包埋吸附法固定化酒用酸性脲酶的研究

用包埋吸附法固定化酒用酸性脲酶,探讨了固定化的条件、固定化酶的部分性质以及固定化酶在黄酒中的应用。结果表明:固定化酒用酸性脲酶的最适海藻酸钠浓度、CaCl2质量浓度和壳聚糖浓度分别为2.0、5.0和0.3g/dL,最适固定化时间为2.5h,固定化率为82.3%;最适反应温度40℃、最适pH4.0、半衰期为48d,固定化酶的比活为3.6U/mg;在35℃下添加量为0.1g/mL(固定化酶质量/黄酒体积),24h内黄酒尿素去除率达65%,同样条件下连续使用去除黄酒中尿素,使用13次时尿素去除率达39.7%。     

固定化酶生产低乳糖牛乳的研究

以离子交换树脂D151为载体,采用吸附交联法固定化黑曲霉来源乳糖酶,并将固定化酶装填于填充床反应器中处理牛乳,研究固定化酶连续生产低乳糖乳的条件和使用稳定性.试验结果表明:在50℃下,牛乳以0.53 mL/min的流速通过反应器生产低乳糖乳效果最好,可获得79.7%的乳糖水解率,达到低乳糖乳的要求.固定化酶在最适条件下连续水解牛乳,每隔20 h用pH 6.5缓冲液清洗反应柱,其10d内酶活力丧失12%,此时乳糖水解率为70.1%,达到低乳糖乳的要求.固定化乳糖酶连续使用半衰期约为22d.该研究为工业化利用固定化酶连续生产低乳糖乳提供了技术依据.     

壳聚糖膜固定化葡萄糖氧化酶的研究

研究以壳聚糖膜为载体、戊二醛为交联剂,固定化葡萄糖氧化酶的最佳条件。结果表明,采用脱乙酰度为86.40%,分子量为1.288×106的壳聚糖制作壳聚糖膜,与浓度0.025%的戊二醛交联后做为载体,室温状态下,在pH为6.5、酶浓度为0.2mg/ml的酶液中固定12h,固定化酶活力最大。在此条件下,固定化酶活力为186.8U/cm2,相对活力78.69%,活力回收>40%。     

壳聚糖固定化绿豆乳糖酶的特性及应用的初步研究

以壳聚糖凝胶颗粒为载体,采用共价键偶联法固定绿豆乳糖酶,研究壳聚糖固定化绿豆乳糖酶的酶学性质并对其进行水解牛乳中乳糖的初步应用研究。结果表明：固定化酶的热稳定性在4～55℃范围内;最适温度60℃;最适pH3.5;固定化酶的表观米氏常数Km 为0.04%,溶液酶米氏常数Km 为0.33%,是溶液酶米氏常数Km 的0.12 倍;固定化酶的操作半衰期为30d,较溶液酶长。用固定化酶制备填充床式反应器水解牛奶中乳糖,水解率可达60% 以上。     

固定化漆酶在SBR处理造纸废水中的应用

固定化漆酶投入反应器处理造纸废水,当进水COD为1265.87 mg/L,固定化酶组COD去除率为65.64%,对照组COD去除率为61.42%,COD去除率提高了6.87%。提高进水负荷至1641.31 mg/L,固定化酶组COD去除率为58.76%,对照组COD去除率为47.94%,COD去除率提高了22.57%,说明反应器接入固定化漆酶后抗进水负荷冲击能力提高。当进水p H改变时,固定化酶组反应器具有较高的COD去除率。说明反应器接入固定化漆酶后抗进水p H冲击能力提高。     

壳聚糖固定化α-葡萄糖苷酶的研究

以粉末状壳聚糖为载体 ,采用吸附 -交联的方法将 α-葡萄糖苷酶固定化。最适固定化条件研究表明 ,0 .1 g壳聚糖与 2 4 ,0 0 0 U(0 .0 8ml) α-葡萄糖苷酶进行固定化 ,在p H6.0条件下 ,室温吸附 6h,然后与 3.5%的戊二醛在 45℃交联 6h,可得到固定化酶的活力为 1 4,30 0 U,酶活力回收率为59.6%。通过实验发现 ,与游离酶相比 ,固定化酶的最适 p H向酸性方向移动 0 .5p H单位 ,为 p H4.5;最适作用温度达到70℃ ,比游离 α-葡萄糖苷酶提高 5℃ ;酸碱稳定性、热稳定性及贮存稳定性均有较大提高 ;在 60℃操作半衰期为 1 68h     

壳聚糖固定化单宁酶及其澄清绿茶汤的应用研究

以固定化单宁酶的酶活和活力回收为指标,筛选出壳聚糖海绵载体固定化单宁酶。与游离酶相比,固定化酶的最适反应pH向酸性偏移0.5,最适反应温度提高5℃;对金属离子和EDTA的稳定性均增强。固定化酶的半衰期也明显延长,4℃时半衰期由35.39h延长至324.25h,25℃时半衰期仍高达189.56h。分别以没食子酸甲酯溶液和绿茶汤为底物,经连续6批次酶促反应,固定化单宁酶的酶活保持稳定。经固定化单宁酶处理后,绿茶汤澄清度、贮存稳定性明显提高。     

固定化马来酸顺反异构酶合成富马酸

为了制备稳定高效的固定化酶转化底物马来酸来生产富马酸,本文将粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)来源的马来酸顺反异构酶与R5肽段融合表达,融合酶比酶活可达42 U/mg。将细胞破碎上清液用40%硫酸铵沉淀,再用终体积分数为0.1%的戊二醛在室温下交联1 h形成交联酶聚集体,最后用1 mol/L正硅酸甲酯包埋,固定化酶的酶活回收率达到60%。在55℃下,固定化酶的半衰期可达4 h(游离酶仅为0.5 h),进行8次重复催化反应后,可保留78%的初始酶活。将固定化马来酸顺反异构酶装入填充床反应器,连续转化10个批次后富马酸的转化率可保持在95%以上。该研究为马来酸顺反异构酶生产富马酸的工业化应用提供了借鉴。     

酶解淀粉载体固定化脲酶的研究

脲酶是-种来源广泛的植物蛋白酶,能高效、专一的催化尿素分解.本文采用酶解木薯淀粉为载体对脲酶进行固定化,研究了温度,时间、pH,醛基含量等因素对固定化脲酶活力的影响,得出酶解淀粉载体固定化脲酶的最佳条件为:反应温度25℃,反应时间6h,反应pH值7.0,载体与酶的配比为1:1(mL/g).     

肠杆菌酸性脲酶的提取及基本特性

采用超声破碎和乙醇分级沉淀的方法,对肠杆菌所产酸性脲酶的提取进行了研究,超声破碎最佳条件为:缓冲液pH6.0,湿菌体(质量)︰缓冲液(体积)=1∶5,功率300W,处理时间10min,乙醇分级较好浓度范围为30%～50%;研究乙醇分级后粗酶的基本特性,结果表明,粗酶液的最适温度75℃,温度稳定范围75℃以下,最适pH5.5,pH稳定范围为pH4.0～ pH6.5;粗酶在黄酒中的应用结果表明,在30℃下添加量为0.05U/mL时,24h后尿素去除率可达70%以上。     

Process Characteristics of Hydrolysis of Chitosan in a Continuous Enzymatic Membrane Reactor

ABSTRACT: Crude enzyme from Bacillus cereus NTU-FC-4 was used to hydrolyze chitosan of 66% deacetylation in a membrane reactor, operated at 45 °C and pH 5, to continuously produce chitooligosaccharides. Major oligomers in the product from the reactor were chitobiose, chitotriose, chitotetraose, chitopentaose, and chitohexaose. When the membrane reactor was operated at an enzyme/substrate ratio of 0.2 (unit/mg) and residence time of 100 min, it reached steady state in 2.5 h. The system could be operated for 15 h and still maintained a stable product composition. When the volume replacement exceeded 2.5, the productivity of the membrane reactor became higher than that of the batch reactor, and the difference between them became even greater when the volume replacement was further increased. The apparent Michaelis constant (K_m) for the enzyme in the membrane reactor was 18.8 mg/mL, but the apparent K_m was 5.4 mg/mL for the batch reactor, suggesting that the affinity of the enzyme for chitosan was lower in the membrane reactor compared with the enzyme in the batch reactor. The estimated values of apparent V_max were 0.18 and 0.20 mg reducing sugar/mL/min for the enzyme in the membrane reactor and in the batch reactor, respectively, indicating that the enzyme activity was not greatly altered when used in the membrane reactor.     

Immobilization of urease on dialdehyde porous starch

Dialdehyde porous starch (DPS) was prepared by enzymatic hydrolysis and periodate oxidation. Urease was immobilized on DPS by several techniques including physical adsorption and covalent bonding. Optimum urease immobilization conditions for maximum enzyme activity were shown as following: immobilization pH 6.0, processing time of immobilization 25 h, immobilization temperature 25°C, aldehydic groups content 79.6% and ratio of supporter to urease 1:2 (w/v in g/mL). Temperature optimum of the free and immobilized urease were 60 and 70°C, respectively. The temperature curve of the immoblized urease was wider than that registered for the free urease. After being stored at ambient temperature for 42 days, the immobilized urease retained almost all of the original activity. DPS was found capable of holding the urease enzyme during a repeated cyclic test for ten times. An increase of the K_m value for the immobilized urease was found. The foregoing data indicated that DPS is a fine supporter for urease and provided a basis for biosensor or bioreactor development with reduced costs and improved shelf life.     

酶电极法测定发酵酒中尿素的含量

为实现准确、快速检测发酵酒中尿素含量,本文以明胶和壳聚糖为包埋材料,透析膜为载体,戊二醛为交联剂,用包埋交联吸附相结合的方法制作了固定化脲酶膜,结合铵离子选择性电极实现了尿素含量的快速测定,研究了脲酶固定化的条件和尿素传感器的响应性能,并应用于实际样品的测定。实验表明：脲酶固定化最适戊二醛浓度为0．05％,最适交联时间为1．5h;尿素传感器最佳使用环境为温度40℃,最适溶液pH值5．0,线性范围为2～50mg／L,最低检测限为0．5mg／L,线性良好（RE〉0．999）,重复性好（RSD=1.45％）,可靠性较高。此方法每片脲酶膜可进行多次测量,且可更换,降低了测量成本,可用于实现酸1生环境下发酵酒中尿素含量的快速检测,为控制发酵酒的营养、质量及食用安全提供技术支持。     

酶制剂在黄酒工业中的应用进展

酶制剂可以改善黄酒工艺已被广泛使用.文中综述了糖化酶、液化酶、酸性蛋白酶、阿米诺酶、普鲁兰酶、纤维素酶、酸性脲酶的摹本性质以及在黄酒工业中的应用进展,并对未来的研究作了展望.     

Naringinase Immobilization in Packaging Films for Reducing Naringin Concentration in Grapefruit Juice

Naringin, a bitter compound in citrus, may be converted to a nonbitter form by enzymic hydrolysis. Our objective was to determine the feasibility of immobilizing naringinase in a food contact approved packaging film. Naringinase from Penicillium sp. was immobilized in cellulose acetate films with up to 23% efficiency at 7°C. Kinetic studies showed that the free enzyme had an optimum pH=3.5 and the immobilized enzyme pH=4.0. Activation energy decreased upon immobilization (from 14.2 to 11.0 Kcal/mol), thus providing an increased catalytic efficiency for immobilized naringinase. The Michaelis constant for immobilized naringinase (K_m=2.1 mM) was lower than for free enzyme (K_mm=3.6 mM). Keeping films under dry storage for 1 mo at room temperature did not cause decreased enzyme activity. A film area/volume ratio (cm²/mL of 10° Brix grapefruit juice) of 7.2 hydrolyzed 60% of the naringin in 15 days at 7°C.     

糠醛渣复合材料固定果胶酶的制备

本文以糠醛渣为原始材料进行磺化预处理,利用静自电组装技术将壳聚糖包覆表面,得到糠醛渣-壳聚糖和磺化糠醛渣-壳聚糖复合材料。以FT-IR、SEM等技术对以上制备的复合材料的进行分析表征;然后将两种复合材料利用戊二醛交联后进行果胶酶的固定化。采用单因素变量法研究新型固定化酶的最佳催化性能和稳定性。未磺化糠醛渣复合材料固定酶的最佳催化条件:pH 3.5,果胶酶浓度50 mg/mL,果胶浓度15 mg/mL,反应时间120 min,反应温度45℃;磺化糠醛渣复合材料固定酶的最佳催化条件:pH 3.5,果胶酶浓度20 mg/mL,果胶浓度10 mg/mL,反应时间60 min,反应温度50℃。其中糠醛渣复合材料的固定化果胶酶的最大载酶量为197.20 mg/g,在重复循环使用8次后剩余相对酶活可达81.78%,磺化糠醛渣复合材料的固定化果胶酶在4℃下储存32 d后仍剩余88.98%的相对酶活。两种固定酶都表现出较好的操载酶量和储存稳定性,有较好的经济价值和应用前景。     

固定化酸性蛋白酶载体的选择及其性质

选用海藻酸钠（sodium alginate,SA）分别与3 种天然高分子材料制作复合凝胶载体,以酶活回收率为评价指标,采用单因素试验和正交试验确定最佳载体材料及最佳固定化条件。结果表明,SA-黄原胶复合凝胶为最佳载体,其最佳工艺条件为：SA与黄原胶质量比例为6∶1,CaCl2质量浓度为5.0 g/100 mL,固定化时间为2.5 h,在此条件下固定化酶活回收率为74.12%。对固定化酸性蛋白酶酶学性质进行研究,结果表明,其最适pH值为3.0、最适反应温度为45 ℃,均与游离酶相同,热稳定性优于游离酶,动力学参数Km值高于游离酶,操作半衰期为17.28 d。     

壳聚糖-埃洛石纳米管微球的制备及其对木瓜蛋白酶的固定化

运用交联-吸附法制备壳聚糖-埃洛石纳米管(chitosan-halloysites nanotube,CTS-HNTs)复合微球固定木瓜蛋白酶,并通过傅里叶红外光谱、扫描电子显微镜、荧光标记等方法进行表征。2%CTS+1%HNTs制备的微球对木瓜蛋白酶的固定量最高。固定化条件为木瓜蛋白酶质量浓度1 mg/mL、固定化时间10 h。固定化木瓜蛋白酶最适pH 6.8(游离酶pH 7.2)、最适温度60℃(游离酶50℃),保存30 d该酶相对活性为62%(游离酶27%),使用4次后,木瓜蛋白酶的相对活性仍然保留26.26%。CTS-HNTs微球固定化木瓜蛋白酶耐贮存,操作稳定性强,可以提高酶的利用率,降低酶解的成本,提高生产效率。     

牛蒡菊糖酶法提取

采用固定化酶法提取牛蒡菊糖。结果表明酶水解提取牛蒡菊糖的最佳工艺为：13.5g/100mL 中性蛋白酶、pH 7、固液比1:15、50℃、酶水解6h,菊糖提取率为14.57%;固定化酶制备最佳工艺为：以甲醛(40%):NaOH(2mol/L)=2:3 为凝结液、pH7.5、壳聚糖2.5g/100mL、60℃、加酶量7.5mg/mL,固定8h,酶活力回收率可达到39.13%;固定化酶提取牛蒡菊糖最适条件为：pH7、固液比1:15、60℃、固定化酶加入量13. 5 g/100mL、酶解5h,在此条件下菊糖提取率达到12.89%。固定化酶的稳定性与游离酶相比有显著的提高,连续反应10 次后,固定化酶仍然具有良好的使用性能,此时牛蒡菊糖的提取率为9.42%。     

利用固定化酵母进行黄酒主发酵的初步研究

该文以海藻酸钙凝胶为固定化载体,从酵母浓度、海藻酸钠浓度、氯化钙浓度3方面来探究黄酒主发酵阶段的最佳固定化条件,确定了酵母浓度为109个/mL,海藻酸钠浓度为2.0%,氯化钙浓度为4%。同时将其与传统游离酵母的发酵曲线进行对比,并且在实验室条件下连续进行了12次固定化酵母发酵,结果显示主发酵结束时酒样的酒精度在7.4%vol左右(与游离发酵结果类似),稳定性较为理想。