海蜇胶原蛋白肽的生物活性研究

以海蜇加工下脚料为原料提取胶原蛋白,酶解制备胶原蛋白肽并对酶解液进行抽滤分离,并对所得不同分子量的胶原蛋白肽进行生物活性研究。结果表明:抽滤分离到四种不同分子量的胶原蛋白肽:分子量>10 kDa(JCP1)、分子量3~10 kDa(JCP2)、分子量1~3 kDa(JCP3)和<1 kDa(JCP4)。生物活性研究表明,JCP1具有最强的超氧阴离子自由基清除能力和酪氨酸酶双酚酶抑制效果,其IC₅₀值分别为22.6和11.96 mg/mL,JCP1对酪氨酸酶的抑制类型为可逆混合竞争型抑制;JCP3具有最强的还原力、羟自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除能力和血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性,其IC₅₀值分别为14.9、2.21、0.61和15.8 mg/mL;JCP4具有最强的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力,其IC₅₀值为28.3 mg/mL。     

条斑紫菜活性肽的抗氧化作用

以条斑紫菜为原料,使用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶水解紫菜蛋白制备活性肽,采用还原能力、清除羟自由基和二苯代苦味酰基自由基作为抗氧化性评价指标,研究紫菜活性肽的体外抗氧化活性,并测定其分子质量分布。结果表明：3种蛋白酶对紫菜蛋白具有较好的酶解效果,酶解产物具有一定的还原能力;自由基清除率和底物浓度之间具有正相关关系,木瓜蛋白酶酶解活性肽清除羟自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.397mg/mL;胃蛋白酶酶解活性肽清除二苯代苦味酰基自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.261mg/mL;经测定,具有抗氧化活性的小分子肽分子质量分布在148～1963u之间。     

优选南极磷虾蛋白肽抗氧化活性组分

目的制备南极磷虾抗氧化肽,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽成分。方法采用脱脂、酶解、超滤等手段制备南极磷虾抗氧化肽;以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、抗氧化能力指数3个抗氧化指标和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)活力2个酶活力指标为评价指标,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分;基于G-25凝胶层析技术对抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分进行分离纯化,进一步基于电子顺磁共振(electron paramagnetic resonance,EPR)方法测定洗脱后各峰的DPPH自由基清除率,得到抗氧化活性最好的南极磷虾抗氧化肽组分。结果通过抗氧化指标测定,截留分子量3～10 KDa的肽的DPPH自由基清除率最高,为(30.10±1.10)%,截留分子量3 KDa的南极磷虾肽的ABTS清除能力和抗氧化指数较好,则IC50值为(0.74±0.08) mg/mL、氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity, ORAC)值为6.39±0.21;通过酶活力指标测定,截留分子量3 KDa的肽的SOD活力和CAT活力最好,分别为(45.7±0.13)U/mg和(17.1±0.19)U/mg蛋白质。对截留分子量3KDa和3～10KDa的南极磷虾肽进行G-25分离纯化后,测定各组分的DPPH自由基清除率,可知截留分子量3～10KDa的F2-2峰清除率最好,为(51.55±1.54)%。结论基于EPR方法优选出分子量为3～10 KDa的南极磷虾肽的F2-2组分的DPPH自由基清除率最高。     

响应面优化鲍鱼内脏抗氧化肽制备工艺及其活性

利用鲍鱼内脏结缔组织为原料,通过酶解法制备内脏多肽,研究鲍鱼内脏蛋白的抗氧化性。考察底物质量分数(1%～5%),酶添加量(3 000～15 000 U/g),酶解温度(40～60℃),酶解时间(1～5 h), pH (5.5～7.5)对鲍鱼内脏抗氧化性的影响;在单因素的基础上结合响应面法,以DPPH自由基清除率为指标,优化出抗氧化肽的最佳制备工艺,进一步研究其体外抗氧化活性。结果表明,风味蛋白酶为最适水解酶,在底物质量分数4.29%、酶添加量10 533.76 U/g、酶解时间3.87 h、酶解温度50℃、pH 6.5,抗氧化肽的酶解效果最佳;在该条件下DPPH自由基清除率达89.18%,其清除DPPH自由基、羟自由基、ABTS自由基的IC_(50)分别为4.61 mg/mL, 16.24 mg/mL和17.41 mg/mL。说明鲍鱼内脏结缔组织能够制备得到良好抗氧化性的蛋白肽。     

鳕鱼皮胶原蛋白肽的功能特性及抗氧化活性

以鳕鱼皮胶原蛋白肽为实验材料,研究其吸水性、保水性、乳化性等功能特性,并且进行了体外抗氧化实验。结果表明鳕鱼皮胶原蛋白肽具有较好的吸水性、保水性、吸油性和起泡性,具有一定的乳化性和较弱的泡沫稳定性。体外抗氧化实验结果显示,鳕鱼皮胶原蛋白肽对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除效果,且清除率与样品溶液的浓度存在剂量依赖关系;浓度为30mg/mL时,胶原蛋白肽对DPPH·、·OH和O2-·的抑制率分别可达到73.84%、85.76%、64.09%。分级后,分子量1ku以下的胶原蛋白肽对DPPH·和·OH的清除能力最强,30mg/mL时清除率达到84%和90.97%;分子量5ku以上的胶原蛋白肽对O2-·清除能力最强,30mg/mL时清除率达到74.02%。     

澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)6.18 mg/mL与还原能力IC₅₀ 2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC₅₀ 0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC₅₀ 0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于...     

松茸水解蛋白肽制备及其抗氧化活性的研究

目的：本文以松茸作为原料经过蛋白提取和蛋白酶解得到蛋白肽,并研究其抗氧化能力。方法：将前期在最优条件下提取的松茸蛋白（得率13.56%）经蛋白酶解,筛选酶及优化酶的组合并制备水解蛋白肽;通过DPPH自由基清除、ABTS自由基清除及羟自由基清除3种自由基清除测定其抗氧化活性。结果：最佳水解酶组合为风味蛋白酶:碱性蛋白酶=1:3,水解工艺为底物浓度6mg.ml-1,作用时间6h,酶添加量2.0%;抗氧化活性实验结果表明水解肽的DPPH自由基清除和ABTS自由基清除能力较强,ABTS自由基清除能力较稳定。结论：深入研究松茸水解蛋白肽并将其应用于食品工业,为食品行业需找新的可利用资源有一定的应用价值。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

不同分子量水牛乳酪蛋白酶解肽抗氧化活性的研究

通过超滤分离得到不同分子量范围的水牛乳酪蛋白酶解肽组分,对比不同组分的抗氧化活性,结果表明:分子量范围小于1 ku的组分,其DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子清除能力以及还原能力均高于分子量范围在大于1 ku(1~3 ku)的组分,且二者均显著高于(P0.05)酶解前的底物酪蛋白。     

大豆β-伴球蛋白多肽抗氧化活性研究

以大豆β-伴球蛋白为原料,利用枯草芽孢杆菌进行发酵制备抗氧化肽,研究发酵时间和浓度对大豆β-伴球蛋白肽抗氧化活性影响。结果表明,发酵40 h时,大豆β-伴球蛋白肽抗氧化活力最高,抑制自由基能力最强;在此最佳发酵时间下,当大豆β-伴球蛋白肽浓度为1.6 mg/mL时,对羟自由基清除率最大;浓度为2 mg/mL时,对超氧阴离子自由基清除能力最强。     

桑叶蛋白抗氧化肽的酶法制备

为了提高桑叶蛋白MLP的抗氧化活性,用碱性蛋白酶Alcalase、复合蛋白酶Protamex、木瓜蛋白酶Papain、风味蛋白酶Flavourzyme、中性蛋白酶Neutrase及胰蛋白酶Trypsin等6种蛋白酶对MLP进行单酶酶解及双酶、三酶复合酶解,并对酶解前后的化学组成、分子量分布、多肽得率、氨基酸组成、自由基清除能力、还原能力等进行对比分析。结果表明,MLP主要由分子量大于6.5 ku的大分子肽及蛋白质组成,酶解物则主要由分子量为0.3~0.6 ku的小肽及0.6~6.5 ku的多肽组成;相较于过度酶解,适度酶解能更好的改善MLP的抗氧化活性;多肽得率与自由基清除能力显著正相关(r=0.916~0.985);6种蛋白酶中,碱性蛋白酶、中性蛋白酶及复合蛋白酶的酶解物抗氧化活性显著优于MLP及其他三种蛋白酶解物;中性蛋白酶单独酶解物的抗氧化活性显著优于双酶、三酶复合酶解物。对中性蛋白酶的单酶酶解条件进行优化,结果表明底物浓度为20 mg/mL,E/S为1%(W/W),用中性蛋白酶酶解2 h所得的酶解物(NH)的抗氧化活性最高,后期研究中可选用中性蛋白酶制备桑叶蛋白抗氧化肽。NH或许可以作为食品中较有潜力的抗氧化剂。     

超高压与Alcalase协同作用制备牛乳清蛋白抗氧化肽

为探讨超高压与碱性蛋白酶Alcalase协同作用下乳清蛋白抗氧化肽的制备,以牛乳清分离蛋白(WPI)为原料,采用Alcalase分别对100～600MPa的超高压处理中和超高压处理后的WPI进行水解,并采用邻苯三酚自氧化法对其水解产物的超氧阴离子自由基清除能力进行测定。结果表明,超高压与Alcalase协同作用显著地促进了WPI的水解,其水解产物的抗氧化活性也显著提高;分子量小于3ku的组分具有最强的超氧阴离子自由基清除能力,其半抑制浓度IC50值最小,为411.62μg/mL。因此,超高压与Alcalase协同作用于乳清蛋白可用于开发新型天然抗氧化剂。     

海参酶解产物的分离及其体外抗氧化作用的研究

从海参酶解产物中分离制备海参肽.并研究其体外抗氧化作用。采用超滤、冷冻干燥方法分离不同分子质量范围的海参肽;采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH),研究海参肽的抗氧化活性;经Sephadex G-25和反相高效液相色谱对抗氧化海参肽进行进一步分离。结果表明,分子质量在1000～3000u的海参肽表现出很强的抗氧化作用,对DPPH自由基的清除能力强于V_E,其再经Sephadex G-25分离得到海参肽Ⅰ的抗氧化活性最强,对DPPH自由基的清除率达56.3%(1mg/mL),海参肽Ⅰ经反相高效液相色谱将分离得到2个海参多肽组分.     

Anti-Inflammatory Effects of Lychee (Litchi chinensis Sonn.) Seed Peptide Hydrolysate on RAW 264.7 Macrophage Cells

Lychee (Litchi chinensis) seeds, a by-product from the canned lychee processing, were hydrolyzed using various concentrations of proteases (Alcalase, Flavourzyme, and Neutrase). The protein hydrolysate produced with Neutrase at a concentration of 50 mg/mL exhibited the highest free radical scavenging activity. After ultrafiltration, the fraction containing peptides of less than 650 Da was purified by using gel filtration chromatography into G1–G3. The G1 fraction exhibited the highest activity and was further purified by reversed phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC). Four fractions (H1–H4) were isolated and exhibited efficient nitric oxide (NO) scavenging activity. The G1 fraction inhibited NO production in lipopolysaccharide (LPS) stimulated RAW 264.7 cells with down-regulation of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and interleukin-6 (IL-6). The results showed that lychee seed peptide hydrolysates exhibited potent anti-inflammatory activities, suggesting the peptides may be useful as additives to health products such as functional foods and/or pharmaceuticals.     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

不同分子质量鲍鱼外套膜酶解物抗氧化活性研究

研究鲍鱼外套膜酶解物(AMH)及其不同分子质量组分的抗氧化活性。采用中性蛋白酶水解鲍鱼外套膜制得AMH,通过超滤得到分子质量分别为小于1kDa和1～3,3～5,5～10kDa的4种酶解物组分;考察AMH和不同分子质量组分的体外抗氧化活性。结果表明:AMH清除DPPH自由基、OH自由基和亚铁离子螯合能力的IC50值分别为11.76,12.07,4.04mg/mL;经过超滤分离后,其抗氧化活性明显增强,且1～3kDa分子质量范围组分的清除DPPH自由基和OH自由基能力最强,3～5kDa分子质量范围组分的亚铁离子螯合能力最强。     

青鱼肉活性肽的制备及其抗肿瘤活性研究

以青鱼肉为原料,经二步酶解、凝胶色谱分离纯化制备抗氧化和抗肿瘤活性肽。首先以抗氧化活性和水解度为评价指标,采用单因素和正交试验优化青鱼肉活性肽的制备工艺;然后采用凝胶色谱进行分离纯化,得到不同分子质量多肽组分并分析其氨基酸组成、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力和抗肿瘤活性。结果表明,二步酶解青鱼肉的最优酶解组合为碱性蛋白酶-复合蛋白酶,最佳制备工艺为:pH 8.00、酶解温度50℃、料液比2∶10(g∶mL)、酶添加量6000 U/g、酶解时间3 h,在此条件的二步酶解物清除DPPH自由基的半抑制浓度(half inhibiting concentration,IC 50)为9.52 mg/mL;经Sephadex G-15分离得到5个肽组分,其分子质量范围为130~1397 Da;抗氧化实验表明,组分IV具有最强的DPPH自由基清除能力,其IC ₅₀为3.17 mg/mL,为二步水解物的3倍。细胞增殖抑制实验发现,10 mg/mL组分IV对HepG 2细胞抑制率为92.54%,表明青鱼肉活性肽同时具有抗氧化和抗肿癌活性。     

不同蛋白酶对小麦蛋白酶解物抗氧化活性的影响

小麦蛋白是小麦淀粉加工的副产物,酶解是提高小麦蛋白溶解性和功能性的有效方式,而酶解用酶种类可能对酶解产物的功能性如抗氧化活性有一定影响。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种常用的蛋白酶分别对小麦蛋白进行酶解,并对酶解4 h后酶解物的多肽得率、分子质量分布、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等反映水解程度和抗氧化能力的主要指标进行评价。结果表明,风味蛋白酶酶解物中多肽得率最高,达91.44%,且分子质量小于3 000 D的多肽含量达76.9%;酶解物质量浓度为3 mg/m L时,木瓜蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除作用最好,清除率为65.12%(P0.01),其次是风味蛋白酶(58.43%)和碱性蛋白酶(55.29%);碱性蛋白酶酶解物对O_2~-·清除率效果最好,清除率为58.68%(P0.01),其次是风味蛋白酶(49.25%);碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物对·OH清除效果最佳,清除率分别为59.23%和58.16%。结果说明,蛋白酶种类对小麦蛋白酶解物抗氧化活性影响显著,风味蛋白酶对提高蛋白水解程度和生成小分子质量多肽的作用明显,而碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对提高酶解产物抗氧化活性效果较好。     

基于生物信息学与分子对接技术对坛紫菜降血压肽的筛选及活性分析

采用木瓜蛋白酶和糜蛋白酶双酶联合水解坛紫菜蛋白（Porphyra haitanensis protein,PHP）制备降血压活性肽,测定了经超滤后各个分子质量PHP酶解液清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）阳离子自由基能力、铁离子还原抗氧化能力（ferric ion reducing antioxidant power,FRAP）以及血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制活性。经质谱鉴定和活性肽数据库BIOPEP以及AHTPDB网站查找筛选活性肽,采用分子对接解释多肽抑制ACE机理,并对双酶酶解PHP动力学进行研究。结果表明：经超滤后的8?个分子质量的坛紫菜多肽组分中,＜0.5?kDa的组分具有最高DPPH自由基和ABTS阳离子自由基清除能力,＜1?kDa的组分具有最高FRAP值,而0.5～1?kDa组分IC50值（（2.21±0.28）mg/mL）最低。经查找筛选出14?条降血压肽,其中4?条肽的序列和对接能量分别为AVP（－5.87?kJ/mol）、GPL（－6.13?kJ/mol）、LDY（－7.65?kJ/mol）和LGYL（－7.78?kJ/mol）。酶解动力学模型预测PHP水解度与实验水解度相对误差在10%以下。本实验基于串联质谱与分子对接技术,通过生物信息筛选和体外活性检测从混合多肽中快速鉴定、筛选活性多肽,探究多肽抑制ACE的机理,并建立了描述蛋白可控酶解过程规律的动力学模型,为活性肽的制备提供了参考和借鉴。     

Evaluation of Antioxidant Activities of Zein Protein Fractions

Zein protein was extracted from the by‐product corn gluten meal. The obtained zein protein was 1st hydrolyzed by 4 different proteases. The antioxidant activities of the hydrolysates or peptides were evaluated by free radical scavenging activity, metal ion chelating activity, and lipid peroxidation inhibitory capacity. Among hydrolysates produced, alkaline protease hydrolysates exhibited the highest antioxidant activity. A regression model was established by uniform design to optimize the alkaline protease hydrolysis conditions. The hydrolysates with molecular weight < 3 kDa obtained from ultrafiltration showed the highest antioxidant activities in all relevant assays. The hydrolysates with molecular weight <3 kDa were subsequently purified by gel filtration chromatography, and fraction F3 exhibited the highest antioxidant activities. Two peptides were identified from fraction F3 using LC‐ESI‐Q‐TOF MS/MS as Pro‐Phe (263.13 Da) and Leu‐Pro‐Phe (375.46 Da). These peptides exhibited good free radical scavenging activity and lipid peroxidation inhibitory effect. The results clearly indicated that zein protein fractions are good sources for the development of natural antioxidants for the food industry.