌Sc52与其他不同益生特性益生菌联合发酵药食同源复方提取物研制辅助降糖固体饮料,利用高脂饲料结合链脲佐菌素的方法建立小鼠糖尿病模型,实验动物分空白组、模型组和产品组,连续灌胃辅助降糖产品4?周后,测定小鼠空腹血糖含量、血糖曲线下面积,血清中血脂、胰岛素和炎症因子水平等相关生化指标。结果：植物乳杆菌Sc52具有较强的耐酸和耐胆盐能力,pH?3.0和1?g/100?mL胆盐条件下分别培养3?h和4?h后,存活率在55%和32%以上;自凝聚能力较强,静置48?h后自凝聚率达到（89±0.3）%;对青霉素和利福平表现出高度敏感性;与模型组相比,辅助降糖产品能显著降低小鼠空腹血糖、血脂、肿瘤坏死因子-α水平,明显提升胰岛素水平。结论：植物乳杆菌Sc52具有良好的体外益生特性,其联合其他益生菌共同发酵药食同源复方提取物研制的固体饮料产品具有明显的降血糖作用。     

发酵鱼酱酸产GABA乳酸菌的分离筛选及发酵特性

从传统发酵鱼酱酸中筛选出产γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）的乳酸菌并分析其菌株发酵特性。通过薄层色谱法定性、Berthelot比色法定量获得产GABA菌株，并进行耐酸、耐胆盐、氨基酸脱羧酶活性、抑菌性、生长曲线及pH值、产酸速率等菌株发酵特性分析。结果表明：从分离自鱼酱酸不同发酵阶段的387 株乳酸菌中，获得15 株典型产GABA菌株，包括2 株食窦魏斯氏菌（Weissella cibaria）、1 株熊蜂魏斯氏菌（Weissella bombi）、11 株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）和1 株戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）。15 株乳酸菌产GABA能力及发酵特性在主成分分析图上差异显著，其中食窦魏斯氏菌Y113产GABA量为0.239 mg/mL，高于其他菌株；植物乳杆菌Y279和Y64展现出较好的耐酸性、耐胆盐性、抑菌性、无氨基酸脱羧酶活性、生长速率及产酸速率快的特点。鉴于其优良的发酵特性、益生特性及产GABA能力，菌株Y279可作为鱼酱酸工业化、标准化生产的潜在优良菌株。     

植物源益生乳酸菌的筛选及其特性

为筛选具有益生特性的植物源乳酸菌,以传统发酵蔬菜中分离的1 000 株乳酸菌为出发菌株,进行了耐酸性、耐胆盐能力、抑菌性、体外抗氧化能力、药敏性、溶血性和氨基酸脱羧酶活性等特性研究,并对筛选菌株进行了16S rDNA 鉴定。经pH 3.0 MRS培养得乳酸菌82 株,再经pH 2.5 MRS培养得乳酸菌49 株;49 株菌经0.3%胆盐测试,均具有耐胆盐能力;根据镜检形态结合发酵植物源的不同从中挑选19 株乳酸菌进行药敏性、溶血性、抑菌性、氨基酸脱羧酶活性和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除实验。结果表明,19 株菌对所选20 种抗生素多数表现敏感,其中4 株菌对20 种抗生素都较敏感;19 株菌对供试致病菌都有不同程度抑制能力且都无溶血性;经氨基酸脱羧酶活性试剂盒结合聚合酶链式反应扩增检测表明,19 株菌无产生物胺的潜在威胁;有5 株菌体外抗氧化能力高于40%。可见19 株菌均具有益生菌的基本特性。经16S rDNA鉴定,7 株为发酵乳杆菌、6 株为植物乳杆菌,嫩江杆菌、戊糖片球菌、利莫西杆菌、戊糖乳杆菌、屎肠球菌、短乳杆菌分别各1 株。     

具有透明质酸酶抑制活性益生菌的体外筛选及鉴定

通过乳酸菌传统分离技术和益生菌体外评价,并结合透明质酸酶体外抑制实验,快速筛选出具有潜在抗过敏活性的益生菌。结果表明,从牛奶样品中分离的5 株具有酸和胆盐耐受性的菌株表现出良好益生特性,其初步判定为安全菌株,所有菌株有较高透明质酸酶抑制率,结合相关研究表明其能够作为抗过敏益生菌筛选的指标之一。其中菌株L02和L15呈现出较为显著（P＜0.05）的体外耐受性、细胞表面特性、透明质酸酶抑制活性,说明其具备抗过敏的益生潜能;经16S rDNA测序鉴定菌株均为植物乳杆菌。     

自然发酵面团中分离的发酵乳杆菌对高脂饮食小鼠的降血脂作用

该研究从哈尔滨周边地区农户家的自然发酵面团中分离纯化乳酸菌,分别评价分离菌株的耐酸耐胆盐及抑菌特性,并利用溶血性试验和抗生素敏感试验评估其安全性。以邻苯二甲醛法对乳酸菌菌株的降胆固醇能力进行体外分析,并利用高脂模型小鼠研究其体内降胆固醇功能。结果共分离得到16株乳酸菌,其中发酵乳杆菌FD-8在酸性和胆盐条件下存活率可达80.21%和75.98%,对致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌均有一定的抑菌作用且安全性良好。FD-8菌株的体外降解胆固醇率达到85.66%,体内饲喂FD-8菌株5 w后能明显降低高脂饮食小鼠的体质量和肝脏指数,改善高脂饮食诱导的小鼠血清及肝脏中总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平的改变,达到降血脂的目的。该研究从自然发酵面团中分离到的发酵乳杆菌FD-8具备良好的耐酸、耐胆盐和抑菌特性,能够在体内外发挥降胆固醇作用,同时无溶血性且对某些抗生素表现一定的敏感性,对于进一步开发降胆固醇产品具有重要意义。     

蜂粮中Lactobacillus kunkeei的益生特性研究

蜂粮是植物花粉、蜂蜜和蜜蜂唾液的发酵混合物,是营养丰富的天然食材。作者从蜂粮中分离到61株乳酸杆菌,经16S rRNA基因测序,鉴定为Lactobacillus kunkeei。首先,用邻苯二甲醛法对61株L.kunkeei进行胆固醇去除能力检测,其中5株菌胆固醇去除能力均大于15%,菌株B35对胆固醇的去除率达到(29.07±1.30)%。随后,对这5株L.kunkeei进行酸耐受性、胆盐耐受性、抗生素耐药性及抑菌等益生特性进行研究。耐酸实验和耐胆盐实验结果表明,5株L.kunkeei均具有良好的耐酸性和胆盐耐受性。药敏试验结果表明,5株L.kunkeei对4种临床常用抗生素(红霉素、克林霉素、庆大霉素、万古霉素)均敏感。通过琼脂扩散法抑菌实验,发现5株L.kunkeei对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌均有一定的抑菌作用。B35菌株的细胞黏附性能良好,对Caco-2细胞的黏附率达到3.32%。从蜂粮中分离到5株具有良好益生特性的菌株,其中菌株B35的益生特性最佳,为益生菌的开发与利用提供了新的菌种资源。