6种药用植物内生菌提取物的抗氧化活性研究

本论文以6种具有抗氧化活性的药用植物乌头、唐松草、独活、车前草、薄荷、泽泻为材料分离内生菌,并对内生菌发酵液和菌丝体提取物中抗氧化活性成分进行了研究。实验以PDA培养基分离内生真菌,以高氏培养基分离内生放线菌,测定各提取样品的抗氧化活性,比较其总酚含量和总黄酮含量,并结合形态学和分子生物学方法对高活性菌株进行的鉴定。结果分别分离得到43株内生真菌,18株内生放线菌,其中内生真菌显示了较好的抗氧化活性,对·OH自由基有较强清除(清除率≥70%)作用的菌株有6株,占所用菌株的9.84%。其中菌株DHL-10发酵液乙酸乙酯提取物显示了较强的抗氧化活性,对过氧化氢的IC50为0.26 mg/m L,总酚和总黄酮含量分别达到了0.81±0.05 mg/g和0.84±0.05 mg/g;分子生物学鉴定结合形态学鉴定该菌株为链格孢菌属(Alternaria sp)真菌。本研究的结果证明,药用植物内生菌是抗氧化活性物质寻找的良好资源。     

一株槐树内生真菌发酵产物对羟自由基所致小鼠肝组织过氧化的体外作用

为了研究初筛获得的具有较高抗氧化活性和清除O2-.能力的槐树内生真菌菌株No.7发酵液提取物对.OH导致的氧化损伤的抑制作用及其清除.OH的效果,采用Fe2+-H2O2和Fe2+-VC两种羟自由基发生系统,以硫代巴比妥酸法测定了小鼠肝匀浆及肝线粒体中脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,以分光光度法测定了小鼠肝线粒体的膨胀程度。结果表明,槐树内生真菌No.7发酵液提取物具有清除.OH的作用,能抑制小鼠肝脏脂质过氧化,从而降低线粒体氧化损伤及肿胀。     

两种海藻内生菌的分离及其抗氧化活性研究

为研究不同海藻不同内生菌(细菌、真菌)的抗氧化活性差异,并筛选出抗氧化活性较好的菌株。选取广西北部湾海域绿藻门石莼(Ulva lactuca L.)与褐藻门裙带菜(Undaria pinnatifida Suringar)为研究对象,以其清除DPPH、羟基自由基与超氧阴离子的能力综合评价体外抗氧化活性,在抗氧化能力都较强的前12株菌株中进一步遴选出石莼与裙带菜内生细菌与内生真菌各3株进行深入检测。石莼与裙带菜的内生细菌、真菌对DPPH、羟基自由基与超氧阴离子的清除活性均随质量浓度增加而升高;不同藻类的石莼与裙带菜的内生菌抗氧化活性之间存在显著差异(P0.05);同种藻类内生菌间,除裙带菜内生真菌外,整体表现为,石莼与裙带菜的内生细菌对DPPH、羟基自由基与超氧阴离子的半抑制浓度IC_(50)值均显著高于内生真菌,说明石莼与裙带菜内生细菌的抗氧化活性显著低于内生真菌。其中,石莼内生真菌SZ-5菌株清除DPPH、羟基自由基与超氧阴离子的综合能力相对最强,IC_(50)依次为(0.59±0.06)、(1.30±0.36)、(1.14±0.35)mg/mL;经分子鉴定为短梗霉菌属真菌Aureobasidium spp.。     

竹叶兰内生真菌的分离鉴定及其抗氧化活性研究

本文采用经典的植物内生菌分离方法,从两种不同产地的竹叶兰植株的根、茎及叶片部位中共分离出16株可培养的内生真菌,其中4种真菌分离自云南省西双版纳地区的竹叶兰,12种真菌分离自广西省百色市的竹叶兰。根据形态学观察和ITS基因序列同源性分析,大致分为7类,其中Phanerochaete sp.、Phyllosticta capitalensis、Diaporthe sp.、Hypoxylon sp.、Nodullsporium sp.、Chaetomium nigricolor各一株,其余10个菌株均属于Colletotrichum sp.,说明Colletotrichum sp.为竹叶兰内生真菌的一大优势种。通过对其中5种内生真菌的抗氧化活性进行测定(DPPH自由基清除法、Fe~(3+)还原能力法及H_2O_2自由基清除法),得到具有较强抗氧化活性的2种菌株BSSF-2及YNLF-1(对DPPH自由基的清除率≥80%),经鉴定菌株BSSF-2为Colletotrichum karstii,菌株YNLF-1为Phanerochaete sp.。本研究结果表明,药用植物内生真菌在寻找新型抗氧化药物的方面具有广阔前景。     

一株丹参种子内生真菌ZJZD-3的分离鉴定及其生物活性

目的:从丹参种子中分离纯化内生菌,筛选具有抑菌、抗氧化、抗凝血活性的菌株进行分子鉴定。方法:采用平板分离法从丹参种子中分离内生菌;采用平板对峙法和滤纸片法筛选具有抑菌效果的内生菌,采用DPPH法测定内生菌抗氧化活性,兔耳缘静脉取血测定内生菌抗凝血活性。结果:从白花丹参种子中分离出11株内生真菌和2株内生细菌,从紫花丹参种子中分离出9株内生真菌和9株内生细菌。其中,一株内生真菌ZJZD-3发酵液对丹参病原菌4和6均有抑制作用,抑制率分别为70.1%和59.6%;内生真菌ZJZD-3具有很好的抗氧化能力,其0.5 mg/mL乙醇粗提液对DPPH清除率为91.44%;内生真菌ZJZD-3对于内源性、外源性凝血途径都具有一定的延长作用,并且内源性凝血途径最为明显,对家兔凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活性部分凝血酶时间(APTT)的延长率分别为48.48%、12.38%和34.44%。该菌株经鉴定为篮状菌属(Talaromyces sp.)。结论:内生真菌ZJZD-3具有很好的抗丹参病原菌、抗氧化和抗凝血能力,为丹参药效成分的工业化开发以及丹参的绿色规模化栽培提供新的途径和方法。     

八角内生真菌的分离及其抗氧化活性初步研究

采用组织贴片培养分离法,分别从八角果、叶、枝等健康组织中分离纯化获得24、32和23株内生真菌。分别采用总抗氧化性能测定、DPPH自由基清除实验对79株内生真菌抗氧化活性进行了筛选。结果表明,从八角果实和枝条中分离获得的内生真菌BGEF11和BJEF13发酵液具有较强的抗氧化活性,其总抗氧化性能分别达147.11 EeEe 11.87（μg Vc/mL）和148.16 EeEe 13.11（μg Vc/mL）,对DPPH自由基清除率分别为84.84%和93.58%。经形态学鉴定,BGEF11和BJEF13均为球毛壳菌。     

藿香内生真菌次级代谢产物抗菌活性研究

【目的】分离纯化藿香花中内生真菌,测定内生真菌次级代谢产物抑菌活性。方法采用组织分离法从藿香花中分离内生真菌,根据显微形态结构进行初步鉴定;用微量肉汤稀释法测定藿香内生真菌次级代谢产物的最低抑菌浓度(MIC)。结果从藿香茎中共分离得到13株内生真菌,鉴定出12株,分别属于丝核菌属、黑孢霉属、长蠕孢菌属、短蠕孢菌属、丝孢菌属、链格孢菌、镰刀菌属、头孢霉属。大多数藿香内生真菌次级代谢产物的乙酸乙酯部位具有抗菌活性。菌株H-2的乙酸乙酯部位抑菌活性最强,对六种供试菌的MIC均为250μg/mL。菌株H-9的乙酸乙酯部位对无乳链球菌的抑制活性最好,为31.25μg/mL,对其他供试菌在500μg/mL能够表现出抑制活性。结论藿香内生真菌的次级代谢产物具有抑菌活性,为进一步的活性指导分离提供了理论依据。     

鸢尾内生真菌的分离纯化及其发酵物活性研究

研究鸢尾的内生真菌及其发酵物的抑菌活性和抗氧化活性,旨在深入开发新资源。以鸢尾为研究对象,分离纯化出内生真菌,采用DPPH自由基清除法和羟基自由基清除法对其发酵物进行抗氧化活性试验,采用牛津杯法和MTT法进行抑菌活性试验。结果表明:(1)采用组织分离法从鸢尾组织中分离出18株内生真菌;(2)菌株B-1-23、B-1-25、B-1-28和B-1-55具有较强的清除DPPH自由基的能力,菌株B-1-9、B-1-16和B-1-55具有较强的清除羟基自由基的能力;(3)菌株B-1-23、B-1-16、B-1-25、B-1-55和B-1-28的发酵物具有一定的抑菌作用,其中对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,1000μg/m L浓度下其抑菌率大于90%;对藤黄微球菌的抑制作用最弱,最高抑菌率为16.39%;(4)菌株B-1-55经分子生物学鉴定其为Fusarium镰刀属。试验结果说明鸢尾中蕴含着具有抑菌活性和抗氧化活性的内生真菌,可进一步开发利用。     

长岛海洋生物内生真菌的分离及其抗老年痴呆活性筛选

目的:从长岛海洋生物中分离内生真菌,通过抑制乙酰胆碱酯酶活性和抗氧化活性筛选获得活性菌株。方法:从几种海洋生物中分离、纯化内生真菌,并测定其发酵液和菌丝体提取物抑制乙酰胆碱脂酶活性和清除二苯代苦味酰基自由基DPPH.的能力。结果:从长岛海域采集到的9种生物中分离内生真菌42株,其中具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的24株,具有清除DPPH.活性的33株,兼具2种活性的15株。乙酰胆碱酯酶抑制率最高达到61.98%,DPPH.自由基清除率最高达到92.94%。结论:海洋内生真菌是寻找抗老年痴呆活性物质的重要资源。     

罗汉果内生真菌的分离及其发酵产物的抗氧化活性研究

为探究罗汉果内生真菌发酵产物的化学成分及其抗氧化活性,从罗汉果内生真菌中筛选8株菌株的代谢产物进行化学成分试验,用DPPH·清除法和·OH清除法测定发酵产物的体外抗氧化活性。结果表明,8株罗汉果内生真菌发酵产物通过化学成分定性试验,推测可能含有蛋白质、多糖、有机酸、黄酮和醌类等物质。在供试液质量浓度为1 mg/mL时,其中菌株F5发酵液对DPPH·的清除率大小顺序为乙酸乙酯萃取相（96.83%）＞VC（95.77%）＞氯仿相（95.24%）;菌株F5发酵液对·OH的清除率大小顺序为VC（99.36%）＞原液（73.56%）＞水相（61.98%）,表明罗汉果内生真菌发酵产物具有较强的抗氧化作用,并且抗氧化的成分极性较大。     

酸性氧化电解水辅助提取槐米总黄酮工艺

为探究酸性氧化电解水对植物总黄酮提取的预处理作用,选取槐米为实验材料并采用酸性氧化电解水预处理-乙醇回流两步法进行提取。将单因素实验结果作为依据,采取Box-Behnken法优化槐米总黄酮的提取工艺,并且通过测定清除DPPH自由基和羟基自由基的能力评价其体外抗氧化活性。结果证实,酸性氧化电解水预处理过程能明显提高总黄酮得率,这是因为酸性氧化电解水中含有一定量氧化态的氯。当有效氯含量由13.61 mg/L提高到322.22 mg/L时,其总黄酮得率由7.16%提高到20.88%。槐米总黄酮的最佳提取工艺为：酸性氧化电解水有效氯浓度250 mg/L,预处理时间160.53 min,乙醇体积分数60.89%,液料比36.60:1 mL/g。此工艺下的槐米总黄酮得率达到19.67%。体外抗氧化活性研究显示槐米总黄酮提取液对DPPH自由基和羟基自由基的最高清除率分别可达96.38%和92.30%,说明其具有较好的抗氧化活性,可作为一种天然的抗氧化剂。该研究成果首次将酸性氧化电解水运用于植物提取的预处理过程中,提出酸性氧化电解水预处理-乙醇回流两步法提取工艺,为得到更高的得率提供实验支撑和理论分析。     

恒山黄芪内生真菌分离鉴定及抗菌活性的研究

目的:分离和鉴定恒山黄芪的内生真菌,并对其进行活性筛选。方法:采用形态学方法对分离菌株进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白假丝酵母和青霉为指示菌对分离得到的植物内生真菌进行抗菌活性实验。结果:从恒山黄芪中分离得到内生真菌菌株49株,经分类鉴定,分属于3目、6科、17属。49株内生真菌中有33株菌至少能抑制1种指示菌,占总菌数的67.35%。结论:恒山黄芪内生真菌种类多样,具有很好的研究和应用价值。     

实生与嫁接槐树的槐米、槐叶的芦丁含量和营养成分的分析及评价

以实生和嫁接槐树的槐米、叶片为材料,依据芦丁及各营养成分测定的国家标准对槐米和槐叶的芦丁、氨基酸和矿质元素进行测定和分析。结果表明,实生和嫁接槐树的槐米、槐叶的芦丁含量和营养成分存在明显差异(p<0.05);实生和嫁接槐树的槐米、槐叶均含有芦丁,含量2.12%～25.30%;氨基酸组成分析得出实生和嫁接槐树的槐米、槐叶均含有18种氨基酸,氨基酸总量较高,绝大部分必需氨基酸含量符合联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)模式。氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS)结果得出色氨酸和蛋氨酸+胱氨酸为槐米和槐叶的限制性氨基酸。必需氨基酸指数(EAAI)在46.33～68.01之间,呈现实生树槐叶>嫁接树槐米>实生树槐米>嫁接树槐叶的趋势;实生与嫁接槐树的槐米、槐叶含有大量的矿质元素,其中以K和Ca含量最高,分别达751.85～1672.45、481.38～2591.36mg/100g。实生树槐米的大部分矿质元素含量高于嫁接树槐米的含量。     

金莲花内生真菌的分离与初步鉴定

从内蒙古采集新鲜的金莲花植株,在确定了该植株内生菌分离的最佳表面消毒方法后,对其根部、茎部和叶部的内生真菌进行分离。通过分析菌落表面形态,从中分离得到6株内生真菌,其中叶中4株,茎中1株,根中1株,并用乳酸酚棉兰液染色镜检观察,经形态学鉴定均为子囊菌亚门(Ascomycotina),青霉属(Pinicielium)。     

女贞内生真菌清除自由基活性成分的分离纯化

采用组织块分离法对女贞的内生真菌进行分离,对分离到的菌株进行清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-（2,4,6-trinitrophenyl）hydrazyl,DPPH）自由基活性研究,并对活性较强菌株代谢产物中的清除自由基成分进行分离纯化。从女贞的叶片、茎、根、枝条等组织共分离出101 株内生真菌,研究发现NZ-18菌株清除自由基活性最强,并采用液相色谱法对NZ-18发酵液中清除自由基活性成分进行制备。分离到一种活性较强的化合物1,经高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）法和薄层色谱（thin layer chromatography,TLC）法纯度验证,发现该化合物为纯品化合物经活性验证发现化合物1在样品质量浓度为0.5 mg/mL时对0.2 mg/mL的DPPH自由基清除率为94.88%。结果表明,女贞内生真菌中存在大量的清除自由基活性菌株。     

郑州刺槐花挥发油化学成分分析

采用同时蒸馏萃取法提取郑州地区刺槐花挥发油,用GC-MS-DS联用技术分析其中化学成分,并与文献报道的其他地区刺槐花挥发油主要成分进行了对比.结果表明,郑州地区刺槐花挥发油中分离出64种组分,鉴定出48种化合物,占出峰总面积的82.93%;郑州地区刺槐花挥发油主要成分是6,10,14-三甲基-2-十五烷酮、3,7,11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯-1-醇、2-氨基苯甲酸甲酯等,与文献报道的其他地区刺槐花主要成分和含量均有所不同.     

鲜天麻内生菌分离鉴定及功能活性探究

目的:明确天麻内生菌及其代谢产物的活性。方法:采用组织匀浆法和划线法从秦巴地区鲜天麻中分离纯化内生菌,测定其抗菌、抗氧化及抗肿瘤活性,并对高活性菌株进行分子生物学鉴定。结果:从鲜天麻内部分离得到4株菌,其中内生菌B1、B2对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌活性,内生菌B2对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径达26.33 mm。4株菌均有一定的抗氧化活性,其中,内生菌B1对DPPH自由基的清除能力为69.13%。内生菌B2、B3、B4对HEK293T细胞有一定的抑制作用,其中内生菌B2的最高抑制率可达40.40%。分子生物学方法鉴定结果表明,内生菌B1、B2为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),内生菌B3为Lelliottia sp.,内生菌B4为水生拉恩菌(Rahnella aquatilis)。结论:分离纯化的鲜天麻内生菌具有抑菌和抗氧化活性。