耐盐芽孢杆菌B11抗菌活性物质的分离纯化及其特征分析

对耐盐芽孢杆菌B11产生的抗菌活性物质进行了分离纯化及特性研究。从盐碱土壤中分离得到一株对金黄色葡萄球菌具有强拮抗活性的耐盐芽孢杆菌B11,其发酵液中抗菌活性物质具有良好的热稳定性、p H稳定性和紫外光照稳定性,100℃加热1 h,抑菌活性仅下降11.0%,且在p H为3和11环境下,抑菌活性也仅下降11.4%和10.9%,对酸碱环境具有耐受性。发酵液经预处理、离心、阳离子阴离子交换层析,经正丁醇抽提和半制备高效液相色谱得到活性物质A1和A2,其中A1分子量为1423.8 u且带有多电荷,氨基酸分析仪鉴定A1为非核糖体多肽(NRPS),对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为8.0μg/m L;A2活性很弱且含量较低,初步鉴定为小分子抗菌物质,分子量为373 u。耐盐芽孢杆菌B11的抗菌代谢产物应用于食品防腐具有很大的潜力。     

四种稻瘟病生防菌的筛选及其活性评价

为了探明生防菌对稻瘟病菌的抑制作用,采用平板对峙法初筛、生长速率法复筛,从供试菌株中筛出4种对稻瘟病菌有明显抑制作用的目标生防菌,即解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D1、嗜麦芽寡养假单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)he41、纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)he14和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)H3。采用生长速率法测定4种生防菌无菌发酵滤液对稻瘟病菌的抑制作用,并对这4种目标生防菌活性的遗传稳定、耐高温、抗紫外线及耐酸碱的性质进行研究。结果表明,无菌发酵滤液的浓度在0.5%~64%时,对稻瘟病菌的抑制率为13.19%~100%之间。菌株D1、he41、he14、H3经转接培养30次,抑菌活性>86%,其发酵液经121 ℃高温处理后,菌株he14无菌发酵滤液的抑菌率达82%,而菌株D1、he41、H3发酵液经40 ℃处理后对稻瘟病菌则无抑制作用。菌株D1、he41、he14、H3在紫外灯(30 W)下照射6 h后,发酵液抑菌率仍达83%以上,经pH3~11的条件处理后,抑菌率>82%。综上,菌株he14是对稻瘟病具有一定生防作用的潜力菌株,为下一步开发防治稻瘟病的微生物制剂奠定了基础。     

乳酸菌FY-1筛选鉴定及其抗菌物质分析

从韩国泡菜辣白菜中分离到一株乳酸菌,命名为FY-1,对该菌株菌落特征、生理生化特征进行分析,并结合16S r DNA序列分析,最终鉴定该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。通过牛津杯法研究该菌株代谢产物的抑菌活性,结果显示该菌株产生的代谢产物抑菌谱较广,对多种细菌如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、李斯特菌等食品腐败菌都有很好的抑制作用,对梨黑斑病菌、桃软腐病菌等植物致病菌也有很好的抑菌活性。通过稳定性实验分析,确定菌株产生的抑菌活性物质有很好的温度和有机溶剂稳定性。在p H为酸性时活性较好,p H为碱性时活性几乎丧失,经蛋白酶K处理后,样品活性消失。     

苏云金芽孢杆菌发酵上清液抑菌谱及稳定性

对苏云金芽孢杆菌Bt185和HD-1菌株发酵上清液中生物活性物质抑菌作用和稳定性进行了初步研究。采用牛津杯法测定发酵上清液中活性物质的抑菌活性,供试菌为草生欧文氏杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、普通变形球菌、谷氨酸棒状杆菌、乙型副伤寒杆菌、绿脓杆菌等9种细菌。结果表明,发酵上清液对9种细菌均具有不同程度的抑制作用,其对草生欧文氏杆菌的抑制性最强。发酵上清液对热、酸、紫外线照射和连续超声波刺激均较稳定;发酵上清液在50℃以上抑菌活性开始下降,在pH 3.0~9.0条件下抑菌活性稳定,紫外光照射2.5 h之内抑菌活性稳定,在连续360 W超声波条件下2 h之内抑菌活性稳定。     

淡水鱼肠道中抗芽孢杆菌性乳酸菌的筛选与鉴定

从淡水鱼肠道中筛选对芽孢杆菌具有较强拮抗活性的乳酸菌,结果表明:从鲤鱼肠道分离的菌株LY-19对蜡样芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的抑菌直径分别为16.89 mm和17.43 mm,活性主要来自无细胞上清液,在p H3.0~4.5范围内保持抗菌活性,经中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶处理后丧失部分抑菌活性,对α-淀粉酶不敏感,在40~121℃范围内处理30 min后其拮抗活性基本不变,初步判定乳酸菌产生的抑菌物质为II型非糖基化类细菌素。根据生理生化特性和16S r DNA鉴定为清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)。     

泡菜中低温乳酸菌的筛选及其特性研究

于10℃条件从四川泡菜中分离获得乳酸菌36株,经过产酸能力初筛、低温测试复筛以及低温乳酸菌界定后,得到2株耐冷性强,温度生长范围2~40℃的菌株。经系统鉴定菌株3m-1为植物乳杆菌,菌株8m-9为肠膜明串珠菌。10℃条件下,菌株3m-1和8m-9培养12 h后细胞生物量快速增加,发酵液p H值显著降低,36h时活菌数达109CFU/m L,168 h时其活菌数109CFU/m L,终p H值分别降至3.70和4.00。30℃条件下,菌株3m-1培养2 h后进入对数期,22 h进入稳定期,终p H值降至3.60以下,能耐p H 3.0的酸度和14%的盐含量,对发酵液中亚硝酸盐降解率高于98%,且不含氨基酸脱羧酶;菌株8m-9在培养4 h后进入对数期,16 h进入稳定期,终p H值降至4.00,在p H4.00或盐含量10%的环境中,生长受到抑制,对发酵液中亚硝酸盐降解率高于75%,且不含氨基酸脱酸酶。排除酸、过氧化氢等因素干扰后,菌株3m-1和8m-9离心发酵上清液对指示菌藤黄微球菌仍有抑菌作用,用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶处理后活性丧失,说明其抑菌物质是细菌素。本结果为低温乳酸菌的深入研究和低温发酵泡菜生产提供了重要菌种资源和理论依据。     

凤凰单丛茶抗菌活性内生细菌FH01发酵条件的优化

以枯草芽孢杆菌为抑菌试验指示菌,采用从凤凰单丛茶中分离到的内生细菌FH01的无菌发酵液进行抑菌试验,对内生细菌FH01的发酵条件进行研究。通过单因素实验得出,对抑菌活性影响较大的因素为碳源、氮源、初始p H、发酵温度、摇床转速、发酵时间。根据Box-Benhnken中心组合方法对FH01的发酵条件进行六因素三水平试验。结果表明:FH01最佳发酵条件为麦芽提取物用量1.43%(m/v),大豆蛋白胨用量1.67%(m/v),初始p H 5.0,发酵温度36.78℃,摇床转速129.52r/min,发酵时间67.36 h。在此条件下,FH01发酵液对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径为22.10 mm,与预测值24.10 mm相比,相差仅为2 mm,比优化前抑菌圈直径的平均值14.50 mm(n=3)提高了34.39%。     

罗伊氏乳杆菌发酵液的抑菌特性与抑菌成分性质初探

研究了罗伊氏乳杆菌LYS-1发酵液的抑菌特性和初步探索了其抑菌成分的性质。发酵液的抑菌特性结果显示,LYS-1当活菌数≥1.00×109 cfu/mL时才会产生抑菌物质,发酵36 h后抑菌活性不随酸度的增大而增强。LYS-1发酵液具有良好的耐热能力,50～120℃处理30 min均对抑菌活性影响不大,但受pH的影响显著,pH≥5.50时发酵液的抑菌活性丧失,pH5.50时才具有抑菌活性,且降低pH有利于增强抑菌效果,pH≤3.50时抑菌活性趋于稳定。抑菌成分性质的探索结果表明,发酵液经过氧化物酶处理后抑菌活性丧失了14.37%,蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶处理则对抑菌活性的影响不显著。发酵液经真空浓缩处理后,浓缩液和接收液均具有抑菌活性。发酵液与浓缩液分别经强酸水解后抑菌圈直径分别为0 mm和6.37 mm。LYS-1发酵液中不存在3-羟基丙醛。LYS-1发酵液的抑菌效果主要受p H影响,其抑菌物质应为多种组分,可能由小分子肽、过氧化氢和有机酸组成。     

甜叶菊废渣提取物抑菌活性及抑菌稳定性研究

研究甜叶菊废渣提取物的抑菌活性及抑菌稳定性。甜叶菊絮凝废渣经酸性丙酮提取和乙酸乙酯萃取后得到甜叶菊废渣提取物。采用滤纸片扩散法和琼脂稀释法等测定甜叶菊废渣提取物的抑菌活性,并探讨热处理、紫外光、p H和金属离子对甜叶菊废渣提取物抑菌活性的影响。结果表明,甜叶菊废渣提取物对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌具有良好的抑菌作用,最小抑菌浓度(或最小杀菌浓度)分别为3.13(6.25)、12.5(25)和12.5(12.5)mg/m L,但对大肠杆菌和沙门氏菌无抑菌作用。甜叶菊废渣提取物经100℃处理20 min仍具有较好的抑菌活性,紫外线处理使其对蜡样芽孢杆菌的抑菌活性降低,p H7.0时对蜡样芽孢杆菌无抑菌作用,Na+、K+和Ca2+能够增强其对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性,Fe2+和Fe3+使其抑菌活性丧失或降低。甜叶菊废渣提取物作为天然防腐剂使用具有广阔的开发和利用前景。     

裙带菜内生菌的分离鉴定及其抑制AChE活性的研究

目前,国内外对于裙带菜的研究主要集中于其抗氧化、抗肿瘤等活性,而对其内生菌的研究未见报道。本文以青岛海域裙带菜为原材料,对其内生菌进行分离、纯化,共获得7株内生真菌和5株内生细菌,并采用DTNB显色法测定各菌株发酵液抑制乙酰胆碱酯酶活性,筛选出具有活性的菌株,并对活性最高的一株细菌QD-4进行生理生化鉴定和16S r DNA分子生物学鉴定,确定该菌株为芽孢杆菌,命名为Bacillus sp.QD-4。以发酵液的ACh E抑制率为活性指标,采用单因素和正交试验对发酵条件进行优化,确定了培养基最佳碳源为5.0%淀粉、最佳氮源为1.0%蛋白胨,最佳发酵条件:发酵时间5 d、接种量8%、培养基初始p H值9.0、培养温度30℃。发酵条件经优化后,当发酵液粗浸膏为20 mg/m L时,对ACh E抑制率可达到34.02%。     

枯草芽孢杆菌抑菌活性物质鉴定、抑菌特性及发酵条件优化

对具有抑菌活性的枯草芽孢杆菌BS08菌株进行抑菌活性物质的鉴定,抑菌特性研究和发酵条件优化。结果表明,枯草芽孢杆菌BS08发酵液经酸沉醇提的抑菌粗提物,再经薄层层析纯化、富集,红外吸收光谱测定为内酯类的环状脂肽,高效液相色谱和质谱鉴定其分子质量在995~1 350之间,有效成分为枯草芽孢杆菌表面活性素和伊枯草菌素。抑菌粗提物有较广的抑菌谱,对多种鱼源腐败菌有显著的抑制作用,该物质还具有良好的热稳定性和酸碱稳定性。在酵母浸膏14 g/L,无水葡萄糖14 g/L,硫酸镁1 g/L的营养液中,选择接种量7.0%,pH 8.2,培养温度38℃,200 r/min发酵24 h,结果发酵液中脂肽类物质含量达450 mg/L,抑菌率达69.6%。     

海胆共附生菌DNC_2的鉴定及其发酵条件优化

为对海胆共附生菌DNC2进行开发利用,对该菌株进行形态、生理生化以及16SrDNA序列测定,并以抑菌活性为考察指标,对其发酵条件进行优化。结果表明:海胆共附生菌DNC2属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);用牛肉膏为0.3%,蛋白胨为0.6%,初始pH值9.0的培养基,35℃发酵5d时抑菌活性最优,且该条件的菌株发酵液对8种真菌指示菌抑菌效果良好,抑制率分别为苹果粉红92%,玉米早疫、番茄灰霉89%,辣椒青枯88%,毛霉菌81%,西瓜枯萎73%,棉花枯萎72%,串珠镰刀菌52%。     

影响解淀粉芽孢杆菌GSBa-1产凝乳酶的因素及发酵条件优化研究

为了提高解淀粉芽孢杆菌GSBa-1发酵产凝乳酶活力,通过单因素试验并采用Plackett-Burman试验设计对影响该菌株发酵产酶条件的6个因素进行评价,筛选出具有显著影响作用的3个因素即发酵温度、发酵时间和装液量,然后通过响应面法探讨此3个主要因素的最优发酵参数水平,获得最佳的发酵产酶条件。结果表明,解淀粉芽孢杆菌GSBa-1发酵产凝乳酶的最佳工艺条件为:发酵温度36℃,发酵时间75h,装液量40%,初始p H为培养基自然p H(6.85),接种量4%,摇床转速160r/min。此条件下解淀粉芽孢杆菌GSBa-1发酵产酶活力为742.42 Su/m L。解淀粉芽孢杆菌GSBa-1发酵产凝乳酶活力经发酵条件优化后得到显著提高,该菌株的发酵产酶及在干酪生产中的应用具有良好的产业化开发前景。     

纳豆菌的分离、鉴定及其副溶血弧菌拮抗作用

从纳豆和纳豆菌制剂中分离、纯化得到9个芽孢杆菌菌株,经生理生化实验鉴定其中6株为纳豆芽孢杆菌。首先采用琼脂扩散法研究纳豆菌在不同温度(37、32、28℃)和不同发酵时间(12、24、36、48h)的发酵液对副溶血弧菌的拮抗作用。然后,选择优势菌株BN-5在28℃时与副溶血弧菌共培养,以研究纳豆菌对副溶血弧菌生长的影响。结果表明,37℃纳豆菌发酵液均有明显抑菌效果,抑菌效果随发酵温度的降低和发酵时间的延长而迅速减弱;纳豆菌初始浓度/副溶血弧菌初始浓度≥100时,在24h以内可以有效抑制弧菌生长。     

抑制芽孢杆菌乳酸菌的筛选鉴定及其抗菌物质的分离纯化

从朝鲜族辣白菜中分离筛选得到1株对芽孢杆菌具有广谱抑菌活性的菌株JLY-7,该菌株发酵液对蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌等食品中常见的腐败性和致病性芽孢杆菌具有较强的抑制作用。对菌株JLY-7进行形态学特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,鉴定其为植物乳杆菌。利用正丁醇萃取、凝胶过滤层析(Sephadex LH-20)和半制备液相色谱纯化等手段对该菌株所产抗菌物质进行分离纯化,得到单一活性抑菌组分,经高分辨电喷雾电离质谱确定该抗菌物质的分子量为694.129 Da。通过蛋白酶处理结果表明,该抗菌物质对常见的蛋白酶均非常敏感。本研究可为乳酸菌抗菌物质控制食品中芽孢杆菌奠定理论基础。     

解淀粉芽孢杆菌HRH_(317)抑菌物质发酵条件的优化

该试验研究解淀粉芽孢杆菌HRH_(317)抑菌物质的发酵条件。首先采用单因素试验研究发酵时间、温度、初始pH、接种量及菌龄、摇床转速、装液量对发酵液抑菌活性的影响,然后采用正交设计对这7个因素进行筛选,分析极差结果确定接种菌龄、接种量、发酵时间为影响抑菌圈大小的3个关键因素,在此基础上,采用Box-Behnken设计及响应面进行分析,在发酵温度37℃、初始p H7.0、摇床转速150 r/min、装液量30 mL/100 mL条件下,确定菌株HRH317抑菌物质的最佳发酵条件为接种菌龄21 h、接种量3.8%、发酵时间25.5 h。拟合试验模型结果显示,抑菌活性物质的抑菌圈直径大小从未优化前的18.63 mm提高至22.95 mm,抑菌圈大小增加23.19%。     

以油茶籽粕为底物发酵生产蛋白酶培养条件的优化研究

优化了枯草芽孢杆菌KD-N2利用茶籽粕等为底物液体发酵生产蛋白酶的发酵条件。单因素实验结果表明,在初始p H 8.0、种龄30h、转速230r/min、接种量12%(v/v)、培养温度28℃、装液量30m L时,发酵液中蛋白酶活性较高。正交试验结果表明,接种量5%(v/v),装液量30m L,初始p H值7.2时为最佳条件,在30℃、30h种龄、200r/min培养18h后蛋白酶活性达到104.2U。文章同时对发酵过程可溶性蛋白质含量和发酵液p H值变化进行了分析,为提高发酵产酶总量,发酵条件还需进一步进行优化。     

螠蛏共附生菌110的抑菌活性及其发酵条件优化

为了开发利用螠蛏共附生菌110,对该菌株进行形态学、生理生化及16S r DNA序列分析,并对其抑菌活性进行检测,进而以对4种细菌指示菌的抑菌圈直径为指标,采用单因素实验和四因素五水平L25(54)正交实验对该菌株的抑菌活性发酵条件进行优化。结果表明:螠蛏共附生菌110属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);具有明显的抑菌活性;在葡萄糖为4%,蛋白胨为2%,初始p H7.0的培养基中,35℃培养120h时抑菌活性最佳,且在此条件的菌株发酵液对11种真菌指示菌均有一定抑制效果,抑制率分别为毛霉菌、辣椒青枯、石榴黑腐100%,棉花枯萎、串珠镰刀菌98.8%,番茄早疫97.6%,苹果粉红88.3%,瓜类枯萎87.1%,雪霉叶枯31%,番茄灰霉8.7%,禾谷镰刀菌9.1%。     

凝结芽孢杆菌Liu-g1产中性蛋白酶的发酵培养基及条件优化

为提高一株产中性蛋白酶凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)Liu-g1发酵液中蛋白酶活力,采用单因素和正交实验研究不同培养基配方和不同发酵条件对凝结芽孢杆菌Liu-g1产中性蛋白酶活力的影响。结果表明:发酵培养基最优配方为大豆粕1%、玉米淀粉4%、碳酸钙0.6%;在初始p H7.5,装液量30 m L/250 m L,发酵温度45℃,发酵时间72 h优化条件下发酵液中蛋白酶活力最高,可达243.874 U/m L,为优化前的5.8倍。     

芽孢杆菌ZYCHH-01发酵条件优化及其抑菌物质的研究

采用芽孢杆菌ZYCHH-01发酵生产抑菌物质,以大肠杆菌（Escherichia coli）为指示菌株,通过牛津杯法测定其抑菌圈的大小判断其抑菌活性。通过单因素试验结合响应面法研究培养基pH值、发酵温度、接种量以及发酵时间对芽孢杆菌ZYCHH-01浓度和抑菌物质活性的影响。结果表明,最佳发酵条件为接种量3%,发酵温度36 ℃,培养基pH值7.8,发酵时间27.5 h。在此优化条件下,抑菌圈最大直径为21.12 mm。最小抑菌浓度为上清液稀释1∶64。生化试验结果表明,芽孢杆菌ZYCHH-01产抑菌物质对蛋白酶敏感,较耐储存,对有机溶剂和部分表面活性剂稳定,抑菌活性pH范围较大且具有良好的热稳定性,对食源性病菌抑菌活性良好。