复合酶法提取西藏金耳粗多糖工艺研究

以西藏产金耳为材料,通过单因素及正交试验,研究复合酶酶解工艺条件对西藏金耳多糖提取率的影响,以期得到最佳复合酶解工艺条件。结果表明:提取西藏金耳粗多糖的最佳酶解条件为酶质量浓度6g/L、酶解时间3h、酶解温度为45℃,此时多糖提取率达(11.59±0.10)%,比传统的热水浸提法(8.02%)提高了(43.26±1.25)%。     

硒化卡拉胶联合表阿霉素对肝癌HepG-2细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察硒化卡拉胶(KSC)和表阿霉素(EPI)联合应用对人肝癌HepG-2细胞生长及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT(噻唑蓝)比色法测定KSC和EPI对HepG-2细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度IC50值及金式指数q判断两者联合作用效果;用倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;Western blot法检测细胞周期蛋白Cyclin A和Cdc25A、细胞周期蛋白依赖性激酶Cdk2的表达水平。结果 KSC和EPI可明显抑制HepG-2细胞增殖,且有剂量依赖性。联合组的抑制效果更显著,且优于单一用药组。EPI单独用药48 h的IC50值为3.612 mg/L,与30mg/L KSC联合用药的IC50值降至0.807 mg/L,q值判断两药联合表现为相加作用。倒置显微镜观察给药后细胞形态发生变化,联合组细胞膜破裂呈坏死状。流式细胞术结果表明,两药均可导致S期周期阻滞。Western blot结果显示两药均可使Cyclin A、Cdc25A和Cdk2蛋白表达下调,联合给药组下降更明显。结论 KSC和表阿霉素可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,引起细胞周期S期阻滞,两药联合具有相加效应,这与其调节细胞周期相关蛋白的生成关系密切。     

响应面法优化西藏金耳多糖提取工艺研究

试验采取传统的热水浸提法,探究料液比、浸提时间、浸提温度等3个因素对金耳多糖提取率的影响。采用响应面法对金耳多糖的提取条件进行优化,研究结果发现料液比对金耳多糖提取率的影响最大,料液比与浸提温度的交互效应对金耳多糖提取率具有显著影响。确定金耳多糖提取的最佳工艺为:料液比为1∶41(g/m L),提取温度为60℃,提取时间为3 h。在上述条件下得到的西藏野生金耳粗多糖的提取率是7.9%,与响应面模型的预测值相符合,表明利用响应面法优化西藏金耳多糖的热水浸提工艺是可行的。     

基于体外药效学结合网络药理学和分子对接对人参-桑椹改善骨质疏松的机制研究

目的:用网络药理学方法,探讨人参、桑椹单味药与药对的水提物、醇提物改善骨质疏松症作用的分子机制。方法:观察人参、桑椹单味药与药对的水提物、醇提物对小鼠睾丸间质细胞（TM3）增值率及睾酮分泌影响和药对的水提物及醇提物对成骨细胞（MC3T3-E1）增值率及碱性磷酸酶（ALP）活力的影响。通过中药成分数据库TCMSP、GeneCards、OMIM数据库分别收集人参、桑椹化学成分及成分与疾病相关靶点,取交集后,运用STRING数据库分析关键靶点间的蛋白相互作用,利用DAVID数据库进行生物功能和通路分析;相关结果采用Cytoscape 3.7.0进行构图和网络拓扑结构分析;并应用Autodock软件对潜在药效物质和关键靶点进行分子对接。结果:TM3给药组与模型组比较,药对各浓度细胞增殖率极显著高于单味药各浓度值,且呈浓度依赖性,其中浓度为200 μg/mL时增殖率最高,增殖率分别是97.31%、91.67%（P<0.01）,睾酮分泌量分别是3.48、3.06 ng/mL。MC3T3-E1给药组与空白组比较,细胞增殖率明显升高。在药对水提物给药组中200 μg/mL浓度细胞增殖率最高,增殖率为155%;醇提物给药组中100 μg/mL时细胞增殖率最高,增殖率为142.8%;ALP分析结果显示药对水提物给药组及醇提物组均具有明显升高效果。本研究共收集到28个活性成分,69个关键靶点,GO功能富集收集到257个生物过程,34个分子功能,62个细胞组分;KEGG通路富集共收集到109条通路;分子对接结果显示,潜在药效物质与关键靶点IL6、ALB、MAPK8、CASP3对接结果能量低于0 kcal/mol。结论:本文揭示了人参-桑椹药对改善骨质疏松症可能的潜在药效物质和作用靶点,为人参-桑椹的开发和后续研究打下了基础。     

黄连生物碱对线粒体复合物Ⅲ蛋白表达的影响

目的:研究HepG2细胞对黄连生物碱的吸收及黄连生物碱对线粒体复合物Ⅲ表达的影响.方法:传代培养HepG2细胞,将其分为对照组、药根碱组、表小檗碱组、黄连碱组、巴马汀组、小檗碱组,设置每组药物浓度由低到高(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00μg/mL),培养24h.通过HPLC法和Western blot法分别检测各组细胞中黄连生物碱的含量及线粒体复合物Ⅲ的含量.结果:在同一浓度下,HepG2细胞中小檗碱的浓度最高,黄连碱次之,药根碱则不能吸收;细胞中的线粒体复合物Ⅲ含量,小檗碱组最高,且小檗碱含量与线粒体复合物Ⅲ含量负相关;黄连碱组含量次之,且随着浓度变化不大;表小檗碱组、巴马汀组则影响不大.结论:小檗碱和黄连碱能提高线粒体复合物Ⅲ的表达,其他生物碱则无明显影响.     

山茱萸多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老的药效评价及机制研究

目的 考察山茱萸多糖（Corni Fructus polysaccharides, CFP）对线虫衰老的延缓作用并探讨其作用机制。方法 以野生型秀丽隐杆线虫（N2线虫）作为动物模型,利用百草枯建立氧化应激模型,筛选CFP的最佳药效浓度;测定CFP对N2线虫的急性热应激、寿命、生殖及咽泵运动能力的影响;检测并比较给药组与空白组活性氧簇（Reactive Oxygen Species, ROS）及脂褐素水平;运用实时荧光定量PCR检测CFP对N2线虫衰老相关基因mRNA表达的影响。结果 通过抗氧化应激实验测得CFP最佳给药浓度为150 μg/mL;急性热应激实验中,CFP给药组较空白组的生存曲线右移;不同浓度 CFP给药组较空白组的存活率更高（P<0.01）,平均寿命（P<0.001）和最长寿命均延长;给药组子代数量在第1、3、5、7 d 无显著性差异(P>0.05);50 μg/mL、150 μg/mL的CFP组均可增强N2线虫咽泵运动能力（P<0.05）;不同浓度CFP给药均能显著降低N2线虫体内ROS含量和减少脂褐素沉积;与空白组相比,150 μg/mL CFP给药5 d后,DAF-16、SKN-1、SOD-3及CTL-2的mRNA转录水平均显著上调,AGE-1的mRNA转录水平显著下调。结论 CFP能在一定程度上延缓秀丽线虫的衰老,其作用机制与提高线虫体内抗氧化应激能力、抑制ROS产生、减少脂褐素的沉积,以及调控胰岛素/胰岛素样生长因子-1(IIS)通路上的基因表达有关。     

响应面法优化可食性鸡蛋清蛋白膜的酶法改性工艺

采用响应面分析法(RSM)对可食性鸡蛋清蛋白膜的酶法改性工艺进行优化。以谷氨酰胺转移酶(TG-B)浓度、p H、注模前酶作用时间及干燥温度为单因素,对膜的机械性能(拉伸强度、断裂伸长率)和阻隔性能(水蒸气透过系数、透油系数)进行测定,得出各指标的二次回归模型。结果表明,TG-B酶浓度0.13%、p H8.34、注模前酶作用时间45 min、干燥温度20℃时膜的各项性能最佳。该工艺参数下膜各性能指标分别为:拉伸强度(5.225±0.108)MPa、断裂伸长率70.492%±3.172%、水蒸气透过系数(3.405±0.067)g·mm/(m2·d·k Pa)、透油系数(0.812±0.007)g·mm/(m2·d)。     

蓝刺头多糖提取工艺优化及其抗氧化活性

本试验用水提醇沉法提取蓝刺头多糖(Echinops latifolius tausch polysaccharide,ETP),通过单因素和响应面法对ETP提取工艺进行优化,并对蓝刺头提取物进行体外抗氧化活性的测定。结果表明,蓝刺头多糖的最佳提取条件为:料液比1:20 g/mL、提取时间2 h、提取温度100 ℃。在最优条件下多糖的得率为1.191%。清除自由基结果显示,在一定浓度范围内,蓝刺头多糖对DPPH·清除率最高达93.69%,对·OH清除率最高达97.44%,对O₂-·清除率最高达67.96%。研究表明,响应面对ETP的提取优化条件合理,同时保留了该多糖良好的抗氧化活性,为其临床应用提供一定的理论依据。     

河豚毒素在暗纹东方鲀体内的转移分布规律及相关代谢酶活性分析

为了研究河豚毒素(TTX)在暗纹东方鲀体内的转移分布规律及其对肝脏代谢酶活性的影响,实验选择口服灌喂的给药方式,通过超高效液相色谱串联质谱法测定不同组织中TTX的浓度变化,同时测定肝脏代谢酶活力。结果如下,在灌喂TTX后的短期转移分布期间,性腺中TTX的浓度从19.00 ng/g升至42.02 ng/g,蓄积率为121%。肝脏中TTX浓度呈波动性变化,在4 h时,TTX浓度最高为11.43 ng/g,在48 h时,TTX浓度最低为1.27 ng/mL。皮肤、肌肉、血液、肠道、鳃组织中TTX含量在2 h时最高,分别为7.43 ng/g、1.15 ng/g、11.44 ng/g、9.77 ng/g、31.75 ng/g。脾脏、肾脏、胆组织中TTX浓度分别在2 h、4 h、6 h时最高为5.05 ng/g、6.54 ng/g、9.06 ng/g。此外,肝脏代谢酶活力的检测结果显示,TTX显著提高了乳酸脱氢酶、谷草转氨酶和谷丙转氨酶的活性(p0.05),在前期对两种磷酸酶活性具有明显的抑制效应(p0.05),而后恢复至正常水平。实验结果表明,TTX在暗纹东方鲀中的转移分布具有组织特异性,并且对肝脏中不同代谢酶活性具有促进和抑制作用。     

水酶法提取金耳多糖的工艺优化

以云南金耳子实体为原料,拟获取酶法辅助提取金耳子实体多糖的最佳方案。以金耳多糖得率为指标,应用单因素实验结合Box-Behnken中心组合设计响应面试验,探究果胶酶及纤维素酶复合酶添加量、提取液料比、提取温度、提取时间对金耳多糖得率的影响,获得水酶法提取金耳子实体多糖最佳试验方案。结果表明,水酶法提取金耳多糖的最佳工艺条件为:复合酶添加量为20.50 mg/g,液料比为347:1 (mL/g),提取温度为52 ℃,提取时间52 min,在此条件下金耳多糖的得率为12.69%±0.52%。此法具有提取温度低、提取时间短、得率较高的优势。     

不同产地金耳中氨基酸含量分析及营养价值评价

目的 测定不同产地金耳中氨基酸的组成及含量,并评价其营养价值。方法 利用氨基酸分析仪测定云南、陕西、福建、西藏和甘肃金耳中氨基酸的含量,比较不同产地金耳中氨基酸组成和含量之间的差异,并采用氨基酸评分(amino acid score, AAS)、氨基酸比值(amino acid ratio, RAA)、氨基酸比值系数(ratio coefficient of amino acid, RC)和氨基酸比值系数评分(score of RC, SRC)以及主成分分析等对不同产地金耳中氨基酸的营养价值进行综合评价。结果 不同产地金耳中均检出17种氨基酸,其氨基酸总含量在9.25～19.50g/100g之间;必需氨基酸含量在2.72～6.07g/100g之间,占总氨基酸含量在26.6%～31.7%之间;非必需氨基酸含量在6.33～13.43 g/100 g之间,占总氨基酸含量在68.3%～73.4%之间。5个产地金耳中4种呈味氨基酸含量由高到低依次为:甜味氨基酸>鲜味氨基酸>苦味氨基酸>芳香族氨基酸,而不同产地金耳中呈味氨基酸总含量由低到高依次为:陕西<云南<福建&l...     

金耳、银耳、木耳多酚提取及其抗氧化活性

以金耳、银耳、木耳为原料,分别用80%丙酮、80%甲醇、乙酸乙酯、石油醚对3种食用菌多酚类物质进行提取。通过高效液相色谱法和体外清除自由基方法(DPPH法、O-2.清除能力和.OH清除能力),对3种食用菌多酚类物质的主要组成及体外抗氧化能力进行初步研究。结果表明,80%丙酮提取效果最好,3种食用菌中槲皮素含量相当,金耳和银耳中芦丁和表儿茶素含量较高,木耳中儿茶素和绿原酸含量较高;体外抗氧化结果显示3种食用菌提取液具有较强的自由基清除能力和Fe3+还原能力,其中对DPPH.与O-2.的清除能力较强,对.OH的清除能力较弱。     

金耳发酵茶发酵条件优化研究

以酚氨比为评价指标,通过单因素试验研究不同参数对产品品质的影响,结合响应面试验设计优化金耳发酵茶的最佳发酵工艺。结果表明,金耳发酵茶最佳发酵条件为:金耳液体菌种接种量为50 mL、茶培养基水茶比为1.5:1、发酵时间为15 d,在此条件下加工获得的金耳发酵茶的酚氨比最低,茶水口感风味最佳。利用该发酵条件对绿茶发酵试验结果重现性良好,该研究可为茶叶产业发展和食用菌开发提供一定的理论参考。     

楮果总黄酮体外抗氧化及对CCl4致脑损伤小鼠的保护作用

目的:探讨楮果总黄酮体外抗氧化活性及对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl₄）致脑氧化损伤小鼠的保护作用。方法:通过体外模拟建立过氧化氢（hydrogen peroxide,H₂O₂）诱导红细胞溶血、肝、脑匀浆脂质过氧化、Fe2+-Vc诱导肝线粒体肿胀的生物膜实验体系和体外总抗氧化能力实验,研究楮果总黄酮的体外抗氧化活性。同时,建立CCl₄诱导小鼠脑组织氧化损伤模型,将60只昆明小鼠分为空白组、模型组、阳性对照组（水飞蓟素,0.2 g/kg）和楮果总黄酮各剂量（0.15、0.3、0.6 g/kg）组,灌胃给药,隔天腹腔注射CCl₄花生油溶液（体积比1:1）2 mL/kg造模,持续14 d。通过测定氧化应激参数丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）和过氧化氢酶（catalase,CAT）水平并观察小鼠脑组织海马区病理学切片,评价观察楮果总黄酮在体内的抗氧化能力。结果:体外实验中,楮果总黄酮对小鼠红细胞溶血、肝、脑组织匀浆脂质过氧化和肝线粒体肿胀的抑制作用随浓度的增加而增强,其总抗氧化能力也随浓度的增大而增强。在CCl₄脑损伤模型中,楮果总黄酮可显著提高（P<0.05）小鼠脑组织SOD、GSH-PX、CAT活性和GSH水平,显著降低（P<0.05）MDA水平,且呈剂量依赖性,同时对小鼠海马神经元的病理学变化有改善作用。结论:楮果总黄酮具有较强体外抗氧化活性,并对CCl₄致小鼠脑组织氧化损伤表现出较好的保护作用,具有良好的体内抗氧化能力。     

Compare Activities on Regulating Lipid-Metabolism and Reducing Oxidative Stress of Diabetic Rats of Tremella Aurantialba Broth's Extract (TBE) with Its Mycelia Polysaccharides (TMP)

ABSTRACT:  Abnormal lipid-metabolism and elevated oxidative stress are the familiar complications of diabetic mellitus. Regulated lipid-metabolism and decreased oxidative stress have become the key indices to cure diabetic complications. The activities of broth extract (TBE) and mycelia polysaccharides (TMP) of Tremella aurantialba , which is one of the best-known multipurpose medicinal fungi in China, were studied using alloxan-induced diabetic rats. TBE contains saponins, while TMP contains polysaccharides. Both TBE and TMP could reduce the blood glucose levels of diabetic rats; TBE had stronger abilities to reduce the levels of total cholesterol and total triglyceride in serum, those of malondialdehyde, and enhance the activities of superoxide dismutase and glutathione reductase in different tissues of diabetic rats ( P  < 0.01). TBE had slightly stronger abilities to enhance the total antioxidant capability, catalase, and glutathione peroxidase in different tissues of diabetic rats, but no significant difference was found between TBE and TMP groups. All these results indicated that TBE was more capable of regulating lipid-metabolism and decreasing oxidative stress.     

银耳芽孢多糖发酵培养基配方、发酵条件的优化及其放大发酵试验

为开发银耳芽孢高产胞外多糖深层液态发酵培养基,提高银耳芽孢多糖的发酵产量以及实现规模化生产应用,本研究采用单因素实验探索不同来源的碳氮源及营养元素对银耳多糖产量的影响,并结合Plackett-Burman和Box-Behnken响应面设计,得到高产胞外多糖的发酵培养基配方和发酵条件,进一步使用50 L发酵罐进行了发酵工艺的验证。结果表明:优化后得到银耳芽孢高产胞外多糖发酵培养基配方为:葡萄糖35 g/L,NaCl 0.6 g/L,复合氮源（酵母浸膏和玉米浆干粉1:1）3.6 g/L,MgSO₄ 0.5 g/L,KH₂PO₄ 1 g/L;最适发酵条件为:发酵温度27 ℃,发酵初始pH5,发酵时间6 d,接种量3%（v/v）,摇床转速150 r/min。优化完后银耳芽孢胞外多糖产量为214.45 mg/100 mL,在摇瓶发酵阶段达到了较高的产量水平。50 L发酵罐放大发酵中验证多糖得率为258.78 mg/100 mL,比摇瓶实验得率提高了21.03%。本次优化显著促进了银耳芽孢胞外多糖的产量,为其规模化工业生产提供理论支持。     

银耳多糖分离提取工艺的优化研究

银耳多糖是银耳中的主要生物活性物质之一,可由银耳子实体、孢子及发酵液中分离、纯化后获得。大量研究表明,银耳多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、降血脂和降血糖等多种生理活性。采用超声辅助热水浸提法来提取银耳多糖,通过单因素及正交试验优化料液比、浸提温度、浸提时间和浸提液pH值,得出银耳多糖的提取工艺条件为:料液比1∶50(g/mL),浸提温度80℃,浸提时间4.5 h,pH 10,银耳多糖得率最高,为(16.25±0.37)%。方差分析结果表明料液比对银耳多糖得率具有显著性影响(p<0.10)。     

添加血耳发酵液的鲜湿热干面研制

为提高鲜热干面的食用品质并实现血耳发酵液的有效利用,本研究以感官评价、蒸煮品质和质构为评价指标,探究了血耳发酵液的浓度,血耳发酵液、食盐、食用碱和谷朊粉添加量对鲜湿热干面食用品质的影响,并利用综合评分法对添加血耳发酵液的鲜湿热干面配方进行优化。结果表明:各因素对鲜湿热干面食用品质的影响顺序依次为食用碱食盐谷朊粉血耳发酵液,最优的鲜湿热干配方为在100 g面粉中,添加浓度为100%血耳发酵液34 mL、食盐1 g、食用碱0.3 g、谷朊粉2 g,该条件下制得的鲜湿热干面的食用品质最佳,综合评分为81.05,感官评分为86.67分,断条率为0,蒸煮损失率仅为5.13%,蒸煮吸水率为68.31%,且优化后鲜湿热干面的货架期延长1倍。本研究为食用菌功能性主食开发提供了思路和依据。     

ESTIMATING DEPTHS OF BACTERIAL PENETRATION INTO POST-RIGOR CARCASS TISSUE DURING WASHING

A method for predicting the depth of penetration of bacteria into various beef tissues was developed. Blue Lake, an insoluble dye, was used to simulate bacteria on the meat surface because movement of the Blue Lake into the meat tissue during spray washing could be easily visualized. The beef tissue surfaces studied were: (1) exterior lean, (2) exterior fat, (3) interior body cavity (peritoneum) and (4) cut tissue. The model indicated that many bacteria not removed during washing are driven into the beef tissue by the washing process. Interior body cavity tissue was most resistant to penetration followed by exterior lean and fat tissues, which were about equal in resistance. Cut surfaces were the most susceptible to Blue Lake penetration.